鲁兹锥体gydF4y2BaSSP4无鞭毛体蛋白诱导表达的免疫调节和免疫抑制分子外周血单核细胞gydF4y2Ba

文摘gydF4y2Ba

恰加斯氏病的急性期在老鼠和人类的免疫抑制状态,在其中gydF4y2Ba鲁兹锥体gydF4y2Ba免疫调节分子广泛复制和发布延迟parasite-specific由效应T细胞的反应。这种逃避机制允许这种寄生虫在宿主体内蔓延。寄生虫分子调节宿主免疫反应在恰加斯病的病没有完全识别,尤其是蛋白质的无鞭毛体阶段。在这项工作中,我们评估的GPI锚定SSP4蛋白质的作用gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba作为免疫调节分子在外周血单核细胞(PBMCs)。rMBP: SSP4蛋白质能够刺激一氧化氮(NO)生产。同样,rMBP: SSP4诱导基因的表达和生产的分子参与炎症过程,如细胞因子、趋化因子、粘附分子(摄像头)由rt - pcr和ELISA。这些结果表明,无鞭毛体SSP4分子可能发挥关键作用在免疫调节和/或免疫抑制过程中观察到感染的急性期gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba。gydF4y2Ba

1。介绍gydF4y2Ba

南美洲锥虫病是一种人畜共患病由原生动物寄生虫引起的gydF4y2Ba鲁兹锥体gydF4y2Ba,它是一个重大的公共卫生问题在拉丁美洲的大部分国家,特别是在墨西哥。事实上,世卫组织估计全世界约8 - 11数百万人感染(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba感染许多细胞类型,包括细胞、成纤维细胞、血管内皮和平滑肌细胞和其他细胞。由于单核细胞靶细胞gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba感染和单核细胞发挥重要作用在调节免疫反应,单核细胞功能障碍可能导致宿主免疫抑制(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。它已被观察到在实验感染gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba,有一个增加的促炎介质的表达,包括细胞因子(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba),趋化因子(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba),血管粘附分子(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)、一氧化氮合酶(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)其他分子(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba),促进炎症过程和血管损伤。有证据表明,免疫机制参与许多寄生虫感染的发病机理。疾病的初始阶段一般表现为非特异性lymphoproliferation的感应,这被认为破坏抗原识别和干扰保护性免疫反应。矛盾的是,在大多数情况下,可以证明免疫抑制状态。这hyporesponsiveness抗原和多克隆刺激在慢性寄生虫感染可能与免疫抑制细胞因子分泌抗原呈递细胞和调节性T细胞。越来越多的parasite-derived分子能产生细胞免疫系统的免疫调节活动导致这种两极分化的细胞因子分泌报道(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

胞内阶段的寄生虫研究很少,知道gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba无鞭毛体表面抗原诱导免疫反应(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。然而,一些类似的分子已经彻底研究。最近我们的团队已经研究了gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Baamastigote-specific表面蛋白(SSP4)绑定到质膜的GPI锚,释放到培养基的磷脂酶C活动(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。这种蛋白质的基因克隆和部分特征(互补)(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba),获得重组蛋白rMBP:: SSP4。我们有报道说,这种蛋白质是一个调制器的体液和细胞免疫反应在小鼠模型中,导致低水平的IgA, IgM, IgG3,但高水平的IgG1, IgG2a,和IgG2b同形像;此外,它能够调节一氧化氮产量,以及,调节细胞因子的表达gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba在小鼠巨噬细胞免疫(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba),这表明rMBP: SSP4可能发挥监管影响巨噬细胞在免疫反应gydF4y2Bat . cruzi。gydF4y2Ba已经观察到蛋白质,rMBP: SSP4激活il - 10 /干扰素-人口gydF4y2BaγgydF4y2Ba分泌CD4 + T细胞(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba),已观察到被激活在慢性感染寄生虫,负责长期持久性和主机保护严重的炎症反应(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。最后,这是观察到免疫rMBP:: SSP4蛋白质使老鼠更容易感染trypomastigote,死亡率高,而小鼠免疫与真核表达质粒含有rMBP:: SSP4 cDNA能够控制感染的急性期(gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]。这表明SSP4抗原在感染过程中扮演了重要的角色。应该注意,寄生虫分子调节宿主免疫反应(人类)在恰加斯病还没有完全确定,迄今为止,很少有报道无鞭毛体蛋白质的作用在疾病的发展;因此,重要的是要描述寄生虫分子及其参与疾病的病理学。gydF4y2Ba

在这项工作中,我们分析了影响rMBP:: SSP4,重组蛋白来源于t cruzi在草书(一个主要表面糖蛋白(SSP4)绑定到质膜GPI锚)诱导一氧化氮(NO),细胞因子、趋化因子、粘附分子(摄像头)使用人类的PBMC。gydF4y2Ba

2。材料和方法gydF4y2Ba

2.1。MBP, rMBP: SSP4表达和纯化gydF4y2Ba

重组蛋白的纯化条件rMBP:: SSP4以前报道(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。短暂,TcSSP4 (EMBL的资源库,以数据库加入AF480943)的克隆gydF4y2Ba生态gydF4y2Ba国际扶轮网站表达向量pMAL-C2(新英格兰生物学实验室)导致质粒pMALSSP4。这个质粒,质粒pMALC2被用来变换gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2BaDH5 -gydF4y2BaαgydF4y2Ba,获得融合蛋白rMBP: SSP4和麦芽糖结合蛋白(MBP),这是根据制造商诱导和纯化。MBP或MBP-fusion蛋白质被筛选了与自由竞争麦芽糖(10毫米麦芽糖在20毫米Tris-HCl pH值7.4,200毫米氯化钠,EDTA和1毫米),然后acetone-precipitated。蛋白质纯化分析10% sds - page在减少条件和coomassie蓝染色(gydF4y2Ba16gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

2.2。PBMC隔离gydF4y2Ba

肝素化新鲜人体全血(肝素10单位/毫升)稀释1:2与PBS(137毫米氯化钠,氯化钾2.7毫米,4.3毫米NagydF4y2Ba_2gydF4y2BaHPOgydF4y2Ba_4gydF4y2Ba,1.4毫米KHgydF4y2Ba_2gydF4y2Ba阿宝gydF4y2Ba_4gydF4y2Ba,pH值7.4)的解决方案。PBMC分数被Ficoll-Hypaque离心获得的。细胞被洗在PBS文化。PBMCs被培养为24小时37°C的密度gydF4y2Ba细胞/在杜尔贝科修改鹰(DMEM)中补充了10% (v / v)胎牛血清(FCS)。PBMCs的生存能力是衡量台盼蓝染料排斥和一直大于98%。然后细胞悬浮在rpmi - 1640 (Invitrogen-Life技术)。gydF4y2Ba

2.3。体外PBMC刺激gydF4y2Ba

PBMC与DMEM培养含有10% FCS公司37°C的5%gydF4y2Ba_2gydF4y2Ba在24孔板(gydF4y2Ba细胞/毫升)。细胞单独培养在德10gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL rMBP: SSP4蛋白质或媒介。细胞和文化上层清液收集在不同的时间(12、24、48、72和96 h),细胞因子和趋化因子浓度和细胞因子基因的表达,趋化因子、粘附分子,和金属蛋白酶被确定。所有实验都控制了刺激与MBP独自一人。gydF4y2Ba

2.4。一氧化氮测定gydF4y2Ba

亚硝酸盐积累,没有综合的指标,测定培养基的格里斯反应(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。总之,人类PBMC刺激与rMBP:: SSP4 (10gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL), MBP (10gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL),有限合伙人gydF4y2Ba大肠杆菌gydF4y2Ba(0.0111:B4, 4 ng / mL)(西格玛化工有限公司)、干扰素-gydF4y2BaγgydF4y2Ba(100 U /毫升)(Genzyme诊断),或有限合伙人+干扰素-gydF4y2BaγgydF4y2Ba,分别。Nonstimulated细胞被用作控制。在某些情况下,NgydF4y2Ba^GgydF4y2Ba硝基-gydF4y2Ba_lgydF4y2Ba精氨酸甲酯(L-NAME;3毫米)(西格玛化工有限公司)是单独添加;同样的15gydF4y2BaμgydF4y2Ba硫酸g / mL Polimyxin B (PMB)(西格玛化工有限公司)添加到抑制LPS中重组蛋白来源于净化过程(数据未显示)。100年gydF4y2BaμgydF4y2Ba与100年L细胞培养基混合gydF4y2BaμgydF4y2BaL格里斯试剂和孵化在室温下15分钟。吸光度在540 nm决心,从亚硝酸钠和亚硝酸盐浓度计算标准曲线。gydF4y2Ba

2.5。通过ELISA测定细胞因子和趋化因子模式gydF4y2Ba

白介素1测试版(il - 1gydF4y2BaβgydF4y2Ba)、il - 6、il - 12, TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba干扰素-gydF4y2BaγgydF4y2Ba趋化因子CCL3,亚兰,CCL5 CXCL10 (IP-10) CXCL8(引发)的ELISA和CCL11量化文化上层清液单核细胞在不同条件下的刺激,根据制造商的协议。短暂,乘96孔板涂层一夜之间在最后一个捕获抗体浓度为2gydF4y2BaμgydF4y2Bag / mL,然后用10% PBS-FCS盘子被封锁,洗了三次,和细胞培养上清液孵育样本或控制抗原在一夜之间在4°C。洗后,盘子被孵化与各自biotinilated anti-cytokine抗体(研发系统)在1gydF4y2BaμgydF4y2Ba在黑暗中g / mL 1 h。盘子洗和streptavidin-Alkaline磷酸酶1:2000添加在黑暗中30分钟然后洗,和100年gydF4y2BaμgydF4y2BaL (abt (2, 2, -azino-bis (3-ethylbenzthiazoline) 6-sulphonic酸)(酶)被允许添加底物和反应在室温下进行了20分钟(RT);和2%硫酸反应停止,吸光度是在415 nm的ELISA读者(断层MS, Labsystem)。gydF4y2Ba

2.6。RNA隔离和rt - pcrgydF4y2Ba

总RNA从PBMC培养24-well板块不同治疗48 h,被隔离使用试剂盒系统(技术)。一微克的RNA是反向转录cDNA寡核苷酸(保利(dT) 16)使用上标二世逆转录酶(技术)和cDNA用作PCR模板。聚合酶链反应序列和PCR条件用于放大GAPDH [gydF4y2Ba17gydF4y2Ba),il - 1gydF4y2BaβgydF4y2Ba(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba),il - 6 (gydF4y2Ba18gydF4y2Ba],IL-12p40 [gydF4y2Ba19gydF4y2Ba),干扰素-gydF4y2BaγgydF4y2Ba(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba),gydF4y2Ba(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba],CCL3 [gydF4y2Ba19gydF4y2Ba],CCL5 [gydF4y2Ba18gydF4y2Ba],CXCL10 [gydF4y2Ba18gydF4y2Ba],E-selectin [gydF4y2Ba17gydF4y2Ba],ICAM-1 [gydF4y2Ba17gydF4y2Ba],VCAM-1 [gydF4y2Ba17gydF4y2Ba],TNFR-I [gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba],TNFR-II [gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba如下:GAPDH (5′GGT棉酚GGT CGG AGT CAA CGG-3′, 5′GGT猫呕吐太极拳TTC CAC GAT-3′), il - 1gydF4y2BaβgydF4y2Ba甘氨胆酸(5′atg棉酚侠盗猎车手有条件现金援助亚美大陆煤层气有限公司CTC GC-3′, 5′ACA CAA ATT GCA TGG TGA AGT CAG TT-3′), il - 6 (5′atg AAC TTC膀胱移行细胞癌ACA AGC GC-3′, 5′棉酚GAG CCC柠檬酸GGC TGG法三大′),IL-12p40 (5′AAC TTG CAG CTG亚美大陆煤层气有限公司CCA TT-3′, 5′TGA TGT行动TGC AGC CTT GC-3′),干扰素-gydF4y2BaγgydF4y2Ba(5′广汽CAG AGC ATC CAA亚美大陆煤层气有限公司a - 3′, 5′有条件现金援助TTT TCG CTT CCC TGT TTT a - 3′), TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba(5′TTC TGT CTA CTG AAC TTC GGG GT-3′, 5′gta TGA手枪AGC AAA TCG GCT广汽GG-3′), CCL3(5′公司治理文化CTG CTG CTT CAG CTA CAC CTC 20 GCA-3′, 5′-TGG ACC有条件现金援助CAG GCA CTC AGC太极拳gg TCG-3′), CCL5 (5′CGG手枪CCA TGA gg TCT 20 CGG CA-3′, 5′CGG AAT移行细胞癌标记CTC ATC太极拳AAA GA-3′), CXCL10 (5′CCA CGT GTT GAG ATC ATT GCT AC-3′, 5′ACA标签CAC CTC AGT AGA GCT TAC-3′), E-selectin (5′CTC TGA CAG亚美大陆煤层气有限公司亚美大陆煤层气有限公司CCA AG-3′, 5′法TGA GTC CAC TGA AGC CA-3′), ICAM-1(5′答GGC AAC广汽太极拳TTC条t - 3′, 5′猫柠檬酸GCG柠檬酸有条件现金援助TGG-3′), VCAM-1 (5′ATG ACA TGC TTG AGC CAG三大′,5′-GTG TCT有条件现金援助TCT TTG ACA CT-3′), TNFR-I(5′柠檬酸GTC 20 TGC CCA GTT CCA有条件现金转移支付条t - 3′, 5′CTG亚美大陆煤层气有限公司GGG GTT GGG手枪GGG GTC-3′),和TNFR-II (5′- GCT公司治理文化CGG GCC AAT ATG颈- 3′,5′GGC TTG CAC ACC ACG TCT GA-3′)。PCR条件如下:最初在94°C DNA变性5分钟35轮变性1分钟(95°C),退火对il - 1 (55°CgydF4y2BaβgydF4y2Ba肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba、il - 6、CCL5 CXCL10、ICAM-1 VCAM-1, E-selectin, 58 TNFR-I°C,和TNFR-II 59 GAPDH°C, CCL3和60°C,干扰素-gydF4y2BaγgydF4y2Ba在每种情况下,IL-12p40 1分钟)和扩展1分钟(72°C)。PCR产品包含0.5在1.8%琼脂糖凝胶电泳gydF4y2BaμgydF4y2BaggydF4y2Ba/gydF4y2Ba毫升溴化乙锭和拍照在紫外线照射下。光密度分析使用图像软件(版本1.43 u)。gydF4y2Ba

2.7。统计分析gydF4y2Ba

统计分析与执行GraphPad棱镜(版本5.0)。结果平均值±标准偏差。方差分析(方差分析)其次是图基的事后测试进行比较不同群体之间的平均值。一个gydF4y2BaPgydF4y2Ba< 0.05被认为是具有统计学意义的价值。gydF4y2Ba

3所示。结果gydF4y2Ba

3.1。诱导一氧化氮产量rMBP: SSP4 PBMCsgydF4y2Ba

第一个测试能力的蛋白质rMBP:: SSP4诱导一氧化氮产量,PBMCs刺激了10gydF4y2BaμgydF4y2Ba克/毫升的蛋白质gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba。结果表明,rMBP: SSP4蛋白能诱导PBMC中没有生产(图48小时后刺激gydF4y2Ba1gydF4y2Ba),生产L-NAME抑制作用的抑制剂。亚硝酸盐的刺激值获得rMBP: SSP4蛋白质是统计学意义与的值相比nonstimulated细胞(gydF4y2Ba)或与MBP。从细胞刺激获得的值没有生产增加了72 h(数据没有显示)。gydF4y2Ba

3.2。rMBP: SSP4蛋白质诱导细胞因子和趋化因子基因的表达gydF4y2Ba

细胞因子在急性阶段发挥着基础性的作用gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba感染(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba),影响所有细胞类型的功能参与免疫反应。调查是否rMBP: SSP4蛋白质改变细胞因子表达,rt - pcr分析在PBMC刺激gydF4y2Ba在体外gydF4y2BarMBP:: SSP4蛋白质(图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。当PBMC与rMBP刺激:SSP4蛋白质,增加对il - 1基因的表达gydF4y2BaβgydF4y2Ba、il - 6、il - 12,干扰素-gydF4y2BaγgydF4y2Ba观察,CCL5 CCL3和CXCL10从12到96 h与低表达在48 h(图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.3。与rMBP PBMC细胞因子和趋化因子生产的刺激::SSP4蛋白质gydF4y2Ba

当PBMCs刺激与rMBP: SSP4蛋白质,il - 1的生产gydF4y2BaβgydF4y2Ba肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba,il - 6显著增加(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。对il - 1gydF4y2BaβgydF4y2Ba,增加观察到24 - 72 h,而对于TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba,增加从12-48 h和持续生产的白介素12 - 96 h的交互,最大生产24 - 48 h。同样,我们观察到生产趋化因子的增加,如引发,CCL3,亚兰,CCL5,和CXCL10 PBMC与rMBP刺激::SSP4蛋白质。观察生产引发只有从12到24 h的交互,CCL3和增加生产,CCL5, CXCL10最大生产48 h和减少96 h的交互。亚兰生产也观察到的峰值在72 h(图合成gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

3.4。rMBP: SSP4蛋白质粘附分子和TNF-Receptors诱发基因gydF4y2Ba

调查是否rMBP: SSP4蛋白能诱导基因表达的凸轮和TNF受体,PBMCs与重组蛋白刺激。我们观察到在PBMC ICAM-1基因的表达增加(12 - 24 h)和基因的表达的增加E-selectin VCAM-1,最大表达在96年和48 h,分别。同样,我们观察到基因的表达的增加TNFR-I和TNFR-II 12到24 h(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

4所示。讨论gydF4y2Ba

寄生虫感染流行于热带和亚热带地区。大部分的影响和/或暴露人口生活在发展中国家控制措施缺乏或不足。尽管已经取得了显著的进展在我们理解寄生虫的免疫反应,最终一步尚未成功完成的操作疫苗寄生虫病(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。病理生理学的恰加斯病并非完全定义,虽然先天和适应性免疫反应是至关重要的。在急性感染,一些寄生虫抗原能激活巨噬细胞,这可能导致生产、促炎细胞因子一氧化氮合成和顺向控制寄生虫血症和死亡率(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。在感染的急性期,gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba免疫调节分子广泛复制和发布延迟parasite-specific由效应T细胞的反应。这种逃避机制允许宿主的寄生虫传播(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。干扰cytokine-chemokine网络可能发挥重要作用在疾病的发病与炎症过程(gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]。我们调查是否rMBP: SSP4蛋白质诱导PBMC没有生产和细胞因子的基因表达。结果表明,rMBP: SSP4蛋白质诱导PBMC中没有生产从24到48 h(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。我们曾表明rMBP: SSP4蛋白质能够诱导一氧化氮(NO)生产的脾脏和腹膜巨噬细胞(pMgydF4y2BaϕgydF4y2Ba和从免疫小鼠巨噬细胞gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。L-NAME抑制生产的小鼠MgydF4y2BaϕgydF4y2Ba年代,下调的结果gydF4y2Ba我gydF4y2BaNOS表达(gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。我们的研究结果显示,没有影响生产时刺激PBMCs孵化L-NAME的存在,从而表明酶gydF4y2Ba我gydF4y2BaNOS参与没有合成,也知道TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba调节NOS表达和/或活动,发挥直接作用于生产(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。根据这些观察,以及rMBP: SSP4蛋白质诱导PBMC没有生产,没有参与T细胞激活的抑制已经报道的生物系统。在的情况下gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba先前的研究已经表明,干扰素-gydF4y2BaγgydF4y2Ba和nonoxidative分子(TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Ba和没有)能发挥作用的控制gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba感染小鼠(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。此外,一系列的实验支持这样的看法,即干扰素-gydF4y2BaγgydF4y2Ba和肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba调节巨噬细胞的激活,导致增加生产的,反过来抑制T细胞的活化作用。因此,很可能没有生产在急性感染的最初阶段可能参与由巨噬细胞清除寄生虫,而其生产过剩在后期阶段急性感染的免疫抑制观察(占gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

我们研究了这些细胞的细胞因子和趋化因子基因表达模式以及生产这些分子的文化上层清液。结果表明,这种抗原诱发多种趋化因子的分泌(CCL3引发,亚兰,CCL5 CXCL10)和细胞因子,如il - 1gydF4y2BaβgydF4y2Ba、白介素、干扰素-gydF4y2BaγgydF4y2Ba和肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba在大量,而il - 12是在一个非常低的水平表明SSP4是一种免疫调节分子gydF4y2Bat . cruzi。gydF4y2Ba此外,干扰素,gydF4y2BaγgydF4y2Ba是一个重要的Th1促炎细胞因子可能参与代亚群细胞(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba)在急性期,因此在小鼠模型已经观察到使用rMBP:: SSP4 (gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。此外,il - 12被描述有刺激造血前体细胞和B淋巴细胞的影响。产生的il - 12在炎症阶段,通过直接的行动,间接地通过确定的组成细胞因子免疫反应的现场环境,引发1型(Th1)辅助T细胞的分化而抑制Th2细胞的生成。因此,由于其双重功能的促炎细胞因子和免疫调节因子,il - 12在抗感染起着关键作用,尤其是那些由细菌或细胞内的寄生虫,对吞噬细胞的激活和Th1-mediated反应尤其有效。然而,由于相同的活动,il - 12中也扮演了重要的角色在病理情况下,如脓毒性休克,在炎症、组织损伤和瀑特异性自身免疫性疾病gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。因此,有报道称在动物模型显示,在急性炎症细胞因子发挥核心作用gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba感染;激活后,这些细胞分泌促炎细胞因子和趋化因子迅速释放,进一步激活其他炎症细胞(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba]。这种模式的表达一直在观察期间的心肌细胞的炎症反应gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba感染。结果表明:心脏组织收集的gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba来华的老鼠表达il - 6、il - 1gydF4y2BaβgydF4y2Ba肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba,gydF4y2Ba我gydF4y2Ba此外,NOS的心老鼠感染和心肌细胞表达细胞因子和趋化因子的同样的模式gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba32gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

SSP4表面蛋白表达trypomastigotes开始转变成无鞭毛体后不久,在一个阶段是释放amastigote-specific SSP4蛋白(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba),这种蛋白质可以相互作用,激活PBMC,分泌细胞因子,趋化因子,不,和其他分子可能会吸引白细胞炎症网站与特定的分子相互作用后的寄生虫,这rMBP:: SSP4可以显著提高这种效果。因为它已经观察到PBMC招聘是一个快速和显著的现象在急性感染细胞内的原生动物寄生虫gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba恰加斯病的病原体的疾病,这些细胞的功能在感染期间,然而,是知之甚少gydF4y2Ba35gydF4y2Ba]。monocyte-derived巨噬细胞的过程和目前的抗原,产生细胞因子,并提供costimulatory信号展示他们在启动免疫反应的关键的作用[gydF4y2Ba36gydF4y2Ba]。在免疫激活巨噬细胞发挥关键活动寄生虫,发挥关键作用的机制来阻止急性gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba感染。激活的巨噬细胞寄生虫抗原导致促炎细胞因子的生产和顺向控制寄生虫血症和死亡率(gydF4y2Ba24gydF4y2Ba]。另一方面,它已经被观察到,这种蛋白质诱导高生产的il - 6 (gydF4y2Ba13gydF4y2Ba,gydF4y2Ba15gydF4y2Ba),根据我们的结果,因为il - 6的多向性的特点使得它难以获得一个明确的答案对细胞因子的作用在这个模型;然而,il - 6在PBMCs可能观察到的生产调节T细胞的分化渗透向Th2模式(通过趋化作用的过程gydF4y2Ba37gydF4y2Ba),后来可能参与B细胞的成熟过程gydF4y2Ba13gydF4y2Ba),在多克隆激活中观察到感染的急性期(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba]。这种炎症T细胞和抗体反应会导致控制不完全消除组织和血液寄生。gydF4y2Ba

我们表明,粘附分子的表达和肿瘤坏死因子受体调节在PBMC的刺激gydF4y2Ba在体外gydF4y2BarMBP:: SSP4蛋白质(图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。积累的白细胞在当地的损伤或感染内皮细胞依赖的循环白细胞与血管粘附分子的相互作用,如E-selectin VCAM-1, ICAM-1 [gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]。同样,众所周知,TNF受体在炎症过程中发挥作用;TNFR-I可能具有抗炎和炎症的影响,取决于被激活的信号通路。TNFR-II主要与炎症和凋亡相关流程(gydF4y2Ba40gydF4y2Ba]。表达TNFR-II PBMC中观察到的上下文中显示感染寄生虫可能确保细胞的生存延续的过程中感染及其组织保留,可能被引发的作用(gydF4y2Ba41gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

溶性寄生虫因素可以引起一系列复杂的细胞间的相互作用导致免疫抑制状态,此外,可能会有额外的角色在推动早期免疫事件向th2型或抗炎反应完全极化。这些提高的可能性,寄生虫的生产因素与细胞表面受体相互作用可能是一种机制,通过这种寄生虫能够干扰感应的规定/宿主免疫反应的起始阶段,可能保护宿主免受过度炎症和加强寄生虫的存活(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

最后,遵循感染的炎症反应gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba对宿主抵抗感染至关重要但也负责不同的病理学观察到恰加斯病(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。寄生虫持久性取决于多种因素,包括释放干扰免疫反应的分子。因此,抑制寄生虫引起的分子更相关的急性期,当这些分子可以相当高的浓度。虽然本质上无鞭毛体阶段被认为是细胞内复制的阶段,这种寄生虫的形式存在于血液循环在小鼠感染的急性期,可以输入和发展在哺乳动物吞噬细胞(gydF4y2Ba在体外gydF4y2Ba吞噬细胞(相同),gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

总之,这些结果表明,无鞭毛体SSP4分子可能炎症过程中发挥关键作用,调节炎症分子的表达和生产,它可能代表一种机制参与免疫调节和/或免疫抑制过程进行的gydF4y2Bat . cruzigydF4y2Ba在开发南美洲锥虫病的急性期。gydF4y2Ba

确认gydF4y2Ba

他们会感谢QFB。作者以及l·m·阿尔瓦雷斯罗德里格斯的技术援助。他们宣称,不存在利益冲突。亚迪莫兰Utrera从CONACyT获得博士学位的奖学金,墨西哥(215332)。这项工作是支持格兰特SEP-CONACyT-Basica (49911 - q)。gydF4y2Ba

引用gydF4y2Ba

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