在活的有机体内和在体外己烷提取物的毒性资料malaccensis成分粉末在老鼠和细胞系模型

文摘

这项研究的目的是评估原油的潜在毒性n己烷提取的malaccensis成分粉末。的在活的有机体内急性口服毒性评价管理提取的单剂量口服0,300,或2000毫克/公斤体重女性Wistar鼠根据423年经合组织修改测试指南。为在体外HepG2细胞毒性研究中,A549, 3 t3, COS-7细胞系暴露在不同的剂量答:malaccensis提取和细胞生存能力评估采用MTT测定紧随其后AO / EB染色,赫斯特染色,和彗星试验,以比较毒性,细胞和分子机制。发现政府的剂量2000毫克/公斤体重在活的有机体内口服急性毒性研究没有产生显著的毒性或死亡率。没有明显的( )差异观察体重、血液和生化参数控制相比,经过14天的治疗。没有行为的变化,体重,血液和生化参数和方面的组织病理学观察相比,控制。因此,可能口语致命剂量答:malaccensis提取高于2000毫克/公斤体重。的在体外细胞毒性分析显示无毒性的浓度提取2,1.4,和1.4µg / mL A549 HepG2 3 t3,和COS-7细胞,分别,没有凋亡/坏死细胞死亡和DNA损伤。在结论中,提取的粉末答:malaccensis没有产生明显的细胞毒性或急性口服毒性,使用范围确认答:malaccensis作为安全食品防腐剂和天然的治疗产品经过进一步亚急性和慢性毒性研究。

1。介绍

药用植物已广泛用于传统或传统的医药实践作为一种可靠的治疗疾病自史前时代。世界卫生组织也有公认的植物疗法的可靠来源(1]。药用植物的治疗特性在于生物活性的化合物。相信植物的化合物,用作治疗,减少有害相比,合成药物(2]。因此,药用植物提供大范围发现新药。然而,调查表明,许多植物中使用传统药物可能产生不利影响(3,4),其中一些已被证明含有有毒化合物(5]。因此,并不是所有的药用植物是安全的。因此,有相关需要评估药用植物的毒性,以确保安全。

malaccensis成分,俗称马六甲姜和“Rankihiriya”,属于家庭姜科。它是一种多年生南亚热带地区的药用植物栽培广泛亚洲包括印度支那、孟加拉国和斯里兰卡(6]。答:malaccensis一直被用于制备药物治疗恶心、呕吐,伤口也作为调味成分在加工肉类的(7]。Somarathna et al。8)评估己烷原油的生物活性化学成分提取的答:malaccensis粉末,发现82.87% 1 ' -acetoxychavicol醋酸(1 'aca)为最主要的活性化合物。原油答:malaccensis提取以及纯化合物1 'aca显示强大的抗菌和anti-biofilm活动单核细胞增多性李斯特氏菌和金黄色葡萄球菌(8,9]。

然而,Primahana et al。10)报道,trans-methyl肉桂酸中答:malaccensis产生中度毒性盐水虾为120.47µg / mL LC₅₀。此外,清华et al。11)报道,水果的答:malaccensis诱导A549细胞毒性和HepG2细胞系为4.8和5.5µ克/毫升剂量。建议不一致的化学成分的差异可能是由于植物地区使用,年龄、品种、土壤因素,地理地区栽培[12,13]。此外,陈等人。14)报道,粉末积累次生化合物比其他植物部分。因此,毒理学方面的评价答:malaccensis粉末将会是一个有价值的研究领域。

本研究旨在调查的潜在毒性n己烷提取物,含有非极性化合物,粉末的答:malaccensis通过寻找急性在活的有机体内使用大鼠模型和毒性在体外使用细胞株的细胞毒性。

2。材料和方法

2.1。工厂收集和验证

答:malaccensis从药用植物收集自然秘密花园(Pvt)有限公司,Millewa, Horana,斯里兰卡和凭证标本(2012 /模仿/ 02)存入农业种植园工程系的植物标本,斯里兰卡的开放大学。植物被发现使用的关键物种Dassanayake和Forsberg15]。

2.2。提取答:malaccensis

新鲜的答:malaccensis根状茎在自来水清洗,表皮剥落。根茎切片,烘干的40°C 24 h。干片粉使用磨床(国家超级搅拌机、台湾、模型MX-TIIOPN) 1分钟在每30秒间隔周期为5倍。粉存放在−20°C到使用。n己烷作为溶剂的提取。通过添加10 g的提取制备答:malaccensis粉100毫升n己烷和激动(160 rpm) 24小时30°C旋转瓶(Stuart®轨道振动SSL1、英国)。混合物在4500×g离心10分钟(百夫长科技有限公司、英国),上层清液使用# 1绘画纸滤纸过滤。滤液蒸发真空在40°C使用旋转蒸发器(起亚房车5、瑞士)和filter-sterilized通过0.45µ过滤装置(Millex®哈,德国)。滤液是N₂软质在高温(40°C)对3 h直到hexane-free提取。最后,集中提取存储在4°C到使用。

2.3。细胞培养

人类肺癌细胞(A549),肝癌细胞(HepG2),正常小鼠成纤维细胞(3 t3)和猴肾组织细胞(COS-7)获得的国立细胞科学中心(国立),印度浦那。细胞在DMEM培养基补充维持10%胎牛血清(美国表达载体的边后卫)和20毫升的青霉素和链霉素作为抗生素,在湿润的气氛中5%的有限公司₂和95%的空气,在一个有限公司₂孵化器(热科学、美国)16]。细胞毒性研究中心在圣雄Gandhi-Doerenkamp Bharathidasan大学选择Tiruchirappalli,印度。

2.4。MTT测定细胞生存能力的评估

细胞的生存能力,从而揭示了细胞毒性的提取,是评估使用3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT)比色测定用细微的修改17]。细胞被播种在96孔板5×10³细胞/好,孵化24小时在37°C。提取的细胞治疗在提高浓度在0 - 1000µg / mL 24 h,在37°C。DMSO溶液的定量提取是溶解在最低数量,培养基稀释准备股票的解决方案,并由在培养基,最后在DMSO浓度的0.1%提取。这个DMSO溶液的浓度不影响细胞的生存能力(18]。也用作溶剂DMSO溶液的浓度控制。实验与每个提取物浓度进行了一式三份的同一批次的细胞。24小时孵化后,20毫升的MTT (Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)解决方案在PBS(5毫克/毫升)被添加到每个和孵化3 h在37°C。中被删除,和100毫升的DMSO溶液添加到每个溶解紫色甲瓒产品。吸光度测量在570 nm(测量)和630海里(引用)使用96孔板读者(Bio-Rad、大力神、钙、美国)。抑制百分比计算使用以下公式,从这些数据和集成电路₅₀,定义为细胞生存能力的测试物质的浓度降低到50%,计算。

2.5。细胞死亡的形态学评估使用AO / EB荧光测定

细胞的形态特征的细胞凋亡和坏死是评估AO / EB染色[19]。HepG2的A549 3 t3, COS-7细胞培养在6孔板和孵化24 h IC₅₀没有毒性浓度的提取、MTT试验中。处理和未经处理的细胞被离心机(4分钟)3000 rpm,孵化与吖啶橙(AO)和溴化乙锭(EB)解决方案(1 100毫克/毫升的一部分在PBS AO和EB)和荧光显微镜观察(卡尔蔡司,耶拿,德国)使用紫外线过滤(450 - 490 nm)。每样三百个细胞,一式两份,和得分是可行的或死,如果死了是否通过细胞凋亡或坏死组织从核形态和细胞质。然后,凋亡和坏死细胞的百分比计算。兴趣拍摄的形态学特征。

2.6。核评估使用赫斯特33528年染色形态学特征

核细胞的形态学特征评估使用赫斯特33528染色(20.]。细胞培养在6-well盘子和处理答:malaccensis在集成电路₅₀浓度和毒性浓度,24 h。孵化后,治疗和控制细胞收获和沾染了赫斯特33258年在PBS(1毫克/毫升)在室温下为5分钟。一滴细胞悬液被放在载玻片和盖玻片覆盖。三百个细胞,每一式三份,在荧光显微镜下观察到x400配备了一个377 - 355 nm过滤器。细胞的百分比反映病理变化进行了计算。

2.7。基因毒性评估使用彗星试验

基因毒性评估了使用彗星试验在单细胞凝胶电泳进行量化的DNA损伤(21]。细胞治疗与IC₅₀浓度和毒性浓度的提取24 h。收获细胞悬浮在低熔点琼脂糖在PBS和用移液器吸取了显微镜载玻片上涂覆层的正常熔点琼脂糖。一层介质琼脂糖融化了的低熔点琼脂糖。幻灯片是沉浸在prechilled裂解缓冲(2.5 M氯化钠,100毫米Na₂EDTA, 10毫米三0.2 mmnaoh (pH值10),和特里同x - 100)和孵化一夜之间在4°C溶解细胞,并允许DNA解除。然后,幻灯片暴露在碱性缓冲(300毫米氢氧化钠,1毫米Na₂edta (pH > 13)) 20分钟允许DNA解除,然后7点进行电泳V。幻灯片与中和缓冲洗(0.4米三羟甲基氨基甲烷、液pH值7.5)2分钟和荧光显微镜观察。一式三份数据,每一百五十个细胞,每个治疗组,手工收集。图像被用来评价DNA损伤的程度代表总DNA的一部分尾巴,据Gayathri et al。16]。

2.8。使用Wistar鼠急性口服毒性研究

2.8.1发布。动物

急性口服毒性试验进行了使用女性Wistar鼠。动物的数量和性用于每个测试确定考虑两个经济合作与发展组织(OECD)准则和伦理审查委员会的意见医学研究所(2016/22),斯里兰卡,基于3 r的概念。所有动物都维持在标准实验室条件下包括20°C到24°C的温度,相对湿度50%到70%,光疗法在整个实验周期12 h光明与黑暗。标准尺寸、聚碳酸酯和透明的笼子被用于动物住房。同性的三只老鼠关在一个笼子里。消毒木屑被用作床上用品材料。所有的动物喂养与MRI兔子和老鼠公式准备根据世卫组织的指南由Saboudry [22]。医学研究所的配方是准备使用本地可用的原料。所有的老鼠都适应于实验室条件下一段加药前7天。

2.8.2。急性口服毒性试验

急性口服毒性试验的原油n己烷提取的粉末答:malaccensis是根据423年经合组织测试指南中描述的方法。三个月大的女Wistar鼠,体重150 - 200克,被随机分为三组,控制(n= 3)和两个治疗组(n= 3)。动物被维护在一个空调房间和光控提供水和饲料随意在整个实验过程。动物是用免费水保持空腹一夜之间开始实验之前的那一天。动物被单独称重。在对照组大鼠服用橄榄油(1毫升)。剂量的300和2000毫克/公斤体重的粗提取液用于极限测试。管理卷被调整至1毫升/公斤/老鼠。

经过政府的答:malaccensis提取、大鼠观察前30分钟和24 h时特别注意前4 h,然后每天14天。老鼠体重和观察到毒性的迹象包括死亡率、行为模式的变化(唾液分泌、嗜睡和睡眠),外表,伤害,痛苦,疾病在观察期内的迹象。此外,体重、采食量、水消费记录整个实验周期。使用气体麻醉动物温和镇静,1毫升的血液收集的侧尾静脉穿刺技术,生物化学和血液分析。血清肌酐、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和血液尿素氮(BUN)测定与商用评估工具(黑科学,科伦坡)使用半自动的生物医学分析仪(3300年统计传真,拉姆齐、锰、美国)。在实验的最后,老鼠通过人道安乐死过量气体麻醉,和肝、肾、肺、心、脾收集。老鼠的相对器官重量记录,还研究了宏观上。器官保存在一个固定10%福尔马林溶液媒介组织病理学研究。

2.9。组织病理学研究

部分formalin-fixed肝、肾、肺、心脏、脾与酒精脱水,嵌入在石蜡,切成4 - 5μ米厚的部分,和与苏木精和伊红染色。幻灯片在x40放大光学显微镜检查。器官的微观特性的控制和治疗大鼠比较。这项研究是在兽医研究所进行Gannoruwa,斯里兰卡。

2.10。统计分析

所有的值表示为±SEM。比较组间进行使用单向方差分析(方差分析)其次是图基的多重比较测试使用SPSS统计软件。一个p值< 0.05被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。细胞毒性的原油n己烷提取的答:malaccensis

的细胞毒性性质答:malaccensis n分析了己烷提取物对A549 HepG2 3 t3, COS-7细胞在不同浓度来确定相应的IC₅₀通过MTT试验。的集成电路₅₀不同浓度的值答:malaccensis提取图形表示在图1。的集成电路₅₀值对A549 HepG2 3 t3, COS-7细胞分别为7.25,22.5,62.75和8.25µ分别g / mL。提取显示0%抑制浓度2,1.4,和1.4µg / mL,对于A549 HepG2 3 t3,浓度和COS-7细胞,分别,这些被认为是无毒的。

3.2。细胞凋亡或坏死的微观特征

显微镜观察细胞凋亡的特点采用AO / EB染色和图所示2(一个)。一般来说,死细胞渗透EB和发出荧光红色,而只活细胞渗透AO因此发出荧光绿。细胞的生存能力和膜完整性决定基于荧光模式。治疗细胞的形态变化观察分类基于荧光发射如下:(i)可行的细胞有高度有组织的细胞核会绿色;(2)早期凋亡细胞显示核凝结会橙绿色;(3)晚期凋亡细胞的高度凝聚染色质或分散的染色质会橙色,红色;和(iv)坏死细胞会橙色,红色没有染色质的碎片。细胞凋亡和坏死形态数据,与IC诱导治疗₅₀浓度和毒性的浓度答:malaccensis24小时,从手工收集计数呈现在图2 (b),这表明答:malaccensis在集成电路₅₀在带来高效的早期细胞凋亡(小于50%),但小坏死。然而,答:malaccensis在没有毒性浓度没有引起任何显著的凋亡或坏死(少于10%)细胞系(图进行测试2)。

3.3。核的微观特性

赫斯特33528年采用染色发现细胞核的形态变化引起的IC₅₀也没有毒性的浓度答:malaccensis和功能如图3(一个)。收集的数据从手动计数细胞与正常和异常核特性如图3 (b)。在控制细胞,核染色质与IC充满而治疗后₅₀的提取、变化如染色质边缘化、凝结,碎片被注意到。这些观察表明暴露答:malaccensis对集成电路₅₀浓度仅导致染色质分裂是细胞凋亡的特征。然而,治疗没有毒性浓度(IC₀)的提取与控制表示没有区别。

3.4。彗星试验中所揭露DNA损伤的识别

采用彗星试验检测细胞DNA损伤和基因毒性。彗星试验非常敏感的DNA链断裂。DNA损伤分析是基于DNA尾大小,形状,和迁移模式,数据在图所示4(一)。答:malaccensis在集成电路₅₀导致中度破坏DNA。然而,在没有毒性浓度,只有微不足道的DNA损伤。自尾长度和密度反映的程度在DNA链断裂,DNA在尾部的比例提供了一个定量测量的DNA损伤,如图4 (b)。

3.5。急性口服毒性动物实验显示

一个剂量的300或2000毫克/公斤答:malaccensis提取的粉末通过口服途径进行管理并没有产生任何死亡率老鼠14天观察期间。此外,关于行为模式,老鼠2000毫克的治疗答:malaccensis提取经常清洗他们的脸第一4小时。然而,4 h后,行为模式与对照组相同。

3.6。器官重量的老鼠进行测试

数据之间的器官重量控制和治疗大鼠如表所示1。老鼠的平均体重收到了两剂答:malaccensis提取与对照组没有明显不同。大鼠的治疗答:malaccensis提取的剂量2000毫克/公斤体重肝重量显著( )高于控制肝脏重量。

3.7。生化反应

大鼠的血清生化参数数据如表所示2。无显著差异( )血清生化参数之间观察到大鼠治疗答:malaccensis和控制。包装细胞体积百分比(PCV %)和控制治疗组之间没有明显不同。血清AST (u / L)和ALT (u / L)水平组没有差异。

3.8。血液反应

数据提出了关于老鼠的血液参数表3。无显著差异( )观察治疗与对照组之间。

3.9。器官组织病理学观察

老鼠的肝脏组织病理学检查的结果部分处理橄榄油(控制)和不同剂量的提取如图5。肝组织肝索和门静脉(图显示正常5(一个)在对照组)。老鼠的肝组织管理提取300毫克/公斤没有任何变更(图5 (b)),而老鼠的组织接受2000毫克/公斤体重显示轻度拥堵(图5 (c))。

组织病理学检查的结果肾脏部分如图6。控制老鼠的肾组织提出了完整的小管(图6(一))。老鼠提取300毫克/公斤体重管理显示正常的肾小球和小管(图6 (b)在2000毫克/公斤),而这些组显示肾小球轻度淋巴细胞浸润(图6 (c))。

心肌组织病理学检查的部分控制老鼠并没有发现病变(图7(一))。老鼠提取物治疗300毫克/公斤集团也没有表现出任何异常(图7 (b)在2000毫克/公斤),而这些组显示轻度拥堵(图7 (c))。

控制老鼠的肺部分如图所示8(一个)。老鼠服用300和2000毫克/公斤提取没有任何可感知的显微结构变化(图8 (b))。

4所示。讨论

评估毒性(如果有的话)答:malaccensis n己烷提取是本研究的主要目标以来几乎没有科学和临床数据的有效性和安全性一个malaccensis粉末中提取。单剂量口服2000毫克/公斤体重管理的原油答:malaccensis n己烷提取并没有导致大鼠死亡率或临床毒性的迹象在14天的观察期。这表明,LD₅₀的价值答:malaccensis提取大于2000毫克/公斤体重。尽管所有治疗大鼠显示正常行为在24小时期间,一些动物显示轻度抑郁的迹象在第一次4 h和喝太多的水在第一次提取的口服后3小时以内。根据Teo et al。23),体重的变化可以被视为不利影响的标志在口服药物和化学物质。超过10%体重损失从最初的体重被认为是重要的( (%)24]。在我们的研究中,没有一个动物显示这样的降低体重,但他们的身体重量增加观测期间表明植物提取物不产生任何不利影响大鼠的体重在急性口服毒性。类似的观察报告Karunarathne et al。13)当他们服用2000毫克/公斤体重的原油高良姜成分n己烷提取物对大鼠,它是同一属的植物提取物有1 'aca为最主要的化合物。此外,没有器官的变化被观察到的治疗大鼠体内除了老鼠的肝脏接受2000毫克/公斤体重的一天答:malaccensis粗提物。肝脏和肾脏功能的评估是一个非常重要的指标评估植物提取物的毒性。血清尿素、肌酐和肝酶(ALT、AST和高山)浓度的血液指标用来评估肾脏的功能(25]。结果的发髻,肌酐,ALT, AST 14天后口服对照组没有显著不同,显示没有异常的肾治疗大鼠。造血系统是其中一个最敏感目标的有毒化合物,尤其是骨髓红细胞发生的生产(26]。急性管理植物提取物并没有造成任何重大改变老鼠的血液资料收到了答:malaccensis提取在不同剂量,表明植物提取物不影响造血系统。治疗没有带来任何严重的肝脏组织病理学变化,肾脏,心脏,脾脏。因此,推断,植物提取物,至少2000毫克/公斤,不是有毒对急性口服。然而,在最终决定之前,亚急性和慢性毒性测试答:malaccensis将高度相关。

在体外研究同样重要的破译如果材料是有毒的。不同的细胞系可能表现出不同的敏感性对复合细胞毒性。因此,使用一个以上的细胞系是必要的细胞毒性效应的检测(27]。所以,我们找到了IC₅₀的值答:malaccensis n己烷提取物对A549 HepG2 3 t3,和COS-7细胞株是7.25,22.5,62.75和8.25µg / mL,分别和zero-toxic浓度(IC₀2,1.4,和1.4µ分别g / mL。这是很重要的,因为到目前为止没有毒性数据报告文学答:malaccensis(28]。

此外,细胞死亡方式,无论是细胞凋亡或坏死,引起植物提取物被评估。双重染色AO / EB无毒的浓度答:malaccensis核,细胞凋亡的形态学变化显示只有不到10%的细胞。然而,10%以上观察凋亡细胞治疗IC₅₀的浓度答:malaccensis提取。赫斯特染色类似的观察了。然而,彗星试验显示,7.25µ克/毫升答:malaccensis集成电路₅₀引起严重的A549细胞的DNA损伤。相比之下,植物提取物在non-cytotoxic浓度(s)没有诱导A549细胞的DNA损伤。因此,我们的研究结果清楚地表明答:malaccensis无毒剂量没有施加在A549细胞基因毒性。事实上,提取这些无毒浓度可以作为防腐剂的食物储存供人类食用对人体健康没有任何不利影响。因此,考虑到无毒浓度,可接受的每日摄入量(ADI)的提取可以使用NOAEC大约计算(no-observed不利影响浓度)除以不确定性因素(usually10推断从动物到人类和10个人间的差异敏感度)。NOAEC定义是没有风险的浓度(无毒级)(29日]。近似的ADI值答:malaccensis n己烷提取是55.41毫克/天(数据没有显示)。然而,生物利用度的提取(s),动物数据,或者PBPK模型(基于生理biokinetic)获得一个适当的ADI对人类是必要的。因此,我们建议进一步调查subchronic和慢性毒性测试发现的可靠性估计ADI的植物提取物用作食品防腐剂和/或治疗。放在一起,最非极性(n己烷)提取答:malaccensis提供巨大的潜力作为食品防腐剂以及治疗可进一步通过明确建立定向研究。

5。结论

口服毒性研究表明,大鼠模型答:malaccensis n己烷提取的单剂量2000毫克/公斤体重没有产生任何严重不良影响对一般行为、体重、采食量、生化参数,和器官组织学。此外,细胞毒性分析表明,无毒的浓度答:malaccensis30岁的(2,1.4和1.4µ分别为g / mL)不影响细胞的生存能力或DNA。因此,这些浓度可能练习供人类食用没有任何不良健康效应。然而,我们建议subchronic和慢性毒性试验进一步免除重复政府的不利影响答:malaccensis。进一步说,可能是更高的剂量答:malaccensis提取可能会破坏DNA,因此我们建议进一步研究走向标准化答:malaccensis作为食品防腐剂用于人类消费和/或治疗。

数据可用性

器官重量的数据、血清生化参数、血清雌性小白鼠血液的值,在体外抑制浓度一个。malaccensis在不同的细胞系,形态学评估细胞凋亡和坏死,核特性的细胞,DNA损伤的评估,内部器官的显微照片部分用于支持本研究的结果中包括这篇文章。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者要感谢博士Tilusha Manchanayaka从兽医研究所,Gannoruwa,斯里兰卡,组织病理学调查,w·g·s·s .库马拉先生,高级医学实验室技术人员,从动物中心,医学研究所,斯里兰卡和Gowdhami Balakrishnan Bharathidasan大学印度,技术支持。作者也要感谢斯里兰卡国家研究委员会的财政支持和批准号12 - 054和印度科学和研究奖学金DST (ISRF)计划,印度提供了一个旅行格兰特Thikshani Somarathna (TS)在印度进行细胞毒性的研究。

引用

1. 世界卫生组织,传统医学战略2002 - 2005年的谁日内瓦,世界卫生组织(世卫组织),瑞士,2002年。
2. a . Karimi) m . Majlesi和m . Rafieian-Kopaei草药和合成药物;信念和事实。”Nephropharmacology杂志,4卷,不。1、研究,2015页。视图:谷歌学术搜索
3. 诉Ertekin、m·A·Selimoğlu和s . Altinkaynak”不寻常的演讲的组合曼佗罗在孩子中毒:横纹肌溶解和暴发性hepatitius。”《急诊医学》杂志上,28卷,不。2、227 - 228年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. s Koduru d·s·格里尔生家族和a·j·Afolayan”的抗菌活性茄属植物aculeastrum”,生物制药,44卷,不。4、283 - 286年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. s . Sirikantaramas m .山崎,k .齐藤”机制抵抗自产有毒植物的次生代谢产物,“植物化学评论,7卷,不。3、467 - 477年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. g . Raj d . p . Pradeep c . Yusufali m .丹和美国婴儿,“挥发物的化学概要文件在4月物种来自喀拉拉邦,印度南部,”精油研究杂志》上,25卷,不。2、97 - 102年,2012页。视图:谷歌学术搜索
7. m . n . i下榻的j . Chowdhury美国j .女王和n . c .南帝”精油分析的根状茎月桃conchigera女孩。和叶的lpinia malaccensis(Burm.f)。从孟加拉国左轮枪。”非洲植物科学期刊,4卷,不。6,197 - 201年,2010页。视图:谷歌学术搜索
8. t . Somarathna w·m·a·d·b·费尔南多·k·k·d·s . Ranaweera g . a . s . Premakumara t . Abeysinghe和n s Weerakkody“抗菌活性和植物化学的筛选malaccensis成分(Ran-kiriya)对食源性细菌。”应用微生物学杂志,卷125,不。5,1276 - 1285年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. t . Somarathna g . a . s . Premakumara m . d . Akbarsha和k . Balamuthu体外抗菌活性的选择充分利用植物和细胞毒性的属性榄仁树属catappa”,国际药学和制药科学杂志》上,9卷,不。12日,第225 - 218页,2017年。视图:谷歌学术搜索
10. g . Primahana t Ernawati: l p, i d . Dwiyatmi a . Darmawan和m .哈纳菲“2-allylphenyl合成肉桂酸和盐水虾杀伤力测试活动评估,”Procedia化学》16卷,第699 - 694页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. Trung n . b .清华t . n, n M Khoi et al .,”文章:筛选越南药用植物的细胞毒性的活动,“自然产品科学,16卷,不。1,43-49,2010页。视图:谷歌学术搜索
12. a .詹森·j·雅伯,a·斯文森主持“精油的抗菌活性:1976 - 1986年的文献综述。方面的测试方法,”足底》,53卷,不。5,395 - 398年,1987页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. p, h . s . Karunarathne m·g . Thammitiyagodage和n s Weerakkody高良姜的安全性评价(成分高良姜)提取用于治疗作为抗菌剂,”国际制药科学工作杂志》上。和研究,9卷,不。11日,第4590 - 4582页,2018年。视图:谷歌学术搜索
14. e . Chan y Lim, m·奥马尔,“叶的抗氧化和抗菌活性Etlingera物种(姜科)在马来西亚半岛,“食品化学,卷104,不。4、1586 - 1593年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. m . Dassanayake和r . Forsberg修订手册锡兰的植物美洲印第安人发布,华盛顿,美国,1983年。
16. l . Gayathri r . Dhivya d . Dhanasekaran v . s . Periasamy, A . A . Alshatwi和m . A . Akbarsha“赭曲霉毒素A和橘霉素的肝毒素的影响,单独和组合,和维生素E的保护作用:体外研究HepG2细胞,”食品和化学毒物学,卷83,不。83年,第163 - 151页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. t . Mosmann“快速比色测定细胞生长和存活的:应用程序来增殖和细胞毒性分析,“《免疫学方法,卷65,不。1 - 2,55 - 63、1983页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. f . Nemati a . Dehpouri诉Mahdavi b·伊斯拉米和s . Mirzanejad”马赞达兰的一些药用植物提取物的细胞毒性特性,伊朗,”伊朗红新月会医学杂志,15卷,不。11日,2013年。视图:谷歌学术搜索
19. d·l·斯佩克特和r·d·高盛,单元:一个实验室手册。文化和生化分析的细胞长岛冷泉港实验室出版社,纽约,1998年美国。
20. s . a . Latt g . Stetten l . a . Juergens h·f·威拉德和c d·谢尔”最近的进展33258赫斯特检测脱氧核糖核酸合成的荧光,”组织化学与细胞化学杂志》上,23卷,不。7,493 - 505年,1975页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. n·辛格·m·t·麦科伊·r·r·泰斯和e·l·施耐德,“一个简单的低水平的定量技术在单个细胞DNA损伤,”实验细胞研究,卷175,不。1,第191 - 184页,1988。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. m . Saboudry实验动物的饲养和照顾瑞士日内瓦,世界卫生组织,1993年。
23. s . k . Teo D·斯特灵,s·D·托马斯·a . m .霍伯曼m . s .基督徒,和v . D . Khetani”的围产期和产后毒性D-methylphenidate和D, L-methylphenidate在老鼠,”生殖毒理学,16卷,不。4、353 - 366年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. d·威廉姆森,g·布雷和d·瑞恩“减肥5%满意的标准来定义临床显著减肥?”肥胖(马里兰州银泉)。,23卷,不。12日,第2320 - 2319页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. r . Chavda k . r . Vadalia和r . Gokani王亚南,根皮的抗氧化活性Calotropis proceraR。Br (asclepediaceae)。”国际药理学杂志》上》第六卷,没有。6,937 - 943年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. m . Kifayatullah m·s·穆斯塔法·森古普塔m . m . r .衬衣,a . Das和s . k . Das”评价的急性毒性和sub-acute ethanolic提取的Pericampylus glaucus(林)。稳定。在BALB / c小鼠,”急性疾病杂志,4卷,不。4、309 - 315年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. k Khairunnisa和恋人”,评价体外诱导细胞凋亡,细胞毒性的活动Hymenodictyon excelsum(roxb)墙在道尔顿淋巴瘤腹水(DLA)和肺fibroblast-mouse l929细胞株,”应用制药科学杂志》上,4卷,不。8日,17岁,2014页。视图:谷歌学术搜索
28. s . Sahoo辛格,和美国Nayak精油的化学成分、抗氧化和抗菌活性和提取月桃malaccensis左轮枪(姜科),“国际药学和制药科学杂志》上》第六卷,没有。7,183 - 188年,2014页。视图:谷歌学术搜索
29. 粮食及农业组织(粮农组织)和世界卫生组织(世卫组织)”原则和食品中化学物质的风险评估方法,”第七章。风险表征日内瓦,世界卫生组织(世卫组织),瑞士,2009年。视图:谷歌学术搜索

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