90天口服毒性Hydroethanolic根提取的假虎刺属spinarum在Wistar鼠

文摘

背景。草药药物是一个在世界范围内,古老的做法,主要是在发展中国家,很大一部分的人口参与这种做法。因此,研究必须评估他们的安全性和效率,以避免或防止毒理学风险由于其使用。在多哥,假虎刺属spinarum是一个属于夹竹桃科药用植物的家庭,作为春药或治愈一些疾病包括疟疾、镰状细胞性贫血,高血压,痛苦,和哮喘。尽管其几个ethnomedicinal好处,几个毒理学数据与长期使用。客观的。因此,本研究旨在评估一个ethanolic根提取物的毒性假虎刺属spinarumWistar鼠。方法。90天的口服毒性过程408年经合组织TG使用指南。雄性Wistar鼠收到假虎刺属spinarum根hydroethanolic提取在500和1000毫克/公斤90天口服填喂法。体重变化,血液和血液生化参数,器官重量变化,丙二醛作为lipoperoxidation标记根据组织的蛋白质表达,和重要器官的组织病理学评估。结果。没有中毒的迹象或死亡率在90天的实验观察。血液参数没有显示任何治疗相关的异常。根据生化参数,增加氯离子水平观察到1000毫克/公斤 。之间没有显著差异治疗组和对照组对丙二醛浓度,体重,和器官相对重量。没有尸体剖检和组织病理学的改变与提取相关的重要器官治疗观察。结论。结果表明,一个ethanolic根提取的假虎刺属spinarum不会引起不良反应,可导致Wistar鼠的死亡后90天在500和1000毫克口服。

1。介绍

假虎刺属spinarum是一种带刺的植物夹竹桃科的家庭传统上用于治疗许多疾病,如镰状细胞性贫血,疟疾、高血压、头痛、疼痛、哮喘、和性的弱点(1- - - - - -3),特别是在多哥和西非地区。中草药治疗是一个世界,古老的做法,主要是在发展中国家,很大一部分的人口是参与这一实践(4]。在一些南撒哈拉沙漠的国家,这种做法是维护5),而在发达国家,我们看到的增加使用药用植物(6- - - - - -8]。这对药用植物等许多原因可以解释这一事实的新的生物活性分子的主要来源是植物医药行业(9- - - - - -11]。其他原因是植物被认为是无害的人12,13]或仅仅是唯一的或主要的医疗保健产品可以对某些人(14]。这种做法可以是由于金融约束(13,15]。尽管有这些众多原因导致草本药物,必须采取谨慎使用植物由于副作用如肝损伤或呼吸衰竭与连续使用一些植物(16]。以前的研究报道,假虎刺属spinarum有一些药理性能如抗惊厥的作用[17],利尿作用[1),镇痛效果(2]。据报道含有一些化学组织如单宁、皂甙、黄酮类化合物和强心甾(18]。植物心脏苷可以参与中毒的情况下对Na的行动⁺/ K⁺泵(19]。这可能会导致严重的副作用如心律失常、心动过缓和低血压13),(有时可以是致命的20.,21]。一些毒理学数据根hydroethanolic提取报道,其致死剂量50 (LD50)高于5毫克/公斤,它可能是相对安全的28天口腔反复给药管理Wistar鼠(18]。然而,没有毒理学数据的长期使用假虎刺属spinarum的根源。这些信息可能是重要的主要的使用假虎刺属spinarum在治疗慢性疾病,或过得勃起功能障碍等疾病,糖尿病和高血压。本研究目的,因此,评估hydroethanolic根提取的长期毒性假虎刺属spinarum在90天的口服Wistar鼠有额外的毒理学数据假虎刺属spinarum根使用。

2。材料和方法

2.1。收集和提取的植物材料

假虎刺属spinarum根被收集在Noepe (6°17′38“N和1°1′19“E,多哥)和被确定在植物学和生态学洛美大学的部门。标本的标本保存在洛美大学NTOGO15579之下。根被清洗和干燥在适应气候(20°C)的动物生理学实验室洛美大学。然后,干和粉根浸泡在混合包裹(50 - 50)72 h控制自动搅拌在一个轨道振动器(IKA KS 501轨道数字平台瓶)。双用棉花和绘画纸纸过滤后,滤液蒸发在45°C使用旋转蒸发器(IKA RV 10数字)。

2.2。动物

雄性Wistar鼠权重161.05 g是用于实验。他们提供了动物生理学部门和驯化至少一个星期前的首次操作。啮齿动物的动物喂养标准饮食和水随意。动物研究之前和期间保持在22°C±2°C的相对湿度水平40%,光周期是12 h光和黑暗12 h。动物保健和处理符合接受准则(22,23]。伦理批准获得了以下教学和研究机构伦理委员会(ref没有数量。CNCB-CEER 2801/2010)。

2.3。实验设计

反复给药的口服毒性根据408年经合组织指导方针执行90天(24]。根据以往的毒理学研究[剂量被分配19),不受限于提取的理化性质,选择最高剂量,目的是诱导毒性、没有死亡或严重的毒性(TG 408)经合组织建议的指导方针。动物被分成三组,每组8。第一组(组1)收到蒸馏水,作为对照组。第二(组2)和第三(组3)组,分别为500毫克/公斤和1000毫克/公斤体重假虎刺属spinarum根hydroalcoholic提取。提取是管理日常在同一时间为90天,和动物观察至少每天两次的发病率和死亡率。每天身体重量都被记录下来。

2.4。血液和生化参数

在第91天禁食12小时后,老鼠被乙醚麻醉。收集血液样本从retro-orbital窦在干燥管的生化分析和EDTA管对血液分析。生化参数,如丙氨酸转氨酶(ALAT)、天冬氨酸转氨酶(ASAT),碱性磷酸酶,肌酐和葡萄糖、甘油三酸酯,磷酸肌酸激酶(CPK)进行评估。剂量的离子水平血清钠、氯、钾和钙也被评估。血液参数实现白细胞计数(WBC),红细胞计数(RBC)、红细胞比容(HCT)、血红蛋白(HB)、平均血红蛋白浓度(MCHC),意思是微粒血红蛋白(妇幼保健)、血小板(PLT),意思是血细胞比容(MCV)。

2.5。生产总值(gdp)观察和器官重量

放血后,大鼠安乐死都是由醚,然后解剖宏观检验。肝、肾、睾丸、心脏和脾脏被孤立和加权。相对器官重量计算是基于下列方程:相对体重=(器官的重量/体重的动物牺牲一天)×100。样本之后实现组织病理学在10%福尔马林溶液固定部分。

2.6。脂质过氧化反应测试和总蛋白测定

脂质过氧化作用进行测试和蛋白质测定心脏、肝脏和肾脏,分别Gerard-Monnier et al。25,26)使用1-methyl-2-phenylindole和布拉德福德法(27,28]。丙二醛(MDA)浓度在nM /毫克的蛋白质表达。

2.6.1。脂质过氧化反应测试

切除器官在9 g / L生理盐水冲洗,碎玻璃罐在Tris-HCl缓冲区的存在(10毫米;pH值7.5)。反应的解决方案包含650μL 1-methyl-2-phenylindole激活的乙腈,250年μL (MDA或器官匀浆,150年μL的盐酸溶液的浓度12 N,和10μ二叔丁基对甲酚的L(丁基羟基甲苯)溶液浓度为0.1 M。管是在45°C 1小时孵化。管被离心机在1881.59克每分钟10分钟。吸光度是阅读的波长586 nm。准确定量,校准曲线的标准MDA解决方案做了准备。

2.6.2。蛋白质的测定

布拉德福德分析是基于使用Coomassie蓝色(g - 250)。阳离子的形式(在酸性条件下)Coomassie蓝色是红色的,而阴离子形式是蓝色的。布拉德福德试剂主要是质子化了的和红色的,因为它是一个酸化的解决方案。在蛋白质绑定,Coomassie蓝色染料成为unprotonated和蓝色。颜色的变化测量光谱方法在595海里。

组织提取后得到的上层清液稀释在1/20磷酸盐缓冲剂和均质。5毫升水中测试样本的收集或空白在管,一式三份和250年μL(布拉德福德试剂被添加在每个管。30分钟后在室温下孵化,样本在595海里。

2.7。统计分析

研究结果表示在平均值±标准平均误差(SEM)。统计分析是由方差分析(方差分析)与图基的测试来评估两组之间的差异。的值 被认为是重要的。InStat统计包(6.02 GraphPad棱镜)是用来进行统计分析。

3所示。结果

3.1。临床观察

提取的90天的口服治疗组没有引起行为上的改变。没有死亡或在实验中观察到的不良反应。

3.2。体重和器官重量比例

我们的研究结果表明,提取并没有引起任何修改后大鼠的平均重量90天的政府(表1)。老鼠的器官比体重90天的实验后组间差异不显著(表2)。

3.3。血液参数

没有观察到异常血液参数后90天的管理c . spinarum(表3)。

3.4。生化参数

对于生化参数,没有观察到显著变化。然而,电解质有了一些变化,主要是氯离子的显著增加(表1000毫克/公斤4)。

3.5。总值的观察

总检查后未发现异常处理和控制之间的器官组织。内出血,没有炎症病变,或畸形中观察到肝脏、肾、睾丸、脾脏、心脏治疗大鼠与对照组相比后的管理假虎刺属spinarum根提取物在不同剂量为90天的治疗。

组织学部分的心、肝、肾、睾丸、脾脏未显示异常的建筑结构在任何组织器官(数据没有显示)。

3.6。脂质过氧化作用和蛋白质分析

脂质过氧化考试的心脏,肝脏和肾脏没有显示显著差异的丙二醛(MDA)浓度之间的控制和治疗组(表5)。

4所示。讨论

这项研究进行了评估的90天口服毒性c . spinarum植物用于许多目的在多哥和西非地区主要是春药(29日]。根据先前的毒理学结果(18),一个极限测试的90天口服毒性测试是在500年和1000毫克/公斤根据408年经合组织指导方针。的c . spinarumhydroalcoholic根提取物在500和1000毫克/公斤没有引起毒性作用能导致治疗大鼠死亡或影响他们的行为没有观察到死亡或临床异常。

体重减少可能是一个敏感的和简单的毒性指数,和体重减少5%被认为是一个实证预测病理结果(30.]。治疗组大鼠的体重变化与对照组相比没有显著差异显示在90天的试验。器官相对体重是肥大的指标或器官萎缩31日]。它是一个普遍接受的起诉者的化学对器官的影响(32]。的相对重量器官如心、脾、睾丸、肝脏和肾脏没有显著区别显示治疗组和对照组。此外,组织数据没有显示任何结构异常的所有架构研究器官被守恒的所有组。提取500和1000毫克/公斤不产生不利影响的研究器官。

另一个很好的毒性预测血液细胞,这是第一个细胞暴露于有毒当它到达体循环。因此,红细胞给一个好的预测的潜在毒性的分子(18,33]。在我们的研究中,治疗组的血液参数没有显示显著差异相比对照组。hydroalcoholic根提取的c . spinarum在500和1000毫克/公斤没有透露对血细胞的毒性(34]。肝脏和肾脏是关键器官确保重要作用的有机体。肝脏参与物质代谢的主要器官,和由于暴露于毒性作用。肾脏的功能单位肾元参与废物的排泄体内的物质和毒素。因此,由于写产品或有毒物质摄入的损害机制如肾小管毒性、水晶肾毒性,或者肾小球血流动力学的改变可以导致肾脏的丧失或死亡如果不给予适当的药物治疗患者(13]。探索因此重要的毒性研究,可以基于一些生物标志物水平剂量。

位于肝细胞,细胞质和线粒体(ALAT),转氨酶(ASAT ALAT)相关的高山和葡萄糖,胆汁中发现第一泪小管和胆管上皮细胞组成参数探讨肝脏毒性(35,36]。反卫星和ALAT被认为是漏酶;因此,他们在血清的增加可能是由于肝细胞或肝损伤后线粒体膜的改变。高山的被认为是胆汁郁积的诱导酶,是“诱导”的高度后阻塞胆汁流(37]。我们的研究没有显示显著差异的生物标记物在治疗组与对照组相比。这些结果接近组织学数据,并没有透露任何有关器官的建筑或结构异常。

肾脏功能探索可以基于尿素、肌酐、电解质用量。他们是好肾功能的标志。在我们的研究中,尿素和肌酐的变化并不显著。它表明,提取并没有引起肾脏功能障碍。然而,显著增加氯离子水平在1000毫克/公斤建议misbalance血清氯水平,它可以是一个简单的利尿剂活动的结果c . spinarum(1]。在这种情况下,一个重要的损失稀释尿液的体积可能解释这种hyperchloremia [3,38,39]。

丙二醛是一种氧化应激标记,导致细胞膜破坏引发活性氧化应激对多不饱和脂肪酸的攻击。然后,MDA是脂质过氧化的产物。这lipoperoxidation醛,能破坏蛋白质的共价加合物形成。这个过程会导致组织破坏(40]。氧化应激是一个过程由于失衡活性氧(ROS)和抗氧化剂。这个过程导致器官结构和功能损伤,然后它会导致毒性(41]。在我们的研究中,MDA水平是评估心脏、肝脏和肾脏。我们没有观察到显著差异根据MDA浓度时比较控制和治疗组。这个结果表明c . spinarum不支持研究器官的氧化过程在90天的口服。

5。结论

在这项研究中,我们评估了90天的口服毒性hydroalcoholic提取的c . spinarum根。结果表明,在500和1000毫克/公斤,c . spinarumhydroalcoholic根萃取液是相对安全的口服药Wistar鼠在500和1000毫克/公斤。然而,更多的毒理学研究必须在执行关键器官体外或在体外确认其真正安全长期使用,主要在心血管系统,肝脏和肾脏是人体的重要器官。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

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