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Robin A. Reddeman.
，1
罗伯特Glavits，2
John R. Endres.，1
蒂莫西S. Murbach.
，1
Gábor Hirka，2
AdélVértesi.，2
ErzsébetBéres.，2
和
Ilona PasicsSzakonyiné.2
1Aibmr Life Sciences，Inc.，2800 E. Madison St.，Suite 202，Seattle，WA 98373，USA
2Toxi-Coop ZRT。，H-1122 Budapest，Magyar Jakobinusok Tere 4 / B，匈牙利
抽象的
研究人员进行了一系列符合OECD和glp标准的毒理学研究，以评估高度提纯的三倍半氧化锗的安全性。三倍半氧化锗是一种自然存在的非必需微量元素锗的有机形式。二氧化锗和乳酸柠檬酸锗(无机锗)已被证明可引起肾毒性，而三倍半氧化锗(有机锗)已被证明具有更有利的安全性。然而，以往对三倍半氧化锗化合物的毒性研究并没有明确说明所测试化合物的纯度。在本文报道的研究中，没有证据表明细菌反向突变试验或体外哺乳动物染色体畸变试验具有致突变性。在哺乳动物体内微核试验中，在浓度达2000毫克/公斤体重/天的极限剂量时，未观察到基因毒性活性。在Han:WIST大鼠进行的90天重复剂量口服毒性研究中，剂量分别为0、500、1000和2000 mg/kg体重/天，通过灌胃，没有发现死亡、治疗相关的不良反应或目标器官。未观察到的不良反应水平(NOAEL)确定为2000 mg/kg体重/天。
1.介绍
锗是土壤，岩石，淡水，植物（例如人参，芦荟和大蒜）中发现的天然存在的，非必要的微量元素，并且在大多数食物中，尽管痕量的含量[1］.在20世纪70年代和80年代，在20世纪70年代，英国和其他地方，使用含锗的化合物作为促进健康的饮食补充剂和药物的使用;然而，此后不久，含锗制剂的慢性消耗后的毒性作用的病例报告开始出现[1- - - - - -7］.更令人担忧的是，有关哪些特定锗化合物被食用的报告错误，使人们对锗的整体安全性产生了很大的混淆[2］.
随后的含锗化合物的毒理学调查揭示了二氧化锗，（无机锗）和锗氧化锗（Ge-132，有机锗）之间的毒性谱的显着差异[1，2，8］.在二氧化锗的同时，已显示二氧化锗在动物模型中诱导肾毒性[9，10]已被鉴定为人类病例报告中的毒性报告中的一种（与乳酸锗柠檬酸锗）[1，3.- - - - - -7，11， Ge-132已被证明具有更有利的安全性[8，12，13]即便如此，Ge-132上公布的毒理学和临床数据还是有限的。Ge-132（1000）6个月重复剂量口服毒性研究 mg/kg体重（bw），每周5天，∼714 1992年公布了大鼠的体重（mg/kg bw/天），并指出了一些不良肾脏影响[13];然而，未提供测试项目的纯度，并且仅使用单个剂量组。在24周长的口腔研究中，通过16周的恢复期，比较二氧化锗（75mg / kg Bw / day）对Ge-132（120 mg / kg Bw / dia）的效果，二氧化锗是发现在停止治疗后持续16周具有显着的系统性和肾毒性[8］.在施用GE-132的动物中，血尿尿素水平波动;但是，既不观察到系统性毒性也不是肾异常。在另外6个月的口服毒性研究中，发现GE-132在30,300和3000mg / kg BW /天的剂量下诱导无毒效应，而且没有异常，但测试项目纯度和研究方法和结果的细节没有提供[12］.在一项为期26周的致癌性研究中，与对照组相比，在浓度为0.3、0.8和2.5%的小鼠饮食中添加锗-132(纯度≥99%)并没有导致任何与治疗相关的肿瘤增加[14］.
由于缺乏结论性数据，很难排除长期摄入锗-132或高剂量摄入锗-132的影响。对Ge-132安全性的进一步研究尤其值得关注，因为它可能用作支持人类健康或提供治疗效益的食物成分或补充剂[13，15］.因此，我们在本文中提交体外和体内毒理学评估高度纯的GE-132。
2.材料和方法
所有主要测试都按照经济合作与发展（经合组织）良好实验室实践（GLP），ENV / MC / CHEM（98）17的原则进行了所有主要测试16］.研究使用方法如先前由Clewell等人描述的方法。[17， Marx等[18]和reddeman等。[19方法部分重复了我们的措辞。研究中使用的所有化学试剂、溶剂、药品和其他化学品均为分析级或制药级。
2.1。测试项目
测试项目，GE-132，（双（2-羧乙基）锗，CAS注册表：12758-40-6，分子量339.42，分子式C6H10通用电气2O7，见图中的结构公式1）是天然存在的非必要痕量元素锗的有机形式，由赞助商制造和供应，设计营养产品（OREM，犹他州）。GE-132的合成开始于二氧化锗的化学转化（地理2）然后通过pH调节，过滤，洗涤和干燥，产生≥99.6％的纯白色晶体粉末，含有42.5-43.1％的元素锗和<50ppm geo2不纯。为了确保生产成品，满足高纯度规格，在地理溶解之后2，采用机械手段去除任何痕量的未溶解的地理2然后加入过量的丙烯酸，以确保不可逆反应完成，在进行下一步之前，通过中间分析进行验证。纯洁和地理2在每批GE-132上确认杂质，用GEO2基于Krystek等人对方法的独立验证修改，采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术检测~ 0.5 ppm [21，22］.实验室根据赞助商提供的分析证，实验室验证了实验室验证了测试项目的阳性鉴定和适当的遗传毒性测试和4895次进行了4895次的化学纯度。
2.2。测试方法：体外测试
2.2.1。细菌反向突变试验
这项研究是按照Ames等人建立的程序进行的。23， Maron和Ames [24]，基尔等人。[25， Venitt和Parry [26]，并根据以下规定:OECD测试指南471 [27]，以及实验室的SOP和利用情况Salmonella typhimurium.菌株TA98，TA100，TA1535和TA1537和大肠杆菌应变WP2UVRA.（Moltox，Inc。）在存在和不存在代谢活化系统（S9-混合;大鼠肝脏S9部分来自Moltox，Inc.，USA）。
根据初步的溶解度和浓度范围测试结果，主要(平板纳入程序)和确认(预培养程序)测试使用超纯水(ASTM Type I)作为测试项目的载体，叠氮化钠(SAZ，默克KGaA，德国，达姆施塔特)和甲基-甲基磺酸(MMS，Sigma-Aldrich Co.，德国，美国)和二甲基亚砜(DMSO, Merck KGaA，德国，Darmstadt)是4-硝基-1,2-苯二胺(NPD, Merck KGaA，德国，Darmstadt)， 9-氨基吖啶(9AA, Merck KGaA)和2-氨基蒽(2AA, Sigma-Aldrich，德国，美国)的载体。测试项目浓度分别为5000、1600、500、160、50和16μ.G /板块。由于试验项目的溶解性，使用0.25ml的处理体积。高于通常的体积没有显着稀释顶部琼脂，并没有改变其组成;车辆控制的平行调查证明了较高治疗量的可接受性。根据引用的指导和文献选择阳性和阴性对照。供应商使用已知对照的供应商认证代谢激活系统的灵敏度，可靠性和Promutagen激活电位，并进一步研究了阳性对照解决方案。在每个实验开始时进行测试溶液（施加轻微的热量以改善测试项目的溶解）。
人工计数确定菌落数量，并由此计算平均值、标准差和突变率。根据本实验室的检测指南和建立的标准，有以下情况的检测项目被认为是诱变的:（一世）发生浓度相关的血液菌落增加和/或;(2)对至少一种剂量组的可重复生物学相关的阳性响应在至少一个具有或不含代谢活化的菌株中发生。
如果以下情况适用，则认为该增加具有生物学相关性:（一世）菌株中的逆转数量美国沙门氏菌感染TA98和/或TA100和/或大肠杆菌WP2UVRA.至少是车辆控制的反转次数的两倍（反转率 ≥ 2） 和/或；(2)菌株中的逆转数量美国沙门氏菌感染TA1535和/或TA1537在车辆控制中至少比返程次数高3倍(返程率≥3)。
如果未观察到致突变反应的标准，则认为该试验项目是非致突变的。因为生物学相关性是解释结果的标准，所以没有进行统计学评价。
2.2.2。体外哺乳动物染色体畸变试验
该测试符合国际公认的指南调查473 [28]在培养的中国仓鼠肺v79细胞（欧洲集合细胞培养物）。
基于初步溶解度和细胞毒性测试的结果，选择了Dulbecco的改良Eagle的媒介（DME，Sigma-Aldrich，德国，美国）作为制备试验项目的载体，选择浓度进行主测试。没有代谢活化的使用的阳性对照是甲磺酸盐（EMS，Sigma-Aldrich Co.，德国，美国，美国）溶解在DME中至最终浓度为0.4或1.0 μ.L / mL是一种已知的诱变和裂纹原，测试设施具有广泛的历史数据库，记录其使用。代谢活化的阳性对照是环磷酰胺一水合物（Sigma-Aldrich，德国，美国）溶解在DME中，以达到5.0的最终浓度 μ.克/毫升。
在实验A中，复制V79培养物（5×105细胞/组)分别暴露于各自的对照品、阳性对照品和各试验项目浓度(500μ.g / ml，1000 μ.g / ml，2000 μ.g/mL)，在有或没有代谢激活的情况下持续3小时。暴露期结束后，用二甲醚清洗细胞，并在处理开始后20小时取样。
除了用于实验A的实验A外，除了没有代谢活化的曝光期除了20小时的曝光期除了在治疗开始后20小时和28小时的曝光期。具有代谢活化的暴露期保持3小时，但在开始治疗后28小时服用取样。
每次测试指南，细胞培养物用血清晶（0.2 μ.L / ML，Sigma-Aldrich Co.，德国，美国）在取样前2.5小时，然后准备幻灯片并逐渐评分。染色体像差的命名和分类是基于ISCN和野蛮的29- - - - - -31］.对于统计分析，进行Chi-Square测试和回归分析。
2.3。动物研究
托西屋ZRT的制度畜牧业和用途委员会。允许根据国家研究委员会的护理和使用指南进行的这些动物研究，并遵守2011年匈牙利法案的原则CLVIII（1998年XXVIII匈牙利法案的修改）和政府法令40 /2013年调节动物保护。
2.3.1。在体内小鼠微核试验中
该研究符合经合组织474 [32］.特异性无病原体CRL:选用8周龄、体质量34.3-37.9 g的NMRI BR小鼠。动物的驯化和饲养是按照引用的测试指南进行的。
使用甲基纤维素（1％，摩尔化学品KFT。，匈牙利）用作试验项目的载体控制和溶剂。用于溶解在无菌水（Naturland Kft，Hungary）的环磷酰胺用于阳性对照。制备试验项目制剂，每天制备给药的每一天，以达到50mg / ml，100mg / ml和200mg / ml的浓度，并在两个小时内使用。
根据GLP初步毒性试验结果，选择500、1000、2000 mg/kg/bw剂量进行主试验，分别灌胃24小时，分两次给药。雄性CRL:NMRI BR小鼠随机分为5组:vehicle control、positive control和3个试验组。阳性对照，环磷酰胺60 mg/kg/bw，腹腔注射一次。小鼠在给药后立即接受治疗，并每隔一段时间(通过颈椎脱位)检查其对治疗反应的可见迹象。在试验项目和溶剂对照组中，第二次处理后24小时取样一次。阳性对照组在治疗开始24小时后采样。在牺牲后立即从两个暴露的小鼠股骨中获得每个时间点的骨髓，并在标准的显微镜玻片上制备涂片，按照试验指南评估微核细胞的发生率和未成熟红细胞在总红细胞(未成熟+成熟)中的比例。采用Kruskall Wallis非参数单因素方差分析(ANOVA)检验和回归分析进行统计分析。
2.3.2。大鼠90天重复剂量口服毒性研究
该研究遵循OECD测试指南408（作为最低标准）所述的程序并进行检查[33］.
SPF HAN：WIST RAT（TOXI-COOP，ZRT，BUDAPEST，匈牙利）52-66天，称重212-261g（男性）和143-168克（女性）根据经合组织的指南408，适应环境条件下的环境条件下。．Animals received food (ssniff®SM R/M-Z + H complete diet for rats and mice produced by ssniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Germany) and potable tap water ad libitum except for overnight food deprivation before blood sampling.
剂量选择是基于来自未发表的OECD 407标准的14天重复剂量口服口服口腔毒性研究的数据：育种大鼠在任何检查的研究参数和2000毫克/千克的Noael中观察到不死的大鼠BW / Day确定。因此，将90天研究的测试项目在1％甲基纤维素中配制成50,100和200mg / ml的浓度为0（仅载体），500,1000和2000mg / kg BW的浓度为50,100和200mg / ml/天（10只动物/性/群），10ml / kg Bw剂量。在偏离GLP的情况下，代替分析控制，每次制剂在施用之前每天制备，并在制备后的4小时内使用。
根据指南，每天和每周进行临床观察，并在最后一周使用改进的Irwin测试[34]，进行功能观察电池(FOB)。
测量个体体重，计算体重增重。测定食物消耗，每周计算饲料效率以与体重测量相一致。在试验终止前，所有大鼠在适应期及对照组和高剂量组均进行眼科检查。
治疗结束后，在异氟醚CP®麻醉(Medicus Partner, Kft)下从眼眶后静脉丛采集血液样本用于临床病理(血液学和临床化学)。、匈牙利)。所有动物处死后，经证实麻醉后从腹主动脉放血进行大体病理检查。
所有动物在处死前称重，以计算相对器官重量。对对照组和高剂量组动物的保存器官和组织进行全面的组织学检查，并根据低剂量和中剂量组动物的宏观结果进行检查。
雌雄大鼠分别进行评价，并进行统计学分析。采用Bartlett方差齐性检验评估组间方差的异质性;如果没有发现显著异质性，则进行方差分析。阳性者采用Duncan’s Multiple Range检验评估组间差异的显著性。当发现异质性显著时，采用Kolmogorov-Smirnov检验数据的正态分布。在非正态分布情况下，采用非参数Kruskal-Wallis方差分析方法。如果结果为阳性，则采用Mann-Whitney u检验进行组间比较。当值< 0.05。按性别和剂量计算临床征象、检眼镜、病理和组织病理发现的频率，但不作统计分析。
3.结果与讨论
3.1。细菌反向突变试验
在确认测试中，回复殖民地数量大肠杆菌WP2 UVRA为5,000 μ.G /板具有代谢激活的高于相应车辆控制历史数据的范围。这种增加没有剂量相关，突变率（1.67）远低于睾丸学阈值的阳性测试。在任何浓度水平下，在任何浓度水平下，在任何浓度水平下，没有背景抑制和无浓度相关的或生物学上相关的增加的任何五种测试菌株中的任何五种测试菌株的数量的增加，无论是在初始或确认的突变试验中的代谢激活的情况下（见桌子1和2）.满足了测试的所有有效性和可接受性标准，所有结果都明确为负面。
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缩写：2AA：2-氨基蒽丙烯;9AA：9-氨基吖啶;DMSO，二甲基亚砜;MMS：甲基 - 甲磺酸盐;先生：突变率;NPD：4-Nitro-1,2-苯二胺;S-9，代谢活化;Saz：叠氮化钠。DMSO为阳性对照物质:NPD、9AA、2AA;超纯水为试验项目的载体，用于SAZ和MMS。试验项目、未处理和阳性对照的突变率使用各自的对照车辆的数据进行计算。 |
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缩写：2AA：2-氨基蒽丙烯;9AA：9-氨基吖啶;DMSO，二甲基亚砜;MMS：甲基 - 甲磺酸盐;先生：突变率;NPD：4-Nitro-1,2-苯二胺;S-9，代谢活化;SAZ：叠氮化钠;DMSO为阳性对照物质:NPD、9AA、2AA;超纯水为试验项目的载体，用于SAZ和MMS。试验项目、未处理和阳性对照的突变率使用各自的对照车辆的数据进行计算。 |
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3.2。体外哺乳动物染色体畸变试验
溶媒对照中发现的畸变数量在历史对照数据的范围内。与溶媒对照相比，同时阳性对照导致具有结构性染色体畸变的细胞的预期生物学相关增加，并且增加与历史对照数据相当。
在实验A和B的条件下，Ge-132在任何检测浓度下，与对照和历史对照相比，均未引起无间隙畸变细胞数量有统计学意义的增加，也未发现多倍体或核内复制中期。试验项目和药物对照组之间没有统计学上的显著差异，也没有剂量-反应关系(见表)3.）.满足了进行测试的所有有效性和可接受性标准，所有结果都明确负面负面。
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缩写词:n/a:不适用;阿明费:车辆;嘘:历史;包括:包括;excl:排除;1阳性对照:(−S9):甲磺酸乙酯(1.0μ.L/mL）；（+S9）：环磷酰胺（5.0 μ.g / mL);2阳性对照：（-S9）：甲磺酸乙酯（0.4 μ.l / ml）;3.阳性对照：（-S9）甲磺酸乙酯（0.4 μ.L/mL）；（+S9）：环磷酰胺（5.0 μ.g / mL);4报告的数字是95％的置信区间。
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，到并行车辆控制和历史车辆控制。 |
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3.3。在体内小鼠微核试验中
在初步毒性试验中未观察到死亡率或性别特异性效应。在主要研究中，未在载体和阳性对照小鼠或任何试验项目组中观察到死亡率和治疗不良反应。
与车辆和历史对照相比，环磷酰胺处理的小鼠显示微核多色红细胞（MPCE）数的预期大，统计学显着增加，这表明对测试的可接受敏感性。与并发车辆和历史控制相比，在第二种治疗后24小时内，在24小时内，在任何测试组的MPCE的频率下没有观察到生物学或统计学上显着增加。在500和1000mg / kg / bw剂量组中24小时取样时间在24小时取样时间的PCE中PCE的比例类似于车辆控制的24小时。与载体对照相比，2000 mg / kg / bw组中，在2000 mg / kg / bw组中，略微略微，但在统计学上或生物学上显着下降，但与载体控制相比，统计学或生物学上没有显着降低，从而证明骨髓暴露于测试项目（见表4）.满足了进行测试的所有有效性和可接受性标准，所有结果都明确负面负面。
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缩略语:MPCE:微核多染红细胞;出版社:normochromatic红细胞;PCE:多色红细胞。载体控制:1%水溶液甲基纤维素;阳性对照:环磷酰胺60 mg/kg体重。
．§每4000次PCE的MPCE，在24小时内发生两次‡给药。 |
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3．4．大鼠90天重复剂量口服毒性研究
在90- 91天的研究期间，任何组均无死亡(分别为男性/女性)。在日常临床观察中，1000和2000 mg/kg体重/日组的公、母动物的粪便比正常粪便更淡，2000 mg/kg体重/日组的公、母动物的粪便比正常粪便更软。虽然这可能与测试项目或其代谢物有关，可能是测试项目剂量增加的渗透效应的结果，但由于缺乏相关的临床或病理变化，粪便变化不被认为具有生物学或毒理学上的相关性。在第51天和第54天观察到，从2000毫克/公斤体重组的一名男性的活动量短暂下降。对照组1只雄性动物的前肢和1只雌性动物的腹部，500 mg/kg体重/天组1只雄性动物的前肢从第85天到研究结束均出现脱发。脱发和活动减少不被认为与试验项目相关，因为它们在对照动物中短暂和孤立的发生和/或更大的发生。在每周详细的临床检查中，所有治疗动物的行为和身体状况在整个研究期间都是正常的(除上述脱发)。与对照组相比，在FOB期间，任何处理组的行为或刺激反应都没有差异。在2000毫克/公斤体重/天或对照组的眼科检查中没有观察到变化。
在雄性大鼠中，与对照组相比，低剂量和中剂量组的体重没有显著变化(见表)5），但在观察期间，在不同点的所有治疗组中，体重增加受到显着影响（见表6）.高剂量雄性的平均体重增加在统计学上显著降低导致总体平均体重降低。然而，与对照组相比，平均体重的显著差异小于10%，因此，被认为没有毒理学相关性。在低剂量和中剂量的男性中，其他具有统计学意义的体重增加和减少是零星的，对总体体重增加或平均体重没有影响。在女性中，相对于对照组，体重没有显著的统计学变化(见补充表)1）.高剂量组女性体重增加有统计学意义的变化，在77-84天期间，体重增加，在84-89天期间，体重减少(见补充表)2）;然而，累积体重增加与对照组相似。女性体重增加的变化是轻微和零星的，不影响整体体重的发展。因此，这些变化(男性和女性)都没有被认为与毒理学相关。
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缩写：DN：Duncan的多个范围测试;ns：不重要;SD:标准差;SS：统计显着性。‡
n = 10 for all groups.
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缩写：DN：Duncan的多个范围测试;ns：不重要;SD:标准差;SS:统计学意义;U: Mann-Whitney U-test与control。‡
n = 10 for all groups.
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在整个研究中，所有剂量组的平均每日食物消耗量与对照组相似(见补充表)3.）.在1000和2000 mg/kg体重/日的雄性中，观察到短暂和累积的具有统计学意义的变化，饲料效率值略有提高(见表)7）.这些变化代表了中高剂量雄性略微较低的饲料效率，并且可能由于上述较低的体重增加而导致的。除了用于低剂量群和高剂量群的饲料效率的孤立（仅限第3周仅），雌性的饲料效率不受影响。因此，这些变化不被视为毒理学相关（见补充表4）.
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缩写：DN：Duncan的多个范围测试;ns：不重要;SD:标准差;SS:统计学意义;U: Mann-Whitney U-test与control。__团体 ”n由于单个动物具有（0）重量增益或体重减轻，因此S减少了几周。
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在治疗组中的性别中观察到血液学参数的几种统计学意义（见表）8，补充表格5）.治疗组中临床化学参数有多种统计学意义（见表9)。这些变化被认为与试验项目无关，因为许多变化是零星的，在历史范围内或边缘，而少数可能是超出正常范围的控制值的伪影。此外，没有相关的组织学发现。因此，这些变化被认为几乎没有或没有生物学意义总工程师。
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缩写:EOS:嗜酸性粒细胞;DN:邓肯多量程试验;MCV:平均红细胞体积;NS:无意义的;PLT:血小板;RET:网织红细胞;SD:标准差;SS:统计学意义;U: Mann-Whitney U-test与control。一个仅显示了统计上的显着发现。‡
n = 10 for all groups.
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缩写：A/G：白蛋白/球蛋白；碱性磷酸酶；白蛋白；ALT：丙氨酸转氨酶；天冬氨酸转氨酶；Ca++:钙;胆固醇:胆固醇;Cl−：氯化物;Crea：肌酐;DN:邓肯多量程试验;gluc：葡萄糖;na +：钠;ns：不重要;PI：无机磷;SD:标准差;SS:统计学意义;U：Mann-Whitney U-Test与控制; TBIL: total bilirubin; TPROT: total protein;‡
n = 10 for all groups.
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肉眼检查显示，对照组和/或治疗组的男性和女性的器官有一些零星的变化，频率相近，且/或没有剂量关系(见表)10).观察到的宏观发现被认为是偶然的，其性质通常在该品系和大鼠年龄中观察到，或与失血过程（肺、胸腺和肝脏）有关，不被视为与试验项目相关。
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中、高剂量组雄性大鼠若干器官重量(绝对和相对体重)(见表)11，补充表格6- - - - - -8)在统计学上与对照组有显著差异，但器官重量相对于脑重量与对照组具有可比性。在2000毫克/公斤体重/天的雄性(绝对和相对体重)中，这些统计上显著的零星变化可能是由于禁食体重的轻微下降，并在正常生物变异的范围内，这证明了他们在实验室的正常范围内。在女性中，除了高剂量组子宫重量略低外，绝对器官重量没有统计学上的显著变化，这可能是由于对照组中处于发情周期的女性数量(6/10 vs 0/10)。在低剂量和高剂量组中，观察到肝脏重量相对于身体和脑重量有统计学意义的增加;然而，它们与剂量无关，也没有相关的显微改变。无论男性还是女性，这些微小的变化都不被认为与测试项目相关或具有生物学意义。
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缩写：DN：Duncan的多个范围测试;SD:标准差;SS:统计学意义;NS:无意义的;一个仅显示了统计上的显着发现。‡
n = 10 for all groups.
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除了几种雄性中的肾盂塞，盲肠，附睾，肾脏，肝脏，肺，皮肤，脾脏和胸腺中的微观变化和/或在试验项目和对照组中的频率上。在雌性中，在具有相似或更大的频率的治疗动物的胸腺和肾脏中注意到微观变化，并且对照有更大的频率发生（见表）12）.观察到的显微镜发现被认为是偶然的，在该品系和年龄大鼠中常见的性质，存在于单个动物和/或在对照组和治疗动物中发生率相似;因此，这些更改不被认为与测试项相关。
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缩写:BALT:支气管相关淋巴组织;N / A:不适用。‡
n = 10 for all groups. |
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本研究进一步证明了锗-132具有比二氧化锗更有利的毒性。正如导论中所讨论的，与以往报道的动物模型和人体病例研究中摄入“含锗”化合物(大多数含二氧化锗)后肾脏毒性的研究不同，在90天的研究中，≥99.6%的纯锗132并未造成宏观或微观的肾脏损害。此外，在目前的研究中观察到的肾盂膨大并没有伴随炎症或变性，并且在一个对照动物中偶然发生了肾盂积水。而在本研究和Anger等人的研究中有相似的重量和临床化学发现[13研究(仅限男性;体重增加减少，总蛋白，白蛋白)，这些发现没有被认为指示肾脏病理或毒理学相关。“轻微肾功能障碍”的报道后,愤怒等人ge - 132管理1000毫克/公斤体重/天(每周5天×6个月),包括,但不显著,增加肌酐和肾组织学发现描述为“管疾病”的治疗雄性动物(“圆柱体,小管细胞肿胀和小叶沉积”)。虽然目前还不清楚这些肾脏的发现意味着什么，但在目前的研究中没有观察到异常或退行性肾脏变化，肾功能指标也没有受到不利影响。
在另一项研究中，雌性大鼠口服120 mg/kg体重/天锗-132后，体重和血液学结果与对照组相似;然而，与对照组相比，血尿素氮在第4周和第12周显著升高，随后在第20周显著降低[8］.血清肌酐和尿液分析结果类似于对照，没有显着的肾组织学发现。Miyao等人。据报道，在实验室，临床和病理检查中没有观察到“毒性效应或异常”，“长期施用30,300和3000mg / kg BW Ge-132（没有提供数据）[12]在致癌性研究中，Doi等人未发现任何剂量组的肾脏组织病理学变化。然而，2.5%剂量组的所有动物都出现稀便（与当前研究中高剂量组的结果相似），并且在一些动物中观察到盲肠扩张。作者推测这些剂量相关的变化可能是由于盲肠的渗透压引起的[14］.在所有这些研究中，如在目前的研究中，发现GE-132在测试剂量上没有毒性效果。
在已发表的病例报告中，长期摄入含锗化合物（主要由无机锗组成）会导致肾功能衰竭。目前对Ge-132的研究中没有证据表明发生这种情况。
4.结论
总之，本文报道的遗传毒理学研究提供了≥99.6％纯度的GE-132在所应用的测试系统下没有表现出致突变性，裂殖或体内遗传毒性，其分别达到最大推荐的测试浓度或限制剂量。没有看到死亡率或不良反应，并且在男性或雌性汉族中没有鉴定目标器官：在500,1000％或2000mg / kg BW /天的剂量为GE-132后90天后的毒性大鼠。基于该90天的研究中的观察结果，Noael确定为2000mg / kg Bw /天。
缩写
| 2AA： | 2-氨基蒽吖啶 |
| 9 aa: | 9-aminoacridine |
| BW： | 体重 |
| DME： | 迪尔伯科的改良鹰 |
| DMSO： | 二甲基亚砜 |
| EMS： | 甲磺酸乙酯 |
| 环保局: | 环保局 |
| FOB： | 功能性观察电池 |
| GLP： | 良好实验室规范 |
| MPCE： | 微核多色红细胞 |
| 彩信： | 甲基 - 甲磺酸盐 |
| 科学: | 无观察到的 - 不利效应水平 |
| NPD: | 4-硝基-1,2-苯二胺 |
| 经合组织: | 经济合作与发展组织 |
| oppts： | 预防，农药和有毒物质办公室 |
| PCE: | 多色红细胞 |
| 萨兹： | 叠氮化钠。 |
数据可用性
为支持这些研究的结果而生成和用于统计分析的平均数据集包括在文章或补充信息文件中。用于支持这些研究结果的所有其他原始和加工数据可根据要求从相应的作者获得。所有实验记录，标本和数据都符合GLP在Toxi-Coop，ZRT的档案中归档。在Balantonfüred，匈牙利。
利益冲突
AIBMR Life Sciences，Inc。由学习赞助商作为一个独立的第三方签约，以确定适当的研究方案和剂量选择，使研究，批准研究计划，并监测本文所述的毒理学研究和分析和解释结果数据并准备稿件。托西屋ZRT。由AIBMR签约，制定研究计划和行为，分析和解释，并报告本文所述的毒理学研究结果。作者宣布没有关于本文的研究，作者和/或出版本文的额外利益冲突。
作者的贡献
阿尔·维特西、埃尔茨贝特·贝雷斯和伊洛娜·帕西奇·萨科宁是资深作家。
致谢
作者披露了由设计的营养产品，orem，犹他州提供的本文描述的研究的财务支持。作者感谢以下个人对工作的贡献：ViktóriaPolgár-Balogh，识别Bugdán，TamásBuga，TimeaCsörge，jánosnédózsa，BiermannéMighterika，MónikaFekete，斯特拉菲克，Zsuzsanna Frank，IrénMomogyiHáriné，IddikóHermann，布里吉塔霍瓦特，Istvánné霍瓦特，巴林特索尔特Juhari，朱迪特Jeneiné卡尔曼，Aranka吻，维多利亚Kocsi，JurácsiknéSeregKornélia，克拉拉弗里茨Kovácsné诺拉PongráczKurdiné，伊娃朗·绍博，马塞尔Mardár，MATEMardár，维多利亚·马蒂纳，兄子Légrádi·莫瑞尔安妮塔迈耶，编辑KőváriMesterháziné，Szabóné奥拉莫妮卡，兄子莲子，ÁgotaJóSchüllerné，亚诺什·斯塔尔，Ákosné绍博，苏珊娜·绍博，玛丽安·伦纳特Szabóné，编辑Szám，奥尔加期Szász，Anett Szegner，玛塔滕克，伊娃Váliczkó，埃里卡MiskuVargáné，BeátaHavasZoltáné，CsengeZoltán和LeventeZoltán的表现为实验任务和/或数据集合;Kelly Raylinsky用于编写稿件的技术写作辅助;和Jared BRODIN用于准备手稿的行政支持。描述的研究描述为海报呈现的一部分[35]2019年3月14日，在毒理学学会第58届年会期间。
补充材料
完成90天的重复剂量口腔毒性研究的完整摘要数据表可用于以下参数的补充材料（报告为平均值±标准偏差）：体重（女性），体重增加（女性），食品消费（男性）和女性），食品效率（女性），血液学（男性和女性），绝对和相对（对脑和体重）器官重量（男性和女性）。（补充材料)
参考
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