植物化学的筛查和毒理学的研究马兜铃baetica林的根:组织病理学和生物化学证据

文摘

马兜铃baetica(一个。baetica)是一种野生物种的马兜铃科家庭;使用其根源许多年前摩洛哥人对抗癌症。这项研究的目的是探讨植物化学的筛查、急性和亚急性毒性答:baetica根摩洛哥北部的增长。定性和定量的分析答:baetica根进行了使用标准的方法;的急性毒性研究植物的根中提取被填喂法评估小鼠单剂量的1、2和4克/公斤体重14天;亚急性毒性是通过使用时重复剂量1,1.5,2 g /公斤/天28天。组织学变化和生化参数标记的肾脏和肝脏功能进行评估。植物化学的筛查结果显示多酚类物质的存在,丹宁酸、生物碱、黄酮、皂苷、蒽醌类的缺席,甾醇类和萜烯。急性毒性的结果显示没有死亡率和毒性的迹象在治疗组1和2 g / kg;然而,毒性的临床症状是重要和死亡率约为16%的速度处理4 g /公斤。亚急性毒性的结果显示,治疗组血清参数的几个变化注册1.5和2 g /公斤/天,分别。结果显示也缺乏组织学损伤治疗组1和1.5克/公斤/天;同时,治疗组的组织学变化是显著的剂量最高的2 g /公斤/天。 The outcome of this work showed that the roots’ extract of the studied plant was toxic in mice with repeated doses, but no toxic effect was observed with a single dose under 4g/kg.

1。介绍

多年前,药用植物的主要用于治疗许多疾病在世界各地;自然植物含有多种不同的药理和生物活性的化学物质。在文献中报道,摩洛哥人使用传统药物的比例从50至75%不等(1];与此同时,许多其他研究已经表明,一个巨大的数量的草药使用没有科学证据可能用力过猛毒性作用[2]。

答:baetica属于马兜铃科家族,是一个摩洛哥人对几种疾病使用的野生物种自古以来;特别是根在水中准备用来对付癌症(3),和消化系统疾病(4),部分使用的天线将堕胎药,花部分用于治疗风湿。整个工厂的答:baetica也“煮水和用作消炎和杀菌摩洛哥[许多地区5]。作为事实上的制备包括植物属马兜铃是被禁止的,因为他们的毒性由于马兜铃酸(AAs)。AAs例最初发现在比利时到一群妇女后影响关键的肾脏疾病患者摄入的植物马兜铃fangchi很长一段时间(6]。马兜铃酸已被公认为神经元(有毒7],致癌[8),和诱变9];草药含有植物包括属马兜铃被禁止在全世界许多国家10]。摩洛哥的负责任的地方卫生机构在新闻宣布一些例肾失败注册由于采用制备包括Bereztem [11];另一方面,某些情况下死亡的记录在摩洛哥由于使用答:巴隆在准备与癌症12]。

这是好心地指出,本研究的目的是评价植物化学的筛查、急性和亚急性毒性答:baetica准备在煎煮;因此,研究不同剂量的植物接种小鼠,生化参数和组织学变化进行了研究

2。材料和方法

2.1。植物材料

的根答:baetica收获来自摩洛哥梅克内斯地区城市以东约150公里的摩洛哥首都拉巴特2016年10月。凭证标本分类学的识别并沉积在大学穆罕默德V-Rabat-Morocco科学研究所的植物标本。答:baetica根用水洗,干在室温下,用电动搅拌机磨成细粉。

2.2。水提物制备

的水提物答:baetica准备好后在文献中描述的标准传统方法(13]。根的粉是第一次煮20分钟100°C。此后,获得的混合物在室温下冷却,然后离心,上层清液是用绘画纸滤纸过滤。滤液集中在一个旋转真空蒸发器。原油在蒸馏水提取重组每天口服所需的最终浓度(14]。

2.3。初步定性植物化学的筛选

植物材料进行定性的植物化学成分定性筛选,以确定某种类型的兴趣phytoorganic选民负责生物活性,生物碱、黄酮、多酚、蒽醌类、皂苷、丹宁酸、甾醇类和萜烯被无礼地说主要组使用标准的方法。

2.4。动物材料

成人瑞士白化病老鼠重约25克被用于急性和亚急性毒性;老鼠从动物购买殖民地的巴斯德研究所(摩洛哥卡萨布兰卡)。聚丙烯所有动物都被关在笼子里。动物们适应一周在实验室条件下的常规光/暗周期(12/12小时)和温度(24±2°C)。动物们可以免费获得自来水和正常颗粒饮食(15]。

2.5。急性毒性的研究

共有24个男性成年小鼠随机分为实验组4 6小鼠;动物分组根据选定的剂量的植物提取物,一个对照组和三个治疗。禁食过夜后,植物根系水提物的管理到每个治疗组在单一剂量的1、2和4毫克/公斤体重;对照组的时候收到一封相同体积的蒸馏水(车辆)。治疗后,小鼠分别观察临床症状,死亡率和治疗期间一般行为的变化(16]。这项研究是根据经济合作与发展组织(OECD) 425号准则(17]。

2.6。亚急性毒性研究

亚急性毒性研究从根据经济合作与发展组织(OECD) 407号准则(18]。共有24个男性成年小鼠被随机隔离分成4组每组6小鼠为每个;老鼠分组根据选定的剂量的植物提取物选择被测试,一个对照组和三个治疗。动物治疗组收到多次b . dioica根提取剂1、1.5和2毫克/公斤/天28天;对照组的时候收到一封相同体积的蒸馏水(车辆)。在治疗期间,动物的体重测量一周一次。动物也观察到毒性的迹象,死亡率,一般行为的变化,和外表的变化19]。

2.7。生化检查

在28天,一夜之间,所有幸存的动物被剥夺食物血液采集和牺牲。肝素管包含收集血液样本在6000 rpm离心机在4°C 20分钟以获得血清。根据描述的方法测量从泰姬et al。(2014)20.),使用一个自动分析仪(瑞士罗氏cobas mira +)。临床生物化学参数包括天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿素和肌酐。

2.8。组织病理学评价

在治疗期的结束,主要器官(肝脏和肾脏)被移除组织病理学检查。器官仔细地固定在10%缓冲福尔马林(pH值7.4)。固定后,组织标本在一系列分级脱水乙醇(70 - 100%)。组织种植和石蜡包埋后,组织标本与苏木精和伊红染色显微镜检查前())。肝脏和肾脏组织的病理检查是由病理学家使用光学显微镜。检查机关的微观特性治疗组比对照组(21]。

2.9。统计分析

定量数据都表示为±SD(标准差)的手段。统计学意义的手段控制和治疗组之间是由单向方差分析使用GraphPad棱镜7软件。意味着成对使用图基测试相比,被认为是具有统计学意义的差异在p小于0.05。

3所示。结果

3.1。定性的植物化学成分筛选

初步定性的植物化学成分筛选的结果答:baetica根表所示1;他们发现黄酮类化合物的存在,多酚、生物碱、丹宁酸、皂甙和蒽醌的缺席,甾醇类和萜烯。

3.2。急性毒性

在急性毒性研究中,没有死亡率或毒性的迹象发生在小鼠治疗剂量少于4 g /公斤;老鼠只表现为一个加速运行3到5分钟。然而,治疗剂量的4 g / kg负责气短、异常运动,活动减退,趋于深化和温柔,唾液分泌,缺乏食欲,嗜睡,逆转反射,偶尔的痉挛,和16%的人死亡。

3.3。亚急性毒性

老鼠和毒性的迹象的一般行为观察考虑死亡率在28天喂水提物;剂量的整个期间,没有明显的毒性作用被发现在治疗组1和1.5克/公斤/天。第二周的治疗小鼠治疗2 g /公斤/天代表异常运动,运动失调,厌食,活动减退和抑郁。

3.3.1。水提物对小鼠体重的影响在治疗期间

在治疗期间,我们没有注意到的重量显著改变治疗小鼠体重1和1.5克/公斤/天(a和B组)与对照组(p > 0.05)。这轻微的重量的变化可能是由于紧张和压力的动物期间和之后抽汲。另一方面,小鼠治疗剂量的2 g /公斤/天(C组)引起了第二周的减肥治疗,成为20到28天的治疗后显著(p< 0.05)(图1)。

3.3.2。水提物对生化的影响参数

等肝功能生化标记的丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和肾功能,如尿素、肌酐和乳酸脱氢酶(LDH)作为无处不在的酶测定。结果在图表示2。

对于肝脏标记,生化结果显示显著增加的AST给C组(2 g /公斤/天)相比,记录在对照组(p< 0.05)。然而,并没有明显的变化观察到在A和B组治疗,分别用1和1.5克/公斤/天)(p > 0.05)。关于ALT转氨酶,微不足道的增加注册在A和B组治疗,分别用1和1.5克/公斤/天相比对照组;同时我们注意到C组显著增加(2 g /公斤/天)(p< 0.05)。

关于肾标记,肌酐浓度增加在B组(1.5克/公斤/天)与对照组(p< 0.05)。同时,没有显著增加在A组(1克/公斤/天)和C (2 g /公斤/天),考虑到尿素,结果显示微不足道的变化相比,所有治疗组的血压控制(p > 0.05)。在无处不在的酶(LDH)方面,我们没有注册任何显著增加A和B组治疗1克/公斤/天1.5克/公斤/天,分别比对照组(p > 0.05)。然而,显著增加在C组治疗2 g /公斤/天(p< 0.05)

3.3.3。组织病理学变化

3.3.4。肾脏

肾组织的组织病理学检查显示,没有发生在A组的肾脏组织病理变化(1克/公斤/天);然而,治疗组肾组织的剂量1.5和2 g /公斤/天代表肾坏死,炎性浸润,皮质坏死,管状变性;主要结果总结在图3。

(一)肾坏死,皮质坏死(B)和(C)最小的炎性浸润。

3.3.5。肝

显微观察表明,没有非凡的发生在治疗组的肝组织病理变化与剂量的1和1.5克/公斤/天;另一方面,C组的肾组织(2 g /公斤/天)被炎性浸润,肝坏死,肝胆汁淤积;主要结果总结在图4。

(一)炎性浸润和肝坏死,肝坏死(B)和(C)最小的炎性浸润。

4所示。讨论

草药是主要由公众的赞赏,因为它被认为没有副作用因其自然起源和常被视为安全的食品补充剂,而不是药物。药用植物通常是由草药医生self-prescribed没有控制和审查在剂量学方面,管理上的方式和频率。在现实中,药用植物的化学物质可能对植物本身的自然,但他们不自然的人体。真正的任何化合物治疗效果有一个被错误地规定或过量的可能性。

植物提取物的植物化学的资料显示,生物碱的存在,多酚、类黄酮、丹宁酸、皂甙可以负责化合物的毒性作用研究植物。根据急性毒性的死亡率约为16%的速度由于最高剂量饲料(4 g /公斤);考虑Viala的规模(1998)(22),根煎煮的水提物可能没有或很少有毒23]。另一方面,LD之间没有相关性₅₀和马兜铃酸内容记录在有机提取液的急性毒性马兜铃manshuriensis在文献中报道(23]。因此,这些结果表明,提取物中的其他组件可能会主导的急性毒性。

条件下根煎剂的急性和亚急性毒性a . baetica活动减退等临床症状观察和减肥可能与缺乏兴趣(6)、嗜睡、唾液分泌和厌食症可归因于研究植物的属性(24];给我们列出的癫痫可能根煎煮的神经毒性作用答:baetica(25]。我们的研究结果相比在亚急性毒性的研究答:果实(19),据报道,22.2克/公斤的动物饲料植物提取的答:果实受到影响的现象,痉挛,逆转反射和气短、暗淡、粗糙的头发,和上睑下垂关闭。

考虑的结果生化参数,增加血浆的尿素和肌酐水平表明,根的汤答:Baetica被证明是有毒的(26]。在等离子体的水平上,我们也注意到增加LDH(溶酶发现通常在每个活细胞)水平向周围细胞外空间控制老鼠相比,这使我们思考根煎剂的细胞损伤的影响答:baetica(27]。这些获得的发现被他人支持报道毒性Cherif和他的合作者,所做的研究中,据报道,水提物的管理马兜铃隆根为28天影响小鼠的生化参数的剂量2.5克/公斤体重/天(28]。生化结果(生化参数的扰动)证实了那些来自肾脏和肝脏的组织学检查。此外,我们的结果相比,慢性毒性的讨论答:manshuriensis作者的报道,没有任何重要的生化变化与有机提取物喂养小鼠后8周(14- - - - - -23]。因此,有机提取物答:manshuriensis负责肝坏死(19]。许多研究表明,口服2.5克/公斤/天的水提物答:巴隆引起组织损伤的肝脏和肾脏,如改变组织架构、淋巴细胞浸润、出血病灶,hepatic-cholestasis,肾小管坏死,细胞堵塞。我们的结果的组织病理学变化如肾坏死,皮质坏死,炎性浸润,肝坏死和支持那些来自生化评价;这些发现是类似的研究报道Cherif et al。27- - - - - -29日]。此外,我们的研究结果也与文献中报道的,这是说,水提取物的亚急性毒性马兜铃果实显示肾毒性的剂量依赖性关系。然而,临床剂量的安全答:果实成人(3.0克/天19]。

考虑到大量的炎性浸润在两个检查器官,特别是周围的病变,组织病理学结果记录在这工作可以归因于根中提取的免疫调节特性答:baetica这可能引发自身免疫反应在有毒的病变(29日]。事实上,一些研究表明,摄入的药用植物,包括属马兜铃可以负责严重的肾损伤,包括肾间质纤维化(30.,31日]。应该注意的是,答:baetica和31个相关物种被认为含有马兜铃酸(5]。

5。结论

根据报告的急性毒性结果在这工作,的水提物答:baetica几乎没有毒性;同时,相同的提取显示高毒性血清参数和组织学组织当摄入的亚急性毒性条件下很长一段时间。考虑到本研究的结果,我们需要支付更多的关注为安全控制植物的生物多样性

数据可用性

(1)先前报道的“免疫刺激性的潜力马兜铃隆l .诱导肝毒性,小鼠的小肠和肾脏“这项研究数据被用来支持和可用的组织病理学分析体内水提物的抗肿瘤效应马兜铃隆用于癌症治疗传统医学在摩洛哥的Int J植物Res,卷2,页。31-35,2012。这些先前的研究(和数据)援引文本中有关地方文献[29日]。(2)此前报道“晚发型终末期肾移植术后膀胱移行细胞癌的马兜铃酸肾病”数据被用来支持这项研究,在10.1053 / j.ajkd.2007.11.015是可用的。这些先前的研究(和数据)援引文本中有关地方文献[7]。(3)此前报道”的马兜铃酸引起近端小管细胞凋亡和上皮间充质转化”数据被用来支持这项研究,在10.1038 / sj.ki.5002714是可用的。这些先前的研究(和数据)援引文本中有关地方文献[12]。(4)之前报道”的Ethanolic提取物急性毒性评价马兜铃逐渐成为杜赫。叶子Wistar鼠肝脏和肾脏功能”数据被用来支持这项研究,在10.22159 / ijpps.2017v9i7.16887是可用的。这些先前的研究(和数据)援引文本中有关地方文献[19]。(5)之前报道的毒性研究马兜铃manshuriensis (Guanmuton)”数据被用来支持本研究在DOI: 10.1016 / j.tox.2004.01.026。这些先前的研究(和数据)援引文本中有关地方文献[23]。(6)之前报道“有毒的影响一些药用植物用于摩洛哥传统医学“数据被用来支持这项研究,在Moroc是可用的。J杂志,2卷,没有。3、21 - 30,2006页。这些先前的研究(和数据)援引文本中有关地方文献[1]。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者感谢专业病理中心的工作人员为他们的贡献(Casapath)。

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