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鲍里斯•Legba Victorien Dougnon、以斯帖Deguenon杰Agbankpe,极大极小Senou, Alidah Aniambossou,四旬斋Gbaguidi,凯文•Sintondji人士Baba-Moussa,雅克Dougnon, ”六个植物的毒性表征贝宁的药典用于沙门氏菌病的治疗”,毒理学杂志》, 卷。2019年, 文章的ID3530659, 12 页面, 2019年。 https://doi.org/10.1155/2019/3530659
六个植物的毒性表征贝宁的药典用于沙门氏菌病的治疗
文摘
最近的研究报道有趣ethnopharmacological、抗菌和植物化学的一些药用植物用于数据的传统治疗沙门氏菌病在贝宁。不幸的是,很少存在于这些物种的毒性数据。本研究旨在评估六个贝宁药典植物的化学特征用于沙门氏菌病的传统治疗在贝宁。水和ethanolic提取物的急性毒性Psidium guajava,Vernonia amygdalina,Cajanus毛竹,菲amarus,Uvaria chamae,马樱丹属卡马拉评估是根据423年经合组织指导的单剂量2000毫克/公斤体重Wistar鼠。在肝脏和肾脏组织学部分进行确认血液和生化数据。内容的铝、铬、镉、铜、铁、铅、锌、砷、硒、锰测定10毫克每提取的电感耦合等离子体发射光谱(ICPOES)方法。我们研究的结果通常显示没有显著影响提取的老鼠的血液和生化参数。然而,除了水和ethanolic提取的Psidium guajava根和ethanolic提取的菲amarus(P > 0.05),所有的提取有显著影响天冬氨酸转氨酶(ASAT)水平,意义的变量阈值(0.0001 < P≤0.05)。没有死亡率和治疗大鼠肾脏组织学状况记录。一般来说,提取的重金属含量不超过规定的标准由世卫组织/ FDA除了少数提取物。砷没有检测到任何提取,而铝和铬检测水平高于世卫组织/ FDA标准。在这些数据的基础上,似乎这六个植物研究没有显示任何毒性。以前的药理、化学数据可用,这些植物都非常适合发展的改进与抗菌尤其是反传统药物沙门氏菌属性。
1。介绍
人类面临着各种各样的条件和健康问题的处理是一个真正的社会问题,尤其是在发展中国家有限的资源(1]。求助于现成的当地资源似乎是一个真正的缓和解决方案从可持续发展的角度来看2]。尽管生物学和医学的进步,发展中国家的大多数人无法获得足够的医疗保健(3]。出于这个原因,植物资源占用很大的地方这些人群的生活4]。
非洲大陆拥有令人印象深刻的ethnopharmacological潜在的各种药用植物组成。据世界卫生组织统计,超过80%的非洲人口使用传统医学和药典解决健康问题(5]。或多或少在地球上列出的300000种药用植物,超过200000人在非洲的热带国家发展和拥有药用美德5]。在阿森纳,植物用于治疗腹泻疾病,在这种情况下,沙门氏菌病,占有重要的地位。事实上,这种疾病构成公共卫生问题在许多国家,因为它是死亡率的一个重要原因。药用植物是一个理想的替代化学药物对发展中国家过于昂贵制造或购买。
为合理使用传统药典,做了多少研究传统食谱获得改进的传统药物。然而,任何生物活性物质是易感,这取决于剂量,产生不良或有害的影响。同样,一般急性毒性评价的提取和测定biocontaminants如重金属是必要的,以确定的公差范围。
在贝宁,ethnopharmacological Dougnon所意识到的研究等。6,7)确定所使用的114种药用植物草药医生,traditherapists,育种者在贝宁南部沙门氏菌病的管理。最常被引用的这些物种价值的抗菌特性,数据生物活性物质的合成,及其幼虫的毒性(8)允许选择六个最活跃的植物。不幸的是,急性毒性和这些植物的重金属含量几乎是不存在的或不足。正是这种差距,本研究旨在填补。其目的是评价急性毒性的重金属含量的水和ethanolic提取六(6)贝宁药典植物用于沙门氏菌病的治疗。这些数据将被用来证明植物提取物和加强数据安全的生物活性和化学成分。
2。材料和方法
有几个研究机构作为研究框架:
(i)实验室的生物学和分子微生物学打字,科学和技术学院(贝宁Abomey-Calavi大学),作为一个框架,用于提取。
(2)应用微生物学和药理学研究单位的自然物质,理工学院Abomey-Calavi(贝宁Abomey-Calavi大学),作为一个框架,用于急性毒性测试。
(iii)的化学实验室的研究生院制度创新工程系东京大学的作为一个框架,用于重金属的决心。
2.1。材料
2.1.1。植物材料
植物材料由六(6)药用植物的器官的贝宁药典中使用的传统治疗沙门氏菌病在贝宁(表1)。国家植物标本鉴定后(Abomey-Calavi大学)教授Hounnankpon Yedomonhan,叶样本清洗和干燥在实验室温度下更好地保护热敏性分子。这些植物干然后使用SM公司芬欧汇川集团2000/1430 / /研磨SMF Retsch机类型。
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2.1.2。动物材料
动物材料由白化病老鼠纯种体重介于200和250克。他们获得的动物设施应用生物医学科学研究所的贝宁。收到,老鼠被随机分为很多3标准笼子前2周的适应时期使用。在此期间,动物们可以免费获得食物和水。他们的宠物店在一个恒定的温度保持在22±2°C和12/12h光/暗周期。
2.2。方法
2.2.1。提取制备
总水和ethanolic提取准备。50克的粉末浸渍在500毫升蒸馏水或乙醇斯图尔特Bioblock科学费雪瓶在室温下72小时。获得的匀浆在亲水三次过滤棉过滤绘画纸1号纸上紧随其后。这滤液当时干在45°C巴斯德炉。
2.2.2。急性毒性试验和治疗的老鼠
老鼠被分为很多根据自己的体重。提取是口服药物根据423年经合组织指南中描述的方法(经济合作与发展组织)。由于植物物种是常用的公众和没有毒性作用的确定,单剂量限制毒性试验的2000毫克/公斤体重。12小时前进行毒性测试,动物被剥夺了食物和水。称重后的老鼠,三很多老鼠构成和分布如下:很多1:控制很多只接收蒸馏水。很多2:水提物的叶子Psidium guajava很多3:ethanolic提取的叶子Psidium guajava很多4:水提物的根源Psidium guajava很多5:ethanolic提取的根源Psidium guajava很多6:水提物的叶子Vernonia amygdalina许多7:ethanolic提取的叶子Vernonia amygdalina很多8:水提物的叶子Cajanus毛竹很多9:ethanolic提取的叶子Cajanus毛竹许多10:水提物的叶子菲amarus许多11:乙醇提取的叶子菲amarus很多12:水提物的叶子Uvaria chamae很多13:乙醇提取的叶子Uvaria chamae很多14:水提物的根源Uvaria chamae很多15:乙醇提取的根源Uvaria chamae很多16岁:水提物的叶子马樱丹属卡马拉很多17:ethanolic提取马樱丹属卡马拉叶子
2.2.3。治疗后
治疗后,大鼠分别监测和观察白天每隔三十分钟,然后每天14天。信息采集卡是制定为每个老鼠为了收集任何毒性的迹象(变化的皮肤、头发、眼睛、出现水肿,以及呼吸系统、死亡)。以下进行了考试。
血液检查。血液检查进行了使用SYSMEX KX 21 n。其中包括红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白(Hb)和决心,比容(不停地),意思是微粒体积(MCV)、平均微粒血红蛋白(MCH)和平均微粒血红蛋白浓度(MCHC)。
生物化学考试。这些都是尿素、肌酐和转氨酶。
组织学检查。组织学部分是由国际海底管理局组织病理学实验室和pathomorphological研究由薄片与苏木精染色的5μ米厚度和光学显微镜下观察。肝脏和肾脏的组织学分析根据描述的基本技术进行了史密斯和布鲁顿(1977)。
器官以前固定在Bouin缓冲福尔马林液体和10%。
2.2.4。切除器官
在这一步中,肝脏和肾脏被移除和固定Bouin(福尔马林+苦味酸+乙酸)和10%的缓冲福尔马林。结果片被安置在仔细地贴上组织学磁带(3.0 x 2.5 x 0.4厘米)。
2.2.5。交通
这个阶段有三个子步骤:脱水、闪电、浸渍。除掉的脱水由组织所有痕迹的水(Bouin液体是水和水不溶混在浸渍/包含介质石蜡)。为了达到这个目标,活检是保存在酒精浴(有机溶剂脱水)浓度增加的:在70°一小时,80°一小时,一小时95°,这三次,持续在100°45分钟连续两次。减轻由脱水溶剂替换成所谓的“过渡”与石蜡溶剂混相:甲苯。
为此,组织在两个二甲苯洗澡,每一小时。浸渍由取代过渡与石蜡溶剂,使其柔软和容易降低。为此,组织在两届融化石蜡浴、每一个小时。
2.2.6款。包容
包含提供外部支持组织,它允许一个好的切片机的实现部分。蜡浸渍后,组织从磁带被移除,引入模具充满融化石蜡,固化后在一个寒冷的表面适当取向的组织块。
2.2.7。组织学部分
不同的块的部分是用切片机在3微米的厚度。一旦减少,部分形成一个石蜡带洗澡的摧残奸污蒸馏水在40°C,然后每个微观幻灯片上恢复先前与酒精脱脂。不同叶片从而形成将在烤箱55°C至少24小时。
2.2.8。染色
这一步让我们突出了不同的组织元素和区分它们;这使得研究他们的结构、形态、及其病理的修改。要做到这一点,我们执行hematoxylin-eosin染色。这是常规核染色后,苏木精染色,深蓝色和细胞质中出现,由伊红染色粉红色。
2.2.9。观察和摄影
幻灯片结束的时候获得一个奥林巴斯光学显微镜下观察染色和照片拍摄使用相机适应显微镜。幻灯片做的分析,因此只有选择最具代表性的照片。
2.3。剂量的重金属
诱导电感耦合等离子体发射光谱(ICPOES)被用来寻找铝、铬、镉、铜、铁、铅、锌、砷和硒。
2.3.1。准备样品
酸分解然后10毫升HNO3-HCl-H2O2 (8: 1: 1, v / v / v)。管被放置在一个加热块温度将增加到120°C 3小时或直至解决方案完全消化。每个工厂由氧化酸消化10毫克的提取。1毫升的每个样本进一步稀释的酸消化20毫升由于腐蚀性酸的性质使用。每个提取过滤除去杂质的3倍和ICP-OES用于阅读。
2.3.2。ICPOES技术的分析
使用的方法和改编自唱(9]。提取的重金属含量T是根据公式确定T = C∗V / m(毫克/克)的误差E = SD∗V / m。与T(重金属含量),C(提取重金属的浓度),m(提取的质量),V(酸消化溶液的体积)。
2.4。统计分析
GraphPad Prism 7.0版软件是用于统计测试。急性毒性评价的平均值和标准偏差。使用非参数Mann-Whitney测试、控制很多的比较与其他很多。5%的显著性水平是申请执行的测试。下面的规模被用来评估的重要性水平(表2)。
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3所示。结果与讨论
3.1。结果
3.1.1。急性毒性的提取
在整个实验动物仍然活着。24小时后提取的管理,临时观察搅拌状态,紧随其后的是平静。血液参数测定在天0,7和14。测试的结果t-student有关进化的白细胞和红细胞的数量表3。没有观察到显著差异之间的值控制批处理和提取的测试。测试t-student变化的结果血红蛋白(Hb)、红细胞比容(不停地),意味着平均体积(MVV)、平均血红蛋白含量(MHC),和平均微粒血红蛋白浓度(MCHC)展示在表4。
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生化参数也被评估。这些是尿毒症(图1),creatinemia(图2),ASAT(图3),和ALAT(图4)。的水提取物Cajanus毛竹的水和ethanolic提取物Vernonia amygdalina,ethanolic提取Psidium guajava叶子,水和ethanolic提取物Psidium guajava根、叶和根的水提取物Uvaria chamae和水提取物菲amarus没有显著影响尿毒症的治疗大鼠(图1)。
除了水提取的Cajanus毛竹、马缨丹卡马拉和菲amaruscreatinemia有显著影响,其他植物提取物的研究有显著的影响(P > 0.05)(图2)。
除了水和ethanolic提取物Psidium guajava根和ethanolic提取的菲amarus,所有提取ASAT水平有显著影响,与一个变量意义阈值(图3)。
除了水和ethanolic提取物Cajanus毛竹,水提取的Uvaria chamae叶子,水和ethanolic提取的Uvaria chamae根,所有提取ALAT无意义的影响水平。
组织的肾脏和肝脏,组织学部分进行确认血液和生化数据。提取,组织学部分器官的治疗大鼠与对照组相比没有结构异常。图5肝脏组织学显示Cajanus毛竹治疗大鼠(图5 (b)老鼠(图)和控制5(一个))。治疗大鼠的肝实质(图5 (b))有一个典型的外观控制老鼠(图中观察到5(一个))。肝细胞(箭头)有一个正常的外观和被安排在绳子隔开的正弦曲线(S)。正弦曲线流到小叶中央静脉(V)图6显示了老鼠的肝脏组织学处理Cajanus毛竹(图6 (b)老鼠(图)和控制6(一))。治疗大鼠的肾实质(图6 (b))控制老鼠(图中观察到典型的体系结构6(一))。肾小球(G)、近端管(TP),远端管(TD),收集管道(CC)显然是可识别的。因此提取物对肾的结构没有影响。所有提取的观察同样的结果。
(一)
(b)
(一)
(b)
3.1.2。重金属提取的内容
表5显示了提取的重金属含量(毫克/毫克)和标准容忍值(毫克/毫克)由世卫组织和FDA(美国食品和药物管理局)10]。对于每个元素,最好的波长选择。这是Al396.153;Cd228.802;Cr205.56;铜327393;Fe238.204;Pb220.353;Zn213.857;Se196.026;As188.979;Mn257.610。
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测量内容,负值表示“在检测水平(UDL)”。事实上,测量仪无法测量浓度低于0.001 mg / L。一般来说,重金属的提取有一个变量的内容。铝和铬含量检测提取高于平均值容忍由世卫组织和美国食品及药物管理局。仅供镉(Cd)p . guajava根提取物,Uvaria chamae叶提取物,ethanolic叶提取物菲amarus有一个高于容忍值。对铜,除了水提取物的叶和根中提取的Psidium guajava,没有检测到任何提取重金属,符合世界卫生组织的标准。关于铁(Fe),提取的六个内容高于容忍值。这些都是叶的提取物Vernonia amygdalina,ethanolic提取的Psidium guajava叶子,水提取的美国chamae根和叶的水提取物菲amarus。铅,水提取的马樱丹属卡马拉叶子,ethanolic提取p . guajava树叶和水提取的Vernonia amygdalina叶子上面内容的容忍极限。至于锌,除了ethanolic提取的美国chamae根部的金属并没有被发现,所有提取内容上方的容忍极限。硒,除了水提取的菲amarus叶子,马樱丹属卡马拉,ethanolic提取的Cajanus毛竹叶子,金属中没有检测到任何提取。砷中没有检测到任何提取,这是符合世界卫生组织的标准。只有叶提取物Cajanus毛竹,Vernonia amygdalina,和Psidium guajava,ethanolic根提取的Psidium guajava和Uvaria chamae,ethanolic提取的菲amarus叶子为锰符合世卫组织/ FDA标准。
3.2。讨论
本研究旨在毒理学特征提取的六个药用植物中使用的传统治疗沙门氏菌病在贝宁。
3.2.1之上。急性毒性的提取
剂量是单身(2000毫克/公斤体重)。水和ethanolic提取物Cajanus毛竹对血液和生化参数没有显著影响。这个结果是由组织学检测,没有发现肾和肝组织学异常治疗大鼠相比,控制。这些观察类似由唐et al。11],显示缺乏生化,血液,摄入后的组织学改变Cajanus毛竹提取一个剂量的15.0克/公斤在昆明小鼠。凯文等人的研究。12)导致了同样的扣除。在他们的研究中,水和hydroethanol提取物Cajanus毛竹没有有毒最大耐受剂量(MTD)的2500毫克/公斤和400毫克/公斤体重,分别。不包括平均微粒体积(MCV)、平均微粒血红蛋白浓度(MCHC)和ALAT,Vernonia amygdalina提取没有显著影响治疗大鼠的生化和血液参数与控制。没有病变也在肝脏和肾脏组织学观察。剂量检测,提取所以不要表现出毒性。这些数据证实了观察扎卡里亚(13),这表明,即使的剂量5000毫克/公斤,水提取的叶子Vernonia amygdalina不会导致任何Wistar鼠的死亡率,在生物化学和血液参数没有明显的修改。Ekpo [14从生化数据)也得出了同样的结论。
的水和ethanolic提取物的Psidium guajava器官没有引起任何治疗大鼠死亡率。血液,没有观察到显著的影响除了平均微粒体积(MCV) ethanolic根提取物诱导显著增加体积。生化水平上没有显著的影响,这种植物的生化参数的提取是指出,但ethanolic提取根导致尿毒症的显著增加,反卫星上。此外,组织数据显示,肾和胎儿组织没有受到影响。无毒的水叶中提取的Psidium guajava已经报道的一剂10 - 50毫克/ 100克Wistar鼠(15]。关于ethanolic根提取的显著影响生化参数,一些文献数据支持我们的结果。据报道,ethanolic提取的Psidium guajava根显著提高血清酶如ALAT和剂量的ASAT subchronic研究150 - 1200毫克/公斤(16]。
一般来说,水和乙醇叶及其提取物的根源Uvaria chamae一般没有显著影响治疗大鼠的血液参数除了叶提取物诱导显著增加的体积平均微粒的体积(MCV)。在生化层面,没有观察到显著影响尿毒症和creatinemia但急剧增加的速度反卫星和ALAT指出相比与控制。这个观察强化了一个已经由Olumese [17)表明,在剂量为5000毫克/公斤体重的根的水提取物Uvaria chamae显著增加反卫星的水平,另一方面,在2000毫克/公斤体重的ALAT水平明显高于治疗大鼠比控制。另一个最近的研究在2018年由同一作者报告类似的观察但这次ethanolic提取的Uvaria chamae根。200年和5000年之间的剂量毫克/公斤体重,显著增加ASAT ethanolic提取管理后观察Uvaria chamae的根源。应该召回,ALAT和反卫星细胞酶是目前在低浓度血清在正常情况下。他们的增加可能有几个来源包括增加酶合成或肝功能衰竭(18]。血清ASAT和ALAT水平升高被认为是敏感的标记可能的组织损伤,尤其是肝损伤(19]。然而,在目前的研究中,没有提到在肝脏组织学异常。因此不可能断言可能带来的毒性Uvaria chamae根提取物,尤其是不记录治疗大鼠的死亡率。然而,有必要建议,等待进一步的工作,提取用于剂量低于2000毫克/公斤体重。
菲amarus提取物对血液参数没有特别显著的影响治疗的老鼠,除了水提物的显著增加平均微粒体积(MCV)和平均微粒血红蛋白(妇幼保健)。生化反应,提取显著减少尿毒症和ASAT水平在治疗大鼠相比,控制。这些观察结果收敛与由Pramyothin [20.]。在这项研究中,治疗水提取物的大鼠菲amarus(75毫克/公斤),po)对乙醇的21天治疗后7天(4 g /(公斤),po)带回的反卫星和ALAT正常水平,表明王亚南属性。即使在5克/公斤体重,提取的菲amarus保持无毒证明Lawson-Evi et al。21]。
提取的马樱丹属卡马拉意思是微粒的体积有明显影响(MCV)和平均微粒血红蛋白浓度(MCHC),血清肌酐,尿毒症,ASAT水平。这些观察没有额外的数据不足以属性的提取马樱丹属卡马拉,一个有毒的角色,尤其是在没有记录在小白鼠的死亡率和组织学部分并没有发现异常。倒et al。22)也报道重大影响生化参数,但它是ALAT被评估。书中从Klorane研究所“有毒植物”,马樱丹属卡马拉已被列为有毒植物。据报道,“人类中毒非常罕见,但核果的摄入导致消化,呼吸,或神经紊乱,在严重的情况下可以去死。与植物接触可能引起过敏和皮肤瘙痒疾病。根据同一来源,这毒性是由于五环的常用药用叫lantadenes [23]。这只毒性担忧水果。建议必须在这个方向的人。
3.2.2。提取的重金属含量
重金属含量是评估补充本研究建立的急性毒性数据和最初的毒性数据提取(幼虫的毒性和subchronic毒性)。目的是优化的毒理学特性以提供完整的数据最优恢复,然而没有掩盖了事实的积累重金属不仅产生有害的后果。
六个药用植物提取物的研究有一个变量组成的重金属。叶的提取物Psidium guajava有铅、铬和铝水平高于极限值。类似的观察已经在这个物种收获一些矿业领域的加丹加省在刚果民主共和国,但是更高的利率(可能是因为研究站点是一个矿区)。应该回忆说,在这项研究中,这种金属物种多样的速度从一个站点到另一个地方,反映出环境因素高度参与重金属的存在(24]。结果也比较这个速度是徒劳无益的其他研究只要起源的环境是不一样的。获得的结果的提取马樱丹属卡马拉是非常不同的从一个另一个关于领导的提取。水提物的含铅量超过极限值,尽管ethanolic提取值低于容忍限度值。低铅的积累马樱丹属卡马拉已经报道了Khankhane和Varshney25]。散度的提取可以归因于溶剂的影响或检测方法的敏感性。相同的观测可以叠加在水和ethanolic提取的数据菲amarus,对铁和镉。然而,研究在加纳粗粉节目相对高水平的铁,相反,值低于世卫组织/粮农组织限制镉(26]。
药用植物中重金属的存在和浓度可以与几个因素,包括源(土壤),土壤的理化性质,影响重金属的浓度(27],pH值、温度、氧化还原电位、阳离子交换量和有机物(28),和根与土壤微生物之间的相互作用29日]。
药用植物中重金属的存在,超过一定的阈值,宣布可能的毒性作用。这些毒性效应是由于他们的阻碍正常的代谢过程。砷和铬经常参与发病和死亡在南非(30.]。法医的研究记录1991年至1995年在约翰内斯堡发现206例传统的补救措施已经被宣布为死因或发现了存在于一个中毒的情况与一位身份不明的物质(31日]。负责10%的重金属中毒。与传统疗法治疗的患者的研究显示,12日混合物,铜(铜)在四混合物浓度非常高。34%的病人(锌)锌浓度升高,一个病人有锌浓度比正常高出10倍。经过一个星期的呕吐与肝肿大和脱水,病人死于肝功能衰竭(32]。在另一项研究中,确定一个7个月大的婴儿已入院治疗服用传统药物,导致严重的multimetal中毒(30.]。
存在的重金属在植物提取物不仅有害的维度。例如,它可以影响植物的次生代谢物生产和结构。它已被证明菲amarus”治疗积极phyllanthine和hypophyllanthin化合物在某种程度的增强Cd压力(33]。在同样的意义上,有人建议,一些药用植物生长在污染土壤达到一个更高的次生代谢物产量(34]。
一些作者认为,“污染”一词用于药用植物中重金属的存在是误导35]。这种断言是支持的事实,在某些药典重金属被用于许多健康问题的管理。中药里,水星是某些制剂的一部分称为“朱砂”(硫化汞),“甘汞”(氯化汞),或“氯化oxydum石”(氧化汞)35]。同样,在印度传统医学,bhasma(钙化粉/灰)是一个herbal-mineral或草药金属配方(33]。
4所示。限制
虽然这项研究提供了有趣的植物毒性的研究数据,半数致死量不确定和毒性不评估在很长一段时间。
5。结论
六个药用植物提取物的研究没有引起任何死亡或任何组织肾和胎儿障碍大鼠治疗的急性毒性测试中,虽然在一些地方有显著影响生物化学和血液参数。这些提取不能归因于毒性的剂量2000毫克/公斤。从一个提取重金属的内容不同到另一个地方。一些成绩低于可容忍的水平,而另一些则远高于他们。重要的是评估健康风险的存在每个重金属为了使目标建议。否则,它是非常重要的,以确定半数致死量和完成这些数据的亚急性毒性。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
作者非常感激世界科学院科学促进发展中国家(TWAS)和联合国教育、科学及文化组织(UNESCO)。这两个机构已经做了这个研究可以通过研究经费分配给研究小组在487号RG /生物/ AF / AC_G-FR3240293303。作者也感谢博士Josiane PONOU为她通过化学实验室技术支持部门的制度创新工程研究生院的东京大学的。
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