戴了眼镜的眼镜蛇的毒液(眼镜蛇科:眼镜蛇眼镜蛇):在体外研究不同的地理起源在斯里兰卡

文摘

一些国家居住表面变质由于眼镜蛇眼镜蛇发现差距的毒液成分根据其地理位置和斯里兰卡眼镜蛇仍然缺乏证据支持这一点。因此,当前的研究主要集中在解决关系组织病理学变化根据斯里兰卡的地理变异n眼镜蛇毒液。重要器官和肌肉组织的组织病理学变化后肌内政府的毒液n眼镜蛇研究了用BALB / c小鼠。毒液的半数致死量n眼镜蛇在本研究确定为0.55,0.66,0.68,0.62,和0.7毫克/公斤北(NRP), (CRP)中部,西部,南部,分别和Sabaragamuwa地区人口毒液。组织病理学变化观察在不同水平重要器官和肌肉组织的老鼠。NRP陪同明显高于炎症和坏死细胞的渗透到骨骼肌和CRP毒液证明向其它地区高水平的cardiotoxic效果比较。本研究显示某种程度上的病理变化的影响n眼镜蛇毒液样品根据他们的地理分布。

1。介绍

许多热带和亚热带国家站在表面变质报告的严重医疗问题的近似年率90000意外死亡由于毒蛇咬伤1- - - - - -3]。是一个热带国家,多样的气候和地理分布,斯里兰卡提供了一个极好的自然栖息地对有毒和蛇,这有助于展示长达37000例毒蛇咬伤事故的一个重要近似率(4,5]。大多数的国家包括斯里兰卡居住这一主题的表面变质分类毒蛇负责根据其毒性的严重程度。在这个分类,亚洲眼镜蛇被公认为剧毒的蛇之一。尽管眼镜蛇咬伤的频率小于毒蛇咬在斯里兰卡,病例的死亡率和发病率的眼镜蛇表面变质是高度显著(6]。亚洲眼镜蛇包括眼镜蛇眼镜蛇(图1)物种在斯里兰卡,分类学上属于家庭眼镜蛇科,是很出名的,由于其独特的表面变质情况下出血、溶血、炎症和坏死的效果在不同器官导致多器官功能衰竭(6]。类似于许多高度阐述了蛇毒,眼镜蛇毒还包括主要的两个分数的有毒蛋白质酶和非酶的蛋白质也确定为细胞毒素(7,8]。水解酶的解放军₂透明质酸酶,caseinolytic AMPase, atp酶结合细胞毒性神经毒素,cobramines, membranotoxins和心脏毒素的贡献逐步施加他们的主要预期活动固定和消化毒液插入猎物9- - - - - -11]。以上归纳毒性作用的生物活性成分一般属性对生成可见病理性心脏异常,紧张,肾,肺,肝脏和肌肉组织。

蛇咬伤引起的病理改变通常取决于两个基本因素:负责蛇咬的物种和物种的特定毒液的生化成分(12- - - - - -14]。许多科学家正在使用不同的方法和技术来解决这一生物化学和药理学特性蛇的毒液。蛇毒液成分变化根据其分类差异(15- - - - - -18)、地理(16,19- - - - - -25,饮食26- - - - - -30.)、年龄(31日,32),和著名的变化取决于性的蛇26,33]。这些因素,内部由于地理差异和种间变异的毒液成分已成为一个有争议的话题作为有效的抗蛇毒血清的生产主要依赖于复合材料的毒液。

印度是四种眼镜蛇一起居住的n眼镜蛇,n kaouthia,n sagittifera,n . oxiana这些,n眼镜蛇确定是最分布的物种眼镜蛇在印度。因此,印度已经给他们多关注解决这个问题的毒液可变性由于区域差异眼镜蛇。几项研究已经显示,组成和临床病理的影响重要器官的毒液n眼镜蛇依照他们的起源位置有显著变化(16- - - - - -19,34- - - - - -37]。类似于n眼镜蛇在印度,戴了眼镜的眼镜蛇在斯里兰卡栖息范围广泛的陆地栖息地,海拔1500米(38,39]。不过斯里兰卡的分布n眼镜蛇是高度可变的,斯里兰卡仍然缺乏这些系统学研究斯里兰卡毒蛇来验证每个毒液成分和它们对身体的影响根据他们的地理多样性和其他相关因素。当可用的文学概况杀伤力和斯里兰卡的毒性作用n眼镜蛇毒液对重要器官,数据记录不显示足够的证据支持种内的变化的因素由于原点的位置。

抗蛇毒素是唯一具体、best-preferred和世界范围内选择治疗毒蛇咬伤的3]。斯里兰卡仍然缺乏抗蛇毒素的本地生产的设施和地方性毒蛇种类包括眼镜蛇(40]。目前,治疗蛇咬伤的受害者在斯里兰卡进行使用多价或双价抗蛇毒素,通常在印度制造。几个研究在体外抗蛇毒素功效和其他研究表明,当前临床管理使用抗蛇毒血清的治疗可用表面变质由于眼镜蛇咬在斯里兰卡不触发所需的恢复病人的疗效水平这揭示理解特定的生物组成的必要性及其相关的发病机制与他们的地理位置6,37,40- - - - - -42]。

因此,本研究的主要目的是确定杀伤力和特定的组织病理学影响诱导的毒液n眼镜蛇在斯里兰卡重要器官和肌肉组织使用BALB / c小鼠模型。这项研究还调查了毒液的变化根据五个不同区域,考虑组织损伤的类型和严重性级别可见一些指标的影响n眼镜蛇毒液组件。它可以作为一个基本研究贡献在种间鉴定定性和定量变化斯里兰卡的毒液n眼镜蛇,从而支持有效的抗蛇毒素对未来的生产n眼镜蛇毒液。

2。材料和方法

2.1。蛇,毒液收集和存储

收集七十七名成年眼镜蛇从五个不同的地理区域内地斯里兰卡从几个不同地理特征如降水、森林类型、海拔、湿度(20标本西部地区人口(WRP), 21个标本中部地区人口(CRP), 15个标本从北地区人口(NRP), 11标本Sabaragamuwa地区人口(SARP)和10个标本南部地区人口(SRP)](图2),在2014年3月至2015年4月底。蛇都被转移到herpetarium,部门兽医病理学,兽医学院动物科学,Peradeniya大学。在执行每个眼镜蛇的毒液收集herpetarium通过允许眼镜蛇咬到封口膜拉伸50毫升无菌烧杯。毒液是立即冻结在-80°C。这些冷冻毒液样本中使用三个月从集合中每个实验。

2.2。试剂和动物

所有的试剂和化学物质用于这些研究均为分析纯。白化小鼠称重22-23g和老鼠从医学研究所(MRI),科伦坡,和小动物被安置在标准条件的单位,医学院,Peradeniya大学,美联储与正常饮食和水。动物被处理根据以下指南由国际医学科学组织理事会在动物实验43]。为了获得足够的适应新环境,这些老鼠被安置周之前所有实验的开始。

2.3。估计的蛋白质

每个地区的毒液池样品直接量化,以规范每个毒液样品从每个区域。标准化是使用布拉德福德蛋白质测定方法(44]。总蛋白浓度在96年估计为595 nm well-microplate读者(美国热Multiskan Ex)根据制造商的协议。一个空白是通过使用10准备的μl的蒸馏水。所有标准和样品一式三份。相应的蛋白质浓度估计使用吸光度标准曲线稀释。本文中提到的所有剂量的毒液,这称为各自毒液蛋白剂量,在毫克/公斤。

2.4。杀伤力试验(LD₅₀)

作为评估正确的致命剂量的第一步,眼镜蛇毒液注射肌内(IM)为腓肠肌的老鼠。试点研究毒液从每个样本剂量范围从0.2毫克/公斤,1.2毫克/公斤,并准备在500年总量μl。根据上述结果实现了首次研究总体中位数在LD₅₀每个地理上的集中毒液样本被发现。然后十剂等在这个临时值LD₅₀价值是每个毒液样品准备。六个老鼠每确定毒液和IM注射剂量被给予。在24小时内死亡的老鼠数量每个测试组的下毒被记录。对照组10老鼠注射一个类似的稀释剂的体积。LD的₅₀值被计算使用概率元分析方法(45)使用IBM SPSS统计窗口,17.0版。

2.5。组织病理学分析

评估组织病理学研究的重要器官,五组老鼠两组小鼠(12)被注射肌内注射相同剂量(0.5毫克/公斤)测试的毒液从每个样本。地理上分开。对照组的小鼠注射无菌0.9%氯化钠溶液体积的500毫升到相同的地方测试组的毒液注入。后,尸体解剖进行1 h、3 h,和6 h后政府眼镜蛇毒的老鼠。三个从每个治疗组小鼠安乐死,然后从毒液注入组织样本网站的腓肠肌肌肉,肾脏,肝脏,心脏,肺,脾是收集和这些样本是保存在10%中性缓冲福尔马林至少7天。组织病理学的准备样本脱水后,嵌入在蜡,4到5μm石蜡部分被削减和苏木精和伊红染色46]。彩色准备使用Axio检查范围。A1(蔡司)光放大的缩微复制40 x和显微图使用数码相机拍摄单位。组织病理学损伤在每个组织样本得分如下:缺席,0;温和,+;温和,+ +;和严重,+ + + (47]。

2.6。血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶(血清),血清谷氨酸丙酮酸氨基转移酶(血糖)和血清肌酸激酶(CK)的活动

异常的评估血清,血糖和血清肌酐通过心脏内的血液收集方法。血液采集也表现在1 h、3 h,和6 h后政府眼镜蛇毒的老鼠和三个从每个治疗组小鼠牺牲来实现这一目的。活动的血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶(血清)和血清谷氨酸丙酮酸氨基转移酶(血糖)是衡量使用商业可用的工具。在随后的工具包(描述方法48]。酶的活动表示为U / L。血清肌酸激酶(CK)的酶的活动内容是根据描述的方法估计商用诊断工具包(49]。单向方差分析是用来测试之间的关系汇集每个地理区域和每个酶活性毒液样本使用SPSS (17.0)。结果被认为是重要的在p < 0.05。

3所示。结果

3.1。蛇

我们收集了77n眼镜蛇根据地域不同的地方在斯里兰卡(图2)。

3.2。对照组

老鼠注射500μl剂量的无菌0.9%氯化钠溶液在腓肠肌肌肉和牺牲后1小时,3小时,6小时,一个星期。正常组织学观察出现在所有器官(肾脏、肝脏、心脏、肺和脾脏)除腓肠肌肌肉组织纤维,含有单聚焦的病变由于针插入注射生理盐水。没有炎性浸润或纤维化。

3.3。致命的毒液n眼镜蛇在不同的地理位置

毒液的半数致死量n眼镜蛇在本研究肌内注射后确定为0.55毫克/公斤,0.66毫克/公斤,0.68毫克/公斤,0.62和0.7毫克/公斤,NRP CRP, WRP, SRP,分别和SARP毒液。

3.4。n眼镜蛇毒液诱导小鼠器官的病理变化

组织病理学变化的心、肺、肾、肝脏和肌肉组织的老鼠下毒池毒液从五个地区都被记录下来。然而,所有地区汇集毒液取样有相似的病理影响心脏,肺,肾,肝脏和肌肉组织。

3.5。骨骼肌组织病理学变化

显微镜下,观察肌坏死和轻微出血细胞在所有组织样本包括腓肠肌肌肉解剖1 h后注入毒液除了SARP和SAP(表1)。然而,随着时间的推移严重水平没有增加。NRP注入样品显示中度炎症细胞的渗透比较其他样本。密集的浸润的炎症细胞和坏死细胞被记录在所有的组织样本,从小鼠获得的牺牲3小时后注射毒液。但是相比其他组织部分来自其他四个地区,骨骼肌组织获得样本被注射毒液池NRP伴随着高度的浸润炎症细胞和坏死细胞。

3.6。心脏肌肉组织病理学变化

根据组织病理学研究心脏组织所有的毒液样品被发现是高度cardiotoxic(表2)。心脏组织样本来自老鼠用毒液治疗主要包括拥堵,焦点和偶尔的肌坏死,偶尔的淋巴细胞和中性粒细胞浸润(图3)。这些观察记录注射后1小时内所有区域的毒液。温和的焦点和偶尔的肌坏死和凝集红细胞的组织观察1小时后CRP的毒液注入样品。在三个小时内,c反应蛋白注入样品表现出严重损害向其它地区比较。然而,比较每个心脏组织样本上的损害程度将毒液从每个地区的组织样本处理CRP毒液与高水平的坏死损害比其他样本。尽管这种差异没有区分病变毒液的毒性效应与每个地区的心脏组织。所有组织样本显示,凝集的红细胞,这可能是引起复合凝血级联的毒液的影响造成严重凝血功能障碍。造成拥堵的最低毒液量心脏组织在NRP 0.2毫克/公斤,CRP, WRP, SRP和0.32毫克/公斤SARP的毒液。

3.7。肺组织组织病理学变化

所有的毒液五个不同地区的样本被发现导致明显的肺组织病理异常(表3)。浸润的炎症细胞在细支气管腔观察显微镜下注射后1小时内所有区域的毒液样本。组织病理学变化在肺泡septae伴随着炎症细胞的浸润间质组织和拥堵的毛细血管和不规则的毛细管内皮,动脉炎,焦点在肺泡上皮异常。肺泡出血与肺组织的一般观察相关老鼠下毒毒液样本(图五个地区4)。然而,当与其他四个地区相比,SARP毒液注入样品没有展开这些病理异常在1小时时间。毒液造成肺充血的最小剂量为0.2毫克/公斤为所有区域毒液样本。严重的肺组织炎症变化从老鼠死后6小时内下毒和汇集毒液NRP样品是唯一的病理变化被发现与别人相比。

3.8。在肾脏组织病理学变化

从小鼠肾组织的样品部分,这是注射眼镜蛇毒液从每个区域,显示组织学改变控制老鼠集团给予生理盐水相比(表4)。肾小球的观察与不规则囊膜等退行性改变和毛细血管堵塞。1小时内NRP和CRP地区毒液注入样本发现肾小球的拥堵。肾小管发生退行性变化观察急性肾小管坏死的组织样本。这些变化包含管液泡化,坏死的管状上皮细胞,毛细血管充血,炎性细胞渗透到肾间质,和退化的远端和近曲小管(图5)。毒液从SARP地区不表现出任何炎症细胞的浸润小时期间。我们没有观察到任何重大差异五个地区的毒液。然而,NRP和CRP汇集毒液注入老鼠牺牲与肾组织得到了6个小时后显示其肾毒性最大影响比较其他毒液WRP样本,SARP和SRP。毒液的最低剂量导致毛细管堵塞在肾组织中是0.3毫克/公斤五regions.fv毒液的所有样本

3.9。肝脏组织病理学变化

显微镜下,所有的肝组织部分被发现显著变化的正常组织学由于注射毒液的影响无论区域(表5)。1小时内的所有病理损害是温和的证明和逐渐增加的时间。这些微小病变在肝组织中包含两种类型的肝细胞坏死。这两个,纬向肝细胞坏死,其中包含小叶中心的坏死,随机的肝细胞坏死,焦肝坏死,偶尔多病灶的肝坏死,肝坏死主要是肝组织(图中观察到6)。除了这些坏死变化,炎症细胞浸润,血管堵塞观察一般炎症变化。没有观察到的宏观或微观出血明显病变在肝组织样本收集的任何时期。当比较和对比有害侮辱毒液的肝组织根据地区收集、微观损伤肝脏样本给定的毒液SARP比其他四个地区更加突出。

3.10。酶的活动

显著增加血清血清(图7)、血糖(图8),CK(图9)活动观察1小时的毒液注射后,与控制老鼠组。当比较血清活动区域的毒液注入老鼠组之间的显著差异在获得的值(F =15.37065;p =0.00001)。血糖为活动也发现之间的显著差异的地区毒液注入老鼠组(F =14.51459;p = 0.00001)和CK活动区域的毒液注入老鼠组之间被认为有一个显著的变化在他们的值(F =4.92769;p =0.001182)。

4所示。讨论

尽管不同物种之间的差异的毒液,生化成分和发病机制由于表面变质由一个特定的物种可能根据他们的地理位置不同(16,19- - - - - -25,50]。在目前的研究中我们调查了这一理论的适用性n眼镜蛇物种在斯里兰卡声明为最毒蛇之一。本研究主要关注排列来识别引起的系统性和生化病理n眼镜蛇和理解这是否产生毒性病理学在小鼠不同器官的分化根据特定的地理位置n眼镜蛇。

在这项研究中,我们发现LD₅₀值获得n眼镜蛇毒液注入通过IM路线从每个值是不同的。平均LD₅₀值(IM)获得杀伤力研究使用毒液n眼镜蛇来自五个不同区域显示降低LD₅₀值。当这致命剂量的n眼镜蛇斯里兰卡是相比以前记录的LD₅₀印度的值n眼镜蛇(51),我们可以得出结论,斯里兰卡n眼镜蛇更多的有毒吗n眼镜蛇在印度,而地区内的LD的变异₅₀值产生的毒液的每个地区都没有显著差异。这可能是由于更少的土地质量在斯里兰卡相比印度。然而,NRP汇集毒液样本持有LD最低₅₀价值被认为是最有毒的毒液的五个地区。我们的结果本研究康科德和几个其他的研究显示,蛇毒的杀伤力因物种而异,甚至同一物种内根据自己的地理起源(15,35]。毒液致死毒性之间的差异确定了印度和斯里兰卡是相当显著的。这可能是相当大的变化的原因在临床情况下人类的表面变质在斯里兰卡和印度相比6]。然而,先进的蛋白质组学研究需要确定这种变化进行相关识别可能影响表面变质后临床症状和体征。

在这项研究中每个区域的病理效应毒液样本根据毒液政府评估的时间和病理数据见证了毒性作用对IM注射后1小时内不管其起源位置。类似于以前的记录之间的关系的影响表面变质表面变质的时间(52]目前研究还发现严重的毒液增加平行于时间。

大量研究表明,眼镜蛇的毒液可以产生丰富的病理异常重要的组织结构(12,13,18,51,53]。组织病理学组织部分腓肠肌肌肉,心脏,肾脏,肝脏,和肺的老鼠注射毒液从所有五个地区表现出严重的病理异常包括组织坏死出血和拥堵,而控制小鼠组导致他们的正常组织结构。几项研究相似的组织病理学在小鼠体内组织表明,强有力的毒性作用的细胞毒素和磷脂酶的非酶的零头₂(中国人民解放军₂)酶会导致这些广泛坏死毒液的影响组织的观察孔的形成和令人不安的磷脂的脂质双分子层结构12,16,54,55]。其他研究报告状态类似出血和拥堵在几个组织类型作为止血剂产生的干扰n眼镜蛇金属蛋白酶和解放军的毒液组件₂(13,35,56]。因此,我们可以得出结论,斯里兰卡的毒液n眼镜蛇包含功能类似的组件进行破坏血管内皮细胞和细胞外基质导致血液渗漏到组织。

所有重要器官和骨骼肌组织了下毒的五个地区老鼠组展示的基本防御反应严重的炎性细胞浸润,确认为反应的主要组织活动下毒动物对解放军的有害影响₂和中国人民解放军₂生成活性氧的眼镜蛇毒液(35,56,57]。一项研究在印度n眼镜蛇发现了类似的白细胞招聘组织解放军的文档₂内容眼镜蛇毒液不同根据其地理位置而自动变化的能力吸引炎症细胞(35]。但在我们的研究中,我们没有认识任何显著差异的炎性改变根据他们地区的毒液集合。

虽然组织病理学研究骨骼肌的毒液注入小鼠显示广泛的细胞病理学,对照组骨骼肌的精细结构方面除了包含物理伤害由于注入。相比之下,骨骼肌注射NRP毒液池示例演示了严重的肌坏死,出现快于其他四个区域显示可能的地区内的成分和毒性作用的变化在斯里兰卡的毒液n眼镜蛇。其他研究表明,细胞毒素和解放军的数量₂可能会根据不同的位置的特定眼镜蛇(35]。上面的细肌纤维膜膜破坏的毒素在眼镜蛇毒液导致异常涌入诱导各种类型的细胞病理学(35,55]。

表面变质的n眼镜蛇是很出名的效应诱导的心脏组织的心脏毒素分数低分子多肽在它们的毒液58]。心脏毒素正在迅速吸收,在血液中循环,结合解放军酶₂,并启动心脏细胞的膜结构的破坏。此活动的最终结果是myotoxicity诱导细胞病理学包括坏死,炎症,充血性心脏组织的变化类似于当前的研究。所有组织样本发现红细胞聚集,这可能是引起复合凝血级联的毒液的影响造成严重凝血功能障碍。成群红细胞也观察到由于心脏毒素直接裂解活动引起的。当比较这些病理改变的严重性级别按照毒液收集区域,CRP毒液注入老鼠包含比别人严重的心脏组织的变化。据此前报道这种隐域性的多样性之间的病理改变可能是由于潜在的毒素基本上区分量变与负责任的眼镜蛇的特定位置(35]。

大多数死亡造成的n眼镜蛇表面变质发生由于窒息后的后续结果和神经突触前神经毒素活动传播。所有区域下毒老鼠的肺组织中血管异常由眼镜蛇毒金属蛋白酶,毛细血管堵塞,不规则的毛细管内皮,动脉炎和肺泡出血。一些研究表明,眼镜蛇毒液解放军₂介导炎症细胞的浸润的活动为细支气管腔和肺泡septae [16]。因此,白细胞的积累导致肺泡隔堵塞和肺泡上皮细胞遭到破坏,在这项研究中,展示解放军的可能的病理效应₂在斯里兰卡眼镜蛇毒液小鼠的肺组织。

突触后细胞毒素在眼镜蛇的毒液是很出名的,容易积累在肾组织(13]。大多数有毒物质的排泄在蛇毒通过肾脏通常发生的下毒的动物55,59]。眼镜蛇毒眼镜蛇的毒液,眼镜蛇毒液引起肾毒性与上述机制也可以应用。本研究揭示了相似的病理损伤肾脏急性肾功能衰竭、肾毒性大概已经被先前的研究分类的影响n眼镜蛇毒液(13,53]。肾脏的精细结构破坏是由于组织病理学可见肾小球和管状病变。管损伤包含典型的急性肾小管坏死的退行性变化。许多研究表明细胞毒素和解放军₂毒液的介质引起的肾病(13,53]。因此,肾损伤的研究对理解这些组件的炎症和坏死活动贡献在斯里兰卡n眼镜蛇毒液。上述病变肾组织中明显变化下毒老鼠根据其地理位置没有发现。

解毒以来任何有毒的组件是肝脏的主要行为之一,大多数的有毒成分有机会发挥他们的病理活动直接到肝实质。小鼠的肝组织管理用毒液从所有五个地区在这项研究中见证了这个事实通过展现变量细胞肿胀,胞质度变化与其他病理变化主要归因于大量肝细胞坏死比其他器官。许多研究与观察推出眼镜蛇毒液解放军₂作为这种肝损害的病因12,53]。吞噬细胞移植诱导的眼镜蛇毒液中观察到当前的研究也破坏了肝组织的细胞结构。升高的ALT和高山记录在所有五个地区老鼠组血清分析类似的生化证据毒液诱导肝细胞功能障碍。当这种血清分析数据结合当前的组织病理学观察肝组织,毒液Sabaragamuwa省被确定为肝毒性引起的毒液。

肌酐激酶作为血清相关指标的组织破坏骨骼和心脏肌肉和可能的肾脏功能障碍(35,53]。因此,膨胀的血清CK水平下毒老鼠不管他们的地区指定有毒斯里兰卡的参与n眼镜蛇与上述组织。最高的CK值获得的毒液NRP和CRP。当结合的组织学变化结果myotoxicity骨骼和心脏肌肉生化结果,NRP和CRP汇集的毒液可以拥有最高myotoxicity结束。

5。结论

本研究的组织和血清生化数据有助于揭示特定的病理的影响n眼镜蛇毒液对啮齿动物重要器官和骨骼肌肉组织和这幅图支持识别可能的毒性作用在任何下毒的动物n眼镜蛇在斯里兰卡。目前的研究还表明这些病理变化提供基线的波动信息可能的种内的变异在斯里兰卡n眼镜蛇毒液根据其起源的位置。当比较这些变化的斯里兰卡n眼镜蛇与印度的观察记录n .眼镜蛇这种内的可变性与地理相关的病理学的眼镜蛇毒液比印度表现出显著的低水平n眼镜蛇。这可能是由于更少的土地质量在斯里兰卡印度与美国相比。尽管地方组织病理学的变化是轻微的记录,这次调查提供了基本的定性和定量变化的证据了斯里兰卡的成分n眼镜蛇毒液基于他们原来的位置。此外,蛋白质组学和其他生化研究应确定地区内的毒液成分的变化及其具体作用方式在不同的器官。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是支持的资助科学,技术和研究MoSTR(地铁/ TRD / AGR / 3/1/7)斯里兰卡。作者要感谢提供许可的野生动物保护部门收集蛇(WL / 3/2/13/14)。感谢Dhammika佩雷拉先生在实验室技术援助工作,K.M. Karunajeewa先生和T.M.I.P.K. Bandara和其他寄生虫学分部的员工,部门兽医病理学,兽医学院动物科学,Peradeniya大学以各种方式提供支持。先生K.P.G. Karunaratne提供了宝贵的协助准备光显微组织病理学的幻灯片;我们感谢Sarath Bandara先生和Nimal佩雷拉的医学院,Peradeniya大学对照顾动物实验室的大力支持和帮助对动物实验甚至责任小时后。先生,我们非常感谢先生Buwaneka Pathirana Nimanth Aberathna, Anil Wijethunga先生,先生Asela Suraweera,先生Tharaka Priyadarshana,查先生已,Sachee佩雷拉,先生和p·珀里斯先生对贷款与字段和拯救蛇从不同的位置。第一作者希望承认Krishantha de Zoysa先生的贡献,在准备地图。

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