文摘

一系列的毒性进行了调查,以评估潜在的基因毒性和反复给药的口服毒性CuroWhite,专有提取姜黄素的氢化和标准化的氢化curcuminoid含量不少于25%。所有的测试进行了一般按照国际公认的标准。测试项目不是细菌诱变的回复突变试验或体外哺乳动物染色体畸变试验,观察和体内基因毒性活动在大鼠骨髓微核测试。90天的反复给药研究是在男性和女性进行Sprague-Dawley老鼠。两个死亡事件发生在主和卫星高剂量组和由于填喂法测定误差。没有特定的器官或其他毒性测试项被观察到的最大剂量800毫克/公斤体重/天,由填喂法。科学,因此,估计为800毫克/公斤体重/天。

1。介绍

Curcuminoids,隔绝姜黄根(姜黄Linn),历史上有很长一段时间都用在传统的阿育吠陀和中药。姜黄素(C1), demethoxycurcumin (C2),和bisdemethoxycurcumin (C3)是主要的组件在姜黄素和负责其生物活性1]。姜黄素及其结构类似物具有许多生物活性,如cytoprotection、抗氧化活性、炎症反应修改、心血管支持,神经保护,辐射防护2]。

姜黄素的催化氢化作用导致tetrahydrocurcumin (THC) hexahydrocurcumin (HHC)和octahydrocurcumin (OHC) [3]。这些是姜黄素的主要代谢物;像他们的父母化合物,它们有许多生物活性(4,5]。THC的影响,研究了反铁nitrilotriacetate——(Fe-NTA)诱导体内氧化应激(6]。THC比姜黄素更容易被胃肠道吸收[6等)和诱导抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶,谷胱甘肽S-transferase,和NADPH:醌还原酶,进行Fe-NTA-induced比姜黄素在体外自由基。这些结果表明,姜黄素转化为THC体内。同样,THC的抗氧化活性高于姜黄素(7),抗氧化活性的分析了THC体外脂质氧化改性的影响。THC显示抗氧化效果比α-生育酚和姜黄素(8]。THC支持正常血管功能的Nω在老鼠-nitro-L-arginine甲酯盐酸盐,相关的影响是减轻氧化应激(9]虽然接触二磷酸腺苷治疗人类富含血小板血浆HHC对血小板聚集的抑制作用导致了(10]。这些结果表明化合物可能有潜在的支持心血管健康。THC调查的可能王亚南水飞蓟素相比Wistar鼠对红霉素estolate-induced毒性(11]。这项研究的结果显示,THC水飞蓟素相比,可以显著的保护。姜黄素及其代谢产物对1-methyl-4-phenyl-1 THC发挥神经保护,2,3,6-tetrahydropyridine和抑制多巴胺的损耗12]。

氢化curcuminoids有较高的生物利用度而封装β环糊精与姜黄素95%。β环糊精作为亲脂性的笼子里,因此增加的溶解度和稳定性活性分子(1]。CuroWhite是一个独特的配方与环糊精氢化curcuminoids封装。然而,没有研究调查的潜在毒性氢化curcuminoids可用。我们的研究小组进行了急性和CuroWhite subchronic口服毒性研究老鼠和简要总结结果之前(13]。在目前的工作,我们报告之前的基因毒性研究和提供详细的报告总结subchronic氢化curcuminoid配方的研究,CuroWhite。

2。材料和方法

2.1。化学物质

所有化学试剂、溶剂、医药、和其他化学物质用于分析或制药的研究成绩。二甲亚砜(DMSO)获得HiMedia实验室(Nasik、马哈拉施特拉邦、印度)是用于所有三个基因毒性的研究。环磷酰胺获得Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)是用于哺乳动物的体内体外哺乳动物染色体畸变和微核测试。以下额外的化学物质被用于细菌回复突变和体外哺乳动物染色体畸变测试:D-glucose-6-phosphate,氯化镁,β烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸味精盐和氯化钾(氯化钾)获得HiMedia实验室。以下额外的化学物质被用于细菌回复突变测试:2-aminoanthracene (2 aa), 2-nitrofluorene (2 nf), 4-nitroquinoline 1-oxide (4 nqo) 9-aminoacridine (9 aa),和叠氮化钠(SAZ)获得Sigma-Aldrich和琼脂,钠铵磷酸盐、柠檬酸、D-biotin,葡萄糖,磷酸氢二钾、磷酸氢二钠,组氨酸,色氨酸,硫酸镁,Oxoid营养肉汤2号,磷酸氢钾、氯化钠从HiMedia实验室。以下额外的化学物质被用于体外哺乳动物染色体畸变试验:秋水仙素和丝裂霉素C从Sigma-Aldrich获得;杜尔贝科的磷酸盐缓冲剂,胎牛血清的边后卫,吉姆沙染色剂,谷氨酰胺青霉素链霉素溶液,和罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI) 1640中获得HiMedia实验室;和冰乙酸和甲醇从费雪科技有限公司(孟买、马哈拉施特拉邦、印度)。May-Grunwald的污点从HiMedia实验室获得另外用于哺乳动物体内微核试验。以下化学物质中使用了90天的大鼠口服毒性研究:二氧化碳(有限公司₂)气从Sridevi气机构(Tumakuru、印度);DPX、K2-ethylenediaminetetraacetic酸和福尔马林获得不错的化学物质(印度科钦);曙红来自reChem实验室(加拿大);和苏木素的获得Microexpress (Tumakuru、印度)。

2.2。测试项目

测试项目是CuroWhite(钻进生物学实验室(P)有限公司Kolenchery,喀拉拉邦,印度)。CuroWhite制造符合良好生产规范的提取从姜黄姜黄素(姜黄l .)粉末粉其次是加氢、封装β环糊精,喷雾干燥生产标准化的氢化姜黄素粉25 - 27%的白色外观(1]。规格成分分析如表所示1。很多数字SL162053(基因毒性研究)和SL151691 SL151719,和SL153146(90 -天口服毒性研究),连同规格,分析证书、材料安全数据表,测试项目被确认符合良好实验室规范(GLP)。

2.3。基因毒性的研究

2.3.1。细菌回复突变试验

一般细菌回复突变试验进行遵守经济合作与发展组织(OECD) GLP按照经合组织C(97) 186 /决赛(14),一般按照经合组织471测试指南15),2000年美国食品药品管理局红皮书,IV.C.1。(16)为了调查CuroWhite诱变的潜力。细菌测试菌株沙门氏菌沙门氏菌感染TA98、TA100 TA1535, TA1537和大肠杆菌WP2uvrA从MOLTOX Inc .,邮政信箱吗 ,美国布恩,NC 28607。

初步溶解度测试是由检查测试项目与蒸馏水混合,乙醇,丙酮,甘油和DMSO溶液。降水测试是在重复进行测试项的浓度1 - 5毫克/板在室温下和观察2 h。接下来,一个初步的细胞毒性测试是在重复使用测试仪进行应变年代。沙门氏菌感染与八个测试项TA100浓度从0.05到5毫克/板,有或没有S9-mix。

基于初步的细胞毒性测试结果,7个浓度(0.062,0.185,0.556,1.667,2.5,3.75,和5毫克/板)被选为主要诱变试验。在所有的实验中,测试解决方案是刚做好的,只是在治疗之前,和使用在两个小时内通过暂停测试项在DMSO 50毫克/毫升的浓度并进行串行实现剩余浓度稀释,这样政府100年μL测试解决方案的实现上述浓度每板。代数余子式补充postmitochondrial分数(在实验室准备从肝脏提取苯巴比妥/β-naphthoflavone预处理大鼠代谢活化系统(S9-mix)刚准备使用前的所有学习阶段的治疗。适当使用积极的控制没有S9-mix选择特定于测试人员按照引用的指导方针。积极的控制与S9被选在实验室表征的基础上批S9分数研究中使用2节aa和苯并(a)芘。作为诱变剂产生的结果历史积极控制范围内的实验室,2节aa被选为积极的控制使用与S9所有测试菌株。所有积极控制和DMSO准备车辆。

主要测试过程由一个标准板合并(I)方法和预培养(方法二)测试。每个实验两种方法进行了一式三份。殖民地数字计数测定;从这些,平均值、标准偏差和变异率计算。结果被认为是积极的,如果增加concentration-related发生回复突变的殖民地和/或可再生的生物相关回复突变的殖民地增加至少一个集中发生在至少一个应变有或没有代谢活化。增加被认为是生物相关的,如果他们下跌超过上面的置信区间(95%)的适当的历史负控制。如果上面的标准是满足,测试被认为是负面的。

2.3.2。体外哺乳动物染色体畸变试验

体外哺乳动物染色体畸变试验进行了一般遵守经合组织GLP (14),一般按照经合组织473年,1997测试指南17)为了调查CuroWhite的致染色体断裂的潜力。两个独立的实验进行了有无S9代谢活化。复制文化(有或没有代谢激活)保持在每个浓度的测试项,溶剂/车辆控制,积极控制。女中国仓鼠卵巢细胞(CHO)用作测试系统是来自美国类型文化集合(美国,马纳萨斯,弗吉尼亚州)和生长在补充RPMI 1640中。

DMSO作为消极的控制和车辆测试项目与测试系统由于其兼容性。测试解决方案是刚做好的测距测试,明确的试验和验证性试验通过溶解测试项目在DMSO浓度的10毫克/毫升,然后进行后续系列稀释RPMI 1640中实现每个实验的试验溶液的浓度。DMSO浓度的RPMI用作负控制为0.1%。积极的控制是由溶解物质在DMSO产生股票的解决方案,其次是连续稀释RPMI达到浓度为0.4(明确的和确认测试)和0.8(仅明确测试)μ丝裂霉素C和g /毫升浓度的7.5和15.0μg / mL环磷酰胺(明确的测试)。S9-mix准备在实验室中描述细菌回复突变试验部分。

进行了初步的测试来确定测试项目在DMSO的溶解度,检查降水,并确定工作储备溶液的pH值。DMSO溶液添加到10毫克的测试项0.1毫升的增量,直到完全溶解,溶解浓度计算。可溶性股票的解决方案是连续稀释在RPMI 1640中获得0.1毫克/毫升工作储备溶液,观察对降水和博士是一个测距后细胞毒性试验是在重复进行相同的程序用于确定的测定实验的目的为主要选择浓度测试。细胞计数进行有丝分裂指数的计算和确定细胞毒性相对细胞生长(宏霸)和相对细胞有丝分裂指数(RMI)(即。,每100个细胞生存和百分比分裂细胞百分比(基于得分1000个细胞)在治疗组相比,负(溶剂)控制)。

两个独立的主要测试进行了分析。明确的分析,赵文化受到消极的或积极的控制或测试溶液浓度的5,10,15μ克/毫升(基于测距结果)3 h段有无S9代谢活化。曝光时间后,这些细胞被洗,与完全培养基补充,另外孵化15 h。抽样是在18 h(1.5细胞周期)后开始治疗。

描述的验证性试验进行了明确的分析,除了暴露在试验溶液浓度是对整个实验进行18 h潜伏期和只是没有代谢激活,由于负面结果的分析。所有单独的测试解决方案和正面和负面的控制实验进行重复和并发的措施进行了细胞毒性的主要实验。暴露和采样时间确定的和确认分析总结如下:(我)明确的试验:3 h治疗和没有S9-mix / 18 h采样时间。(2)验证性试验:18 h治疗没有S9-mix / 18 h采样时间。

二百年中期细胞从每个实验组进行评估结构畸变和得分。多倍体和endoreduplicated细胞也被记录下来。clastogenicity(即。,negative or positive results) of the test item was determined as a concentration-related statistically significant increase in the frequency of chromosomal aberrations without gaps compared to the negative control and/or increases in the number of polyploid cells and endoreduplicated chromosomes compared to negative controls. The test item was considered nonmutagenic in the absence of the above criteria.

2.3.3。体内哺乳动物微核测试

哺乳动物的体内微核试验进行了一般遵守经合组织GLP (14),一般按照经合组织474年,1997测试指南18)为了调查CuroWhite体内基因毒性的潜力。测试项剂量被溶解CuroWhite准备在DMSO浓度达到20,40和80毫克/毫升为了提供一个常数剂量体积10毫升/公斤。日常的计量解决方案和管理在三个小时内由于缺乏稳定的数据准备。负对照组收到同样体积的DMSO车辆。积极的控制是由溶解环磷酰胺在盐浓度达到5.0 mg / mL的政府10毫升/公斤体重的标准计量体积。

男性和女性Wistar鼠(懒得生物学实验室,卡纳塔克邦,印度)是用于研究和收藏(最多3相同性别的动物/笼)在标准聚丙烯笼子消毒玉米棒子的床上用品 °C, 42 - 68%相对湿度,12 h光暗周期。动物收到AMRUT实验室动物饲料(Pranav农业产业有限公司,Sangli,马哈拉施特拉邦,印度)和反渗透纯化水随意。preexperimental的6天内提供适应的动物。动物保健和使用符合委员会的建议是控制和监督的目的动物实验(CPCSEA)、环境、森林,和气候变化,印度政府,在实验室动物伦理委员会的机构的许可(IAEC)。

五十6-8-week-old动物体重140 - 170 g是由重量和分层随机分为五组大鼠/性/组和给一个单一的每日剂量的测试项填喂法连续两天在测试浓度为0(车辆控制),200年,400和800毫克/公斤体重。积极的控制,环磷酰胺50毫克/公斤体重,是由填喂法一次。

体重测量得到开始之前的实验时间和剂量之前每一天学习。所有的动物被观察到的死亡率,可见毒性的迹象,每天一次或其他反应治疗剂量后(1 h),直到牺牲(通过二氧化碳接触)24小时后最终的政府。动物受到总值尸体剖检和骨髓涂片上准备一式两份标准显微镜载玻片样本来自动物的股骨。

至少二千多色红细胞(PCE)每个动物都得分频率的微核。PCE成熟红细胞的比例(又名normochromatic红细胞(指标))/动物由PCE的数量决定,一旦遇到至少200红细胞计数。试验结果被认为是积极的统计学意义,剂量增加,或增加一个剂量组,观察血细胞发生的PCE (MPCE)相比,控制。结果被认为是负面的,如果上面的两个标准是满足。

2.4。九十天的反复给药的口服毒性研究老鼠

一般研究符合GLP按照经合组织C(97) 186 /决赛和一般按照经合组织指南40819),以评估潜在的健康危害与口腔接触CuroWhite和重复来估计no-observed-adverse-effect水平(科学)。这项研究包括两个卫星组28天,不做任何处理,观察复苏时期。动物保健和使用的研究是按照CPCSEA指南和实验室的IAEC协议。

一百男性和女性Sprague-Dawley老鼠(懒得生物学实验室(P)有限公司Antharasanahalli,卡纳塔克邦,印度),8 - 9周,体重140 - 169克(男性)和140 - 170 g(女性)在实验周期的开始,是由重量和分层随机分配到四个主要组的10大鼠/性/组和两个卫星(复苏)五组大鼠/性/组后5天(男性)或六天(雌性)驯化期。动物(3 /笼)被安置在聚丙烯笼子不锈钢网烤架和无菌条件下玉米穗轴被褥足够的新鲜空气(12 - 15更改/ h), 21.2 - -24.8°C, 44 - 69%相对湿度,12 h光暗周期。实验室动物饲料(Pranav阿尔戈产业,Sangli,马哈拉施特拉邦,印度)和反渗透水随意提供。

CuroWhite是溶解在蒸馏水(BML产业,班加罗尔,印度),按照赞助商及其普遍接受的规范作为一个适当的车辆管理由填喂法水溶性物质,为了准备测试项剂量配方浓度为20,40和80毫克/毫升。每天测试解决方案管理一旦填喂法以恒定体积剂量10毫升/公斤bw(每周计算)提供剂量水平0(车辆控制),200年,400年和800毫克/公斤体重/天/赞助商的建议。组被指定为G1(车辆控制),G1R(车辆控制复苏),G2(低剂量),G3(中间剂量),G4(高剂量),和G4R(大剂量复苏)表2。每天测试解决方案是刚做好的,三个小时内服用的准备。

临床(发病率和死亡率,一般cage-side和详细的)和功能(对感官刺激的反应性、运动活动,和握力)观察,眼科检查,测量体重和饲料消费是根据经合组织的准则,和身体体重增加计算。

最后一周的治疗(主要组)或最后一个星期的恢复期(卫星组),收集尿液样本,进行外观检查,比重,pH值、蛋白质、葡萄糖、血液和血液细胞,酮体,硝酸和白细胞。最后一次治疗后的主要组或最后一天为卫星组恢复期,一夜之后快,血液样本的测量(即临床病理学参数。、血液学(包括凝血时间)和临床化学)是获得所有的动物从retroorbital丛在有限公司₂麻醉。临床化学参数测量偏离引用经合组织的准则,只有两种酶(丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶)测定表明肝细胞的影响。

血液采集后,动物被过度暴露于公司实施安乐死₂。总值病理检查,选择器官重量测量,和器官重量体重比率计算。从所有的动物组织收集和保存完整的组织病理学检查(以下偏差:组织没有收集和检查垂体和甲状旁腺腺)进行了主要的控制和高剂量组。完整的组织病理学检查也进行两只动物(一个主要大剂量的男性和一个卫星高剂量女性)发现死在63年和62年,分别。

2.5。统计分析

Microsoft Excel 2013(美国微软公司,微软,WA)被用于统计分析的染色体畸变试验结果利用卡方检验进行比较的细胞数量的变化与染色体畸变与相关控制。统计分析进行了使用GraphPad Prism 5.04为Windows (GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国)的哺乳动物微核测试和90天的反复给药研究。单向方差分析(方差分析)其次是Dunnett后续测试进行评估的变化MCPE控制哺乳动物相比,微核测试。相同的测试进行了比较显著的差异的主要车辆控制和治疗组体重和体重增加,饲料消费,绝对和相对器官重量、血液和临床化学参数和数值尿分析参数在为期90天的研究。这些参数在卫星控制和高剂量组相比使用学生的以及。一个< 0.05被认为是具有统计学意义的价值。

3所示。结果与讨论

3.1。基因毒性的研究

3.1.1。细菌回复突变试验

在初步溶解度测试,测试项目在DMSO溶液溶解,形成一个均匀的淡黄色悬挂在最大浓度为1000毫克/毫升,但不溶于其他测试溶剂(数据未显示)。因此,DMSO被选为所有的车辆和消极的控制实验。没有观察到沉淀浓度测试项5毫克/板沉淀试验,没有剂量减少回复突变体菌落数量比消极的控制或影响草坪的发展背景,有或没有S9-mix,观察在任何浓度测试仪测试项TA100菌株的初步的细胞毒性测试(数据未显示)。

在我测试方法(板合并),意味着回复突变的菌落数,有或没有代谢活化,仍在历史负控制范围内测试浓度和在并发负控制如表所示3。方法二测试(预孵化),并发负控制和测试浓度为0.185 mg /板与S9-mix试验机TA98菌株下降略低于历史负控制范围;然而,随着差异没有统计学意义,这些反应被认为是正常的。所有其他浓度,有或没有S9-mix菌株都是在历史范围内(表4)。积极控制在所有实验诱导倍增加回复突变的殖民地并发负控制相比,虽然没有concentration-related或可再生的生物相关增加回复突变体观察菌落数在任何应变测试项有或无代谢活化浓度测试。

3.1.2。体外哺乳动物染色体畸变试验

测试项是随着在DMSO浓度的10毫克/毫升,降水或pH值的变化并没有观察到工作股票0.1毫克/毫升的浓度稀释后车辆原液的RPMI 1640中(数据未显示)。在测距测试中,在一个20的浓度μg / mL,宏霸是负控制相比减少了67.56%和76.18 S9-mix的缺失和存在,分别。同样,RMI降低了57.89%和55.71,分别,没有和代谢活化。由于细胞毒性观察到20μg / mL,更高浓度没有评估。测试项浓度≤10μg / mL导致减少宏霸和次rmi < 35%的负控制值(数据未显示);因此,高浓度的15μ克/毫升(中途测试细胞毒性浓度最低和最高的测试noncytotoxic浓度)被选择用于染色体畸变试验。

明确的化验,阴性对照组细胞的比例和结构畸变没有差距是1.5%没有S9-mix,≥十二倍增加阳性对照组均出现异常的细胞相比,显著的负控制和结果表中描述5。观察而没有明显的统计学差异负控制染色体畸变的百分比没有差距,在任何浓度测试项,有或无代谢活化。

在验证性试验(表中6),没有进行S9-mix,阴性对照组细胞的比例和结构畸变没有差距为1.5%,和21-fold统计上显著的增加的异常细胞中观察到的积极控制。观察而没有明显的统计学差异负控制染色体畸变的百分比没有差距,在任何浓度测试项目。没有多倍体或endoreduplicated中期测试item-treated观察细胞或消极的控制,没有沉淀,对pH值的影响,或限制的任何实验条件下观察细胞毒性的权威和验证性分析(数据没有显示)。

3.1.3。体内小鼠微核测试

没有死亡,临床毒性的迹象,不良反应治疗,或改变体重和体重增加在任何动物观察研究(数据未显示)。MPCE观察到的频率在负对照组历史控制范围内的实验室,和一个统计上显著的增加MPCE频率在积极的对照组相比,消极的控制。没有观察到显著差异的频率MPCE之间的三个剂量组相比,负控制如表所示7。PCE成熟红细胞的比例相似的三个剂量组和消极的控制。

3.2。九十天的反复给药的口服毒性研究老鼠

两个动物,一个G4主组(高剂量)男性和G4R卫星(高剂量组)女,被发现死在63年和62年,分别。没有总在死去的动物的尸体剖检病变观察。观察支气管肺炎的肺G4男,和肺泡充血和水肿以及温和的自溶的肺部和温和的变化标志着自溶的损伤肝脏,肾脏,胃,肠,生殖器官,大脑,坐骨神经,脾、胸腺和脊髓,观察显微镜检查(表上的动物9)。没有其他死亡率中观察组(G1和G1R(车辆控制),G2 (200), G3(400),或G4和G4R(800毫克/公斤体重/天))在研究过程中。

轻度至中度鼻涕在一些动物的大部分治疗团体开始第一周G3 G2和G3、G4雄性和雌性,G4 G4R雄性和雌性周3,周6 G2男性和继续在整个治疗期间是暂时性的。卫星高剂量组(G4R)女性,鼻涕是观察到的只有一个次(66天)在一个动物,没有鼻涕随时观察治疗或复苏时期的对照组(G1和G1R)动物。没有观察到鼻涕G4R男性后一周10或复苏时期。观察正常活动的减少是暂时性的几个动物个体的男女在所有主要治疗组(G1男,一天28 - 30;G2男性,两天13 - 15,49-56职责。G4男,一天68 - 71;一个G1和G2和两个G4雌性,一天71;和G4女,28天),但它不是任何控制或卫星组中观察到的动物。没有其他临床观察观察在任何其他动物cage-side每天或每周的详细观察整个治疗和恢复时间,并在对感官刺激的反应没有异常,步态,或运动活动在FOB被观察到的主要组。

没有观察到任何G1眼科病变或变化或G4组动物或在考试开始前进行的最后一个星期的治疗。在体重没有显著变化,身体体重增加,或饲料消费观察在治疗或复苏阶段的治疗组相比,相关控制(数据未显示)。

血液的评估参数(数据未显示),统计上显著的增加意味着微粒血红蛋白浓度(MCHC)观察G2和G4组的女性相比,控制。尽管是统计学意义,增加MCHC仍然在实验室的历史控制数据的范围,也没有统计上的显著差异观察G4R MCHC的女性相比,卫星控制的经济复苏时期。相比没有明显的统计学差异相关的控制被观察到的任何男性治疗组或任何其他血液参数的女性群体。

统计上显著的剂量相关性降低肌酐的主要观察对照组相比,两性的主要组在临床化学考试,虽然没有在统计上有显著差异的肌酐观察G4R组G1R相比(表8)。几个额外的显著改变临床化学参数相比,有关控制发生零星和没有一个剂量组和性别之间的关系。没有显著改变观察尿液的分析参数,和一些零星的改变血液、胆红素、酮、葡萄糖、蛋白质、和硝酸盐发生在男女团体和与类似的频率控制和治疗动物或剂量的个人发现没有关系(数据未显示)。

在验尸总值病理检查,没有观察到病变的任何动物。在统计上有显著差异的绝对器官重量相比,有关控制观察肝脏重量增加G4男性(数据未显示)。几个显著增加器官重量相对于体重有关控制观察G4相比男性组和发生零星没有明确的剂量关系除了肝脏重量的情况下体重比例(表10)。统计上的显著差异相对的性器官重量仅为女性组肝脏重量降低体重G4R组相比G1R(数据没有显示)。所有的统计上显著的变化在绝对和相对器官重量是历史控制范围内的实验室。

观察到的微观损伤的两只动物死于上面的研究报道。微观病变中观察到的主要控制和高剂量的动物发生类似的频率(或更大的控制)或被孤立的个体动物。所有微观病变观察组织病理学检查显示在表中9。

CuroWhite潜在的基因毒性,据我们所知的氢化curcuminiods一般来说,以前没有调查。在硅片毒性筛选模型预测dihydrocurcumin, tetrahydro-bis-demethoxycurcumin,和tetrahydrodemethoxycurcumin (demethoxytetrahydrocurcuminoid的同义词)潜在诱变剂和潜在的肝毒素,和dihydrocurcumin tetrahydrodemethoxycurcumin也预测潜在的啮齿动物致癌物质(20.]。这些氢化curcuminoid化合物,只有tetrahydrodemethoxycurcumin CuroWhite的成分。其他CuroWhite氢化curcuminoid选民似乎没有被测试在这些模型中,这很有趣在tetrahydrocurcumin hexahydrocurcumin, octahydrocurcumin已报告中姜黄素的主要氢化curcuminoid代谢物在几项研究[21- - - - - -25]。

姜黄素已经相当深入研究通常被认为是安全的,在某些用途(26];尽管如此,有一些分歧关于姜黄素的致癌性。姜黄素(500年和160年μg /板)和姜黄素油性树脂(160μg /板)没有显示诱变细菌回复突变试验(27,28姜黄素诱导染色体畸变),而没有在CHO细胞代谢活化10μ克/毫升(29日,30.]。姜黄素诱导MPCE也得到了证实在人类肝癌细胞G2无代谢活化(31日]。然而,姜黄素纳米粒子,在剂量300毫克/公斤体重,体内染色体畸变测试呈阴性反应的,小核,彗星化验(32]和curcuminoid-essential石油复杂-在体内染色体畸变试验和体内微核试验的剂量2000毫克/公斤(33]。符合上述报道基因毒性的结果,国家毒理学规划处(NTP)引用附加引用证明姜黄素的缺乏诱变细菌回复突变试验,体外诱导染色体畸变和微核,缺乏体内染色体畸变和微核(34]。因此,由于混合基因毒性结果和普遍缺乏口服毒性和致癌性试验,国家结核控制规划进行了长期的致癌性研究姜黄素在大鼠和小鼠(34]。没有致癌性的证据在雄性老鼠摄入的后2年姜黄素含量高达2000毫克/公斤体重/天的饮食,但curcumin-induced致癌性的证据被模棱两可的雌性老鼠和雄性和雌性老鼠的国家结核控制规划的基础上增加发病率观察到的几种肿瘤类型在不同组动物研究中没有明确的剂量关系。联合联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂专家委员会评估姜黄素的国家结核控制规划研究的回顾,认为姜黄素不是致癌物质剂量相关(由于观察不35]。因此,因为氢化curcuminoids姜黄素在人体的正常代谢产物,尽管在低水平(25),因为在其他氢化curcuminoids硅片的预测,我们调查了基因毒性的潜力CuroWhite在当前工作。

在当前细菌回复突变试验,对比结果观察到其他组与姜黄素和姜黄素油性树脂(27),没有观察到的细胞毒性,CuroWhite评估的最大推荐浓度5毫克/板。因为没有离群值的其他验收标准的自发回复突变体菌落数量并发负控制相比,历史上的控制和适当的诱变反应积极的控制实现,测试被认为是有效的。因此,这两种方法的结果我和方法二世,在浓度为0.062,0.185,0.556,1.667,2.5,3.75,和5毫克/板,有或没有代谢活化,被认为是明确负所有回复突变的殖民地人数远低于genotoxicologically相关阈值。

相比之下Araujo等人的作品和其他涉及姜黄素、CuroWhite没有引起显著或concentration-related增加结构在CHO细胞染色体畸变的(3 h治疗和无代谢活化)或确认(18 h治疗无代谢活化)体外哺乳动物染色体畸变分析当前的测试。因为积极的和消极的验收标准控制和细胞毒性浓度满足,测试被认为是有效的,明确的和确认化验没有代谢的激活被认为是明确对clastogenicity不利。

哺乳动物的体内微核测试被认为是有效的试验验收标准之间的正面和负面的控制和比例的成熟红细胞总数已经实现。作为没有观察到显著增加MPCE比消极的控制,明确测试被认为是消极的。然而,目前尚不清楚骨髓发生接触测试项目。虽然有轻微抑郁的P / E比率女性剂量组与对照组相比,这显然不是男性剂量组中,没有性别差异在毒性预计表7。因此,目前尚不清楚观察到的负面结果应解释为暗示缺乏CuroWhite在老鼠体内致染色体断裂的活动。尽管如此,基于明显的负面结果的体外测试,以及一般的负面结果姜黄素在体内微核测试,预计不会基因毒性的测试项目。

反复给药的口服毒性CuroWhite也调查了在当前的工作。在之前的急性口服毒性研究中,观察CuroWhite是无毒剂量2000毫克/公斤体重女性Sprague-Dawley老鼠。这些结果简要总结与当前为期90天的研究的结果在之前的出版物(13]。因为没有其他口服毒性研究已经发表在CuroWhite,或我们所知氢化curcuminoids一般来说,这里我们描述90天的详细研究。

62年和63年的观察研究死亡两天(一个高剂量复苏组女性和高剂量一个主要组男性)被认为是偶然由于肺损伤符合填喂法错误,缺乏其他总值或组织病理学结果可以表明毒性作用的测试项,及其在动物个体孤立的事件(表9)。在这两种动物,中度到标记自溶的变化被观察到在许多器官和组织,被认为是由于时间的流逝(估计是12到16 h)之间的老鼠死在晚上和第二天他们发现在验尸。

鼻涕观察所有治疗组的血压是暂时性的整个治疗时期被认为是由于强烈的刺激气味的测试项,因为它没有被观察到在控制动物或G4R组在恢复期间。唯一的其他临床研究中观察到的迹象是减少活动发生瞬变的只有少数动物G1, G2, G4组和测试item-related没有考虑由于其零星的发生和没有G4R组在研究过程中。

没有观察到显著的发现与临床病理学检查的异常统计上显著的剂量降低肌酐在两性(剂量关系是明显的女性而不是男性中一览无遗,但它不能排除)的主要组相比,控制临床化学评估(表中8)。统计学意义时,减少仍远的历史控制范围内相关的实验室和没有任何关联组织病理学观察,并没有证据表明肌肉萎缩(或相关的病理条件)。此外,没有证据的条件(例如,肝病,溶血性贫血),可能导致错误的降低肌酐明显对血液分析。最后,没有观察到显著变化肌酐卫星高剂量组(G4R)相比,控制(G1R)。由于这些原因,肌酐的变化被认为是发生没有毒性或生物相关性。

增加肝脏重量在尸体剖检观察G4男性在规模小(剩下的历史控制范围内的实验室),缺乏一个明确的剂量反应,但这是与剂量相关统计上显著的增加肝脏重量相对于体重G4男性(表10);后者发现也在历史的控制范围内,绝对和相对肝脏重量是恢复在卫星群。没有相关研究结果中观察到的组织病理学检查;因此,观察被认为是没有毒性的相关性。没有非凡的发现被观察到的总或组织病理学(除了如上所述的动物发现死)考试。

4所示。结论

总之,CuroWhite没有造成碱基对或移码突变的最大推荐浓度5毫克/板细菌回复突变试验和被认为是摘要的应用条件下测试系统。同样,CuroWhite被认为是nonclastogenic条件下的体外哺乳动物染色体畸变试验,因为它未能引起染色体损伤的细胞毒性浓度15μ克/毫升。在哺乳动物的体内微核测试中,没有观察到有关增加MPCE高达800毫克/公斤体重,得出的结论是,CuroWhite不具有基因毒性活动适用条件下的测定;然而,指出骨髓接触测试项目不能明确确认。在90天的口服毒性研究男性和女性Sprague-Dawley老鼠,每日填喂法管理0,200,400,和800毫克/公斤体重/天CuroWhite没有造成毒性检测参数,和科学被估计为800毫克/公斤体重/天。因为这是最高剂量测试,未来的研究利用更高的剂量和更长的持续时间可能被认为进一步描述CuroWhite毒理学的状况。

附加分

突出了。(我)CuroWhite不是诱变在细菌回复突变测试。(2)CuroWhite没有体内基因毒性活动展出。(3)科学的800毫克/公斤体重/ day-highest测试区剂量估计在90天的研究。(iv)没有确定靶器官或治疗相关的毒性效应。

的利益冲突

钻进生物学实验室(P)有限公司赞助的研究和发展,生产,测试项目和市场,CuroWhite,描述。Sreeraj Gopi是研发部门的首席科学家钻进生物学实验室和CuroWhite的发展起到了至关重要的作用。Joby公司雅各也在钻进生物学实验室,coinventor CuroWhite, 90天的和基因毒性研究和协调。Alastimmanahalli Narasimhiah Ravikumar基因毒性研究的研究主任。Tumkur Subbarao使人盲目崇90天的毒理学研究主任,负责分析。都懒得的雇员生物学实验室(P)有限公司承包的钻进生物学实验室(P)有限公司开发研究计划和实施,分析和解释,并报告结果的毒理学研究在此描述。作者声明没有额外的利益冲突在研究方面,本文的作者,和/或出版。

资金

作者披露,提供的金融支持为所述研究钻进生物学实验室(P)有限公司Kolenchery,科钦,682311年喀拉拉邦,印度。

确认

作者感谢以下个人的贡献工作:盖美国Murbach评论的实验室报告和技术写作,参与调查者,Bidhan罗伊,实验任务的性能和/或收集的数据,和Jared Brodin行政支持准备的手稿。