文摘

Dirithromycin抗生素是一个拥有14个内酯环大环内酯物和被广泛用于医学治疗许多不同类型的细菌感染。在目前的研究中,可能的基因毒性dirithromycin评估在人工培养的淋巴细胞通过姐妹染色单体交换(sc)、染色体畸变(CA)和微核(MN)测试和细胞增殖动力学等细胞有丝分裂指数(MI),复制指数(RI),核分裂指数(NDI)对细胞毒性进行了分析。细胞培养进行了四种不同浓度的dirithromycin(37.75、67.50、125和250µg / mL) 24和48 h。Dirithromycin显著诱发SCE和MN频率在24和48 h浓度细胞治疗。此外,CA水平已经显著增加细胞处理几乎所有的浓度dirithromycin 24(除37.75µg / mL)和48 h治疗时间比控制。然而,MI、RI和NDI值没有影响dirithromycin治疗(p> 0.05)。这项研究的结果表明,dirithromycin治疗引起的遗传损伤通过增加细胞遗传学端点的水平,表明其基因毒性和诱变作用对人类淋巴细胞在体外。

1。介绍

Dirithromycin是一种大环内酯物糖肽抗生素用于治疗轻度到中度感染,急性细菌性急性加重慢性支气管炎,肺炎,咽炎和扁桃体炎,和简单的皮肤,以及感染皮肤结构。这是一个药物前体和开发口服药1,2]。

Dirithromycin转换期间,非酶的水解吸收,微生物活性代谢物9 - (S) -erythromycylamine。Erythromycylamine施加其活动通过绑定到50年代70年代的子单元细菌核糖体导致抑制蛋白质合成和核糖体亚基的形成,50年代和30年代。60 - 90%的服用剂量是水解后35分钟内erythromycylamine剂量和转换后血清中红霉素几乎完成了1.5小时。消除红霉素是粪便的主要路线/肝[3- - - - - -5]。

常见的副作用引起的dirithromycin报道为呕吐、头痛、恶心、腹泻,腹痛(1,6]。另一方面,安全性和有效性dirithromycin 12岁以下儿童尚未建立。然而,没有足够的和控制数据在人类怀孕。此外,一生研究动物与dirithromycin尚未执行,评估潜在的致癌物。尽管有证据表明基因毒性的影响许多抗生素组(7,8),没有信息存在于dirithromycin的基因毒性。

因此,在目前的研究中,可能的基因毒性dirithromycin对人体淋巴细胞的影响通过使用不同的细胞遗传学检查指标和端点检测,姐妹染色单体交换(sc)、染色体畸变(CA)和微核(MN)。细胞生长动力学,如细胞有丝分裂指数(MI),复制指数(RI),核分裂指数(NDI)分析确定抗生素的细胞毒性效应。

2。材料和方法

2.1。测试物质

Dirithromycin是一个拥有14个内酯环大环内酯物erythromycylamine的C9-oxazine导数,由凝结的erthromycylamine 2 - (2-methoxyethoxy)乙醛。9 n, 11 o-oxazine环形成hemiaminal,酸性和碱性水溶液条件下是不稳定的(1]。dirithromycin如图的化学结构1。Dynabac Dirithromycin、贸易名称,购买从Abdiİbrahimİlac圣。抽搐。Aş。(İstanbul,土耳其)和溶解在蒸馏水。四个剂量,37.75,67.50,125年和250年μg / mL,准备分析认为是临床相关的剂量。

2.2。收集血液样本

从四个健康志愿者外周血采集标本捐助者(20 - 24岁两个男人和两个女人,)没有接触已知的诱变剂的历史。大约2毫升静脉血收集静脉穿刺到喷油器含有肝素的抗凝剂CA,南加州爱迪生公司和MN化验。

2.3。CA和SCE化验

重复的外周淋巴细胞的文化,0.2毫升的肝素化全血样品添加到2.5毫升染色体中B (Biochrom, F5023)补充10μg / mL溴脱氧尿苷(σ,B5002)。文化是在黑暗中孵化37°C 72 h。细胞治疗与37.75、67.50、125和250μg / mL dirithromycin 24 h (dirithromycin添加48 h后启动文化)和48 h (dirithromycin添加24 h后启动文化)。一个控制和一个已知的诱变剂Mitomycin-C (Kyowa, 50-07-7)积极控制也包括在内。细胞暴露于0.06μg / mL秋水仙碱(σ,C9754)文化的最后2 h。离心细胞收获0.4%氯化钾作为低渗的解决方案和甲醇:冰醋酸(3:1)作为固定剂。染色的幻灯片是根据标准方法使用5%染色CA分析(45380年默克公司)(9南加州爱迪生公司)和修改荧光+染色方法分析(10]。

CA的镜检,预计在1000年使用油浸物镜的奥林巴斯双目显微镜放大。每捐赠100传播中期(总共400中期/浓度)进行结构的发生和/或数值改变。CA的数量每个细胞(CA /细胞)和异常细胞的平均频率(Ab.C %)浓度和治疗周期计算。确定数量的sc, 25传播二流中期进行了分析。结果被用来确定意味着每个细胞的sc数量(sc /单元)。此外,100个细胞从每个捐赠者是得分的决心复制指数(RI)和3000个细胞/捐赠者的计算分析了有丝分裂指数(MI)。

2.4。锰测定

整个肝素化的血液(0.2毫升)是培养在2.5毫升的染色体中B和孵化72年37°C h。细胞治疗与37.75、67.50、125和250μ克/毫升dirithromycin 24和48 h。细胞松弛素B(σ,C6762)添加到文化最终浓度为5.2μ孵化的g / mL 44小时。额外的24小时孵化后37°C,通过离心收集细胞。治疗后低渗的溶液在室温下,细胞被固定在甲醇:冰醋酸(3:1)解决方案的三倍。风干幻灯片染色沾5%解决方案(11]。

微核频率由得分1000双核细胞从每个捐赠者在400放大根据Fenech MN分析描述的标准(11]。为了确定细胞毒性效应,核分裂指数(NDI)被分类计算捐赠500细胞对细胞核的数量控制。

2.5。统计分析

获得的数据被表示为算术平均值()±标准错误(SE)。比较之间的差异平均自发和诱发频率使用学生的表现以及。SPSS为windows 10.0一揽子计划是用于统计分析。所有值是双尾并接受< 0.05显著性水平。

3所示。结果

细胞遗传学端点和的平均频率的值为每个dirithromycin浓度细胞生长动力学和控制表所示1- - - - - -3。在这项研究中,dirithromycin显著诱发SCE频率的浓度在24和48小时治疗细胞(表1)。dirithromycin剂量和控制之间的差异对国际扶轮在统计学上没有显著意义(),如表所示1。

比较的控制和治疗细胞显示dirithromycin CA的频率明显增加,Ab.C浓度24(除了最低剂量的37.75μg / mL)和48 h(表2)。六种结构畸变,即染色单体和染色体断裂(图2),染色单体交换(图3),片段,姐姐联盟,具双着丝的染色体,且只有一个类型的数值偏差(多倍体)(图4)观察。如表所示2dirithromycin治疗没有显著影响MI值()。

所有测试dirithromycin浓度显著升高引起锰水平细胞的治疗期(表3)。BNMN分布的分析表明,dirithromycin显著增强的双核细胞含有锰、比控制。表3也表明,NDI值细胞不受dirithromycin治疗()。

4所示。讨论

大环内酯类抗生素抑菌,广泛的活动对许多革兰氏阳性细菌。大环内酯物抗生素包括自然成员,高活性化合物,半合成衍生物和由14 - 16 member-ringed化合物。尽管他们具有相似的化学结构和作用机制和抵抗,他们在不同的药代动力学参数和频谱不同的活动(2,3]。

大环内酯类蛋白质合成抑制剂。大环内酯类的作用机制是抑制细菌蛋白质的合成。大环内酯类发挥他们的活动通过可逆地绑定到70年代50 s亚基的细菌核糖体。他们刺激peptidyl-tRNA分子的离解核糖体在伸长阶段。这导致链终止。因此依赖rna的蛋白质合成抑制细菌生长受到抑制。大环内酯类倾向于积累在感染的白细胞和运输到网站(2- - - - - -4,6]。

据报道,一些大环内酯类毒性作用对心血管和胃肠道系统(12,13),他们还会导致过敏,肝损伤,发育毒性、基因毒性、致畸性(14- - - - - -18]。

因为有证据表明基因毒性的影响许多抗生素组(7,8一些研究人员调查了诱变和基因毒性大环内酯类的潜力。研究İla和Topaktaş17),螺旋霉素(bwt 100毫克/公斤/天)诱导骨明日CA水平细胞大鼠口服治疗后7天。螺旋霉素不引起CA和sc研究Rencuzoğullarıet al。19]。Acetyl-spiramycin,螺旋霉素的衍生物,并不是诱变沙门氏菌沙门氏菌感染TA98、TA100 TA1535、TA1537 TA1538菌株(20.]。

另一个大环内脂类抗菌素,红霉素,CA频率升高在人类淋巴细胞(21),但它并没有增加MN频率在治疗人类淋巴细胞(22]。Grujičićet al。23)报道,与羟苄羟麻黄碱治疗相结合,红霉素,维拉帕米在六天的频率显著增加MN在孕妇外周血淋巴细胞。托哈密(24)增加了抗抑郁药物之间相互作用引起的基因毒性观察舍曲林和小鼠的骨髓细胞中抗生素红霉素。Miokamycin,大环内酯物集团的抗生素不是诱变沙门氏菌沙门氏菌感染菌株,也没有引起显性致死突变小鼠(25]。İbrahim和El-Sherbeny26)报道,克拉霉素诱导染色体畸变在骨髓和脾细胞细胞的老鼠。

在目前的研究中,我们调查了基因毒性的潜力dirithromycin人类淋巴细胞通过使用带宽,CA,和MN测试,因为没有信息在其基因毒性的潜力。我们也决定了细胞增殖动力学、MI、RI,利尿,治疗细胞中的值分析测试的细胞毒性效应的物质。dirithromycin用于实验的浓度测定基于每日成人剂量由个人(两片)。因为平板电脑含有512.46毫克dirithromycin,成年个体必须采取一天dirithromycin 1024.96毫克。计算后,我们准备67.5的股票的解决方案μg / mL蒸馏水dirithromycin,每日相关剂量的成人。识别可能的情况下过量和低剂量,我们还准备了双重的上层(125年和250年μg / mL)和单一的低剂量(37.75μg / mL)。然后用这四个人类淋巴细胞治疗浓度的dirithromycin 24和48小时时间来确定异常发生在第一个细胞周期(24小时),第二细胞周期是否修理(48小时)。

测试结果显示,所有的浓度dirithromycin造成统计上显著的增加人类淋巴细胞SCE频率和MN与控制。此外,dirithromycin明显升高的水平CA和Ab.C浓度24和48小时治疗对控制。然而,这并没有显著增加最低的细胞治疗剂量,37.75μg / mL, 24 h治疗期()。另一方面,dirithromycin并不影响细胞增殖动力学MI, RI, NDI值()。这表明dirithromycin基因毒性活动在人类淋巴细胞而不是细胞毒性效应。

5。结论

最后,结果的基础上,假设sc, CA,和MNs可以用作化学基因毒性、细胞遗传学生物标志物可以得出结论,dirithromycin测试浓度在体外造成对人类外周淋巴细胞DNA损伤和基因毒性影响。进一步的研究应该进行基因毒性的潜力dirithromycin使用临床相关的剂量在不同的测试系统。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

承认

作者要感谢研究基金会KahramanmaraşSutcuİmam大学支持这项研究(批准号2012/2-11M)。