骆驼奶有益影响治疗大鼠庆大霉素诱导的改变

抽象

研究了骆驼乳(CM)对庆大霉素(GM)诱导的大鼠血清生化变化的潜在影响。四组六个白化病老鼠用于控制,厘米美联储注入与通用汽车(i.p),然后美联储注入了通用。结果表明,通用的管理水平显著改变了的天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP),和在大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)活动。CM恢复这些参数几乎在第四组正常范围。此外,目前的研究显示,注射的老鼠和庆大霉素引起的增加丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)活性等抗氧化剂酶超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽s-transferase(销售税)活性显著降低()。管理管理(）抑制MDA的形成和活性MPO的和上调的抗氧化酶（SOD和GST）的活性。这项研究证明预处理CM给对GM保护的总体结论是通过抑制氧化应激和炎症，并因此骆驼奶可以被识别为一个新的治疗剂可能引起的肝损伤。

1.简介

CM的独特特征常被用于治疗糖尿病、肝脏和微生物感染等疾病[1- - - - - -3.]，除此之外，有报道称还能改善血液、肾功能和肝功能[4]。低胆固醇，糖和蛋白质，但具有较高水平的矿物质电解质，维生素，及胰岛素，CM是作为唯一相比其他反刍哺乳动物的乳汁[5]。部分活性CM蛋白已被成功研究，具有特异性抗菌和抗病毒效果[1,6,7]。胰岛素依赖型糖尿病患者服用原药后，胰岛素用量可减少三分之一[8- - - - - -10]，这是指对代谢和自身免疫疾病的一些控制。在这个领域中，自身免疫性疾病，糖尿病和呼吸道和各种类型的结核病的被广泛的研究[11]，以及特定的肝中毒研究[12- - - - - -17]。

氨基糖苷类组的抗生素，包括庆大霉素（GM），具有对抗大多数威胁生命的革兰氏阴性微生物的[有益治疗效果18，尽管它们的副作用包括相当大的肾病和肝毒性并发症，几乎有三分之一的患者会感染这些并发症[19]，尤其是在GM肾毒性改变字段[20.,21]。本研究的主要目的是通过测定血清活性及脂质过氧化(MDA)、MPO、GST、SOD、AST、ALT、ALP和LDH水平，来评价CM消耗对GM诱导的实验大鼠生化变化的影响。

2.材料和方法

2.1。骆驼奶

骆驼奶是从当地郊区用手挤的。样品采集在无菌螺杆瓶中，保存在冷藏盒中，直到运送到实验室。大鼠被给予新鲜牛奶(5毫升/大鼠/天)，没有任何进一步的治疗。

2.2。动物

24只雄性白化病鼠(200-250克)从沙特阿拉伯利雅得苏丹王子军事医疗城(PSMMC)研究中心的动物之家设施中获得。大鼠在开始实验前适应10天。所有动物饲养在标准笼中(6只/笼)，喂食标准实验室饲料和水自由采食。实验动物被安置在21-23℃、相对湿度60-65%的空调房间中，光照12h /黑暗12h。根据PSMMC科学研究伦理委员会出版的《实验室动物的护理和使用指南》，这些动物得到了人道的照顾。

2.3。庆大霉素

80 mg (2 mL vials) gentamicin was obtained from Parkin Remedies.

2.4。实验设计

动物被分成四组，每组6只老鼠。I组为对照组，仅给予生理盐水0.2 mL, i.p。第二组仅给予CM (5 mL/大鼠/天，口服15天)。III组仅注射GM (2 mL小瓶)(80 mg/kg b)。在过去的10天里。IV组给予CM(前5天单独注射)，然后注射GM(10天)。

2.5。血清的采集

实验结束即第16天，在轻度乙醚麻醉下处死过夜禁食动物(对照组和实验动物)。腹部切开前心脏穿刺采血;取5 mL的血液样本在平管中，分离血清，在−80℃冷冻直到分析时。

2.6。生物化学分析

使用商业诊断试剂盒(United diagnostic Industry, UDI, Dammam, Saudi Arabia)测定ALT、AST、ALP和LDH。根据制造商说明计算生化成分的浓度。

2.7。MDA估计

的硫代巴比妥酸反应物（TBARS）的浓度通过大川等人的方法测定的。[22]。In brief, the reaction mixture contained 0.1 mL of serum, 0.2 mL of sodium dodecylsulfate, 1.5 mL of acetic acid, and 1.5 mL of aqueous solution of TBA. The pH of 20% acetic acid was preadjusted with 1 M NaOH to 3.5. The mixture was made up to 4 mL with distilled water and heated at 95°C for 1 h, in a water bath. After cooling, 1 mL of distilled water and 5 mL of mixture of n-butanol and pyridine (15 : 1) were added and mixture was shaken vigorously on a vortex mixer. The absorbance of the upper organic layer was read at 532 nm using UV-VIS spectrophotometer.

2.8。测定谷胱甘肽s -转移酶(GST)活性

Habig等人的方法[23用一些修改用于]来估计谷胱甘肽S-转移酶（GST）的活性。In a final volume of 2 mL, the reaction mixture consisted of 0.1 mole phosphate buffer, 1 mM reduced glutathione, 1 mM 1-chloro-2,4-dinitrobenzene (CDNB), and serum. The GST activity determined as nM CDNB conjugate formed min/ml using a molar extinction coefficient of 9.6 × 10^3.米⁻¹厘米⁻¹。

2.9。超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定

超氧化物歧化酶（SOD）的活性根据由S. Marklund和G. Marklund [描述的方法测定24]。反应混合物为0.5 mL的tris缓冲液(50 mM;pH-8.2)、邻苯三酚0.5 mL (0.5 mM)、EDTA 0.5 mL (1 mM)，不同体积分别为0.025 mL、0.05 mL、0.075 mL、0.1 mL血清。在420 nm处记录吸光度的变化。其活性表现为抑制邻苯三酚50%的降低，并以U/mL表示。

2.10。髓过氧化物酶的测定（MPO）

根据Barone等的方法对血清中炎症标志物髓过氧化物酶(MPO)的活性进行了修改[25]。将0.1 mL的血清与2.9 mL含0.167 mg/mL的o- dianisidine盐酸(Sigma)和0.0005%的过氧化氢(ICN Pharmaceuticals, Irvine, CA)的50 mM磷酸钾缓冲液(pH 6.0)混合，测定血清中的MPO。用紫外-可见分光光度计(UV-160A, Shimadzu, Japan)测定460nm下3分钟的吸光度变化。MPO以每mL血清的活性单位表示，其中1单位为能够转化为1的酶的数量μmol过氧化氢在室温下1分钟变成水。

2.11。统计分析

结果用均数±均数标准误差(SEM)表示。差异的显著性用SPSS软件(version 20)计算-测试;被认为具有统计学意义。

3.结果

3.1。骆驼乳和庆大霉素对生化酶水平的影响

ALT，AST，ALP，和LDH活性的血清样品作为肝功能的生物标记在估计。这些结果列于表1。转基因治疗显着地影响了肝脏特异性酶。甲显著上升在血清ALT，AST，ALP，LDH和活性GM发现治疗组相比，对照组为（至();至();至();至(),职责)。这一结果表明，由于酶从受损的肝脏释放，这些肝脏生物标志物在血清中升高。然而，与III组相比，IV组大鼠上述生物标志物各自的血清活性显著下降(至;至();至();至(））。


参数	I组（控制）	第二组 (厘米)	第三组（GM）	第四组（CM + GM）

ALT (U / L)	29.15±1.85	31.65±0.90	39.70±2.17^一个	33.62±3.0^b
AST (U / L)	77.08±2.5	68.37±3.53^d	128.63±6.31^一个	111.02±5.25^{a, b, c}
高山(U / L)	58.80±6.90	77.07±10.75^d	123.29±9.09^一个	87.29±5.96^{a, b, c}
LDH（U / L）	332.89±17.59	212.04±17.80^d	466.93±15.54^一个	398.81±15.76^{a, b, c}

值被给出为平均值±SEM对每个六只动物的组。价值观是两组统计显著≤0.05。^一个对照组与庆大霉素组比较;^b与骆驼奶和庆大霉素组相比对照组;^c庆大霉素基团与骆驼奶和庆大霉素组相比;^d对照组与骆驼乳组比较。

3.2。驼乳庆大霉素脂质过氧化的影响。

骆驼乳可以抑制由转基因处理引起的脂质过氧化反应，即众所周知的氧化应激生物标志物MDA。与对照组相比，施用GM导致第三组MDA水平显著升高()。IV组给予CM显著()与III组相比，在改善丙二醛形成方面效果显著。对照组和cm处理组之间MDA水平无明显变化(图)1)。

3.3。骆驼乳和庆大霉素对抗氧化酶的影响

研究了CM给药对GM诱导的SOD和GST酶活性降低的影响，结果如图所示2和3.,分别。我们观察到有一个显著的(,与对照组相比，III组的抗氧化酶活性降低。但与III组相比，给药组明显恢复了抗氧化酶活性(,)。有基团I和II（图之间没有观察到差异显著2和3.)。

3.4。骆驼乳和庆大霉素对脊髓过氧化物酶活性的影响

我们观察到，有在三只转基因治疗组的MPO活性的增加显著相比，I组（)。然而，与III组相比，给药组明显恢复了MPO的活性()。各组间差异无统计学意义(图)4)。

4.讨论

与对照组(I组)相比，III组注射GM的大鼠血清肝脏生物标志物AST和ALT活性显著升高，提示受损肝细胞释放酶。根据之前的报道，这些在循环中释放的细胞质酶作用于信号转导途径，导致膜细胞的通透性[26- - - - - -28]。转基因毒性会增强氧化应激和活性氧(ROS)，活性氧会耗尽抗氧化酶和生物分子[27- - - - - -三十]，指的是进一步受损的通路过程[31]。与对照组相比，注射GM的大鼠LDH显著增加，这也与先前发表的研究结果一致[3.,13]。结果，可以看到的是，MDA（脂质过氧化标志物）和炎症标记物MPO活性增加显著，而内源性抗氧化剂GST和SOD水平降低。这一发现与研究人员的报告说，属性的酶失活与MDA的联横铅超氧自由基的累积而增加诱发更多的脂质过氧化反应是一致的[13,16,28,三十,32,33]。

另一方面，骆驼乳可以抑制转基因处理引起的大鼠血清AST和ALT活性的增加。这一发现表明，CM通过稳定细胞膜和防止细胞内酶渗漏，有可能修复和保护注射GM的肝组织。可以认为肝实质细胞的修复和愈合过程应导致血清转氨酶水平的逆转[34]。CM保护作用已经在一些相关的主题[先前报道3.,17,35,36，将肝脏的有害作用恢复归根于正常生理，归根于CM的消耗影响了肝细胞膜完整性的再生或保护[37]。

服用CM后，血清抗氧化系统酶(GST和SOD)和炎症标志物(MPO)也恢复到正常的最佳水平，这是由于CM中抗氧化维生素、矿物质和其他元素含量高[三十，几种潜在的治疗效果[8,9]，和疾病抗性[2,38- - - - - -42]。功能失调的线粒体负责产生过多的过氧化物，而过氧化物是转化为炎性生物标志物的底物[43]介导对一些疾病的收缩[44- - - - - -46]。

一些矿物质和维生素的可用性（如CM充裕的情况下），提高SOD水平和相对较低的水平会导致消耗[47而本研究显示，给药后，SOD水平显著提高。Barbagallo等人的报告[48和Virginia等人[49强调了谷胱甘肽和其他含有矿物质和维生素的抗氧化剂之间不可或缺的联系。

GM引起的并发症受到了许多研究人员曾与抗氧化剂[21,50,51]。正如1400多年前先知穆罕默德(PBUH)所说的那样，CM的健康益处在伊斯兰社区很受欢迎。之前的几项研究已经通过实验证明了骆驼奶的有益作用。有些牛奶中会引起过敏的成分在骆驼奶中是没有的，骆驼奶的蛋白质成分(酪蛋白)是不同的[52，对治疗和预防食物过敏起决定性作用[53]。因此，它被用作多种疾病的治疗剂和抗菌药物[54- - - - - -57]和抗病毒药物[57,58]。除此之外骆驼奶含有许多免疫球蛋白兼容与人合的[对比59]。就胰岛素而言，骆驼奶的含量高于牛奶和水牛奶[60]。最近的研究报道了CM具有几个有益的特征[9,17,61,62]但是仍的确切机制和对GM诱导的组织损伤的CM活性修复效果不充分的调查。

5.结论

本研究结果表明，CM对庆大霉素治疗的大鼠具有显著的肝保护和肾保护作用。CM对抗庆大霉素诱导的生理变化的确切作用机制还需要进一步的研究。最后，本研究确定了开发更好的治疗肝肾功能障碍和其他疾病的药物的新研究领域。

利益冲突

作者宣称没有关于本文的发布利益冲突。

致谢

作者感谢PSMMC为他们提供机会，做这个实验工作。他们觉得感激Nasreddien M.阿卜杜·奥斯曼先生在这项研究帮助。

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毒理学杂志

抽象