文摘

的目标是。3、5、4′三羟的-反式对称二苯代乙烯,天然多酚化合物存在于葡萄酒和葡萄和更好的被称为白藜芦醇,具有自由基清除属性,是一个强有力的保护者对酒精代谢导致的氧化应激。今天,乙醇对其毒性的机制仍不清楚,但一般认为自由基生成中发挥着重要作用在细胞结构和功能改变的外观。本研究的目的是评估白藜芦醇对ethanol-induced大脑细胞损伤的保护作用。方法。大鼠星形胶质细胞的主要文化被暴露于乙醇,有或没有与白藜芦醇预处理。我们检查了这个白藜芦醇预处理的影响存在剂量依赖的相关性引起的细胞毒性和基因毒性乙醇。减少细胞毒性评估使用MTT测试。用单细胞凝胶电泳基因毒性被证明。此外,核损害的DNA与荧光染料染色允许可视化使用共焦显微镜。结果。细胞浓度较低的预处理反式白藜芦醇(0.1 -10μ米)减慢细胞死亡和乙醇暴露引起的DNA损伤,而更高的浓度(50 - 100人μ米)增强这些相同的效果。没有保护独联体白藜芦醇是观察。结论。提供的保护反式白藜芦醇对ethanol-induced神经毒性只有有效的低浓度的多酚。

1。介绍

大脑是特别容易受到氧化应激由于其耗氧率高,其高比例的多不饱和脂肪酸和低水平的抗氧化剂防御酶(1]。因此,大脑是一个一流的目标等情况下,自由基与衰老、神经退行性疾病,异型生物质新陈代谢。这个器官是乙醇的主要目标,及其消费一直与严重损害有关。乙醇的不利影响在中枢神经系统的不同的功能已经被很好地记录下来了。大量的实验研究和验尸检查显示广泛的结构和功能改变神经元和星形胶质细胞。星形胶质细胞被选择作为脑中毒模型,因为他们的有害影响相当大的潜在后果。首先,他们代表了最丰富的细胞在中枢神经系统。除了提供营养神经元和神经营养因子,这些细胞immune-active和积极参与宿主防御机制(2,3]。此外,特定的酶系统允许星形胶质细胞对外源性物质的代谢、自由基,和金属,从而保护大脑免受这些药物的毒性4,5]。

小学文化的优势在于细胞发现他们更为相似在活的有机体内。这个选择的缺点是他们有限的生存时间和文化的持续需要准备新的细胞。这可以解释为什么很少有报道发现在文献中关于这个话题。

有强有力的证据表明,长期或过量乙醇消费提高氧化损伤大脑。这是由于乙醇的能力增加氧化应激,导致增强生产氧化物种包括活性氧(ROS)和脂质过氧化作用形成的产品(6,7]。

之前使用spin-trapping技术,我们发现hydroxyethyl-free激进乙醇暴露后形成各种生物系统如鼠肝脏或大脑微粒体(8)和大鼠星形胶质细胞的主要文化或C6神经胶质瘤细胞系(9]。

ROS产生在正常细胞代谢以及在暴露于各种外源性物质包括酒精。尽管谷胱甘肽和各种抗氧化酶(SOD、GPX、过氧化氢酶等)防止细胞攻击这些活性氧,大规模或慢性暴露于有毒物质可能诱导氧化/抗氧化失衡,导致细胞氧化损伤。文献报道,抗氧化剂微量营养物质,如维生素C,维生素E,β胡萝卜素在水果和蔬菜在一定程度上有助于防止细胞ROS的破坏性影响。

3、5、4′三羟的-反式对称二苯代乙烯,所谓的白藜芦醇,是一个天然芪红葡萄的皮和某些药用植物,据信,提供预防各种感染和压力(10]。此外,这种红酒成分可能会涉及到所谓的“法国悖论,这种现象相关的冠心病的发病率低在法国南部尽管高膳食摄入的饱和脂肪(11]。许多有益健康的影响已报告如抗癌、抗病毒、抗炎、抗衰老和神经保护作用[12- - - - - -15]。的确,神经保护作用在脑缺血模型以及相关的神经退行性疾病如阿尔茨海默病、亨廷顿氏病,帕金森病(16,17]。此外,大部分的保护生物学行为与白藜芦醇已经与其内在游离基清除剂相关属性(18- - - - - -21]。De Almeida et al。22]证明了白藜芦醇的保护作用对急性H2O2全身在星形胶质细胞氧化应激的文化。

由于自由基途径参与细胞损伤的观察乙醇暴露后,我们研究了白藜芦醇预处理的星形胶质细胞,因为这抗氧化剂可以促进大脑细胞暴露于乙醇的生存压力。

本研究的目的是评估的能力白藜芦醇保护大鼠星形胶质细胞的主要文化免受ethanol-induced细胞损伤在一个长期暴露的细胞模型在体外实验。

2。材料和方法

2.1。文化主要星形胶质细胞

怀孕Sprague-Dawley老鼠从Janvier (L 'Arbresle、法国)。动物保健和使用和所有过程涉及动物是按照法国国家规定执行。

主要星形胶质细胞文化是从大脑半球无菌准备1 -或幼童不幼崽,根据先前描述的方法(23)一些修改(9]。分离的细胞被镀在poly-L-lysine-coated 35-mm-diameter培养皿或75厘米2塑料水瓶的密度500 000个可行的细胞/毫升一般D-MEM中含有10% FCS 100 U /毫升青霉素,链霉素0.1毫克/毫升、和2.5μg / mL两性霉素b的文化是维持在37°C公司5%2湿润的气氛。每3天中被改变。经过12天在体外(DIV),星形胶质细胞层组成的支流和95%,证明了积极的与抗血清免疫染色α-GFAP,星形胶质细胞标记(24]。

电镀共焦显微镜实验中,十天后,细胞在烧瓶使胰蛋白酶化然后在同一介质的密度250 000个可行的细胞/毫升,到poly-L-lysine-coated 40毫米直径的玻璃盖玻片。播种后48小时电池使用时文化融合达到80 - 90%。

所有实验在培养基和空气/有限公司2孵化器12到15天在体外。

2.2。形成和识别独联体- - -反式同分异构体的白藜芦醇

反式白藜芦醇是购自Sigma-Aldrich化学(圣路易斯,密苏里州,美国)。

两个100毫米的解决方案反式白藜芦醇也准备了H2O / DMSO (50/50)。一个整除被蒙在鼓里,另将实验室光,为了引起trans-cis异构化。然后样本derivatized 30分钟在65°C使用BSTFA (N, N-bis(三甲基硅烷基)trifluoroacetamide)。最后,样本分析气相色谱与质谱(GC / MS)。

2.3。暴露于白藜芦醇的条件和/或乙醇

反式白藜芦醇是溶解在H2O / DMSO(50/50),以获得一个100毫米原液过滤,然后整除,储存在−20°C到使用。在实验的开始,trans-cis实现异构化,让一个整除实验室光。不同中间稀释的这两种同分异构体被准备在相同的混合为了保持最后的H2O / DMSO /培养基比为每个白藜芦醇浓度测试。

1小时的细胞preincubated含有不同浓度的培养基顺式或反式-白藜芦醇从100到0.1不等μm .然后,媒介取代一个新的包含相同白藜芦醇的乙醇浓度和20毫米三天。控制与白藜芦醇单独或乙醇单独也意识到。

避免酒精蒸发,我们使用先前描述的补偿系统,提供一个恒定的酒精浓度培养基(3天25]。

2.4。气相色谱/质谱分析

安捷伦科技6890 n的分析网络GC系统结合一个安捷伦科技5975年网络质量选择检测器和一个安捷伦科技7683系列喷油器。整个过程,包括数据收集,由安捷伦科技控制化学Rev.D.02.00.275站版本。

我们注入了2μ每个样本的L DB-5女士列(30×0.25毫米证件;0.25 -μ膜厚度)使用脉冲离注入一个喷油器温度为250°C。温度条件如下:初始温度为100°C, 1分钟增加到300°C在20°C /分钟,并举行了11分钟。载气的流量(氦)保持在恒流模式下1毫升/分钟。气相色谱仪界面温度举行315°C。70 eV,执行电子碰撞电离离子源温度为230°C和质谱收集从40到600m / z。

2.5。测定细胞生存能力

每次治疗后,细胞生存能力是决定使用MTT还原测试(26]。生长介质取代D-MEM含0.5毫克/毫升3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT)。孵化2 h后,细胞中被删除,取而代之的是1毫升的二甲亚砜溶解沉淀甲瓒。

细胞生存能力量化spectrophotometrically在540 nm,和100%的可行性被分配到控制的吸光度。至少五菜为每个中毒状态进行测试。MTT试验,测量线粒体脱氢酶活动,反映了细胞的代谢活动和细胞的生存能力是一个有用的指标。

2.6。核损害的评估
2.6.1。彗星试验

DNA损伤评估使用单细胞凝胶电泳,也称为彗星试验(27]。该技术实现了使用电泳电源(配偶EV265)和潜艇水平电泳系统(模型HU25)。这个试验执行后立即产生的压力损害证据乙醇或经过1 - 3 - h恢复期,目的是研究修复机制。因此,对DNA的影响中观察到的这些情况反映最初的DNA损伤和氧化破坏基地的链断裂生成alkali-labile网站DNA。

所使用的程序是一个协议的修改被辛格et al。28]。磨砂显微镜载玻片首次覆盖150人μL 1%的普通琼脂糖2 +- - - Mg2 +无磷酸盐(PBS)和立即覆盖22×50 mm盖玻片,保持在室温下使琼脂糖凝固。盖玻片是轻轻滑了。大约20 000个细胞在80年被停职μL 0.8%的低熔点琼脂糖在PBS保持在37°C和转移到第一个琼脂糖层。后被覆盖着一个盖玻片,幻灯片留在冰了5分钟。然后盖玻片被移除和幻灯片放在刚做好的赖氨酸溶液在4°C 1 h在黑暗中(2.5 M氯化钠,100毫米Na2钠sarcosinate EDTA、10毫米三、1%,与氢氧化钠pH值设置为10,补充10% DMSO溶液和1% Triton x - 100之前使用)。轻轻消散后,幻灯片被转移到一个水平凝胶电泳槽充满刚做好的电泳溶液(0.3 M氢氧化钠,1毫米Na2在黑暗中EDTA)在室温下。DNA被允许放松20分钟,和电泳是由调整25 V的电压和电流300毫安(~ 0.7 V /厘米),持续15分钟。电泳后,幻灯片被轻轻清洗去除任何干扰的碱和洗涤剂溴化乙锭染色,使用中和缓冲(0.4 Tris-HCl, pH值7.4)三次为5分钟。中和后,幻灯片被沾染了50μL的3.3μg / mL溴化乙锭在蒸馏水和盖玻片覆盖。幻灯片被置于湿润密封的容器,防止凝胶干燥,直到分析。三个幻灯片每试验准备,每张幻灯片和50核数。

幻灯片进行使用荧光显微镜数字化,蔡司Axioskop 20(卡尔•蔡司显微镜部门,从德国),配备了短弧水银灯HBO (50 W, 516 - 560 nm,蔡司),使用20 x干燥的目的。随机选择50彗星每一式三份幻灯片是得分Pulmix TM 765摄像头(动态成像,利物浦,英国)连接到一个固美3.0图像分析系统(动态成像)。这对于图像处理软件定义不同的参数。在这些参数中,我们选择的百分比的尾部DNA DNA损伤的评价。DNA的百分比在尾部DNA断裂频率线性相关(29日]。

2.6.2。共焦显微镜

凋亡细胞死亡被证明评估核形态改变。在各种细胞治疗结束时,生长介质提供了1.6μ赫斯特33258(最终浓度)15分钟在37°C。盖玻片和PBS然后冲洗两次,用70%乙醇固定15分钟,在PBS储存在4°C到分析。细胞成像使用共焦激光扫描显微镜徕卡TCS SP2 aob(徕卡、海德堡、德国)。激发荧光,紫外激光在351 - 364海里。光学部分使用63 x油浸的客观记录。图片收集在512×512像素格式和由徕卡共焦处理软件。

2.7。统计数据

三个独立实验系列进行了对于每个接触条件,除非另有指示。控制与星形胶质细胞不暴露在乙醇和生长在文化在相同条件下的实验系列。

结果表示为±SEM。的Mann-WhitneyU测试是用于统计分析。发现与 < 0 。 0 5 被认为是重要的。Kolgomorov-Smirnov测试来比较DNA的分布百分比的尾巴。的值 < 0 。 0 5 被认为是重要的。

3所示。结果

在文献中,一些作者白藜芦醇溶解在DMSO和不遵守任何细胞毒性的溶剂15,20.,21,30.]。不幸的是,我们的实验条件,长期接触和大脑细胞的脆弱性主要文化,一个温和的细胞生存能力下降(15%)时观察星形胶质细胞暴露在这车。最后,我们测试了一个H2O / DMSO (50/50, V / V)混合物溶解白藜芦醇,所描述的ola et al。31日]。在这种情况下,DMSO /培养基比例是0.0005%,而没有对星形胶质细胞毒性检测主要文化(数据未显示)。

3.1。白藜芦醇光敏性

白藜芦醇只是商用的反式药物活性的多酚异构体。白藜芦醇是一种光敏化合物,但只有很少的信息是可用在文献中对曝光的一些预防措施,以避免它独联体- - - - - -反式photoconversion和可能的失活的保护行动10,32]。它已被证明反式白藜芦醇是容易UV-induced异构化独联体—构成,但只有少数作者指出,他们在黑暗中工作10,33,34]。是独联体—构成积极防范ethanol-induced伤害?要回答这个问题,我们感应trans-cis异构化的白藜芦醇暴露一个整除实验室光。样本然后分析了采用气相色谱和色谱相比,一个记录中获得相同的整除放置在黑暗中。与我们的GC / MS分析条件,整除的峰值观察放在黑暗的保留时间为11.87分钟(图1 (c))然而,light-exposed样本,相对应的峰值独联体异构体的保留时间为10.47分钟(图1(一))。

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图1
白藜芦醇的GC / MS分析可溶性的H2O / DMSO溶液混合物。(a, c)显示色谱得到样品放置在光(a)或(c)在黑暗。(b, d)代表的质谱顺式和反式分别白藜芦醇。节中详细分析条件2。

评估神经保护提供的这两种同分异构体,我们测试了预处理的星形胶质细胞的影响独联体——或者反式白藜芦醇在长期接触乙醇引起的毒性(20毫米,3天)。没有观察到当效应独联体白藜芦醇是添加到细胞培养,不管浓度测试(图2(一个)),而反式同种型诱导略微降低乙醇中毒(图2 (b))。

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图2
星形胶质细胞生存能力的变化与不同浓度的1 h预处理后独联体白藜芦醇(a)或反式白藜芦醇(b)其次是为期3天的暴露在20毫米乙醇在白藜芦醇的存在。决定了后直接接触或24 h后的复苏新鲜培养基。MTT比色细胞毒性是分析和控制没有白藜芦醇和乙醇代表100%的可行性。实验数据显示了在一个典型的代表三个独立的实验,表示为±SEM, = 5 ( • < 0 。 0 1 resveratrol-treated细胞与控制, • • < 0 。 0 0 1 乙醇暴露细胞与控制, ∗ < 0 。 0 5 Res +细胞治疗与控制乙醇,乙醇Mann-WhitneyU测试)。细胞接触条件详细的部分2。
3.2。的影响反式白藜芦醇在长期接触乙醇引起的细胞毒性

确定哪些剂量是最有效的对长期接触乙醇导致的细胞损伤,一个广泛的反式-白藜芦醇含量(从0.1到100μM)进行了测试。星形胶质细胞是预处理(1 h),用不同浓度的coincubated反式-白藜芦醇存在与否的20毫米乙醇为3天。曝光后,星形胶质细胞被取代的新媒介24小时评估细胞复苏。如前所述,如图2 (b)、生存能力的培养的星形胶质细胞暴露于乙醇明显减少了大约30%相比,控制没有乙醇( < 0 。 0 0 1 ,Mann-WhitneyU测试)。此外,没有生存能力的变化观察后恢复期(图2 (b))。

处理低浓度的星形胶质细胞反式白藜芦醇(0.1 - 5μ米)没有产生任何变化在细胞生存能力相比,没有控制反式-白藜芦醇(图2 (b))。虽然轻微下降,观察细胞的可行性反式白藜芦醇10μM,丧失生存能力的25%是观察到50μ米治疗(图2 (b), < 0 。 0 1 Mann-WhitneyU测试)星形胶质细胞治疗时达到70%反式-白藜芦醇100μ(数据未显示)。

没有明显的毒性观察的最低浓度反式-白藜芦醇测试(0.1μ米),但不幸的是没有提供保护对乙醇损伤浓度(图2 (b))。此外,提供了重要的保护与1 - 10μ米的浓度反式-白藜芦醇(Res1或5或10 +乙醇和乙醇, < 0 。 0 5 ,Mann-WhitneyU测试,图2 (b))。事实上,在乙醇的最佳防护效果观察5 -μ米的浓度反式-白藜芦醇,这集中提供最好的细胞复苏(图2 (b))。总之,保护存在剂量依赖的相关性ethanol-induced神经毒性是提供的反式-白藜芦醇在浓度从0.1到5μm以同样的方式,这个多酚存在剂量依赖的相关性提供细胞复苏后24小时的新媒介。

的浓度反式-白藜芦醇高于5μ米,针对ethanol-induced毒性保护作用是剂量依赖性的方式减少。例如,在乙醇,50μ米反式-白藜芦醇诱导大幅减少生存能力的百分比,这是几乎相同的那些观察乙醇,是否压力或后24小时后恢复时期(图2 (b))。

3.3。的影响反式白藜芦醇在长期接触乙醇引起的基因毒性

考虑与MTT试验获得的结果之前,所提供的保护作用反式-白藜芦醇对DNA损伤只研究了浓度从0.1到5μm .根据彗星试验的结果,DNA在尾巴的百分比显著增加在为期3天的接触乙醇相比,控制细胞没有乙醇。的尾部DNA百分比细胞暴露于乙醇的两倍以上控制值(25.2和9.7, < 0 。 0 0 0 1 ,Mann-WhitneyU测试,图3)。然而,与MTT试验观察结果相反,彗星试验显示轻微下降,在经济复苏时期DNA链断裂,相比暴露条件没有复苏,特别是3 h值明显不同的恢复时间(25.2细胞暴露于乙醇和20.0 3 h恢复期, < 0 。 0 5 ,Mann-WhitneyU测试,图3)。


图3
1 h预处理与不同浓度的影响反式白藜芦醇在星形胶质细胞的DNA损伤程度观察暴露在为期3天的治疗20毫米乙醇,是或不是由1 h或3 h恢复期在新鲜培养基。DNA损伤评估使用彗星试验和百分比表示为DNA的尾巴。图中显示的是三个独立实验的结果。50个细胞被随机检查每个条件,一式三份和结果表示为±SEM ( • • • < 0 。 0 0 0 1 乙醇暴露细胞与控制, ∗ ∗ < 0 。 0 5 , ∗ ∗ ∗ < 0 。 0 0 1 Res + ethanol-treated细胞与控制乙醇,Mann-WhitneyU测试)。实验条件的详细部分2。a.u。:任意单位。

没有观察到当基因毒性反式白藜芦醇是添加到培养基浓度从0.1到5μM(图3)。此外,当细胞暴露在乙醇的存在反式-白藜芦醇,显著和剂量依赖性降低1 -观察DNA损伤μM和5 -μ25.2 M浓度(细胞暴露于乙醇和19.4细胞暴露于Res1 +乙醇, < 0 。 0 5 ,15.1和25.2细胞暴露于乙醇与细胞接触Res5 +乙醇, < 0 。 0 0 1 ,Mann-WhithneyU测试,图3)。此外,更换新鲜细胞介质压力增强细胞复苏后反式-白藜芦醇存在于中毒介质。3 h后恢复期,几乎完全恢复被观察到的细胞使用1μ米和5μ米反式-白藜芦醇相比控制(图3)。

图4显示有趣的尾部DNA的分布的变化:在控制条件下,85%以上的细胞尾部DNA在0%和10%之间(图4(一)),而重大修改的分布尾部DNA后观察为期3天的接触乙醇(图4 (c)),逐步向更高的尾部DNA百分比分布(控制与乙醇, < 0 。 0 0 0 1 Kolgomorov-Smirnov测试)。当细胞在新鲜培养基没有乙醇取代1或3 h恢复期,前面描述的DNA链断裂的下降是证实。这个恢复过程是时间依赖但不完全因为只有69.1%的细胞尾部DNA在0%和10%之间3 h后的恢复(图4 (g))相比,88.2%的细胞控制条件(乙醇+ 3 h复苏与控制, < 0 。 0 0 0 1 、Kolgomorov-Smirnov测试图4(一))。当细胞被使用5μ米反式-白藜芦醇,没有毒性观察星形胶质细胞(图4 (b)控制(图)相比4(一))。此外,有更少的DNA损伤后3天暴露在乙醇和存在反式-白藜芦醇(图4 (d))以来78.2%的细胞尾部DNA在0%和10%之间细胞暴露于乙醇仅50.4% (Res5 +乙醇和乙醇, < 0 。 0 0 0 1 、Kolgomorov-Smirnov测试图4 (c))。此外,经济复苏过程也提高;1 h后的复苏,80%的细胞尾部DNA在0%和10%之间(图4 (f)),而不反式-白藜芦醇尾巴只有65%的细胞DNA在0%和10%之间(图4 (e)),(Res5 +乙醇+ 1 h复苏与乙醇+ 1 h复苏, < 0 。 0 0 0 1 Kolgomorov-Smirnov测试)。3 h后的复苏,可能是认为经济复苏时完整的细胞使用5μ米反式-带尾白藜芦醇(88.2%和85.3%的细胞DNA在0%和10%之间,为控制(图4(一))和Res5 +乙醇+ 3 h恢复(图4 (h)),分别。事实上的直方图分布不仅是统计上的不同,但也为这两个几乎相同的条件。

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图4
直方图分布的彗星尾巴星形胶质细胞DNA获得3天之后接触20毫米乙醇,之前不通过1 h与白藜芦醇预处理(5μM),或不是由1 h或3 h恢复期在新鲜培养基。(一)控制;(b)与白藜芦醇预处理;(c)三天接触乙醇;(d)与白藜芦醇预处理之后,接触乙醇;1 h复苏(e)和3 h复苏后星形胶质细胞(g)乙醇暴露;1小时恢复(f)和3 h复苏后星形胶质细胞(h)乙醇暴露当细胞第一次用白藜芦醇预处理。(a)和(c), (d)和(c), (f)和(e), < 0 。 0 0 0 1 ,Kolmogorov-Smirnov测试。实验条件的详细部分2。Insets显微图显示代表“彗星”,对应于各种细胞疗法所描述的传奇。

核损害也证明基于核形态。星形胶质细胞与核酸染料染色赫斯特33342年后进行各种治疗。细胞使用激光共焦显微镜进行分析。与常规相比,蓝色细胞核可行的星形胶质细胞中观察到的对照组(图5(a)),细胞核和细胞膜出泡,不规则的形状和凋亡尸体被证明在细胞暴露于20毫米乙醇(图3天5(c))。这些有害的影响持续了恢复期后自气泡核细胞膜总是可检测(图5(e))。星形胶质细胞预处理与5μ米反式-白藜芦醇没有引起任何毒性(图5(b))。此外,治疗反式-白藜芦醇浓度降低引起的受损核乙醇,尤其是在经济复苏时期,没有证明核形态异常(数字5(d)和5(f),职责)。


图5
治疗效果5μM白藜芦醇在星形胶质细胞的主要文化ethanol-induced核子损害。核与赫斯特33342节中描述标签2。图5荧光显微镜图像显示代表证明星形胶质细胞的核形态控制条件(a),暴露于5μM白藜芦醇为3天(b),暴露在20毫米乙醇3天没有(c)和恢复期(e),或暴露于20毫米乙醇3天,与预处理和cotreatment 5μM白藜芦醇(d)和恢复期(f)。在变焦显微图,箭头点气泡核和核分裂。图片是代表所有字段至少有三个独立的实验进行重复。

4所示。讨论

正常细胞代谢的结果持续一代的活性氧(ROS)严格控制的抗氧化机制。然而,在某些情况下,会发生氧化应激的结果增加了接触氧化代谢的正常代谢产物。这可能发生在ROS生产刺激某些毒物的代谢和/或当生产或抗氧化剂等影响制剂的生物利用度。因此,氧化剂和抗氧化剂之间的生理平衡可以直接或间接修改毒物。在这些毒物,乙醇生产自由基在其新陈代谢(4,9,35]。尤其是慢性接触乙醇诱导细胞和核损害大脑细胞,介导的自由基途径(5,6,36,37]。

多酚从饮食中获得的作用防止氧化应激是一个持续的兴趣和一些争议的话题。

几个在活的有机体内而在体外研究报告可测的浓度反式白藜芦醇后政府动物或接触细胞。例如,贝尔泰利et al。38)表明,单一或长时间管理与一个已知的老鼠的红酒反式-白藜芦醇含量导致血液和各种器官的积累。此外,Vitrac et al。39)表明,14C-labeled反式白藜芦醇是吸收、代谢和分布在全身治疗的小鼠口服多酚。此外,由于其脂溶性高,白藜芦醇可能沉积在组织中脂质含量高,如大脑和神经系统(40),这多酚一流的复合神经保护研究。白藜芦醇运输从等离子体胞内目标似乎涉及到被动扩散和carrier-mediated过程(41,42]。

关于大脑细胞,郭et al。43)描述有用的保护在活的有机体内大范围的白藜芦醇含量对基因毒性引起的急性和慢性乙醇暴露。相反,一些作者指出白藜芦醇浓度对细胞保护的重要性。因此,他们描述了神经保护效应对低浓度的白藜芦醇高剂量的多酚诱导细胞毒性(44- - - - - -46]。最近,Quincozes-Santos et al。47)证明,压力的性质可能比白藜芦醇浓度更重要。他们表明,强烈的但是时间比较短的氧化条件下白藜芦醇能保护C6神经胶质瘤细胞对H2O2侮辱在那么激烈但持久的氧化侮辱,白藜芦醇有相反的效果,其余的H2O2全身的破坏,导致prooxidant效果。

在这项研究中,脑保护提供的反式-白藜芦醇对ethanol-induced毒性、调查。为了避免它的光异构化导致一个不活跃的异构体(图2(一个)),反式必须仔细蒙在鼓里白藜芦醇在整个实验中,样品制备和细胞治疗。

互相矛盾的信息有关白藜芦醇治疗的影响已经在文献中报道。大的变化实验系统,如细胞模型,白藜芦醇含量,孵化时间等等可以解释这些差异。因此,似乎重要的测试一个大范围的白藜芦醇含量定义最优浓度提供细胞保护与我们自己的实验系统。保护作用的浓度用于证明白藜芦醇对乙醇引起的细胞损伤已经初步调查的主题。在我们的实验条件,处理低浓度的白藜芦醇的星形胶质细胞3天(从0.1到10μ米)并没有引起任何生存能力的变化,而毒性作用时观察到的最高浓度的白藜芦醇(50和100μ米)被添加到细胞,具有剂量依赖性细胞死亡率高于30%。这些结果符合这些报道Quincozes-Santos et al。47]。

如前所述(5星形胶质细胞),慢性接触乙醇导致重大损失的可行性,MTT试验就是明证。此外,当细胞被取代在新鲜培养基24小时poststress时期,没有观察到经济复苏。这些结果显示持久的改变在星形胶质细胞的正常功能,特别是对呼吸、精力充沛的MTT试验测量过程。提供的保护反式-白藜芦醇对乙醇细胞毒性浓度最低摄入量有关,只有观察,但最有价值的结果有关的影响多酚对星形胶质细胞的复苏;细胞复苏剂量依赖和完整的5μ白藜芦醇。

长期的潜在基因毒性乙醇政府星形胶质细胞用彗星试验研究。这种方法提供了快速的结果,只需要几个细胞,所以看起来适合分析主要文化,这需要不断的新制剂。

尾部DNA百分比增加2.5倍后长期接触乙醇。此外,1或3 h后恢复期的新媒介,这些DNA链断裂只有部分自我修复。这些结果表明乙醇的基因毒性。此外,它通常是认为引起的DNA损伤的化学物质增加突变和癌症的风险,尽管DNA损伤可能自我修复(48]。

星形胶质细胞暴露于乙醇时为3天,反式-白藜芦醇诱导DNA损伤减少和治疗剂量依赖性的增强细胞复苏的方式。的有效浓度反式-白藜芦醇能够降低DNA链断裂的形成和增强DNA修复是5μM。

与这些结果一致,激光共聚焦显微镜的图像星形胶质细胞染色与赫斯特33342年允许可视化的凋亡细胞核细胞暴露在3天至20毫米乙醇。有趣的是,治疗5μM白藜芦醇完全阻止核形态变化引起乙醇治疗自膜起泡和凋亡尸体被证明在这些条件。

几种机制可能构成反式-resveratrol-induced星形胶质细胞对乙醇神经毒性的保护。反式-白藜芦醇已被证明具有有益的自由基清除属性(19,20.,49- - - - - -51已知)和乙醇暴露诱导活性自由基的生成在体外(8,9,52),以及在活的有机体内(53,54]。因此,它是合理的假设反式-白藜芦醇对ethanol-induced DNA氧化损伤,可能有保护作用的猝灭自由基生成在其大脑的新陈代谢。

总之,我们清楚地证明这一点反式白藜芦醇可以显著降低细胞死亡率和水平长期乙醇暴露引起的DNA链断裂的星形胶质细胞在初级文化。此外,我们证明了这个多酚提升poststress细胞复苏。然而,这将显著的保护应该针对白藜芦醇治疗的限制条件加权自水平升高和/或长期接触这种化合物可能有助于提高脑损伤。

虽然我们的研究结果的相关性在活的有机体内临床情况还有待证明,我们的研究结果表明,谨慎是必要的治疗使用反式-白藜芦醇,因为高水平的这种化合物可能会导致不良的外观对大脑的影响。