文摘
的安全Zigbir®, polyherbal配方使用作为食品补充剂,在Sprague-Dawley评估大鼠口服治疗在急性剂量2000毫克/公斤,250年,500年,90年和1000毫克/公斤天subchronic毒性研究。半数致死剂量的Zigbir®被发现超过2000毫克/公斤,fourteen-day重复剂量毒性研究表明它是安全的1000毫克/公斤。subchronic研究没有显示任何死亡或治疗相关的不良临床症状。对待动物表现出正常的采食量和体重相当获得除了减少500和1000毫克/公斤的女性群体。眼部检查发现没有异常。此外,Zigbir®管理的老鼠没有产生任何重大变化在验尿,血液和生化评价,除了小改变一些参数在不同剂量水平。毛重和组织病理学结果没有任何病变可归因于Zigbir®管理。没有观察到的效应水平Zigbir®被发现500和250毫克/公斤男性和女性Sprague-Dawley老鼠。
1。介绍
开发和评估各种有益健康的草药配方和或功能影响动物和人类是越来越受欢迎。尽管行之有效的科学研究phytopreparations或草药成分的药理性质,草药物质的安全细节发表在遵守国际公认的指导方针似乎不足(1- - - - - -3]。鉴于预期增加使用草药补充各种卫生需求,在未来的时候需要长期毒理学调查评价和草药制剂的分类基于安全数据。
本研究的临床实验的物质,Zigbir®,是polyherbal配方组成的四种药用植物,即穿心莲香(答:香),Boerhaavia diffusa(b . diffusa),菲amarus(p . amarus),龙葵(美国初步)保护肝脏免受各种各样的毒素。这polyherbal准备,建议在家禽,音调肝脏,增强肝脏功能,加速再生过程,刺激低迷的肝实质。它也提高了胆汁的分泌和流动,帮助脂肪代谢。
的草药成分的王亚南影响Zigbir®一直建立在文学出版。答:香王(爵床科),也称为苦味剂,广泛用于单独或结合其他草本植物在许多王亚南准备在印度医学系统(4- - - - - -6]。Andrographolide的主要活性组分答:香二萜内酯,已被证明是主要负责antihepatotoxic活动的草在不同的动物模型。对四氯化碳(Andrographolide显示保护作用7),对乙酰氨基酚(8)、乙醇(9,半乳糖胺(10)诱导实验动物的肝毒性。乔杜里的一项研究表明答:香提取治疗胆汁流量增加和肝脏重量和行动的持续时间降低hexabarbital在实验室老鼠(11]。andrographiside等二萜和neoandrographolide老鼠导致细胞抗氧化成分显著增加并发降低脂质过氧化作用。王亚南属性被发现是相当于有益的水飞蓟素对肝脏功能的影响(4]。
一个酒鬼的提取b . diffusa(紫茉莉科)口服500毫克/公斤,成年男性瑞士小鼠和查尔斯·福斯特大鼠表现出王亚南属性,巴比妥酸盐睡眠时间减少,凝血酶原时间,降低血浆胆红素水平。提取也报道安全甚至在老鼠(2000毫克/公斤12]。察克拉波提和翰达岛的antihepatotoxicity活动氯仿和methanolic提取的b . diffusa针对碳tetrachloride-induced分离大鼠肝损伤的肝细胞(13]。
p . amarus(大戟科)200毫克/公斤口服治疗改善肝脏再生在雄性Wistar鼠酒精引起的肝损伤14]。Mehrotra等人的调查在体外的影响p . amarus乙型肝炎病毒和发现的酒精提取物p . amarus有效对抗乙肝病毒抗原,丁醇提取是最有效的(15]。活动分数抑制之间的交互HBsAg / e抗原和抗体表明anti-HBs相关,anti-HBe-like活动也影响病毒dna。下在体外条件下,水提物美国初步(茄科)抑制黄曲霉素生产黄曲霉从而保护肝脏。的王亚南活动美国初步可能是由于氧化变性组织DNA的抑制(16]。
尽管广泛的可用性为上述药理信息药用植物肝脏功能,只有少数报告现有描述单个植物成分的安全性评价进行符合普遍接受检测方案。除了有利影响观察,它也必须生成综合测试物质的毒理学资料,以确保安全使用,尤其是对较长时间。在目前的研究中,因此,我们进行了急性和subchronic口服毒性研究Zigbir®在大鼠,建立没有观察到影响水平(NOEL)和确定其安全用作王亚南代理。
2。材料和方法
2.1。测试物质
Zigbir®是一个组合的四种中药材开发的M / s自然疗法,班加罗尔,印度。Zigbir®已经答:香(27.7% w / w),p . amarus(27.7% w / w),美国初步27.7% (w / w),B。diffusa(16.9% w / w)。分析了植物材料各自的标记化合物的高效液相色谱(HPLC)法和液相色谱-光谱法(LCMSMS)方法。
2.1.1。的标准化Zigbir®
原油从植物获得粉末材料,验证标记化合物的内容后,在适当比例混合,磨,混合准备Zigbir®。薄层色谱法(TLC)的产品是相对于参考材料使用高性能薄层色谱分析(效果)。产品分别和各自的参考标准体重5.0克重并提取分别使用在水浴回流冷凝器使用80毫升甲醇为30分钟。滤液又倾析,残渣和80毫升甲醇提取30分钟和过程重复两次,然后冷却后过滤。滤液集中到25毫升。相同卷(15微克)的样本和参考标准被发现在硅胶60 F254年0.2毫米厚度的板。开发板的流动相组成的甲苯:乙酸乙酯:醋酸(55:45:2)。干板扫描在254和366海里。板是喷洒茴香醛硫酸试剂和干在烤箱100°C。产品的指纹样本与参考标准。
2.2。实验动物和住房
Sprague-Dawley老鼠(6 - 8周)用于本研究培育和饲养毒理学的印度理工学院,印度浦那。动物们被安置在聚丙烯与不锈钢烤架笼子顶部和床上用品的清洁稻谷壳在温度控制的动物房间(20 - 24°C)的相对湿度30 - 70%,10 - 15每小时换气次数,和光照周期设置为12 h光明和12 h黑暗。标准颗粒状啮齿动物饲料(M / s Nav马哈拉施特拉邦Chakan榨油机有限公司,普纳)和过滤和紫外线暴露便携式水(Aqua警卫队)提供随意。
2.3。急性口服毒性研究
初步观测研究,其次是主要研究进行了评估的急性口服毒性Zigbir®,管理作为一个悬挂在0.5%水羧甲基纤维素(CMC)五个雌性老鼠(8周)2000毫克/公斤体重作为单一口服剂量以顺序的方式。剂量体积保持20毫升/公斤体重。老鼠禁食16小时前和后3小时测试材料的管理,只有水期间提供。所有的动物被观察到的死亡率(每天两次)和临床症状前10分钟,30分钟,1 h, 2 h, 4 h、6 h后剂量,此后每天一次连续14天。老鼠的体重记录期间禁食后0天,此后每周和终止研究15天,每周体重计算获得。进行尸体剖检所有老鼠都牺牲了的实验。本研究进行了符合经合组织指导化学品测试:测试指南420号,急性口服toxicity-fixed剂量方法和时间表Y,药物和化妆品(第八修正案)规则- 1988,卫生和家庭福利,印度政府(17,18]。
2.4。14日剂量测距研究
一剂测距研究是评估的潜在毒性进行重复暴露Zigbir®Sprague-Dawley老鼠选择剂量水平进行为期90天的subchronic毒性研究。在这项研究中,一组5男5女老鼠刚做好的接种剂Zigbir®每天口服填喂法一段14天在100,250,500,1000毫克/公斤。并发控制的一组老鼠仅接受车辆(0.5% CMC)。观察大鼠的死亡率和临床体征在14天观察期。注射的老鼠体重和采食量在研究的开始和每周记录。所有幸存的老鼠都牺牲在15天生产总值(gdp)病理检查。
2.5。Subchronic口服毒性研究
2.5.1。剂量和治疗
90天,subchronic口服毒性研究按照经合组织指导化学品测试:测试准则第408号,90天重复剂量口服毒性研究啮齿动物(19],遵从安排Y、药物和化妆品(第二修正案)规则- 2005,卫生和家庭福利,印度政府评估潜在的有毒Zigbir®反复口腔接触(20.]。50每个男性和女性Sprague-Dawley老鼠被选作研究。动物被随机分配成四组每个10男10女组成的老鼠(6到8周大)。这些动物的口服药物与Zigbir®(0.5% CMC)剂量水平的0,250,500,1000毫克/公斤每天一次连续90天。额外的卫星控制和高剂量组水平,有五个老鼠每性,给出了各自的治疗90天,并保留进一步28天为可逆性评估,持久性、毒性或延迟发生,如果任何。雌性是未生育过的和没有怀孕。剂量体积保持不变在10毫升/公斤为所有剂量水平包括对照组和剂量体积管理个人鼠调整根据其最近记录体重。准备新鲜的每日剂量,在管理。老鼠每天服用大约在同一时间。
2.5.2。死亡率和临床症状
所有的动物观察每天两次在研究期间的死亡率。同时,异常的临床体征或对治疗的反应(发病时间、强度和持续时间),如果有的话,都被记录下来。
2.5.3。体重和饲料摄入量
体重和饲料消耗数据被记录在毕业典礼的日子,在整个研究期间每隔一周所有的组和康复组治疗后的时期。
2.5.4。检眼镜检查
眼睛检查控制,所有的动物进行治疗之前启动的研究和在13和17周(复苏组),用一只手裂隙灯tropicamide感应的瞳孔放大0.5%后的解决方案。
2.5.5。功能的观察
在13周中,所有动物都检查了感官反应性听觉,视觉和本体感受的刺激,握力(数字式握力计,哥伦布)和运动活动。功能观察电池设计评估的反应在国内动物笼子和大田条件。
2.5.6。临床病理学
年底13(控制和治疗组)和每周17(复苏组),所有老鼠都禁食过夜。收集血液样本从retroorbital窦在乙醚麻醉血液学和血液生化学使用钾EDTA(1.5毫克/毫升)和肝素钠(200国际单位/毫升)作为抗凝血剂,分别。
血液学的参数估计(贝克曼库尔特分析仪Ac.T。Diff,来源:Wipro生物医学有限公司,孟买,印度)包括血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、网织红细胞计数(Rt),血细胞压积(HCT),意思是血细胞比容(MCV),意思是微粒血红蛋白(妇幼保健),意思是微粒血红蛋白浓度(MCHC),血小板计数(PLT),和总白细胞(白细胞)。微分白细胞计数进行手动从微观标本。凝血酶原时间(Pt)测量使用柠檬酸灯泡(100μL 3.8%的柠檬酸钠溶液每毫升血液中)。血样离心机在3000 rpm,持续15分钟。
血清生化参数研究(VeTEX兽医化学专家,来源:Wipro生物医学有限公司,孟买,印度)是丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ谷酰基转移酶(γGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、胆红素、血尿素氮(BUN)测定,肌酐、总蛋白、血糖、肌酐磷酸激酶(CPK)、总胆固醇、甘油三酯、白蛋白、钙、无机磷、钠、钾和氯。
2.5.7。验尿
尿液样本收集了控制和治疗组的91天,119天复苏组分析尿液体积,外观,颜色,pH值,比重,蛋白质,葡萄糖,酮,隐血、胆红素、尿胆素原和亚硝酸盐。显微镜进行了考试存在的脓细胞,上皮细胞,投下,红细胞,和水晶和频率的分析物,如果存在,记录。
2.5.8。尸体剖检和组织病理学
所有幸存的老鼠都牺牲在放血的终止研究二氧化碳麻醉和受到完整的尸体剖检。的绝对权重器官如肝脏、肾脏、肾上腺、脾、肺、脑、心脏、子宫、卵巢和睾丸/记录和相对权重(即。、器官/体重比值)计算。下面的器官和组织都保存在10%福尔马林和受到组织病理学检查:肾上腺,主动脉,大脑,盲肠、结肠,十二指肠,附睾,心脏、回肠、空肠、肾脏、肝脏、肺、淋巴结,食管,卵巢,胰腺,垂体,前列腺,直肠,唾液腺,坐骨神经、脊髓、骨骼肌、脾、胸骨骨髓,胃、精囊、睾丸、胸腺、甲状腺、气管,膀胱,子宫。
2.5.9。统计分析
进行评估的数据方差分析学生的紧随其后以及,科克伦以及,Dunnett测试。统计学意义是P-0.05 < 0.01。组织病理学观察列表和个体动物的分数是根据程度和面积计算(LABCAT模块组织病理学,创新编程Associates Inc .,普林斯顿,新泽西州)。
3所示。结果
3.1。急性口服毒性研究
所有动物管理的单剂量口服2000毫克/公斤Zigbir®幸存在整个实验周期和没有任何毒性剂量后的迹象,在观察期间的14天。这个研究的发现对身体并没有透露任何重大不利影响在整个治疗期间体重增加。身体体重7和14天后被发现观测研究中16.54%和28.55%,14.63%和29.98%在主要研究中,分别。总值没有主要病理变化观察尸体剖检。根据结果,半数致死量为Zigbir®被发现超过2000毫克/公斤体重。
3.2。14日剂量测距研究
所有的雄性和雌性动物控制和不同剂量水平的Zigbir®幸存到终端牺牲和没有发现异常的临床体征在14日研究期间。没有身体体重的差异之间的控制和治疗组大鼠。尸体剖检检查没有任何治疗相关的毒性的证据。
3.3。Subchronic口服毒性研究
3.3.1。死亡率和临床症状
治疗Zigbir®选择剂量没有死亡,产生不利的临床体征,或毒性作用在动物整个剂量的90天内,postdosing 28天的恢复期。
3.3.2。体重和饲料摄入量
在整个实验期间,雄性动物的剂量治疗组和康复组表现出类似的身体体重增加与各自的控制(图1)。减少体重增加6.56%和10.90%在雌性动物从500和1000毫克/公斤剂量组相比,控制研究期间的最后90天。女性从高剂量(1000毫克/公斤)复苏组表现出正常的身体在恢复期间体重增加(图28天2)。没有观察到的差异对饲料消耗的所有治疗组的血压在不同时间间隔的评估(表1)。
3.3.3。眼底镜检查
用检眼镜检查的检查控制,所有治疗剂量组小鼠没有任何异常。
3.3.4。血液病学的调查
血液学的评价参数显示只有少数显著降低(MCV,男性在250毫克/公斤组;妇幼保健和MCHC,男性在250,500和1000毫克/公斤组();妇幼保健,女性在250毫克/公斤集团和MCHC,女性在250,500和1000毫克/公斤组();HCT,女性在1000毫克/公斤复苏剂量组()和增加(总红细胞,在男性(250毫克/公斤组)和女性();总白细胞,男性组(500毫克/公斤);HCT, 250毫克/公斤在雌性和雄性和雌性在500毫克/公斤()和女性在1000毫克/公斤(”),女性为500毫克/公斤()相比,对照组(表2和3)。
3.3.5。血清生化
没有观察到治疗相关的变化从血液生化结果除了高浓度的碱性磷酸酶在动物的剂量组(1000毫克/公斤雌性老鼠)和减少钾水平组(表250毫克/公斤4和5)。
3.3.6。验尿
没有明显差异的尿参数。
3.3.7。病理学和器官重量
治疗Zigbir®没有引起任何显著的总值和治疗相关的病理改变对待动物。组平均绝对和相对权重的器官,如肾脏、肝脏、胸腺、心脏、睾丸、附睾、卵巢和子宫从控制动物之间没有显著性差异除了一些雌性动物的变化,即相对体重增加()动物的大脑和脾脏250毫克/公斤剂量组和500毫克/公斤剂量组,分别。1000毫克/公斤复苏组显示相对体重的增加(肾上腺)(表6,7,8,9)。
3.3.8。组织病理学
所有的组织病理学结果与本研究相关似乎是偶然的频率和严重程度保持相同的控制和治疗动物的男女。观察包括白细胞的浸润、肝坏死;白细胞的浸润,在肾脏出血;肺泡组织细胞增生症,肺出血和神经胶质过多症,submeningeal,淋巴细胞浸润在大脑。
4所示。讨论
几个世纪,药用植物和草药继续丰富动物和人类的医疗保健需求。肝、参与新陈代谢的一个重要器官的异型生物质的物质身体和解毒功能,经常挑战许多有毒的攻击(21]。在缺乏有效和安全的王亚南代理在常规治疗和由于禁止许多抗生素和合成生长促进剂,中药材在各种肝脏疾病的管理发挥重要作用[22,23]。各种药用植物的有利影响广泛建立在科学文献和配方包含单个或多个草药已经表示恢复肝脏健康ethnomedical实践和许多国家的传统医学系统(24]。禽类物种通常和容易容易肝脏并发症由于各种病因因素与商业相关的鸡肉生产。鸟类减少肝性能最终导致代谢受损,可怜的饲料利用效率,减少身体体重的增加可以有效地管理与草药补充,因为草药改善肝脏的阈值水平与不同的有害的压力。然而,草药制剂,尽管被普遍声称为自然安全,需要经过身份验证的科学验证测试之前的毒理学性质被广泛引入消费。
在测试物质的安全性评价,急性口服毒性研究被认为是初步的步骤,有助于调查药剂的分类和标签17]。在目前的研究中,单一的急性口服Zigbir®五女Sprague-Dawley老鼠在2000毫克/公斤的剂量水平b.w.并未造成任何死亡率和半数致死量被发现超过2000毫克/公斤合著的。因此,结果导致分类Zigbir®5级标准根据全球统一系统。它可以观察到从科学报告发表在最近一段时间,许多家禽和家畜草本配方制成的polyherbal成分类似于Zigbir®已报告的半数致死量高于2000毫克/公斤,发现合理安全的急性照射(1,2,25,26]。
重复剂量口服毒性研究进行评估的不利影响物质用于长期的时间和获得信息的潜在健康危害,可能发生连续曝光包括靶器官毒性信息,累积效应的可能性,估计没有观察到的不利影响的剂量(19]。通常推荐的监管指南subchronic毒性测试,14日剂量测距研究,选择合适的剂量水平的90天口服毒性研究。管理Zigbir®在100、250、500和1000毫克/公斤的14天,没有死亡,治疗相关的临床或行为异常迹象,改变身体体重增加,总病理观察记录到实验的最后。
基于剂量范围的结果发现研究中,三个适当的剂量水平的250,500和1000毫克/公斤b.w.选择subchronic口服毒性研究的老鼠。治疗Zigbir®口头连续90天,高达1000毫克/公斤的剂量水平b.w.没有造成任何死亡或毒性剂量以及postdosing复苏期间迹象在测试组。用检眼镜检查的结果和功能观察考试对待动物也证实了正常的生理反应,类似于对照组的动物的结果。
指导方针的毒性测试相当重视报告体重的变化(17,19]。安全特性的测试材料,一个公认的减量10%体重限制或增长率固定长期暴露下27,28]。在当前的研究中,观察体重下降在中、高剂量组雌性动物实验的最后。然而,雄性动物各自的剂量治疗组和两性复苏组显示正常的身体体重增加,直到终止研究。尽管流行的看法,异型生物质化合物影响身体体重长期摄入,治疗组之间的矛盾发现表明,改变在身体体重没有明显毒性的参与支持。这个考虑,从表是显而易见的1,强化了动物的饲料消耗的所有剂量组仍在整个研究期间不受影响,被发现与对照组比较在不同周间隔。
血液学的分析,一些改变端点的值如MCV、妇幼保健、MCHC, HCT,总红细胞,白细胞总数观察与对照组。此外,总值在尸体剖检观察,没有伤害到任何造血的器官或组织病理学上的任何变化明显。尽管有些改变血液学的观察值与对照组相比,这些变化不能被认为是肯定的病变的血形象没有观察到相关的组织病理学变化。此外,被发现在一定范围内变化,因此,这些变化并不视为治疗相关。
评估动物血液生化显示高浓度的碱性磷酸酶从1000毫克/公斤剂量组。虽然碱性磷酸酶存在于所有组织,酶特别集中在肝脏、胆管、肾、骨,和胎盘29日]。Hyperphosphatasemia,碱性磷酸酶升高,据报道在肝脏和骨骼疾病的主要条件30.]。然而,缺乏并发相关宏观或微观证据,没有任何明显的海拔等其他相关器官损伤的敏感指标ALT, AST,γGT、LDH和胆红素表明,这些发现可能不是生物学意义重大。降低血清钾水平观察仅在低剂量组的男性,因此不能被视为有毒性的相关性。此外,结果被发现尿液的相应支持。
的一个主要优势进行subchronic毒性研究是信息在特定的器官毒性重复测试物质用于长期使用在目标动物物种19]。在这项研究中,终端牺牲各种剂量组Zigbir®总值不透露任何病理变化归因于治疗。对待动物的绝对和相对器官重量被发现与各自的对照组比较。虽然大脑的一些相对权重的增加,脾脏,肾上腺被注意到在某些剂量组,这些变化被发现nondose依赖,因此被认为是没有毒性的重要性。同样,观察到的组织病理学变化的控制和高剂量治疗组动物也类似,可以被认为是偶然的,先天性或自发的。
除了在活的有机体内当前研究的发现,最近在体外毒性测试Zigbir®确认草本配方的相对安全的特点在不同的测试系统。Chandrasekaran等人确定在体外基因毒性的潜力Zigbir®使用艾姆斯二世分析和报道,草药物质没有表现出任何重大TA98和TAMix菌株的诱变效应鼠伤寒沙门氏菌(31日]。
总之,Zigbir®单一口服显示半数致死量超过2000毫克/公斤b.w.女性Sprague-Dawley老鼠并没有表现出任何治疗相关的临床毒性的迹象时口头给连续90天在老鼠的两性测试剂量水平。没有观察到的效应水平(NOEL) Zigbir®subchronic口服毒性研究中被发现是500毫克/公斤在女性的男性和250毫克/公斤Sprague-Dawley老鼠。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突。