文摘
本研究报告开发一个简单的、具有成本效益的,高度敏感的光谱光度测量的方法测量mesalazine (MSZ)。方法利用氧化耦合的MSZ syringic酸(4-hydroxy 3, 5-dimethoxybenzoic酸)在碱性条件下溶解氧的存在,形成一个稳定的靛酚与特有的蓝色染料,可以以615海里。比尔定律被发现听从-50 1.25的范围µg·毫升−1,摩尔吸光系数为0.53×104摩尔−1·L−1·厘米−1。此外,该方法表现出优秀的敏感性,限制检测(LOD)为0.093µg·毫升−1和定量的限制(定量限)为0.282µg·毫升−1。该方法被发现是有选择性的,因为它能有效地检测MSZ存在某些干扰的物种。该方法根据当前我指导和演示验证准确性好,复苏范围在100%到98之间,相对标准偏差小于0.6%。总的来说,这种方法提供了一个有前途的工具,敏感和准确测定MSZ纯形式,制药配方和生物样本。
1。介绍
Mesalazine (MSZ),化学称为5-aminosalicylic酸(5-ASA),是一个重要的非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药)用于治疗克罗恩病和溃疡性结肠炎,这可能与炎症性肠病(IBD)保护个人发展中结直肠癌(1]。Mesalamine aminosalicylate药物,口服后在肠道代谢和施加的影响(2]。晶体mesalazine白色到粉红色,分解在280°C左右,微溶于冷水,用酒精更溶于热水和盐酸。
可以分析mesalazine各种药物剂型的使用各种不同的分析技术。这些技术包括分光光度法(3- - - - - -16),荧光17- - - - - -19),UHPLC-MS /女士[20.),高效液相色谱法(21],rp - [22,23],UPLC [24],伏安法(25,26]。处理mesalazine可能是一个挑战,因为它通常是在一个复杂的生物环境中发现微量。因此,它是至关重要的从高度集中删除任何潜在的干扰内源性物质之前进行分析。Mesalazine两性是由于的存在主要芳香氨基,羧基和酚羟基的分子。因此,很难分离和确定。之前mesalamine的仪器分析,从生物识别技术消除干扰,提高选择性和灵敏度的分析方法往往需要一个样品制备技术。
由于他们的能力提供选择性和敏感药物的确定和量化方法及其代谢物,氧化耦合反应发挥重要作用在药物分析(27]。氧化耦合反应提供有用的分析仪器测定物质的药品配方,生物样品,和法医调查。他们帮助药物质量控制、药代动力学研究、治疗药物监测,患者安全导致强劲的发展和敏感分析方法(28]。mesalazine的氧化偶联反应是一个至关重要的阶段确定药物的浓度。增加灵敏度、精度、速度和安全的反应使其分析的首选方法29日]。
本研究引入了一个敏感的分光光度法确定mesalazine医药产品。的方法是基于氧化耦合mesalazine在碱性介质中溶解氧产生p-benzoquinon亚胺,然后加上4-hydroxy 3 5-dimethoxy苯甲酸(syringic酸)产生靛酚蓝产品。随着图形抽象图1所示,该方法被用来确定的mesalamine制药配方。本研究旨在找到一种快速而简单的方法来测量mesalazine全血样品中使用批量分光光度法。该方法被成功验证。这种新方法是一种很有前途的方法来发现mesalazine在制药和生物样品,因为它是敏感和准确的。
2。一个实验装置
2.1。装置
紫外可见分光光度计(紫外可见分光光度计AE-S60)由计算机软件控制(MetaSpec)使用。1.0厘米匹配石英细胞用于测量。一个恒温控制的水浴(Lab.同伴BS-11颤抖、韩国)用于反应热量控制。离心机6000 rpm(板、德国)是用于分离血液样本的血清。
2.2。材料
所有的解决方案都是用分析纯化学物质和蒸馏水。化学物质(供应商)如下:标准MSZ从Awamedica获得的(纯度:99.9%)。商业样品(Pentasa 500毫克,Mesacol 400毫克和500毫克Metaza)是来自当地的药店。
2.3。试剂的制备方法和解决方案
1000年的一个股票的解决方案µg·毫升−1mesalazine (MSZ), 0.05摩尔·L−1syringic酸(SA)和1摩尔·L−1氢氧化钠解决方案准备。所有纯试剂购自Sigma-Aldrich,德国。标准的解决方案被稀释(根据需要准备30.]。
2.4。样品制备
2.4.1。制剂的Mesalazine
20块商用药物的体重,粉,和彻底的总和31日]。每一个包含500或400毫克的mesalazine精细混合,混合彻底,称重精确。温和加热,药物溶解在蒸馏水中,解决方案被过滤后,mesalazine长大到500的浓度µg·毫升−1通过添加蒸馏水在容量瓶中。
2.4.2。人类血清飙升
人类血浆飙升是一个实验室技术用于添加一个已知物质人类血浆样品进行测试或校准分析仪器(32]。收集血液样本来自健康人没有收到mesalazine-containing药物。血液被允许凝结在离心机在4000 rpm 15分钟分离血清。然后,50μ血清L是直接放入50毫升容量瓶和去离子水稀释至所需浓度。
2.5。靛酚反应的一般过程
在这项研究中,我们准确地测量和传输mesalazine (MSZ) 10毫升容量的玻璃瓶。这些玻璃瓶所允许的稀释MSZ解决方案获得浓度从1.25到50µg·毫升−1进行定量分析。3毫升syringic酸(0.05摩尔·L−1包含药物)被添加到每个瓶,这是碱性增加1毫升氢氧化钠(1摩尔·L−1),30秒的混合物是大力动摇了溶解氧的存在。溶液被稀释DW和加热10分钟45°C水浴完成靛酚蓝颜色的形成反应。
3所示。结果与讨论
3.1。的氧化耦合MSZ
当mesalazine暴露在溶气氧气和基本媒介,它与syringic酸解反应使蓝色的最大吸光度在615海里。图2显示蓝色染料的吸收光谱。建议的机制mesalazine形成的水解染料在碱性介质syringic酸如图3。3-Imino-6-oxocyclohexa-1, 4-diene-1-carboxylate被溶解环境氧气氧化,反应在一个活跃的网站由于亲电攻击产生靛酚染料的氧化偶联反应。
3.2。优化实验条件的靛酚染料形成
3.2.1之上。基地类型及其数量的影响
靛酚形成的过程发生在碱性条件下(33]。各种类型和浓度的基地,包括氢氧化钠、KOH, Na2有限公司3,NaHCO3进行调查,提出了氧化偶联反应。氢氧化钠被发现产生最高的颜色强度,如图4。达到的高度敏感性,不同量的0.5摩尔·L−1氢氧化钠进行评估,观察到1毫升生产最重要的吸收,是显示在图5。
3.2.2。Syringic酸溶液浓度的影响
我们可以确定理想的剂量通过操纵一个实验参数,同时保持其余的参数和药物数量不变。具体地说,我们研究了不同的浓度的影响syringic酸(SA)的解决方案。如图6,我们的结果表明,最大的颜色强度达到浓度为0.012摩尔·L−1SA试剂。
3.2.3。温度和时间的影响
确定反应时间,我们监控颜色开发在一个恒温控制的在室温下水浴。我们的研究结果表明,最高的灵敏度达到10分钟后在45°C,通过观察数据呈现在图7。
3.2.4。产品的稳定性
确保生成的靛酚染料的稳定性,稳定剂,包括铜(II)、补充说,一些研究报道,靛酚染料可以不稳定,显示连续吸光度下降随着时间的推移,在达到他们的最大值34,35]。然而,我们的合成染料表现出异常稳定,如图8,吸光度测量达到最多只有几分钟后120分钟并保持稳定。
3.3。方法验证
我们评估建议的方法对线性、灵敏度、精度和准确性。
3.3.1。线性
采用前面提到的光谱光度测量的方法,我们获得的线性回归方程和画的信息调查颜色之间的联系强度和mesalazine浓度从1.25到50µg·毫升−1。结果回归图显示一个线性关系。另外,校准数据的确定系数,拦截,斜率确定。我们也计算敏感性参数,如Sandell指数和摩尔吸光系数,以及检测的局限性(LOD)和定量的极限(定量限)根据参数表中列出1。
表2介绍了计算盘中和interday精度。盘中精度评估是在同一天进行,虽然interday精度评估是通过三天。
3.3.2。准确度和精密度
评估该方法的准确度和精密度,三个复制进行纯药物在每个MSZ浓度在线性范围内(10和20µg·毫升−1)。表中给出的结果3表明,该方法实现了高水平的准确度和精密度相对误差和标准偏差不超过1。5%。这些发现证明了高可靠性和可重复性的过程。
3.3.3。干扰的影响
我们确定干扰对产品的成分没有明显的影响,表中给出的数据就证明了这一点4。具体地说,我们分析了合成样品的解决方案包含20µg·毫升−1mesalazine和75µg·毫升−1赋形剂。根据我们的光度测量,未经处理的样品表现出没有吸收实验条件下观察到。值得注意的是,即使在高浓度、稀释剂和添加剂,如氯化钠、乳糖、淀粉、葡萄糖、不干扰分析。
3.3.4。应用于制药配方
的分光光度法确定MSZ平板和Pentasa栓剂在商业制药配方已经有效地评估没有辅料的干扰。这种方法使用回归方程计算MSZ浓度,和平均恢复值介于98.98%和101.7%之间获得低偏差为0.06 -0.14%,如表所示5,表明提出的方法是非常有效的。
为了保证结果的可靠性,建议方法的结果与参考方法比较22]。如学生的使用统计测试t以及和方差比F以及在95%置信水平有四个自由度,如表中所述5统计检验结果表明,建议的方法执行有足够的可靠性在使用真实的样品。
3.3.5。申请血清
验证该方法的有效性(36),恢复实验进行了通过添加2和图10所示µg·毫升−1MSZ。表6显示了复苏的结果。该方法的结果证明其准确性和有效性的血清血液样本数据中恢复。的回收率介于103.00%和97.00之间证明该方法可以恢复大部分来自血清血液样本的数据,从而证明其有效性,并提供一个可靠的数据恢复的解决方案。
相比,该方法是有效的和知名出版方法基于席夫碱、电荷转移、重氮和其他氧化耦合。表7LOD,表明该方法的相对标准偏差和定量限显示一个可接受的范围特异性和敏感性与最近的分光光度法相比。
然而,该方法比其他方法更经济,只使用溶解氧的氧化酶剂氧化MSZ p-benzoquinonemomoimine,和产品是稳定的很长一段时间不使用稳定剂如mesalazine的决心靛酚的反应。
4所示。结论
该方法简单、准确、精确、经济,除了快速、不需要预先提取过程。它是基于被分析物的氧化偶联反应与syringic酸溶氧的存在,以及由此产生的复合测量在615海里。当比较测量浓度的理论,从学生的价值观t以及和F以及较低,表明更多的准确度和精密度。由于其灵敏度高,建议的方法似乎是适合学习mesalazine制药配方和等离子体所表5和6。真实的调查样本包含MSZ表明,经常使用赋形剂没有互动。因此,质量控制实验室可能会考虑实施这些技术来确定MSZ。建议的方法带来了相当大的好处,比如只需要最小的试剂和简化转换过程。相比,该方法是有效的和知名出版方法基于席夫碱、电荷转移、重氮化作用和耦合,和其他氧化耦合。表7LOD,表明该方法的相对标准偏差和定量限显示一个可接受的范围特异性和敏感性与最近的分光光度法相比。然而,该方法比其他方法更经济,只使用溶解氧的氧化酶剂氧化MSZ 3-imino-6-oxocyclohexa-1, 4-diene-1-carboxylate,产品是稳定的很长一段时间没有使用稳定剂在其他制药配方的确定由靛酚的反应。
此外,似乎理想情况下该方法适合于评估和保证mesalazine商业制剂的质量,一般以小干扰使用药物添加剂,可以毫不费力地消除。发达的生物分析方法血清血液样本设计和验证使用氧化耦合的mesalazine溶解氧加上4-hydroxy 3 5-dimethoxybenzoic酸在碱性介质。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
苏珊t .构思和设计的研究,进行了研究,并写了手稿。Diyar a为这项研究提供了技术支持,提供了重要的见解和建议改进研究,并帮助修改手稿。