文摘

FDA最近批准了一项新的固定剂量组合的氨氯地平besylate (AMD)和塞来昔布(COX)治疗高血压和关节炎。没有报道的分析方法来分析这两个分析物。因此,监控质量和数量的配方AMD和考克斯一个简单的、准确的,精确的,经济的,环保的光谱分析方法。第一种方法包括AMD的决心和考克斯的一阶导数紫外光谱法与比例因子10。然而,第二种方法是基于AMD的紫外吸光度的直接测量364.3 nm,比一阶导数紫外光谱法对考克斯。这两种方法都显示良好的线性范围的5到40μg / ml考克斯,而AMD显示线性在0.5到10的范围μ克/毫升一阶导数方法和比例因子10 1到10μg / ml的第二种方法好相关系数(R²> 0.998)。了LOD的方法验证,定量限,精度,精度,恢复研究,和稳定性按照我的指导方针,和验证结果在可接受的范围之内的。的方法被成功用于测定AMD和考克斯在制定彼此的存在,和统计对比该方法。因此,该程序可以用于常规质量控制研究。

1。介绍

高血压和骨关节炎(OA)是中产阶级和老年人口的主要健康问题。一般来说,这两种疾病共存,和40%的OA患者诊断为高血压(1]。然而,治疗这两种疾病是具有挑战性的,因为不良的非甾体抗炎药对血压的影响(2]。然而,塞来昔布(考克斯图1(一))被发现是一个更好的选择,因为它比布洛芬对血压的低风险,萘普生,或其他非甾体抗炎药,和考克斯胃肠道和肾脏毒性较低3,4]。因此,FDA最近批准的固定剂量组合钙通道阻滞剂,氨氯地平besylate,和选择性cox - 2抑制剂塞来昔布、治疗高血压和OA (5]。

氨氯地平besylate (AMD,图1 (b)),一个长效钙通道阻滞剂,dihydropyridine衍生物广泛用于高血压和心绞痛的管理(6]。几种分析方法被描述在文献中量化的AMD独自从配方,结合其他药物和生物液体。这些分析方法包括光谱光度测量的方法(7- - - - - -9[],spectrofluorometric方法10),效果11],rp - [12- - - - - -14),LCMS /女士[15)、毛细管电泳电化学方法(16- - - - - -23]。选择性COX - 2抑制剂塞来昔布(COX),是一种有效的止痛剂,退热剂,抗炎药。考克斯远比其他传统非甾体抗炎药在胃肠道安全性方面,维持生理的前列腺素的胃和肾脏。因此,它通常是首选在OA等慢性炎症性疾病(24,25),也被用于chemodefensive活动在不同癌症26]。考克斯的医药应用不断增加;因此,不同的分析方法也被报道,如分光光度法(27,28),荧光光谱测定法28,29日],RPHPLC [30.- - - - - -32),LCMS /女士,33,34)和毛细管电泳方法(35]。然而,没有分析技术报告同时评估AMD和考克斯在最近批准的药物配方。

紫外光谱方法简单、经济、准确。然而,对于多组分配方组成的分析物显示完整的紫外吸收光谱重叠,很难估计分析物在彼此面前使用零级紫外光谱未经分离。然而,衍生的零级光谱将使我们能够分析这些组件在彼此面前,通过测量在零交叉导数光谱的峰值振幅分析物之一。此外,衍生化率光谱也可以用来避免干扰的另一个组件和平板辅料(36- - - - - -40]。因此,尝试在这个提案开发两个经济、简单、准确、精确导数紫外光谱光度测量的方法同时测定的AMD和考克斯制药配方。

2。实验

2.1。化学药品和试剂

纯氨氯地平的样本besylate(99.1%)和塞来昔布(98.9%)获得的西格玛奥德里奇(德国)。分析纯乙醇从西格玛奥德里奇购买。我们实验室的蒸馏水准备毫问(美国微孔)在整个实验使用。氨氯地平片(10毫克/片)和塞来昔布胶囊(200毫克/胶囊)从当地市场购买。平板电脑组成的AMD:考克斯在浓度为2.5:200,5:200年和10:200毫克/平板电脑,分别在实验室准备使用8毫克的乳糖,硬脂酸镁5毫克,10毫克微晶纤维素,12.5毫克滑石,10毫克羧甲淀粉钠/平板电脑。

2.2。仪器

日本岛津公司紫外可见分光光度计(1700)被用来记录AMD的紫外光谱和考克斯使用10毫米石英比色皿。扫描的样品进行50 nm /分钟的速度通过调整狭缝宽度1海里。在分析物浓度水平高,光谱显示高噪声;因此,光谱与8海里平和。校准容量的玻璃瓶被用于制剂的股票和工作标准和样品的解决方案。

2.3。准备工作的股票和解决方案

AMD的股票的解决方案和考克斯标准是由传输精确平衡的100毫克的AMD和考克斯两个单独的100毫升测量烧瓶50毫升乙醇组成。AMD自由溶于乙醇,而解散考克斯量瓶是彻底混合5分钟超声发生器的帮助下,最后成交调整到100毫升乙醇。工作标准是由稀释这些解决方案与乙醇:水(50% V / V)作为溶剂。

2.4。AMD的准备和考克斯示例解决方案使用配方和Laboratory-Prepared平板电脑

二十块AMD(10毫克/片)的体重,粉,平均重量计算。20胶囊的考克斯(200毫克/胶囊)被打开和内容分别称重,计算平均体重,然后混合。AMD和考克斯粉相当于10毫克的AMD和200毫克的考克斯被转移到测量瓶100毫升。大约75毫升乙醇被调到其他岗位工作,在室温下用15分钟将分析物溶解到溶剂。解决方案是滤纸过滤和清洗用新鲜乙醇和最终的成交调整与乙醇。此外,解决方案是用50%乙醇将稀释浓度的校准曲线。同样,laboratory-prepared平板电脑是粉和样品的解决方案是使用上述过程和分析做好准备。

3所示。过程

3.1。一阶导数分光光度法(第一法)

足够的AMD和考克斯标准股票的解决方案转换成两个独立的一系列10毫升容量的玻璃瓶,浓度范围为0.5 -10μAMD的g / ml(0.5, 2, 4, 6, 8,和10μg / ml), 5 - 40μ克/毫升的考克斯(5、10、15、20、30和40μg / ml)。所有这些解决方案都被吸收测量的200 nm - 400 nm记录紫外吸收光谱使用50% v / v乙醇/水溶液为空白。一阶导数光谱计算所有这些光谱使用∆4海里λ与比例因子10。AMD的峰值振幅谱的零交叉考克斯考克斯和峰值振幅谱的零交叉AMD记录。校准曲线之间建立了这些振幅值与相应浓度的AMD和考克斯分别和各自建立了回归方程。

3.2。比一阶导数光谱法(第二种方法)

足够的AMD股票的解决方案被转移到一个10毫升序列测量包含20个烧瓶μ克/毫升的考克斯的浓度在1到10的水平μg / ml AMD (1、2、4、6、8、10μg / ml)。同样,考克斯标准储备溶液添加到一系列10毫升测量烧瓶组成的2μg / ml的AMD的浓度范围5 - 40μ克/毫升的考克斯(5、10、15、20、30、40μg / ml)。紫外吸光度光谱被记录结合AMD和考克斯和存储解决方案。AMD的吸光度测量为363.4 nm和AMD通过绘制校准曲线构造的吸光度与浓度之间的图。另外,2μAMD的g / ml的解决方案准备和紫外线光谱被记录。第二个系列的吸光度光谱AMD和考克斯被转换为比值光谱的考克斯除以结合光谱与紫外光谱的AMD (2μg / ml)。结果比吸收光谱转换成比例的一阶导数光谱的考克斯derivatizing∆4海里λ。峰值振幅为286.7纳米测量,图像是由策划图之间的振幅值和相应的浓度。回归方程也被计算从校准曲线。

3.3。应用紫外光谱方法来制定

整除的样品溶液与50%乙醇溶液稀释的工作示例解决方案包含AMD和COX 1: 20μ克/毫升,1:40μ40 g / ml, 0.5:μ分别g / ml。紫外吸收光谱被记录在200 nm - 400 nm的范围。对于第一种方法,示例解决方案转换成正常的紫外光谱一阶导数∆使用4海里λ10的比例因子。AMD和考克斯的浓度测定记录峰值振幅的零交点波长和相应的回归方程。在第二个方法中,AMD的决心,吸光度测量为364.3 nm和浓度计算回归骑马。考克斯的浓度测定,正常的紫外光谱的配方是AMD(2除以紫外光谱μg / ml),导致比谱转化为一个一阶导数光谱使用∆4海里λ。测量振幅峰值为286.7 nm,考克斯的浓度计算使用相应的回归方程。此外,这两个方法比较使用学生的“t“测试”F“测试知道之间的区别这两种方法的分析结果。

4所示。结果与讨论

紫外吸收光谱对AMD和考克斯在乙醇/水(50% v / v)解决方案如图2。考克斯的紫外光谱是AMD的完全由紫外光谱重叠,很难确定考克斯的AMD事先通过直接分离紫外分光光度法。因此,开发了两种导数紫外光谱光度测量的方法同时测定的AMD和考克斯在配方。紫外光谱的衍生化可能使我们能够确定分析物的辅料也消除重叠分析物的干扰。

分析物都溶于乙醇和浓度的校准曲线范围内,工作标准的解决方案在50%乙醇溶液清晰的解决方案。因此,50%的乙醇溶液被选为溶剂来开发简单,经济,环保UV-spectroscopic方法。

第一种方法是基于正常光谱转换成一阶导数光谱区分样品的吸光度光谱波长的波长。导数光谱还允许我们单独的重叠光谱和消除干扰的赋形剂和其他分析物。这增加了多组分光谱的分辨率和提高特异性和敏感性。此外,此功能允许一个组件的浓度测定在别人面前通过测量的振幅导数零交点波长的光谱,其中一个组件将零吸光度(36,37]。

AMD的固定剂量配方和考克斯在三个不同的比率:2.5:5:200年,200年和10:分别为200毫克/片。由于低浓度AMD的配方与考克斯相比,考克斯的零交点波长,AMD显示微不足道的吸光度高达2μg / ml由于低振幅的一阶导数光谱。因此,很难确定配方同时分析物在含有2.5:200毫克和5:200毫克的AMD和考克斯。因此,浓度的增加,AMD考克斯的浓度成比例地增加。考克斯的吸收溶液,浓度超过40μg / ml,超过2.5,显示噪音。10因此,比例因子在交谈中使用光谱一阶导数光谱,一阶导数光谱的振幅增加,并可以确定AMD的低浓度从0.5μ克/毫升(图3)。

吸光度光谱被记录为AMD和考克斯解决方案和转化为一阶导数光谱,∆的比例因子10使用4海里λ。不同波长的2、4、8和10 nm∆应用λ。然而,4海里被发现最优比例因子10;因此,作为∆4海里λ在整个实验过程。AMD的一阶导数光谱显示2极大值在233.16和338.34 nm和3最小值−219.68 nm,−249.22 nm,−393.55 nm(图4);然而,考克斯显示零交叉−252.0 nm的AMD有吸收振幅(图5)。考克斯的一阶导数光谱显示1最大245.59 nm和2最小值209.8−−272.08 nm(图6)。然而,AMD显示零交叉210.56−−289.4 nm,考克斯有吸光度(图5)。然而,振幅是擅长−210.5 nm但线性不好,而在−289.4 nm,振幅较低但显示良好的线性回归系数。因此,波长的选择−252.0−289.4 nm的量化AMD和考克斯。此外,分析物显示相同的吸光度在纯和在彼此面前零交点波长(图5)。

第二种方法包括直接测量AMD和COX比例导数方法测量。因为考克斯的紫外光谱显示没有吸光度范围的320 nm - 400 nm, AMD有吸光度,校准曲线构造了AMD通过测量吸光度为363.4 nm(图7)。然而,光谱AMD的考克斯是完全重叠的。因此,比值导数光谱法(38- - - - - -40考克斯)已经采用了量化,是基于以下原则。两种化合物(P和Q)没有化学化合物间的相互作用和服从啤酒的法律对于每一个化合物,下列方程(1可以构造): 在哪里一个_米P和Q的吸光度是混合物,ɛ吗_P和ɛ_问分别是化合物的摩尔吸光系数P和Q,然后呢C_P和C_问分别P和Q的化合物的浓度。将上述方程与吸光度方程的一个纯化合物溶液的光谱(一个_问°=ɛ_问°C_问°)结果为以下方程(2):

表达式是常数,可以消除转换比光谱导数光谱。这衍生化作用生成几个最大值和最小值,测量峰值振幅的最大值和最小值波长使我们能够确定一个组件的浓度在干扰另一种化合物的存在和赋形剂(38- - - - - -40]。在这种方法中,紫外吸光度光谱AMD的混合物和考克斯除以AMD的紫外吸光度光谱解生成率光谱的考克斯的浓度范围5 - 40μ克/毫升(图8)。研究了不同浓度的解决方案的AMD (0.5, 2、4、8、10μg / ml)作为遗赠人;然而,遗赠人2的浓度μ由于良好的灵敏度g / ml被选中。比光谱转换成一阶导数光谱使用∆4海里λ。一阶导数光谱(图9)显示两个极大值在222.92和258.24 nm和三个最小值−209.10 nm,−232.35,−286.7海里。在这些波长峰值振幅测量是直接与考克斯的浓度成正比。然而,振幅为222.92 nm,−209.10 nm,和232.35 nm很低,而在286.7 nm显示良好的复苏的考克斯在实验室混合样品的相对标准偏差和良好的线性回归系数较低(r²> 0.999)相比,振幅测量为258.24 nm。因此,286.7 nm是考克斯的选择进行分析。峰值振幅测量在不同浓度为286.7 nm,和校准曲线是由策划图之间的振幅与考克斯的浓度。另外,从校准曲线线性方程构造了。

4.1。方法验证

提出了光谱程序验证线性坚持我指导原则,检测和量化的限制,精度,精度、复苏,选择性和稳定性。

4.2。线性

线性范围确定的分析物通过两种方法分析了不同浓度的解决方案。AMD表现出出色的线性度在0.5到10的浓度μg / ml第一个方法,1到10μg / ml的第二种方法好相关系数(r²> 0.998)。考克斯是线性范围的5到40μ与一个优秀的相关系数(g / mlr²> 0.999)两种方法。校准曲线的分析物的方法如图10。线性范围、回归方程和相关系数都列在下表中1。

4.3。检测和量化的极限的极限

光谱灵敏度的方法建立了确定检测的局限性(LOD)和量化的极限(定量限)。LOD和定量限测定根据我的指导方针。LOD由3.3 p / m,而确定定量限10 p / m, p代表校准曲线的标准偏差和m表示曲线的斜率。低LOD和定量限的值(表显示良好的灵敏度的方法1)。

4.4。精密度和准确度

的精度interday和盘中精度评估的方法(补充材料文件(可用在这里))。盘中的精度,分析了三种不同浓度的两种分析物的优化方法在同一天一式三份。interday精密,同样的解决方案进行了分析:连续三天。精度是表示为%取代,而准确性是表示为%相对误差和列在下表中2。低%相对标准偏差(< 2.0)和低%重新显示良好的精密度和准确度的方法。

4.5。恢复的研究

恢复光谱的研究方法进行评估的标准添加法(补充材料文件(可用在这里))。三种不同浓度的解决方案的AMD(1、2和3μg / ml)和考克斯(5、10和15μg / ml)分别添加到先前分析制定解决方案组成的1μ克/毫升的AMD和20μ考克斯的g / ml。然后,AMD和考克斯的总量测定使用相应的回归方程,分析物浓度添加量计算。准确性是表示为复苏和百分比%相对标准偏差(表3)。复苏的百分比低% RSD为98.70%至101.83%(< 2%),这表明最好的准确性的方法。

4.6。稳定性研究

标准股票的解决方案和工作标准的解决方案在4°C存储在冰箱和分析每天7天。没有观察到两种分析物的浓度的变化甚至在第七天,这表明两种分析物的稳定性。

4.7。应用提出的方法测定AMD和考克斯的配方混合和Laboratory-Prepared平板电脑

紫外光谱程序都是有效地用于量化的AMD和考克斯配方混合和实验室准备平板电脑(补充材料文件(可用在这里))。没有固定剂量组合AMD和考克斯在当地市场;因此,不同配方的AMD和考克斯喜忧参半的命题coformulation的浓度,和平板电脑在实验室和分析准备。分析结果(表4)在协议的AMD和考克斯的配方。进一步的恢复研究结果(表3)也同意AMD和考克斯的数量添加到前面分析的混合物。评估方法的有效性通过确定方法的准确性的标准添加法。分析结果(表3和4较低的)%的良好的准确度和精密度RSD为显示方法。此外,它还证明没有辅料的干涉分析物的分析公式。此外,决定”t”和“F“值小于临界”t”和“F”值(表5),表示没有显著性差异分析结果之间的两个方法。

5。结论

两个简单的紫外光谱测定程序已建立的AMD和考克斯在彼此的存在和辅料。这是第一个分析方法报道测定AMD和考克斯在彼此面前。这两种方法都很简单,经济,环保,准确、精确。一阶导数光谱法可以确定二元混合物的分析物在两个步骤:衍生化和测量振幅的零交点波长。另一方面,第二种方法包括AMD和考克斯的直接测量,分析了在三个步骤:分割比例,衍生化,和振幅的测量;然而,比衍生给许多最大值和最小值来确定数量的分析物在另一个分析物的存在。最后,这两个方法已成功申请的决心AMD和考克斯从配方混合物和laboratory-prepared平板电脑。统计比较结果证实之间没有显著差异的两个提议的方法。

数据可用性

紫外光谱数据用于支持本研究的结果中包括文章和补充信息文件。

的利益冲突

作者没有利益冲突。

确认

作者承认院长以来费萨尔国王大学科学研究的资金支持下纳什跟踪(批准号186160)。

补充材料

文件1:一阶导数光谱AMD和考克斯的精密度和准确度。文件2:(一)正常光谱的AMD和考克斯比2:5、4:20日和8:40μ克/毫升。放大部分为AMD (2、4、8μ在363.4 g / ml)测量吸收;(B)的比值光谱一阶导数C5, 20和40μ精密度和准确度的g / ml。文件3:一阶导数的AMD和考克斯的混合物比1:20(配方),2:25日,3:30日和4:35μg / ml,分别制定和恢复研究。文件4:(一)比值光谱的考克斯20日,25日,30、35μ使用AMD (2 g / mlμg / ml)解谱作为遗赠人;考克斯(B)的比值光谱一阶导数20日,25日,30、35μ使用4 g / ml∆nmλ配方和恢复研究。文件5:(一)正常光谱AMD和考克斯的比率(A) 0.5: 20, (b) 1: 20日和0.5 (c): 40μg / ml;(B) AMD和COX的一阶导数光谱比率(a) 0.5: 20, (B) 1: 20日和0.5 (c): 40μg / ml;(C)(第一法)比值光谱的平板电脑解决方案(a)考克斯20μ40 g / ml和考克斯(b)μ使用AMD (2 g / mlμg / ml)解谱作为遗赠人;(D)的比值光谱一阶导数平板电脑解决方案的考克斯(a) 20μ40 g / ml和考克斯(b)μ使用4 g / ml∆nmλ。(补充材料)