红血球膜微粘度的变化和蛋白质后血浆中氧化石墨烯加成:ESR谱学研究

文摘

红血球膜微粘度的变化和氧化石墨烯添加后血浆中蛋白质研究的ESR谱利用两个自旋探针与不同的亲脂性的组件结构。实验与自旋探针2嵌入到红血球膜表明引入石墨烯氧化物浓度很小(∼70μg / ml)的悬浮红细胞没有导致膜微粘度的显著变化。相关的疏水探针旋转1血浆蛋白的吸附,疏水口袋展示逐渐放缓的石墨烯氧化物注入血浆表明一个小变形在吸附蛋白质的疏水空腔。然而,这种蛋白质绑定与石墨烯氧化物不会引起的位移自旋探针的疏水空腔,这是证据小蛋白质二级结构的变化。结果表明的微不足道的细胞毒性效应小的石墨烯氧化物浓度红细胞和血浆。

1。介绍

近年来,制造石墨烯纳米材料已经收到越来越多的关注由于其独特的物理和化学性质,如高的电子导电性,良好的热和化学稳定性,优良的机械强度。在附加的上述表示属性,一种氧化的石墨烯(氧化石墨烯(去))有很好的水可分散性,肤浅的表面功能化,和有吸引力的光学特性。所有这些特点使这种纳米材料非常有吸引力在许多生物医学应用程序包括若,药物输送,光热光谱分析、光动力治疗、组织工程、成像不同的生物过程在体外和在活的有机体内(1- - - - - -9]。

生物分子相互作用可以通过π- - - - - -π叠加与sp的交互²结合域的底面和通过形成氢键形成含氧组去不同的化学组之间局部分子壳。平sp的存在²杂化部分包围与不同的含氧集团导致混合sp²/ sp³杂化碳领域促进有效的与生物分子相互作用的不同类型,包括小分子生物活性和大型结构,如蛋白质和膜。

在生物学和医学应用的领域是永久扩展包括组织工程和研究不同的生物过程在细胞4- - - - - -6和动物7]。近年来,一些研究来说明氧化石墨烯的生物相容性和毒性问题在体外和在活的有机体内据报道,但矛盾的结果。结论去毒性的差异可以用这一事实来解释这毒性取决于各种生化的特性,如形状,大小,官能团的氧化状态,和数量结构。在最近发表了评论3,4,8,9],许多研究致力于纳米毒理学和生物相容性graphene-related材料进行了综述。然而,仍然有许多问题需要解决,和额外的实验与广泛的细胞是必需的。

这项工作的目的是研究氧化石墨烯的作用在膜微粘度的红细胞和血浆蛋白(主要是血清白蛋白(SA)的血浆蛋白)使用自旋标记方法。细胞膜的微粘度是一个重要的参数,可以描述膜结合酶的酶活性,细胞膜离子通道的结构和功能,膜透性,药物的生物利用度。信息结构转换的血浆蛋白吸附在氧化石墨烯是非常有用的评估纳米材料的生物相容性和毒性。在我们的研究中,我们利用自旋探针方法,成功应用于分子生物学,药理学,生物医学研究(10,11]。在这种方法中,转换的电子自旋共振(ESR)(顺)光谱稳定的硝酰激进(探针或标签)12,13)与生物对象绑定后控制。在我们从ESR实验光谱探针与亲脂性的有机组成部分,相关时间τ_c布朗转动扩散的探针在细胞膜和血浆蛋白的疏水空腔可以评估之前和之后吸附在氧化石墨烯。结果给可能性评估细胞的膜结构的变化与氧化石墨烯和血浆蛋白结合。

2。实验的细节

2.1。材料

石墨烯氧化物(粉、15 - 20张)从Sigma-Aldrich购买(欧洲)和用作收到(产品编号:796034)。水暂停去粉ultrasonicated在水浴60分钟,然后离心机(3000 g, 20分钟)消除了大的碎片。走在水中悬浮的初始浓度为300μ克/毫升。走在水中悬浮体浓度红细胞或等离子体解决方案是70年μ克/毫升。实验前,去悬架被超声波清洁ultrasonicated 30分钟。

ESR实验作为稳定的自旋探针,我们选择两个硝酰自由基,其结构如图1。这些自旋探针准备从棕榈酸和由伊戈尔·a·Kirilyuk教授提供。注入的探针1和2(图1)悬浮红细胞和血浆发生通过添加集中调查解决二甲亚砜(DMSO)。逃避DMSO溶液的毒性作用,其最终悬浮颗粒浓度不超过1%。

红细胞和血浆用于雄性老鼠的研究是从血液获得根据前面描述的技术(13]。血液中的红细胞获得通过三重洗涤与生理溶液(0.9%的氯化钠)准备在钠磷酸盐缓冲剂(5毫米,pH值7.2),与进一步离心20分钟3000转的速度。上层清液获得第一次离心后用作血浆。对于我们的实验,获得了老鼠血离心后的红细胞和血浆稀释2倍与生理的解决方案。我们的估算表明,红细胞的数量在1毫米³是关于9·10吗⁶和SA浓度稀释血浆是34毫克/毫升。

样品制备,白色的血远雄鼠的体重180 - 210克。每六个动物的血液是在白天。所有实验动物进行了符合欧洲公约保护的动物用于实验和其他科学(斯特拉斯堡,1986)和“动物实验的一般道德原则”(乌克兰,2001)。

2.2。方法

2.2.1。电子自旋共振

ESR谱观察使用ESR谱仪CMS8400 (Adani,欧洲)。ESR谱记录的样本准备25°С。的评价膜微粘度控制的基础上,分析线强度和宽度的分配到两个稳定的三重态的电子转换硝酰自由基(自旋探针)中观察到的ESR谱。这些自旋探针与外部环境互动;在我们的例子中,这是一个红细胞细胞膜脂质双分子层和蛋白质的疏水腔血浆与SA(主要是血浆的主要蛋白质)或水。调查相关的计算时间( ),使用下面的光谱特性:一个核心组件的宽度(高度的一半)( ),强烈的ESR谱组件(h_{+ 1},h₀,h₋₁与原子核的磁量子数)¹⁴N ,一个各向同性分裂常数( ),确定之间的距离(高斯单位)低场(h_{+ 1})和中部(h₀ESR谱)组件。的基本方程评价任何介质的粘度是修改Stokes-Einstein方程: 在哪里中等粘度,吗是自旋探针的有效半径定义的ESR谱(10,11]。调查相关时间( ),膜粘度(成比例 ),决定从以下经验相关性(10,11]:

众所周知,自旋探针基于棕榈酸性(探针1和2)用于我们的实验在细胞的细胞膜结构排序不佳(10]。ESR谱的形状表明主要各向同性和减缓布朗旋转扩散这些探针在红细胞细胞膜的脂质。然而,获得更客观的信息可能的各向异性的探针旋转膜,我们确定相关的旋转扩散的探针在红血球膜(2)- (4)。应该注意的是,在我们的研究中,我们不追求的决心中微黏度的绝对值,和我们工作的主要目的是观察参数的相对变化τ_c确定去的可能影响红细胞膜或血浆蛋白质。

获得的数据进行统计处理与变化统计方法的标准软件包Statistica为Windows 7。

2.2.2。的傅里叶变换红外(FTIR)光谱

红外吸收光谱的得到利用生物分子的红外光谱分光计适应隔离低温矩阵并修改注册红外光谱非均匀散射(高的电影14,15]。去薄膜的红外光谱光谱中观察到的范围4000 - 600厘米⁻¹apodised分辨率约3.0厘米⁻¹。去电影得到的奈米dried-droplet衬底的方法从水中悬浮体的温度30 - 40°C。

3所示。结果与讨论

3.1。用红外光谱表征

按照产品规格,氧化石墨烯表用于我们的实验中10% edge-oxidized组织结构。edge-oxidized组去通常归因于羟基和羧基组(16)(图2)。进行更详细的分析内容的含氧组的结构,这可能影响ESR谱,利用红外光谱。到目前为止,主要的特征吸收带,使独特的识别,是已知的(16,17]。依照这个任务,去吸收波段的红外光谱范围1750 - 1600厘米⁻¹是由于弹性振动的ν(C = O)主要羰基和羧基组(图3),乐队在1600 - 1500厘米⁻¹被分配到伸展振动的ν(C =С)涉及sp的碎片²杂化的石墨烯领域。近1250厘米⁻¹乐队是归因于的振动(C-O-C)环氧树脂组,和近1100厘米⁻¹伸展振动的羟基和羧基组(ν(c)) (16,17]。在去电影光谱用于我们的实验中,最密集的吸收带位于1586厘米⁻¹(图3),这是分配给拉伸ν(C =С)振动的石墨烯领域。吸收在1364厘米⁻¹最可能相关的平面变形振动石墨烯和六边形羟基。的最大值3440厘米宽的吸收带⁻¹可能是由于振动的ν(OH)羟基和羧基组和部分间的吸收水分子(图3)。注意,红外光谱在1250 - 800厘米⁻¹吸收很差(图3)。同时,非常弱的乐队在1709厘米⁻¹并在1620厘米的小肩膀⁻¹密集的乐队在1586厘米⁻¹可以分配给振动的羰基和羧基组,分别为(图3)。乐队在1586厘米⁻¹分配给ν(C =С)振动的石墨烯领域具有“指纹”地区流行的强度比其他属性含氧组乐队,我们可能会得出这样的结论:研究样本包含少量的羟基和羧基组。注意,这些团体是放在床单的边缘而乐队,基底表面(羰基和环氧树脂组)几乎没有观察到。示意图表示的用于我们的实验如图3。注意,这些实验中使用的超声波作用制备的水悬浮液不会导致含氧的数量增加。我们之前的分析去片在水中悬浮的大小由相似的方法(17)显示,我们获得的主要是单一的层或影响的横向尺寸从0.5到2μ米(平均片大小是1μ米)。

3.2。ESR谱学研究

3.2.1之上。表征石墨烯氧化物掺杂后的红细胞悬液

疏水自旋探针1几乎不溶于水,而它有一个高极性和非极性有机溶剂中溶解度。图4(一)代表的ESR谱调查1在溶液中,制备浓溶液的稀释这个探针在DMSO的生理解决方案;因此,DMSO浓度大约是0.5%。广泛的单线态带,可以观察到的频谱特征光谱的个人亲脂性的硝酰激进分子在液体。的单线态乐队结果快速自旋探针的硝酰片段之间交流互动1(10]。然而,调查2烷基尾和一个正电荷的季氮原子结构显示了一个狭窄的三联体的ESR谱表明快速旋转流动胶束是由分子探针的探针2在水里(图4(b))13]。

数据5和6代表的ESR谱探测器2和1分别在红细胞的解决方案,没有去。请注意,调查2一个正电荷和烷基尾分子结构类似于磷脂酰胆碱的结构,是生物膜的重要组成部分。所以,自旋探针2可以很容易地纳入粘性介质的红细胞的油脂的双分子层膜。在红细胞可检测浓度探测解决方案(2·10⁻⁴米)为探针2ESR谱,三联体是观察到的可能性计算自旋探针的相关时间2本地化的脂质膜。我们观察到布朗转动扩散的自旋探针放缓2在注射后红细胞的解决方案(图5、表1),表明这个探针嵌入在红血球膜(6]。同时,对于无电荷的亲脂性的调查1在红细胞的解决方案,广泛的单线态ESR谱(图中观察到6三个一组)和一个模糊的暗示。因此,数量信息相关的调查1红细胞的解决方案不能来源于这个频谱以及这个探针的光谱添加后的红细胞悬液(图7)。

众所周知,去的ESR信号是在室温下观测到,但减少的ESR信号只能观察到低于100 K (18]。因为我们的样品去减少(含少量的羟基和羧基组),这保证了没有额外的线从我们进去ESR谱。

图8显示了自旋探针的ESR谱2在红细胞的解决方案添加去之后(在稀释的结果,溶液浓度约为70μg / ml)。相关次决定从ESR自旋探针的光谱2在注射后立即获得的红血球膜以及1和4小时后孵化了的表1。因为我们不遵守任何转换的ESR信号1和4小时后红细胞与去孵化,我们有限的测量4小时。根本原因的时间限制也可能造成红细胞衰老,因为这些细胞保持在25°C。

我们也评估环境极性接近硝酰片段的自旋探针2红细胞的膜通过测量参数这是确定的距离(在高斯(Gs)单位)之间的低场(h_{+ 1})和中部(h₀ESR谱)组件。当自旋探针的硝酰片段是在水环境中,通常有一个值约为17.2 g,而在细胞膜中的亲脂性的环境中,这个值通常是接近14日至15日Gs (10,11]。在实验中硝酰片段的自旋探针2,我们获得的等于15.4 g(表吗1)。这价值和布朗的减速转动扩散的自旋探针2在红细胞的解决方案(图5)表明其嵌入在红细胞的油脂的双分子层膜。在这种情况下,硝酰片段的调查2坐落在磷脂膜,所以它的旋转流动是抑制。因此,这种自旋探针是非常敏感的细胞膜的磷脂包装密度的变化,即。微黏度的细胞膜。

紧接着的ESR自旋探针的光谱2嵌入在红细胞(图5从表)以及1,增加红细胞悬液(图8)不会导致一个重要影响探针相关时间。经过一个小时的孵化与红细胞氧化石墨烯,调查相关次演示略有放缓,表明一个倾向弱红血球膜微粘度的增加。自旋探针的ESR谱分析2在4个小时后悬架的组件混合证实了这种倾向。这个观察的证据弱弱氧化石墨烯对红细胞细胞膜的影响。我们可以认为没有必要的细胞毒性效应弱氧化石墨烯在70的浓度μg / ml,合同实质性增加红血球膜微粘度的微碳纳米管引起的观察(早些时候19]。结果表明保存完整的细胞膜结构的互动去表在小浓度。这个观察是非常重要的实验不同的活细胞吸附到石墨烯/氧化石墨烯表面,打开门为不同的应用程序(例如,干细胞分化成神经元在石墨烯表面)(1]。

3.2.2。表征石墨烯氧化物掺杂后的血浆

血浆的血液是一种液体介质的全血血细胞流传。血浆与主要组件是一个复杂的系统,如蛋白质,离子,脂类和碳水化合物。一些主要的蛋白质包括血清白蛋白(SA),γ球蛋白和纤维蛋白原;其中SA是一种血液中含量最丰富的蛋白质(20.]。SA在血管系统执行一些重要的生物学功能。SA具有独特能力,结合不同的内源性和外源性化合物,表演非常必要的传输函数。它结合主要是水不溶性物质,如脂质和胆红素等也可能有毒的化合物。

红细胞的膜相比,血浆与一些基本组件作为复杂系统具有许多结合位点(21- - - - - -24)自旋探针1和2。然而,由于现行SA的复杂系统(超过50%),我们集中我们的注意力在探针只与这个蛋白质绑定。这种蛋白质结构包含三个疏水口袋有效结合的分子脂肪酸,类固醇,和其他疏水物质。这些口袋可以提供一个有效的自旋探针的绑定1SA。注意,血浆蛋白质的有效吸附在碳纳米管(早些时候报道25]。

图9代表自旋探针的ESR谱1这演示了一个三个一组乐队由于其吸附血浆蛋白的疏水空腔。自旋探针之间的交互1与SA阻碍硝酰片段之间的快速交流互动的调查。自旋探针1嵌入到疏水腔也证实了价值是11.8 g。

引入悬架进入血浆用自旋标记探针1导致微黏度逐渐升值的SA壳(水分子包围)和其他一些与时间使用这个自旋探针血浆蛋白(表1)。4小时后血浆孵化的,我们观察下降值9%。这样的信号变换后随着时间的推移,我们决定延长实验20小时。我们可以观察到明显的影响继续旋转相关时间的调查1(表1),它显示了33 - 40%放缓经过20小时的潜伏期。这种放缓time-expanded吸附造成的SA的疏水表面上(表1)。SA的互动去诱发小变形的疏水腔增加旋转探头的结合能1与SA伴随着相关时间放缓。重要的事实是,SA与去不会引起位移SA疏水亲脂性的探测的蛀牙,这表明保护SA的原生结构吸附(13]。随着时间的推移,我们只观察小蛋白质二级结构的变化所引起的互动,这是位于靠近接触面积。这些结果与其他实验观察(26)和计算机模拟BSA吸附在石墨烯的分子动力学方法27,28]。

自旋探针的行为2在血浆(图10)不同于自旋探针1很大。首先,高价值的(16.8 g)表示自旋探针的安排2在水环境中。介绍进入血浆用自旋标记探针2不会导致明显的相关时间的变化,尤其是在第一个1 - 4小时。只有20个小时的自旋探针孵化后,我们可以注意到一个小的减少相关,可能是由于弱压这个探针的蛋白质或交互的带正电的硝酰用氧气氧化石墨烯。在任何情况下,我们观察到疲软的自旋探针的灵敏度2蛋白质的构象变化的表面。

4所示。结论

应用程序的两个自旋探针不同硝酰激进分子的亲水/疏水性质的结构不同,让我们来分析红血球膜微粘度和血浆蛋白的兴奋剂。实验与亲水自旋探针2表明,引入弱氧化(平均片尺寸1μ米)的悬浮红细胞没有导致膜微粘度的显著变化。四个小时孵化后,观察到一个无关紧要的微粘度增加,显然由于吸附膜。结果表明红细胞细胞膜结构的稳定性与去互动,可以被视为一个足够cytocompatible材料浓度很小。疏水自旋探针1绑定与其他血清白蛋白或血浆蛋白的疏水口袋里显示的微粘度逐渐增加的water-protein阶段这些蛋白质的第一个20小时内掺杂。蛋白质之间的相互作用(主要是血清白蛋白)诱发只有小变形的疏水腔伴随着旋转相关时间放缓调查1。作为protein-graphene氧化物相互作用不会导致自旋探针的位移1从蛋白质的疏水空腔,该观察表明保存的原生结构蛋白质吸附在走。

获得的数据显示,诱发小膜微粘度的增加红细胞和血浆的蛋白质外壳。所有这些观察证实一个无关紧要的弱氧化石墨烯的细胞毒性浓度很小(∼70μg / ml)红细胞和血浆。

因此,该方法估计碳纳米材料的细胞毒性的自旋探针方法允许我们清楚地展示和证实的缺失表达细胞毒性的浓度很小。这个实验观察显示额外的机会使用血细胞等复杂的生物系统。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢教授伊戈尔·a . Kirilyuk从n n Vorozhtsov新西伯利亚有机化学研究所、新西伯利亚、俄罗斯、自旋探针的合成用于这项工作。诉Karachevtsev和a。伊万诺夫是感谢乌克兰国家科学院(批准号15/19-H程序中的“创建新的纳米材料和纳米技术的基本问题,”格兰特号。07-01-18和0117 u002287)财政支持。

引用

1. l·冯·l·吴,瞿x,“新视野”为诊断和治疗的应用石墨烯和石墨烯氧化物),“先进材料,25卷,不。2、168 - 186年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. k·杨,x, y . Li r·彭和z . Liu”行为和毒性的石墨烯及其功能化衍生物在生物系统中,“小,9卷,不。9 - 10,1492 - 1503年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. s . f . Kiew l . v . Kiew h·b·李,t . Imae和l . y .钟”评估生物相容性的石墨烯氧化物人们:复习一下,”《控释卷,226年,第228 - 217页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. 周张,p, z, t·魏“石墨烯与哺乳动物细胞的相互作用:分子机制和生物医学见解,“先进的药物输送的评论卷,105年,第162 - 145页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. i m·马丁内斯非我意,f·桑托斯和诉Zucolotto生物相容性和毒理学影响石墨烯氧化物的癌症,正常,主要免疫细胞,”《生物医学材料研究的一部分,卷105,不。3、728 - 736年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. Kenry, w·c·李,k . p . Loh和c t . Lim,“当干细胞实现石墨烯:机遇和挑战在再生医学,”生物材料卷,155年,第250 - 236页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. m . Ema、m . Gamo和k .本田“回顾石墨烯纳米材料的毒性研究实验动物,”监管毒理学和药理学卷。85年,7-24,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. f . m . Tonelli v . a . Goulart k·n·戈梅斯et al .,“石墨烯纳米材料:生物和医学应用和毒性,”纳米,10卷,不。15日,第2450 - 2423页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. g . Lalwani 'Agati m . D, a . m .汗和b . Sitharaman“石墨烯纳米材料的毒理学,”先进的药物输送的评论卷,105年,第144 - 109页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. g . i Likhtenstein自旋标记在分子生物学方法威利跨学科,纽约,纽约,美国,1989年。
11. l .柏林和j·鲁本自旋标记:理论和应用,1卷,学术出版社,纽约,纽约,美国,1976年。
12. n . t .木床l . v .伊万诺夫Kovalenko、v . p . Tereschenko,“碳纳米管:biorisks biodefence,”北约和平与安全科学系列一:化学和生物学施普林格,柏林,德国,2011年。视图:谷歌学术搜索
13. n . t .木床l . v .伊万诺夫o . a . Nardyd y . o . Cherkashyna a . v . Okotrub和l . v . Derymedved”评估碳纳米管对线粒体的活性细胞在不同器官组织的影响通过自旋探针方法,”现代Science-Moderni吠陀经,3卷,不。3、121 - 131年,2016页。视图:谷歌学术搜索
14. a . y .伊万诺夫和v . a . Karachevtsev“红外光谱谱和构象2脱氧尿苷在Kr矩阵,”低温物理,33卷,不。6,590 - 594年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. a . y .伊万诺夫y v鲁宾,s . a . Egupov l . f . Belous和v . a . Karachevtsev“费米共振在东北,Ar和5-bromouracil Kr-matrix红外光谱,”低温物理,39卷,不。6,546 - 551年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. c .张左治亚,d·m·达布斯教授采集L.-M。刘,中情局Aksay r .车,a . Selloni“官能团的影响相结合,晶格缺陷,和边在氧化石墨烯的红外光谱,”物理化学学报C,卷119,不。32岁,18167 - 18176年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. m . v . Karachevtsev s . g . Stepanian a . y .伊万诺夫et al .,“绑定polycitydylic酸氧化石墨烯:光谱研究和计算机建模、”物理化学学报C,卷121,不。33岁,18221 - 18233年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. m .凯宾斯基sŁos p . Florczak w .凯宾斯基和s . Jurga“EPR和阻抗测量的氧化石墨烯和石墨烯氧化物减少,”Acta自然史Polonica一,卷132,不。1,第85 - 81页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. n . t .卡特尔l . v .伊万诺夫a . n .李雅普诺夫et al .,”评价的影响碳纳米管膜微粘度的红细胞,”乌克兰国家科学院的报告,3卷,第121 - 114页,2015年,在俄罗斯。视图:谷歌学术搜索
20. d . c .卡特和j . x Ho“血清白蛋白的结构,”蛋白质化学的进步,45卷,第203 - 153页,1994年。视图:谷歌学术搜索
21. m·r·Housaindokht j . Chamani a . a . Saboury a . a . Moosavi-Movahedi和m . Bahrololoom”三个绑定集分析a-lactalbumin十四烷基三甲基溴化胺的相互作用,”Bulletin-Korean化学学会,22卷,不。2、145 - 148年,2001页。视图:谷歌学术搜索
22. s . h . Tousi m r·萨贝里和j . Chamani”比较cyclophosphami de一水的相互作用对人类血清白蛋白holo-transferin对面的光谱和分子建模:分配的结合位点的证据,”蛋白质和多肽的信件,17卷,不。12日,第1535 - 1524页,2010年。视图:谷歌学术搜索
23. b . Bakaeean m·卡贝里h . Iranfar m·r·萨贝里和j . Chamani”约束力共同离子的人类血清白蛋白诺氟沙星的存在:调查与光谱和电动电势的方法,”溶液化学杂志第41卷。。10日,1777 - 1801年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. z Sharif-Barfeh Beigoli, s . Marouzi a s Rad a . Asoodeh和j . Chamani”Multi-spectroscopic之间的互动和高效液相色谱研究雌二醇和环磷酰胺与人血清白蛋白:二元和三元系统,”溶液化学杂志,46卷,不。2、488 - 504年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. c . Salvadormorales e . Flahaut e . Sim j·斯隆,m . Hgreen r . Sim,“补体的激活和蛋白质吸附到碳纳米管,”分子免疫学,43卷,不。3、193 - 201年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. a . p . a . Raju s . c . Offerman p Gorgojo et al .,“分散的原始生物研究,石墨烯”RSC的进步》第六卷,没有。73年,第69559 - 69551页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. j·g . Vilhena p . Rubio-Pereda p . Vellosillo p·a·瑟瑞娜和r·佩雷斯”白蛋白(BSA)吸附在石墨烯水环境:取向的影响,吸附协议,和溶剂处理,”朗缪尔,32卷,不。7,1742 - 1755年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. p . Rubio-Pereda j·g . Vilhena竹内n, p . a·瑟瑞娜和r·佩雷斯”白蛋白(BSA)吸附到石墨表面,”化学物理学报,卷146,不。21日,第21718 - 214704页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2019 V。答:Karachevtsev et al。这是一个开放的访问分布在条知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。