4-Hydroxycoumarin导数:N - (diphenylmethyl) 2 -乙酰胺((2-oxo-2H-chromen-4-yl)氧)与人血清白蛋白的交互

文摘

在这项研究中,香豆素衍生物之间的交互:N- (diphenylmethyl) 2 - [(2-oxo-2H-chromen-4-yl)氧乙酰胺,生物活性药物,和人血清白蛋白(HSA)研究通过使用各种光学光谱技术和计算技术。稳态荧光光谱的结果表明,静态淬火时发生香豆素药物浓度增加到保险公司。此外,绑定常数(K焓的变化(Δ)和热力学参数H°),熵变(Δ年代°),吉布斯自由能变化(ΔG°)是计算在不同温度(293 K, 298 K, 303 K)。结果是在良好的协议与分子对接研究,而且,对接研究进行了解氢键和疏水相互作用人类血清白蛋白和香豆素衍生物。除了对接,电荷分布的分析是为了了解香豆素衍生物的内部稳定活跃的人类血清白蛋白的网站。进一步进行了时间分辨发射光谱(非常)研究自由HSA和HSA-coumarin之间复杂,结果证实的存在没有细胞毒性药物在蛋白质分子。

1。介绍

香豆素及其衍生物已经知道很久了,但是他们的至关重要的作用在植物和动物系统尚未彻底分析。很多香豆素及其衍生物发挥抗肿瘤,抗病毒、抗凝、抗炎,抗氧化剂,vasorelaxant,抗菌和酶抑制属性。这些化合物是已知的精确施加的抗肿瘤效应,可能导致重大变化的调节免疫反应,细胞生长和分化。香豆素类最近吸引了太多的关注由于其广泛的药理活性的前体分子合成的合成抗凝药物(1- - - - - -6]。香豆素(2-oxo-2H-chromene)是一种天然杂环化合物分离出各种植物;人们已经发现在微生物、动物、精油,和水果4,7- - - - - -12]。N——(diphenylmethyl) 2 - [(2-oxo-2H-chromen-4-yl)氧]乙酰胺(图1 (b)已经报道了Govindhan等。)13]这源于4-hydroxycoumarin显示功能的生物活性和生物活性的香豆素家庭赚更多的利息,了解到载体分子药代动力学机制。

血清白蛋白(图1(一))是最富有成效的蛋白质的循环路线,各种生物的多样性,也揭发了至关重要的第一自然绑定和运输各种内源性和外源性配体。化合物的分子相互作用的蛋白质和许多药物和一些有机分子成功地调查。然而,4-hydroxycoumarin产品绑定的血清白蛋白现在是一个新兴领域去探索这个角色,在生物系统,及其作用方式在各种疾病(14]。

在目前的研究中,合成N——(diphenylmethyl) 2 - [(2-oxo-2H-chromen-4-yl)氧]乙酰胺与人血清白蛋白的交互进行了使用各种光学光谱技术。同时,计算技术如分子对接和密度泛函理论(DFT)进行进一步了解氢键,疏水与活性部位残留信息,内部稳定,分子的电荷分布在原子级别(15]。

2。实验部分

2.1。试剂

N——(diphenylmethyl) 2 - [(2-oxo-2H-chromen-4-yl)氧]乙酰胺新合成,已报道了Govindan et al。13),同样的药物溶解在0.5% DMSO PBS缓冲。美国人类血清白蛋白从Sigma-Aldrich购买和使用没有任何进一步净化。

2.2。荧光测量

发射光谱学研究了使用荧光谱仪(ISA FluoroMax-2;Jobin Yvon-Spex,爱迪生,NJ);谱带通是固定在5 nm单色仪的波长的激发和发射波长和记录地区是300 - 500 nm 280海里激发。香豆素衍生物的荧光寿命测量和人血清白蛋白复杂检测使用Fluorolog (Horiba Jobin Yvon IBH,英国)与快速响应敏感PMT检测器(滨松光子学、日本)的激发波长280 nm - 450 nm。衰变的切片和归一化波长对HSA和HSA-coumarin复杂。excitation-emission矩阵(EEM)映射与以下两个条件:200年和700年之间的发射波长记录nm和最初的激发波长是设置为200 nm的增量10纳米。额测量的光谱带通都保持在5 nm激发和发射。除此之外,福斯特共振能量转移分析供体和受体之间进一步的单点极化研究人类血清白蛋白和香豆素衍生物之间的复杂也进行了。

2.3。红外光谱和CD光谱测量

傅里叶变换红外光谱(FTIR)人类血清白蛋白的解决方案被使用在温度红外光谱谱仪(Interspec 2020;爱沙尼亚)衰减全反射(ATR)模式分辨率的4厘米⁻¹和32扫描。二级结构分析进行了利用圆二色性(CD)免费白蛋白和复杂的使用分光偏振计(Jasco J715;医学博士,美国)采用石英电池0.1厘米的梁浴。

2.4。对接研究

人血清白蛋白结构从蛋白质数据库(PDB ID: 4 l8u),和香豆素衍生物使用ChemDraw软件绘制。蛋白质和小分子能量最小化使用OPLS 2005力场(薛定谔LLC)用于分子对接15]。

2.5。DFT方法

能量最小化已经完成使用密度泛函理论(DFT)方法在B3LYP功能和6 - 311 g∗∗基础集香豆素分子和辅因子的活性部位的氨基酸使用高斯03 HSA的软件。静电势countermaps见使用GView软件(16]。

2.6。细胞生存能力研究

药物的细胞毒性试验是获得使用细胞计数Kit-8 (CCK-8) (Dojindo实验室,大阪,日本)。96孔板的细胞密度是5000细胞/好,24小时后;药物被加入到培养板和孵化24小时。药物接触后,细胞孵育10µ为2 h L CCK-8, 450海里的吸光度测量使用标(mtp - 880实验室;电晕、日立、日本)。细胞毒性是未经处理的控制细胞的百分比来表示。

3所示。结果与讨论

3.1。荧光光谱研究

稳态荧光光谱是最有效的技术来理解HSA-coumarin导数的进一步绑定机制复杂。一般来说,人类的血清白蛋白发射将在350海里由于色氨酸残基的存在和其他苯丙氨酸;酪氨酸残基发射被认为是色氨酸残基相比,排放更少。HSA的发射光谱(1µ米)和各种香豆素衍生物的浓度(0 - 3.6µ米图所示2(一个),指出没有转变的减少排放的最大HSA-coumarin导数复杂。因此,我们可以得出这样的结论:由于发生荧光猝灭香豆素衍生物的存在(17]。

(一)

(b)

(c)

知道更多关于淬火的类型,我们执行Stern-Volmer(方程(1))计算在不同的温度,如图2 (b)和猝灭常数的计算结果列在下表中1(18,19]: 在哪里和是自由HSA和HSA复杂(香豆素药物),双分子的猝灭常数(),的一生是没有药物分子的荧光团(10⁻⁸年代),Stern-Volmer猝灭常数(0.79×10⁻⁵,1.00×10⁻⁵和1.33×10⁻⁵摩尔⁻¹·年代⁻¹·L⁻¹)和(问]表示药物的浓度。从表1的计算结果表明,静态猝灭发生由于复杂的香豆素衍生物的形成。结合常数和结合位点的数量计算使用以下方程(20.]: 在哪里HSA和香豆素药物的总浓度,分别结合常数和结合位点的数量获得列表在表1使用最小二乘拟合的算法(图2 (c))。


复合	T(K)	k_问(×10¹³l·摩尔⁻¹·年代⁻¹)	K_b(×10⁵l /摩尔)		ΔH°(焦每摩尔)	ΔG°(焦每摩尔)	Δ年代°(J / mol / K)

香豆素衍生物	293年	7.41	6.04	1.15		−25.34
	298年	5.82	5.67	1.11	−10.35	−25.76	86.51
	303年	4.38	5.48	1.10		−26.19

3.2。热力学参数分析

drug-binding热力学的研究是重要的机制来计算的绑定稳定药物与高分子复杂。Δ热力学参数H°,Δ年代°,ΔG°计算从以下方程: 在哪里气体常数和吗温度,在这里,三个不同的使用温度:293 K, 298 K, 303 K。

据罗斯和萨勃拉曼尼亚(17,21,22),(Δ焓的变化H°)和熵变(Δ年代°)列在下表中1表明(ΔH°< 0和Δ年代°> 0)类型的交互HSA和香豆素衍生物之间的复杂可能是由于静电作用。

3.3。时间分辨发射光谱学研究(非常)和荧光寿命的研究

时间分辨发射光谱学是一种高度非侵入性技术来了解生物分子的实时动态。图3(一个)显示了放射衰变的自由HSA和HSA-coumarin导数复杂;每个点由各自的平均光子的波长。HSA的所有排放档案记录和HSA复杂multiexponential衰变动力学,和平均寿命衰减免费HSA被发现4.83 ns几乎等于之前报道值(21,23]。然而,对于HSA-coumarin导数复杂,衰变是自由HSA相比稍快,和的平均估计HSA复杂是4.67 ns(表2)。从图3 (b),观察结果表明,淬火时由于香豆素衍生物与HSA的绑定。一定要提到放射衰变的HSA复杂速度比自由HSA的所有波长将携带的香豆素衍生物。现在结果阐明了HSA复杂的蛋白质发生是可能的因为药物的存在,而且,色氨酸地区变得更加暴露于水。这些结果表明,自由HSA更不稳定和更快的水化动力学,和类似的过程发生在HSA-coumarin导数复杂没有任何结构性障碍。图3 (b)代表了衰变parameter-fitted值τ₀自由HSA和HSA-coumarin导数复杂,容易理解。

(一)

(b)


波长(nm)	α₁±×10(错误⁻³)	α₂±×10(错误⁻³)	α₃±×10(错误⁻³)	τ₁(ns)	τ₂(ns)	τ₃(ns)	(ns)	χ²

免费HSA荧光decay-fitting参数
280年	0.00098±0.012	0.74±5.13	0.00015±0.02	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	1.13	0.5
290年	0.017±0.024	0.61±5.60	0.00106±0.05	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	2.55	1.03
300年	0.037±0.033	0.29±5.34	0.0024±0.07	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	2.84	1.42
310年	0.037±0.036	0.21±5.13	0.0047±0.086	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	3.40	1.19
320年	0.037±0.042	0.15±5.31	0.010±0.013	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	4.24	1.12
330年	0.035±0.046	0.093±5.34	0.016±0.013	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	4.89	1.09
340年	0.032±0.048	0.042±5.24	0.020±0.014	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.23	1.00
350年	0.027±0.05	0.027±5.23	0.024±0.015	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.56	1.00
360年	0.026±0.051	0.00054±5.0	0.026±0.016	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.69	1.05
370年	0.024±0.050	0.0018±5.0	0.027±0.016	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.79	0.96
380年	0.023±0.052	0.0061±5.1	0.029±0.016	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.87	1.00
390年	0.022±0.051	0.0031±5.1	0.028±0.016	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.91	0.91
400年	0.022±0.051	0.016±5.0	0.029±0.016	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.90	1.00
410年	0.024±0.051	0.007±5.0	0.027±0.016	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.81	1.00
420年	0.028±0.051	0.035±5.0	0.026±0.016	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.66	1.00
430年	0.029±0.053	0.029±4.9	0.024±0.015	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.53	1.00
440年	0.030±0.050	0.030±4.9	0.023±0.015	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.50	1.00
450年	0.031±0.050	0.038±4.9	0.023±0.015	2.12±0.008	0.0097±0.002	6.82±0.006	5.47	0.99

荧光decay-fitting HSA-coumarin导数复杂的参数
280年	0.0015±0.011	0.00004±0.0013	0.815±5.5	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	0.65	0.34
290年	0.0051±0.016	0.00021±0.0021	0.806±5.9	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	1.55	0.73
300年	0.029±0.030	0.0015±0.0054	0.499±6.0	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	2.51	1.07
310年	0.037±0.037	0.0004±0.0073	0.374±6.1	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	3.17	1.16
320年	0.038±0.042	0.0008±0.0096	0.20±5.9	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	4.03	1.11
330年	0.041±0.049	0.015±0.012	0.095±5.9	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	4.69	1.07
340年	0.037±0.050	0.019±0.013	0.025±5.6	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.11	0.98
350年	0.035±0.053	0.024±0.014	0.012±5.6	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.41	1.01
360年	0.030±0.053	0.025±0.014	0.020±5.4	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.59	0.97
370年	0.029±0.055	0.029±0.015	0.035±5.5	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.73	1.09
380年	0.026±0.054	0.029±0.015	0.049±5.3	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.80	1.03
390年	0.026±0.055	0.030±0.016	0.072±5.2	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.83	0.98
400年	0.024±0.054	0.029±0.016	0.075±5.0	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.89	1.13
410年	0.027±0.055	0.031±0.016	0.11±5.0	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.85	1.06
420年	0.028±0.054	0.028±0.016	0.15±4.7	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.76	1.26
430年	0.030±0.054	0.027±0.016	0.17±4.5	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.67	1.15
440年	0.033±0.054	0.026±0.016	0.19±4.4	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.50	1.17
450年	0.032±0.053	0.025±0.015	0.21±4.2	1.9±0.0082	6.8±0.0065	0.009±0.002	5.53	1.04

3.4。Excitation-Emission矩阵(EEM)分析

这项研究是用于进一步理解HSA的构象变化与香豆素衍生物的交互期间更仔细。图4显示了自由HSA的等值线图(a)和香豆素derivative-HSA复杂(b)与相应的特征参数。主要有两个荧光峰观察数据:峰1和峰2。峰1 (λ_前女友= 220海里,λ_新兴市场= 325海里)主要是由于多肽骨架结构,它与蛋白质的二级结构,和峰值2出现主要是(λ_前女友= 278海里,λ_新兴市场= 344海里)由于色氨酸和酪氨酸残基的存在。从图4,观察到有一个强度最大值下降而添加香豆素衍生物为免费的保险,和淬火峰1和峰2可能是由于香豆素衍生物的存在,表明化合物可能是附近HSA发色团。这些结果得出结论,可能会有轻微的确认HSA的变化由于香豆素衍生物的存在23,24]。

(一)

(b)

3.5。红外光谱研究

一般而言,红外光谱技术进行了解生物化学变化;这里,HSA的红外光谱谱记录调查构象变化理解香豆素衍生物的绑定机制。图5(一个)显示了自由HSA和HSA-coumarin导数复杂的光谱,和我的峰值HSA的酰胺是躺1600至1700厘米⁻¹和二酰胺地区几乎是1558厘米⁻¹,这几乎是类似于蛋白质的二级结构。比较这两个乐队,酰胺我强(1644厘米⁻¹)如图5(一个),并添加香豆素衍生物免费HSA时,有一个减少在酰胺我最大限度的吸收,这可能是由于HSA酰胺的香豆素衍生物扰动区域(21,23,24]。

(一)

(b)

3.6。圆二色性(CD)的光谱分析

了解蛋白质二级结构的构象变化,CD进行了光谱分析。从图5 (b)HSA, CD光谱表明,有两个消极的乐队在紫外区域,在208 nm和222 nm。香豆素衍生物时加入自由HSA分子,有显著的增加在208年和222 nm强度而增加浓度和也特别是在HSA(1 208海里的地区µ和HSA-coumarin导数(1.6 M)µ米)显示轻微转向较低的波长区域,表明的α螺旋结构可能会失去稳定或重新排列的方向总香豆素衍生物的结构确认由于存在。

二级结构的计算进行了使用DichroWeb (http://dichroweb.cryst.bbk.ac.uk/html/home.shtml)免费HSA的在线工具,由∼54.2%α螺旋,∼22.1%β表,和16.3%的无规卷曲,几乎比得上以前公布的数据17,24]。香豆素衍生物的1.6µM浓度,增加对∼58.1%二级结构参数α螺旋,∼24.7%β表,分别为和19.2%的随机线圈。这些结果表明,HSA的二级结构可能是部分展开或重新定位发生在总体结构由于香豆素衍生物的存在。

3.7。分子对接研究

分子对接方法是非常有用的理解之间的绑定洞察机制大分子和小分子在原子水平(25,26]。在这部作品中,分子之间的对接HSA和香豆素衍生物进行使用AutoDock 4.2进一步澄清香豆素衍生物和HSA的绑定模式。在这里,小分子和大分子都允许灵活的对接,和自由能值和氢键和疏水信息结果如表所示3。对接结果表明绑定之间的交互HSA和香豆素衍生物良好的协议,关于能源和交互。数据6(一)和6 (b)的氢键和疏水信息HSA-coumarin导数复杂进一步理解更多关于内部香豆素衍生物的稳定性,和电荷分布分析在活跃的残留进行了HSA-coumarin导数复杂。


复合名称	氢键(d - h…)	距离(一个)	结合能(焦每摩尔)

香豆素衍生物	- h⋯O(亮氨酸185)	3.0	−28.32
	O - h⋯ARG (117)	2.9

(一)

(b)

3.8。电荷分布分析

分析了马利肯原子电荷对香豆素衍生物和辅因子与HSA的交互氨基酸。MPA指控展示在表4(图1 (c))。氮原子N₈N₁₀和N₁₁在氨基酸精氨酸具有高负电荷;同时,氧原子O₄₈和O₅₆具有较低的负电荷。由于这些氮原子,交互发生在O₄₈和O₅₆(N原子₈:−0.44 e, N₁₀:−0.45 e, N₁₁:−0.46 e, O₄₈:−0.16 e, O₅₆分别为:−0.38 e);这些指控很低而代数余子式的。氧原子O_69年酪氨酸负电荷很低,这与O_91年。同时,配体含有氮原子N₄₅,也有一个低的负电荷(N₄₅:−0.39 e, O_69年:−0.16 e, O_91年:−0.30 e)。,MPA费用降低,同时增加蛋白质和配体之间的距离。碳C₉原子具有较高的正电荷由于碳原子氮原子包围着27]。


MPA			MPA代数余子式

1 n−0.38	51 c−0.06	101 c−0.06	1 n−0.43	51 o−0.28	101 c 0.06
2 c−0.05	52 c−0.05	102 c 0.32	2 c−0.11	52 c−0.18	102 c−0.16
3 c 0.16	53−0.13加元	103 c 0.08	3 c 0.15	53−0.09加元	103 c 0.14
4 o−0.24	54 c−0.09	104 c−0.10	4 o−0.30	54 c−0.05	104 c 0.29
5 c−0.20	55 c 0.12	105 c−0.14	5 c−0.16	55 c−0.05	105 n−0.38
6 c−0.27	56 o−0.38	106 c−0.03	6 c−0.26	56 c−0.09	106 c 0.09
7−0.09加元	57小时0.18	107 c−0.09	7−0.09加元	57−0.06加元	107 c−0.09
8 n−0.44	58 h 0.20	108 c−0.09	8 n−0.46	58 c 0.12	108 c 0.02
9 c 0.68	59 h 0.12	109 c−0.09	9 c 0.65	59 o−0.41	109 c−0.21
10 n−0.45	60 h 0.12	110 c−0.06	10 n−0.47	60 h 0.25	110 c 0.44
11 n−0.46	61 h 0.09	111 c−0.07	11 n−0.49	61 h 0.19	111 o−0.41
12 h 0.15	62 h 0.08	112 c−0.09	12 h 0.23	62 h 0.12	112 c 0.01
13 h 0.10	63 h 0.15	113 c−0.09	13 h 0.19	63 h 0.08	113 c 0.04
14 h 0.09	64 h 0.09	114 c−0.10	14 h 0.13	64 h 0.12	114 c 0.39
15 h 0.11	65 h 0.26	115 c 0.00	15 h 0.09	65 h 0.08	115 o−0.49
16 h 0.14	66 n−0.38	116 h 0.11	16 h 0.10	66 h 0.08	116 o−0.49
17小时0.12	67 c−0.08	117 h 0.12	17小时0.13	67 h 0.10	117 o−0.37
18 h 0.14	68 c 0.23	118 h 0.17	18 h 0.12	68 h 0.08	118 c−0.21
19 h 0.14	69 o−0.16	119 h 0.11	19 h 0.32	69 h 0.10	119 c−0.26
20 h 0.27	70 c−0.22	120 h 0.13	20 h 0.28	70 h 0.19	120 o−0.37
21小时0.25	71 c−0.12	121 h 0.13	21小时0.25	71 n−0.45	121 n−0.52
22 h 0.26	72 c−0.03	122 h 0.15	22 h 0.20	72 c−0.07	122 h 0.21
23小时0.24	73 c−0.04	123 h 0.26	23小时0.15	73 c 0.19	123 h 0.08
24小时0.28	74 c−0.13	124 h 0.15	24小时0.11	74 o−0.28	124 h 0.09
25 n−0.49	75 c−0.12	125 h 0.07	25小时0.11	75 c−0.21	125 h 0.08
26−0.05加元	76 c 0.16	126 h 0.09	26小时0.21	76 c−0.06	126 h 0.07
27个c 0.03	77 o−0.37	127 h 0.09	27个n−0.43	77 c−0.04	127 h 0.12
28 o−0.30	78 h 0.18	128 h 0.09	28 c−0.11	78 c−0.07	128 h 0.10
29−0.24加元	79 h 0.19	129 h 0.10	29 c 0.22	79 c−0.12	129 h 0.15
30 c−0.20	80 h 0.15	130 h 0.08	30 o−0.29	80 c−0.08	130 h 0.23
31日−0.27加元	81 h 0.12	131 h 0.09	31日−0.22加元	81 c 0.13	131 h 0.11
32 c−0.26	82 h 0.08	132 h 0.09	32 c−0.20	82 o−0.37	132 h 0.10
33 h 0.16	83 h 0.08	133 h 0.09	33 c−0.25	83 h 0.24	133 h 0.22
34 h 0.14	84 h 0.09	134 h 0.11	34 c−0.26	84 h 0.19	134 h 0.22
35小时0.10	85 h 0.12		35小时0.10	85 h 0.12	135 h 0.08
36 h 0.09	86 h 0.25		36 h 0.20	86 h 0.07	136 h 0.11
37个小时0.11	87 c−0.09		37个小时0.13	87 h 0.11	137 h 0.09
38小时0.10	88 n−0.42		38小时0.08	88 h 0.07	138 h 0.10
39 h 0.09	89 o−0.31		39 h 0.12	89 h 0.08
40小时0.10	90 c−0.08		40小时0.09	90 h 0.09
41小时0.10	91 o−0.39		41小时0.11	91 h 0.12
42小时0.10	92 c−0.10		42小时0.10	92 h 0.14
43小时0.10	93 o−0.35		43小时0.18	93 h 0.19
45 n−0.39	94 c 0.18		44小时0.11	94 c−0.07
46 c−0.08	95 o−0.37		45 h 0.10	95 c−0.08
47个c 0.24	96 c−0.19		46小时0.10	96 c−0.06
48 o−0.16	97 c 0.00		47个小时0.10	97 c 0.10
49−0.20加元	98 c 0.39		48 n−0.44	98 c−0.15
50 c−0.15	99 c−0.25		49−0.06加元	99 c 0.20
	100 c 0.36		50 c 0.19	100 n−0.39

全球反应描述符(28- - - - - -34香豆素衍生物和代数余子式的分子如电负性、亲电性,硬度和化学计算从HOMO和LUMO能量。电离势的计算值,电负性,电子亲和能的分子是6.5/7.2,8.1/9.6,1.6/2.4 eV(表5),这些值表明香豆素衍生物分子具有较高的比代数余子式接受电子的倾向。计算两个分子的亲电性都是6.8/9.6电动汽车;这个低价值表明,分子毒性较低(35]。化学分子的硬度是4.85/4.82电动汽车,这表明分子展品高动力稳定性和反应性16,36- - - - - -38]。分子轨道之间的能隙也计算,回龙观值是4.86/4.82电动汽车,这表明分子有很高的内部稳定性。图7显示了静电势countermap香豆素衍生物和辅因子与HSA的活性部位的氨基酸。


全球反应描述符	香豆素衍生物的DFT (SP)	cocrystal DFT (SP)的药物
	活性部位	活性部位
	能源(eV)	能源(eV)

带隙的LUMO-HOMO	4.857	4.825
人类能源	−6.501	−7.245
LUMO能量	−1.644	−2.422
电离势我=−E_人类	6.501	7.245
电子亲和能一个=−E_LUMO	1.644	2.422
全球硬度η= (我−一个)/ 2	4.857	4.823
亲电性ω=µ²/ 2η	6.829	9.688
电负性X=我+一个/ 2	8.145	9.667

(一)

(b)

3.9。稳态荧光各向异性研究

荧光各向异性被广泛用于测量绑定常量和动力学反应导致的旋转时间变化的荧光分子(24]。这项技术将改变我们的方向信息在人类血清白蛋白香豆素衍生物。这里,人类之间的荧光各向异性测量进行了血清白蛋白和香豆素衍生物的浓度范围从0到100µm .大多数报告说,各向异性小分子可能是零,没有旋转时增加到最大值为0.4。从图8香豆素衍生物与各种人血清白蛋白浓度增加显示的各向异性值香豆素衍生物增加20µ米,然后到达稳态最大值(r40后= 0.13)µM HSA的环境。这个饱和值可能是由于旋转运动的香豆素衍生物限制HSA分子,也可能是由于形成的氢键和疏水作用活跃网站HSA的香豆素衍生物。

3.10。荧光共振能量转移

福斯特能量转移的方法被用来理解生物分子的能量供体和受体之间的距离。药物的吸光度光谱重叠和人类血清白蛋白的发射光谱图所示9。能量转移效率(E)是用来计算香豆素衍生物和人血清白蛋白之间的距离。能量转移的速度取决于重叠积分(J)的捐赠(HSA)和接受者(香豆素衍生物)。跃迁偶极子和药物和蛋白质分子之间的距离也扮演了一定的角色在决定能量转移率(17,24]。色氨酸残基的距离位于供体(HSA)和绑定药物受体(香豆素衍生物)HSA可以使用福斯特的理论计算。

能量转移效率(E)使用以下公式计算39]: 在哪里供体和受体之间的距离和吗是供体和受体之间的临界距离时传输效率:50% 在哪里偶极子的取向因子,φ_D的荧光量子产率的捐赠者没有受体,然后呢是复杂介质的折射率:

J发射光谱的重叠积分HSA(供体)香豆素衍生物的吸收光谱(受体)。F_D(λ)是供体荧光强度的波长λ来λ+Δλ、总强度归一化统一,ε_一个(λ)受体的摩尔消光系数的波长(λ)。对我们来说是可能的计算J价值的谱估计J =1.3182×10⁻²⁰米⁻¹·厘米³。在实验条件下,我们发现了R₀=从方程(2.5海里5)。使用以下值,E= 0.018,k²= 2/3,和ϕ_D= 0.118,r= 4.88 nm已经计算。这两个R₀和r值被发现是低于最大值R₀(< 10海里),距离(r)在供体和受体之间的谎言< 7海里。

3.11。香豆素衍生物的细胞毒性

香豆素衍生物的细胞毒性,这是用来评估其生物相容性,使用海拉细胞作为模型研究了由CCK-8细胞。图10展示了细胞生存能力的测试结果进行了香豆素衍生物30µ克/毫升。如图10,香豆素衍生物的数量增加和细胞生存能力降低甚至很小的百分比在最大程度的浓度30µ克/毫升。然而,香豆素衍生物是一种安全的分子与血清白蛋白结合蛋白质和提供有针对性的组织。

4所示。结论

在这种背景下,合成香豆素衍生物分子遭受到各种光谱学和计算技术理解HSA分子的相互作用机理。从紫外可见吸光度的结果,可以看出HSA-coumarin导数复杂可能是由于基态复杂;进一步的香豆素衍生物荧光技术表明,HSA情结是静态猝灭,模式,而且,热力参数计算结果结合很好。时间分辨发射光谱结果表明,HSA分子能够携带香豆素衍生物,并计算平均生命周期价值发现免费HSA 4.83 ns和HSA-coumarin导数复杂是4.67 ns。能量转移分析还计算供体和受体之间r价值发现4.88 nm,学术价值。各向异性的结果得出结论,HSA的旋转运动是饱和的r= 0.13后HSA 40的浓度µM是可能由于香豆素衍生物的存在。excitation-emission矩阵结果表明确认HSA改变由于香豆素衍生物的存在,这后,红外光谱和CD谱分析也证实了这些二级结构的变化。计算分析阐明HSA-coumarin导数复杂的交互机制在原子层面和信息融合和内部稳定;从这个总体结果,绑定香豆素衍生物与HSA的本质是好的,它可以携带特定目标分子无细胞毒性。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

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《光谱学

4-Hydroxycoumarin导数:N——(diphenylmethyl) 2 -乙酰胺((2-oxo-2H-chromen-4-yl)氧)与人血清白蛋白的交互

文摘

1。介绍

2。实验部分

2.1。试剂

2.2。荧光测量

2.3。红外光谱和CD光谱测量

2.4。对接研究

2.5。DFT方法

2.6。细胞生存能力研究

3所示。结果与讨论

3.1。荧光光谱研究

3.2。热力学参数分析

3.3。时间分辨发射光谱学研究(非常)和荧光寿命的研究

3.4。Excitation-Emission矩阵(EEM)分析

3.5。红外光谱研究

3.6。圆二色性(CD)的光谱分析

3.7。分子对接研究

3.8。电荷分布分析

3.9。稳态荧光各向异性研究

3.10。荧光共振能量转移

3.11。香豆素衍生物的细胞毒性

4所示。结论

数据可用性

的利益冲突

引用

版权

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