文摘
stability-indicating光化学方法开发的试验硫胺素(TH)盐在水溶液和新鲜和衰老的维生素制剂。它是基于TH的光致氧化紫外辐照形成硫色素在碱性溶液(TC)。TC: TH比受控条件下的光强度、温度、pH值、曝光时间和照射距离是不变的,可以用来确定紫外辐照的浓度的解决方案。TC,提取的异丁醇photodegraded解决,已由370纳米的紫外线分光光度法。将会呈现出一种高强度紫外线吸收的地区,可用于测定的低浓度的。在最佳条件下,比尔定律是服从的浓度范围0.20 - -2.00毫克/ 100毫升(R2= 09998)。检测的极限(LOD)和量化的限制(定量限)0.0076和0.0231毫克/ 100毫升,分别。的方法进行验证,并应用于水溶液和维生素制剂。结果统计已经与美国药典液相色谱方法。人们已经发现,这两种方法之间没有显著差异在95%置信水平。
1。介绍
硫胺素(维生素B1)(TH)是一种水溶性维生素和用于疾病的预防和治疗脚气病(1]。它是广泛用作组件的单一复合维生素B和维生素制剂(2- - - - - -4]。一些分析方法,包括紫外和可见光谱和多变量分析5- - - - - -7),荧光的8- - - - - -21),高效液相色谱法(HPLC) [22- - - - - -35),UHPLC / MS-MS [36),浊度和浊度的37],安培计的[38),和伏安方法(39- - - - - -45),已被用于硫胺及其盐的测定制剂,食品材料和生物液体。其中有些方法曾被审查(46- - - - - -49]。流动注射分析(FIA)分光光度法测定的紫外辐照后,根据不同的分光光度法,据报道(50]。官方的硫胺盐的分析方法是基于非水滴定法(2)和液相色谱(3]。硫胺素经历化学(1,8,9,11,14,16,17,19,51- - - - - -54和光化学氧化55,56)形成脱氢硫胺素(TC)展品蓝色荧光(440海里)。这是由TH(作为荧光测定的基础的8,9,11,14,16,17,19,54- - - - - -60]。TH(1)的光化学脱氢TC(3)可能通过一个中间(2)(52)如图1。TC的形成是pH-dependent,收益率是最大的pH值1052]。TC展品强烈吸收溶液在紫外区域61年]。
本研究的目的是开发和验证一个简单、经济、和stability-indicating光化学方法分析的基础上形成的TC,其分光光度测定,建立条件与TH的定量关系。分析的方法将适用于在纯粹的解决方案和维生素制剂。
2。实验
2.1。材料
盐酸硫胺素(TH)和thiocrome (TC)从Sigma-Aldrich购买(美国)。可用的试剂和溶剂都是纯粹的形式从默克公司(德国)。使用的缓冲系统是Na2B4O7氢氧化钠(pH值9 - 10)和Na2HPO4氢氧化钠(pH值11);离子强度保持在0.002米。
2.2。预防措施
进行了实验工作在一个黑暗的暗光下室。TH的解决方案是从光保护以避免紫外线辐照之前任何光化学变化的影响。
2.3。光致氧化的
水解决方案包含4毫克/ 100毫升的9 - 11 TH准备在pH值使用适当的缓冲的2毫升30%的H2O2解决方案。50毫升的培养皿中传播的解决方案是放置在一个恒温浴25±1°C和辐照使用飞利浦36 W德国莱茵管(100%排放在254海里)30分钟。管是固定水平25厘米的距离从培养皿的中心辐射室。样本在适当的时间间隔内撤回并受色谱检查和光度测定。
2.4。薄层色谱法(TLC)
TC的形成在紫外线辐照250 TH证实了薄层色谱使用的解决方案µm硅胶的女朋友254年盘子和溶剂系统:(a) pyridine-isobutanol-water(66: 17: 17日,v / v)和(b) 1-butanol-acetic酸水(40:10:50 v / v,有机层)(62年]。
比较他们的化合物被检测到Rf价值观和荧光色彩在365 nm (TC、蓝色)和荧光猝灭在254 nm励磁(TH、黑),与参考标准。
2.5。pH值测量
pH值的解决方案是衡量一个Elmetron液晶显示器酸度计(pH值模型CP 501,灵敏度±0.01单位,波兰)组合使用pH电极。电极的校正进行了使用商用缓冲块pH值7和9(默克公司)。
2.6。光谱测量
的光谱测量和TC的解决方案进行热费希尔科学紫外可见分光光度计(201年进化,美国)使用石英细胞10 mm路径长度。
2.7。光强度测量
飞利浦36 W德国莱茵管的强度是由钾ferrioxalate光量测定(63年),和一个值为5.50±0.11×1018广达电脑年代−1获得了。
2.8。光度法测定TH
2.8.1发布。提取TC
5毫升photooxidized解决方案的整除的是放置在一个100毫升分液漏斗,2毫升的脱水乙醇添加,解决方案与10毫升的异丁醇提取分离TC。异丁醇层在Na干2所以4并用于TC的浓度的测定溶液中使用20400在370海里−1·厘米−1摩尔吸光系数的值(61年)或654的值(1% 1厘米)波长。相同的程序是用于测定photooxidized TC在稀释的溶液的浓度的维生素制剂。
2.8.2。TC的决心:TH比率
TC: TH比率是由一定数量的TC的形成光致氧化的一个固定数量的控制实验条件下(即。,浓度、氧化剂浓度、pH值的解决方案,辐照来源,和照射时间)。这些值确定浓度的TC和TH,已经使用了TH在不同样品的测定。
2.8.3。化验的
TH的光度法测定纯解决方案和维生素制剂的基础上进行了TC: TH比率确定受控条件下如上面所描述的部分。例如,如果TC: TH比获得的辐照包含30毫克的维生素制剂TH / 100毫升是0.405:1,对应的TH浓度可以由以下公式计算:
3所示。结果与讨论
3.1。识别Photoproduct TH
TH在碱性溶液的光致氧化导致TC的形成。TC在紫外线辐照解决方案的识别,pH值9 - 11进行了TLC使用溶剂系统(a)和(b)(部分2。4)。TC相比,检测到的荧光(蓝色)和特征Rf值与真实的化合物(表1)。TC才发现在解决方案辐照在pH值9 - 11,因为它是由光致氧化在碱性溶液52]。从荧光的强度TC的pH值范围研究,发现最高产量的反应进行pH值10。
3.2。TH和TC的光谱特征
7 TH展品吸收最大值pH值在246 nm的摩尔吸光系数值15200−1·厘米−1和一个1厘米(1%)值为45064年]。TC显示了一个吸收最大值370海里的摩尔吸光系数20400米−1·厘米−1(61年)和一个1厘米(1%)654(图的价值2)。在目前的研究中,摩尔吸光系数值为19800−1·厘米−1和一个(1%,1厘米)值的取得了635的TC 370海里(表2)。针对高价值的摩尔吸光系数TC 370海里,它可以方便地用于测定维生素制剂对其光致氧化的TH TC受控条件下节中描述3.5。吸收最大的TC 370海里提供最大吸光度测量的特异性和敏感性的方法。报告的测试方法的验证数据表2。
3.3。TC产量
的光致氧化反应在pH值进行了9 - 11。已经观察到的收益率TC对紫外线照射一段固定的时间是最大酸碱10比9和11(图3)。因此,pH值10被认为是适合TH的光致氧化反应条件下用于这项研究(表3)。早些时候报道,TC的形成取决于介质的pH值,在pH值及其收益率最大10 [52]。pH值高于10 TH是带负电荷的硫醇电离形式(pK一个11.6)发生水解降解噻唑和嘧啶(半个53]。因此,有一个降低TC的形成与pH值10以上。
3.4。应用程序的分析方法
光化学方法已经应用于测定的新鲜和老年药品维生素制剂,比较结果与美国药典液相色谱方法(表4)。在95%置信水平,人们已经发现,计算t值为每个浓度小于列表t值,表明这两种方法之间没有显著差异。方法的准确度和精密度已经确定,及其灵敏度计算(表2)。方法stability-indicating TH的维生素制剂的分析的基础上的TC光化学地受控条件下形成的,其定量关系,也就是说,TC: TH比率。类似的光化学方法测定核黄素(RF)的基础上形成的photoproduct lumichrome (LC)和LC:射频比率,据报道(65年]。
3.5。实验条件
3.5.1。辐射源
36 W德国莱茵管(100%排放在254海里)已经找到适合的光致氧化TH。TH(246海里)的最大吸收64年德国莱茵管的发射频带重叠,提供最大的辐射能量的光化学反应和TC的形成。
3.5.2。辐射Source-Vessel距离
射线源之间的距离和反应容器必须定一个固定数量的量子吸收执行统一的光化学反应。25厘米的距离与辐射源之间的反应容器被认为是适合这个工作。
3.5.3。温度
光化学研究温度的控制是至关重要的,以避免任何热对反应速率的影响。这已经通过辐照的解决方案在一个恒温浴维持在一个恒定的温度,即25±1°C时的反应。
3.5.4。辐照时间
解决方案的照射一段固定的时间是必要的,以达到均匀的结果在TC的形成。在目前的研究中,发现了30分钟的时间足以避免任何光降解的TC (52]。
3.5.5。氧化剂
TH在碱性溶液的氧化发生在氧化剂的存在,也就是说,铁氰化钾(66年)或过氧化氢(67年]。在目前的研究中,光致氧化的进行了过氧化氢的存在,以避免任何干扰的氧化剂TC的吸光度。
4所示。结论
一个简单的光化学方法的开发和验证试验的TH水溶液和制药维生素制剂。它是基于光致氧化TH TC,决心的定量关系(TC: TH比)的条件下进行,并在此基础上分析不同制药TH的样本。TC值高(1%,1厘米)分光光度法测定,可以方便地在370海里。该方法与美国药典方法。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
作者欣然承认巴基斯坦高等教育委员会的财政支持进行本研究通过NRPU格兰特(研究项目。伊克巴尔·艾哈迈德·20 - 3968)。