文摘
一个简单、快速、敏感spectrofluorometric方法开发的决心三antihyperlipidemic药物,即伐钙(RSV), ezetimibe(法国埃兹),和pitavastatin钙(坑)。该方法是基于测量的本地荧光引用他们的最佳激发和发射波长的药物。荧光强度测量λem 362 nm、309 nm和373 nm激发态λ交货315 nm、260 nm和245 nm RSV,法国埃兹,和坑。校准图表是线性浓度范围0.50 - -10.0,0.25 - -4.0,0.10 - -3.00μ克毫升−1分别为RSV,法国埃兹和坑。此外,spectrofluorometric方法RSV的同时测定,法国埃兹。荧光测定λem法国埃兹309 nm和432 nm为RSV激发态λ前两个260海里。提出的方法应用于确定引用散装和制剂的药物。
1。介绍
伐钙(RSV), (E) 7 - {4 (4-Fluorophenyl) 6-isopropyl-2 -(甲基(methylsulfonyl)氨基]pyrimidin-5-yl} 3 5-dihydroxyhept-6-enoic酸钙盐),ezetimibe(法国埃兹),[1 - (4-Fluorophenyl) 3 - [3 - (4-Fluorophenyl) 3-hydroxy-propyl] 4 - (4-hydroxyphenyl) -azetidin-2-one],和pitavastatin钙(坑),[(+)-monocalcium bis {(3 r 5 s 6 E) 7 - [2-cyclopropyl-4 - (4-Fluorophenyl) 3-quinolyl] 3 5-dihydroxy-6-heptenoate}]小说antihyperlipidemic口服药物。化学结构的RSV,法国埃兹和坑图所示1。RSV和坑是一个类的成员降低胆固醇的他汀类药物通过抑制酶β-还原酶;这种酶催化(β)甲羟戊酸的转化率,胆固醇生物合成的早期和病原反应步骤(1,2]。法国埃兹是一种降低胆固醇的药物通过阻止胆固醇的吸收膳食和胆道来源通过阻断胆固醇的运输通过肠壁[3]。coadministered与他汀类药物,法国埃兹是许可用于治疗原发性高胆固醇血症患者,单独使用他汀类药物控制不好,纯合子家族性高胆固醇血症(4]。详细调查分析文学RSV透露几个方法基于不同技术,高效液相色谱法(5- - - - - -7),分光光度法,8)和高性能薄层色谱法(9]。同样,文学的调查分析测定的法国埃兹在生物样品或制剂显示方法基于高效液相色谱法(10- - - - - -13)和LC / MS / MS (14,15)在人血浆的决心,UV-spectrophotometric测定结合其他药物(16]和stability-indicating LC [17,18]。此外,不同的分析方法的确定坑已报告,包括分光光度法(19)、高性能薄层色谱法(20.),和LC / MS / MS测定人血浆(21- - - - - -24]。
(一)
(b)
(c)
荧光光谱测定法一直被应用在药物分析领域的许多药物25- - - - - -28因为更高的灵敏度比在吸收分光光度法。复合能发出荧光的必要条件是它吸收光光谱在紫外或可见光区域。因此,化合物共轭π电子系统可能给有效再发射吸收能量的直接法测定的原生荧光分子的测量(25- - - - - -28]。这项工作的目标是开发敏感、简单、精确、快速spectrofluorometric方法分析坑,RSV,法国埃兹散装和药物制剂和组合产品,包含RSV和法国埃兹。
2。实验
2.1。仪表
日本岛津公司rf - 1501荧光光谱仪(日本)和Soniclean sonicator-degasser(澳大利亚)。
2.2。试剂和参考样本
医药级RSV(认证包含99.91%)和可定5毫克片剂名义上含有5.217毫克的RSV平板(生产批号。100268)被AstraZeneca-Egypt提供。法国埃兹(认证包含99.93%)和Ezetrol 10毫克片剂名义上含有10.0毫克每片法国埃兹(生产批号。303345)& Dohme-Egypt由默克锋利。坑(认证包含99.80%)和Livalo 2毫克片剂名义上含有2.09毫克/平板电脑(生产批号。3079200)被Lilly-USA提供。Rosuvas EZ10毫克片剂名义上含有10.0毫克的法国埃兹和10.434毫克的RSV /平板电脑(生产批号。2220206)被Ranbaxy-India提供。甲醇液相色谱级和乙腈高效液相色谱级从Sigma-Aldrich购买,德国。
2.3。标准和测试解决方案
2.3.1。制备的标准解决方案
100年的标准股票的解决方案μ克毫升−1每种药物都准备在甲醇作为RSV坑和选定的溶剂乙腈作为法国埃兹选定的溶剂。
2.3.2。准备的测试解决方案
对于包含RSV的制剂,法国埃兹,坑
二十块可定5毫克,ezetrol 10毫克,livalo 2毫克平板电脑分别称重和细粉砂浆。平板电脑粉相当于10毫克的药物(RSV-free,法国埃兹和PIT-free)准确称重和分别转移到三个100毫升容量的玻璃瓶。每种药物的平板粉溶解使用甲醇作为RSV坑和选定的溶剂乙腈作为法国埃兹选定的溶剂,然后用15分钟,完成与所选溶剂体积。0.45解决方案被过滤μ米尼龙注射器过滤器,紧随其后的是连续稀释所需浓度为每一个实验。
包含二元混合物RSV Rosuvas-EZ平板电脑和法国埃兹
20片rosuvas ez 10毫克的称重和细粉砂浆。平板电脑粉RSV-free相当于10毫克,相当于10毫克的法国埃兹准确称重和转移到100毫升容量瓶。平板电脑粉溶解使用乙腈作为选定的溶剂,然后用了15分钟,由所选溶剂的马克。0.45解决方案被过滤μ米尼龙注射器过滤器,紧随其后的是连续稀释为每个实验所需的浓度。
2.4。一般程序和校准
2.4.1。对RSV,法国埃兹和坑
准确地测量整除的工作相当于5.0−100.0标准的解决方案μ2.5 - -40.0克,μg和1.0 - -30.0μg RSV,法国埃兹和坑是准确测量并分别从他们的股票的解决方案分为三个组10毫升容量的玻璃瓶;那么每个瓶完成与每个药物的选择溶剂体积。本机荧光强度测量指定的激发和发射波长对于每个药物(λ前315 nm -λem 362海里),(λ前260 nm -λem 309海里),(λ前245 nm -λ为RSV em 373海里),法国埃兹,和坑。每个药物通过绘制的校准曲线得到荧光强度与浓度(C) (F),和每个药物的回归参数计算。
2.4.2。对于RSV-EZE Laboratory-Prepared混合物
不同的整除RSV和法国埃兹股票的解决方案相当于4.0 - -100.0μg和2.0 - -50.0μg,分别是准确测量并转换成一组10毫升容量的玻璃瓶,用乙腈和卷完成。本机荧光强度测量λRSV em 432 nm和309 nm为法国埃兹在激发λ前260海里这两种药物,然后对相应的浓度,绘制和回归参数计算。
3所示。结果与讨论
文献调查表明,只有液相色谱和光谱光度测量的方法已经报道了RSV的决心,法国埃兹和坑。因此,发展spectrofluorometric引用的方法测定药物在批量或制剂的利益是没有报告这些方法三种药物。拟议中的spectrofluorometric方法成功地应用于估计RSV,法国埃兹,坑和二元混合物RSV-EZE在平板剂型没有辅料的干扰被发现(表1)。
3.1。方法开发
3.1.1。对RSV,法国埃兹和坑
选择激发波长为RSV,法国埃兹和坑是基于的最大吸收波长在紫外区域;然后激发光谱是由测量排放强度在固定波长不同的激发波长为每个引用的药物。最佳激发波长为RSV发现,法国埃兹,坑315海里,260 nm和245 nm,分别。另外,选择合适的发射波长是由扫描发射光谱,测量排放强度的变化为一个固定的波长激发波长。决心为RSV,法国埃兹和坑完成发射波长362 nm, 309 nm和373 nm,分别在他们选择的激发波长。RSV的荧光发射光谱,法国埃兹,坑图所示2。甲醇被发现合适的溶剂与背景噪音最低选择激发和发射波长为RSV坑,在线性范围0.5 - -10.0给出令人满意的结果μ克毫升−1-3.0和0.1μ克毫升−1,分别。而对于法国埃兹,乙腈给发现了更好的敏感性和降低背景噪音所选择的激发和发射波长,在线性范围0.25 - -4.0给出令人满意的结果μ克毫升−1。
(一)
(b)
(c)
3.1.2。二元混合物RSV-EZE
寻找合适的激发波长对RSV和法国埃兹。RSV和法国埃兹被发现是兴奋λ前260海里,最佳不重叠的发射光谱RSV和法国埃兹在二进制混合解决方案。因此测定二元混合物的法国埃兹是通过测量排放强度的变化λem 309海里,而决心RSV的二元混合物也通过测量排放强度的变化λem 432海里,应用合适的激发波长时,法国埃兹和RSV的二元混合物(λ260海里)。二进制混合RSV-EZE发现更高的灵敏度和背景噪音最低时溶解在乙腈。满意的结果线性范围和浓度范围从0.4到10.0的再现性μ克毫升−1RSV和0.2到5.0μ克毫升- - - - - -1法国埃兹,在他们laboratory-prepared二元混合物。RSV-EZE laboratory-prepared二元混合物的荧光发射光谱图所示3。
3.2。方法验证
3.2.1之上。线性
研究了线性三引用药物RSV,法国埃兹,坑也为二进制RSV-EZE混合物。在这项研究中,使用6到8浓度为每一个药物。荧光强度之间的线性关系和组件浓度(c)。范围的线性回归方程表中提到的每个药物1。验证了校正曲线的线性相关系数的比较高的值,如表所示1。校准曲线的分析数据,包括斜率和截距的标准差(年代b,年代一个)也总结表1。
3.2.2。精度
计算结果精度%恢复6不同浓度的RSV,法国埃兹散装和8个不同浓度的坑,还有8个不同浓度的实验室准备的混合物RSV-EZE和标准技术申请制剂,所有在一式三份。获得的结果包括复苏的均值、标准偏差和相对标准偏差是显示在表中1。
3.2.3。精度
精度估计的可重复性。重复性是评估通过分析5.0的溶液μ克毫升−1RSV和2.0μ克毫升−1法国埃兹和坑()。二元混合物RSV-EZE,包含1.0解决方案μ克毫升−1分析了RSV和法国埃兹()。精确的值(% R.S.D)的可重复性以及盘中和interday精度(使用3种不同浓度连续三天)一式三份的三种药物显示在表中1。
3.2.4。特异性
特异性的能力分析方法测量分析物反应的干扰。在目前的工作,我们检查了样品的光谱出现任何新辅料的光谱。没有发现任何辅料的干扰的激发/发射波长检测药物。此外,每种药物的光谱在示例解决方案是相同波长的光谱接收的标准解决方案。此外,样品均获得良好的复苏。这些结果说明没有干扰其他材料在制药配方,因此确认方法的特异性。
3.2.5。极限检测和量化的极限
检测极限(LOD)代表被分析物的浓度在3和信噪比的极限量化(定量限)的S / N是10测定方法,并给出结果表1。LOD和定量限计算基于响应的标准偏差和斜率。
3.3。统计分析
统计分析的结果提出spectroflourometric方法测定(RSV,法国埃兹和坑)和那些得到报道的方法是由“SPSS统计软件包版本11。“团体之间的显著差异由单向方差分析测试,如表所示2。测试证实没有显著差异的方法。
4所示。结论
拟议中的spectrofluorometric方法简单的优点,精度、准确性,并方便引用antihyperlipidemic毒品的决心:RSV,法国埃兹和坑。除此之外,同时测定的二元混合物RSV-EZE。因此,该方法可用于引用药物的质量控制在普通实验室。