文摘
两个简单的、敏感的和有选择性的光谱光度测量的方法描述了精神药物的测定,在平板电脑和盐酸甲硫哒嗪生物液体。第一种方法是基于氧化盐酸甲硫哒嗪KMnO测量过剩4在酸性条件下紧随其后的决心未反应的氧化剂使用靛胭脂和甲基橙。第二种方法是基于离子对复合物的形成与酸性sulphophthalein染料如溴甲酚绿和溴甲酚紫KCl-HCl缓冲区的pH值1.8。形成复合物被提取到二氯甲烷和吸光度测量在412海里。不同实验条件的优化是两种方法的描述。提出的方法成功地申请了测定药物在平板电脑和生物流体具有良好的准确度和精密度。统计比较官方的方法获得的结果与显示良好的协议,表示在准确度和精密度无显著差异。
1。介绍
的盐酸盐酸甲硫哒嗪(太赫兹),10 - [2 - (lmethyl-2-piper-idyl)乙基]2-methylthiophenothiazine,吩噻嗪安定药物用于治疗精神分裂症和其他精神疾病(1]。吩噻嗪类也有止吐剂,镇静、止痒的antidyskinetic,镇痛和抗组胺剂属性(2]。甲硫哒嗪一直被称为最强有力的吩噻嗪类之一,抑制trypanothione还原酶不可逆,通常用作抗精神病和antimuscarinic药物治疗行为症状(3,4]。此外,甲硫哒嗪在出汗的治疗是有效的抗抑郁药和镇静药物5,6]。
由于临床盐酸甲硫哒嗪的重要性,它是重要的建立一个简单的和敏感的方法,其在生物体液的决心。不同药典推荐测定甲硫哒嗪基或盐酸滴定药物在冰乙酸和乙酸酐与高氯酸。BP推荐药物的滴定丙酮溶液中含有约7%醋酸汞(二)解决方案,利用甲基橙指示剂(7]。描述了几种分析方法测定甲硫哒嗪盐酸。在方法、紫外分光光度法和传统的高效液相色谱法是最常用的8- - - - - -11]。伏安法(12- - - - - -14),分光光度法15- - - - - -19已报告)和化学发光方法测定盐酸甲硫哒嗪(20.]。超临界流体色谱法(21]和LC结合其他技术也报道测定盐酸甲硫哒嗪(22,23)及其主要代谢物或衍生品。其中有些方法缺乏足够的敏感性,和一些是昂贵和费时。因此,重要的是要开发两个新简单的和敏感的方法太赫兹光谱光度测量的决心。第一种方法是基于太赫兹的氧化和轻微的过量的高锰酸钾在酸性介质。然后估计不会泯灭的氧化剂与两个染料的颜色强度下降。第二种方法是基于离子对复合物的形成的药物与染料如溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚紫(BCP)和后续提取到二氯甲烷。提出的方法已成功申请的决心太赫兹在药物制剂和生物液体。
2。实验部分
2.1。仪器
spectroscan 80 D双光束紫外/可见分光光度计(英国生物技术工程有限公司),190 - 1100 nm波长范围、光谱带宽2.0 nm匹配10毫米石英电池被用于所有的吸光度光谱测量。
2.2。试剂和材料
使用的所有化学分析试剂级的,解决方案是在蒸馏水。(我)靛胭脂(IC)。5×10−3M的靛胭脂(奥尔德里奇)是由溶解的准确重量染料在水中(纯度99%),稀释在校准瓶100毫升。(2)甲基橙(MO)。5×10−4M的甲基橙被溶解的准确重量准备染料在最少的水和完成校准瓶100毫升的马克。(3)高锰酸钾。股票的解决方案为1.0×10−3M KMnO4(奥尔德里奇)是由溶解的准确重量在10毫升温暖的蒸馏水,然后完成马克在校准瓶100毫升、使用草酸钠和标准化。2.0 M H2所以4是准备。(iv)Sulfophthalein染料。5×10的解决方案−4M溴甲酚绿和溴甲酚紫(奥德里奇产品)是由溶解酸染料的准确重量几滴丙酮然后用蒸馏水稀释到马克在100毫升分别校准烧瓶。(v)盐酸甲硫哒嗪(太赫兹)。医药级盐酸甲硫哒嗪是收到的礼物从三角洲制药公司,10日斋月,埃及;据报道99.8%的纯和作为收到。股票标准溶液相当于10毫克的太赫兹是由溶解精确称重的纯药物蒸馏水。太赫兹的溶液稀释浓度逐步获得工作的100人μ克/毫升。标准的解决方案保存在琥珀色瓶和存储在一个冰箱不使用的时候。
2.3。推荐程序和校准曲线
2.3.1。氧化反应
不同整除(0.1 - -0.7毫升)100年的标准μg / mL太赫兹的解决方案被转移到一系列25毫升校准烧瓶的微量滴定管。每个瓶,2.0毫升的2.0 M H2所以4和1.2毫升1.0×10−3M KMnO4解决方案被添加。内容是混合好,烧瓶一直为20分钟,在室温下用断断续续的震动。最后,1.1毫升的5×10−3M IC和1.4毫升5.0×10−4米莫解被添加到每个瓶和体积用水稀释到马克和混合。吸光度是对照试剂空白在610 nm和508 nm,分别。在这两个方法,一个标准的图形是由策划太赫兹的吸光度与浓度。未知浓度从校准曲线读取或使用比尔定律从回归方程导出计算数据。
2.3.2。离子对反应
合适的股票的解决方案太赫兹(4-24整除μg)对卡介苗和BCP方法转移到单独的口玻璃塞管。然后,2.0毫升氯化钾+盐酸缓冲的pH值1.8和2.0毫升的5×10−4M卡介苗或BCP添加和混合。内容被摇动10毫升二氯甲烷提取2.0分钟和有机层在无水硫酸钠干燥。黄色的复合物的吸光度测量在412 nm BCG和BCP,二氯甲烷。在这两个方法,一个标准的图形是由策划太赫兹的吸光度与浓度。
2.4。制剂的过程
至少二十的太赫兹平板电脑(Thiozine平板电脑,δ制药公司,开罗,埃及,标签包含25毫克盐酸甲硫哒嗪/平板)重获得意味着平板电脑重量,均质粉。平板电脑粉的量相当于30毫克转入一个校准瓶100毫升,溶解在蒸馏水和过滤。适量滤液拍摄和分析所述下推荐程序。提出的方法,计算平板电脑的内容使用相应的适当的校准曲线的回归方程。
2.5。尿液和血清程序越来越多
提出的方法应用于测定太赫兹在尿液和血清提供一些健康的志愿者。飙升的尿液是用蒸馏水稀释50倍。10毫升的血清样本脱去蛋白质的乙腈加入5毫升离心5分钟在1000 rpm。上层清液用于调查复苏。添加一个整除的标准溶液太赫兹到1.0毫升的稀释尿液或血清。分析完成后的推荐程序。一个空白值取决于治疗THZ-free尿液和血清THZ-free以同样的方式。绝对复苏确定了太赫兹通过比较治疗尿或血清样本的代表性的吸光度与吸光度的标准药物在同一浓度。
3所示。结果与讨论
优化的变量
试验过程的最优条件建立了通过研究反应反应时间的函数,试剂的浓度,和彩色的物种的稳定性,缓冲和博士这样的变量单独改变,而其他人则保持不变。
3.1。氧化反应
在目前的方法,有两种染料靛胭脂和甲基橙的决心太赫兹(图1)。太赫兹是间接的决定,是基于盈余KMnO的决心4氧化反应后通过KMnO太赫兹4,(24,25]。根据药物发生氧化反应计划中给出方案1。
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3.1.1。温度和反应时间的影响
保持其他条件不变,温度对氧化产物的影响进行了研究。太赫兹和KMnO之间的反应4被发现是瞬时的。然而,在室温下反应15分钟内完成(25±2°C),但20分钟足以得到最大强度。因此,在室温下20分钟被选择进行进一步的实验。
3.1.2。酸浓度的影响
初步调查显示,硫酸的氧化是媒介的选择由KMnO太赫兹4。两毫升2.0 H2所以4是理想的氧化步骤方法和相同数量的酸用于染料的估计。发现的最大的颜色是在20分钟,几乎保持稳定大约24小时。
3.1.3。氧化剂浓度的影响
氧化剂浓度的影响,研究了通过添加不同量的1×10−3米的KMnO4固定数量的太赫兹(2.4解决方案μg / mL)。这是观察到的最大颜色强度得到KMnO 1.2毫升4体积后,进一步增加导致减少吸光度。因此,1.2毫升KMnO4足以达到最高药物浓度的啤酒的范围。
3.1.4。染料浓度的影响
dyeconcentration的影响强度的颜色开发选定的波长分别研究了通过测量吸光度的最终解决方案的反应混合物包含固定浓度的太赫兹(2.4μg / mL)和各种大量的染料(0.5 - 5毫升)。使用1.1毫升的5×10−3M IC和2.8毫升5×10−4M的密苏里州被发现有必要产生恒定的吸光度值。试剂的使用过剩的生产没有进一步增加吸光度。
3.2。离子对反应
萃取光度法程序由于其灵敏度广泛应用于药物的测定,因此,离子对萃取分光光度法定量测定获得了相当大的关注的许多制药化合物(26- - - - - -31日]。太赫兹与BCG和BCP反应在酸性缓冲给二氯甲烷可溶性离子对复合物,具有吸收最大值在412 nm BCG和BCP(图1)。在实验条件下,试剂空白显示微不足道的吸光度从而允许良好的分析太赫兹的定量测定条件。
3.2.1之上。缓冲和pH值的影响
定量测定的最佳反应条件,建立了离子对复合物通过初步实验。这是观察到的有效提取复杂取决于所使用的缓冲区的类型及其博士研究了pH值的影响通过提取出有色复合物存在各种缓冲区即KCl-HCl (pH = 1.0 - -2.2),氢钾phthalate-HCl (pH = 2.2 - -3.6), NaOAc-HCl (pH = 1.99 - -4.92),和NaOAc-AcOH (pH = 3.72 - -5.57)。注意到最大的颜色强度,不断的吸光度被观察到在KCl-HCl缓冲区(克拉克和滑)染料的pH值1.8。因此,克拉克和滑缓冲区的pH值1.8是用于所有后续测量两种方法。进一步,2.0毫升KCl-HCl缓冲区的pH值1.8 BCG和BCP给最大吸光度和可重复的结果。
3.2.2。有机溶剂的选择
大量的有机溶剂如氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、苯和甲苯进行提取离子对复合物,以提供一个适用的提取过程。虽然二氯甲烷不是一个生态友好溶剂,这是首选的选择性萃取离子对复合物由于提取的离子对更大的稳定性,大大降低试剂空白的萃取能力。这项研究表明,体积比为1:1(水:有机)是最适合离子对萃取。
3.2.3。时间和温度的影响
温度对有色离子associates的影响在不同的温度进行了研究。发现有色离子associates稳定30°C。更高的温度是不适合由于二氯甲烷的挥发性性质。由此产生的离子将被发现在室温下稳定的24 h。完整的颜色强度达到2.0分钟后所有复合物混合。
3.2.4。染料浓度的影响
分别研究了染料的浓度的影响通过测量吸光度的最终解决方案的反应混合物包含固定浓度的太赫兹和各种大量的染料。复杂的最大颜色强度达到2.0毫升的5×10−4M BCG和BCP。虽然更大体积的试剂对复杂地层没有明显影响,吸光度的增加略由于背景颜色的试剂。
3.2.5。序列和时间抖动的影响
最有利的序列是drug-buffer-dye-solvent生产最高的颜色强度和最短的时间内为发展中最大吸光度,而另一个序列需要更长的时间和生产低吸光度值。摇晃的时间提取离子对配合物进行了研究,发现提取液的吸光度之间保持不变0.5 - -5.0分钟。因此,2.0分钟抖动时间利用作为一个最优值在整个实验。离子对复合物是一只提取定量恢复。
3.2.6。化学计量关系
形成产品的化学计量比是调查工作的连续变异方法(31日]。1×10−4太赫兹的M解是试剂的使用类似的解决方案(BCG或BCP)。为每个方法,制备了一系列的解决方案的药品和试剂的总量保持在2.0毫升,和描述的过程完成了通用程序。工作的连续变异方法的应用表明1:1比例与每个试剂药品。
3.3。分析数据
校准图形构造了上述两种方法在最优条件下。摩尔吸光系数、浓度范围回归方程,相关系数列在下表中1。吸光度之间的线性关系被发现λ马克斯和药物的浓度在0.4 - -3.2范围μ氧化法和4-32 g / mLμ为离子对方法g / mL。比尔定律绘制的回归分析λ马克斯揭示了一个良好的相关性(= 0.9972 - -0.9993)。图显示一个微不足道的拦截,这是由最小二乘法的回归方程计算。的相对敏感试剂可以通过比较确定的摩尔吸光系数复合物。
3.4。准确度和精密度
interday重复性的方法研究了通过执行五个独立的分析太赫兹在纯形式三种不同浓度水平连续六天(表2)。盘中该方法的重现性是决定通过测量药物一天内三个浓度水平(表5倍2)。试剂的解决方案准备新鲜和分析所述下推荐程序和校准图表。表的数据2表明,内天,相对标准偏差小于1.8%,interday相对标准偏差不超过2.17%,这表明提出的方法是高度可再生的。
3.5。分析应用程序
3.5.1。分析平板电脑
提出的方法成功地应用于太赫兹的决心代表平板电脑和结果总结在表3。品牌/剂量检查,方法给出的结果是同意声明的内容。提出了方法的性能是根据计算学生t- - -F值。在95%置信水平,计算t- - -F值没有超过理论从表值明显3。因此,得出的结论是,之间没有显著差异提出和官方的方法(7对准确度和精密度。此外,检查提出的方法的有效性,我们采用了标准添加法通过添加太赫兹前面分析的平板电脑。太赫兹的复苏是通过对比计算得到的浓度上升混合物与纯药物和添加量的复苏被发现超过96.29%。这表明没有任何辅料的干扰,它们存在于平板电脑。这些结果在表4。
3.5.2。分析人类的样本
吩噻嗪类抗精神病药物和用作试剂确定Hb在生物体液和组织,但在用量可以导致死亡,所以说甲硫哒嗪的定量评估人类血清和尿液的健康也是确定如表所示5。精度高和良好的复苏了,这表明该方法可以成功地应用于恢复甲硫哒嗪人类样本。
3.6。干预研究
常用的辅料和添加剂通常陪太赫兹的剂型,如(淀粉、乳糖、葡萄糖、糖、滑石、氯化钠,和硬脂酸镁)进行了研究。结果表明,没有退化的干扰,表明高选择性确定剂型的研究太赫兹。
3.7。鲁棒性
该方法的鲁棒性是评估通过使用不同的仪器由两个不同的分析师相同的优化条件。结果被发现是可再生的,因为获得的结果没有显著差异的两个分析师。因此,该方法可以被认为是健壮的。
4所示。结论
上面给出的数据表明,该方法简单、选择性、准确、敏感(氧化法>离子对方法)有良好的准确性和精度。因此,该方法可以作为替代方法为常规测定的报道太赫兹在制剂和生物液体的性质取决于可用性的化学物质和其他成分存在于样品。