文摘gydF4y2Ba
大黄素的淬火效果基于luminol-myoglobin (Mb)反应,一个敏感的方法测定纳克级大黄素的流动注射化学发光(FI-CL)首次提出。发现CL强度从luminol-Mb系统可以在大黄素的存在,抑制和CL强度的衰减是大黄素浓度的对数成线性正比0.5 -的范围gydF4y2Ba(gydF4y2BaRgydF4y2Ba= 0.9956)的检出限gydF4y2Ba(3gydF4y2BaσgydF4y2Ba)。的流量gydF4y2Ba大黄素的,一个完整的决心,包括采样和洗涤,可以完成在0.5分钟的相对标准偏差(rsd)小于3.5% (gydF4y2BangydF4y2Ba= 5)。该方法已成功应用于测定大黄素在制剂和人类的血清样本。可能的CL luminol-Mb-emodin反应机理解释。gydF4y2Ba
1。介绍gydF4y2Ba
天然成分,传统上被用来治疗许多疾病几百年来被认为是作为癌疗法(一个不错的选择gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。大黄素(1、3、8-trihydroxy-6-methylanthraquinone图gydF4y2Ba1gydF4y2BaMW = 270),最常用的物种之一,来自干大黄的根是一组植物所属的大黄属蓼科的家庭。大黄素已广泛研究的传统的药理作用,主要治疗便秘和月经不调,皮肤烧伤、胆石、肝炎、炎症、和骨髓炎(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。最近,一些研究已经把大黄素回关注其抗癌活动对几种类型的癌细胞和病毒,例如,抑制ATP-induced巨噬细胞死亡(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba人类nonsmall],调节细胞毒性细胞肺癌细胞(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba),诱导resensitization女性肺癌细胞(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba),对gydF4y2BaβgydF4y2Ba-amyloid-induced神经毒性、单纯疱疹病毒、人类慢性粒细胞白血病K562细胞株(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba9gydF4y2Ba),和抑制肝癌细胞的生长gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
不同的方法测定大黄素的报道,包括高效液相色谱法(HPLC) (gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba),毛细管电泳(CE) [gydF4y2Ba13gydF4y2Ba),ultraperformance液体chromatography-tandem质谱(UPLC-MS / MS) (gydF4y2Ba14gydF4y2Ba),电化学(EC) (gydF4y2Ba15gydF4y2Ba[],紫外可见分光光度法进行测定gydF4y2Ba16gydF4y2Ba),电化学发光(ECL) [gydF4y2Ba17gydF4y2Ba,gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。然而,没有报告的确定大黄素使用流动注射化学发光(FI-CL)。gydF4y2Ba
据报道,Mb,其中包含一个铁原卟啉或血红素铁州Mb (FegydF4y2Ba三世gydF4y2Ba),可以与鲁米诺反应产生CL发射(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba,gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。本文从luminol-Mb系统发现CL强度可以抑制大黄素的存在,和CL强度的衰减是大黄素浓度的对数成线性正比0.5 -300 nggydF4y2Ba·gydF4y2Ba毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(gydF4y2Ba= 0.9956)的相对标准偏差(rsd)小于3.5% (gydF4y2Ba)。简单和快速的方法成功地应用于测定大黄素在制剂和人类的血清样本。gydF4y2Ba
2。实验部分gydF4y2Ba
2.1。仪器和试剂gydF4y2Ba
实验仪器是流动注射氯分析仪(模型IFFL-DD,西安Remax电子科技。有限公司);聚四氟乙烯管(1.0毫米证件)被用来连接材料流系统;鲁米诺被用来提供准备2.5×10gydF4y2Ba−2gydF4y2Ba摩尔gydF4y2Ba·gydF4y2BalgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba股票标准溶液溶解0.44克鲁米诺(丙烯酰胺,Biochemika) 0.1摩尔gydF4y2Ba·gydF4y2BalgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在100毫升氢氧化钠校准瓶;马心Mb(σ)从当地市场购买和使用没有进一步净化。所有试剂都是分析纯度等级。双重蒸馏水纯化Milli-Q系统(微孔,贝德福德,MA)中使用。gydF4y2Ba
2.2。程序gydF4y2Ba
流动注射系统用于这项工作是如图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。蠕动泵是用于泵的所有流流流速为2.0毫升·分钟gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。承运人用于流动注射系统是水。鲁米诺被用来提供准备2.5×10gydF4y2Ba−5gydF4y2Ba摩尔·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba解决方案,和氢氧化钠溶液为2.5×10gydF4y2Ba−2gydF4y2Ba摩尔·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。100年六方与循环阀gydF4y2BaμgydF4y2BaL用于发光氨稳定的基线记录后,CL信号产生在CL发射单元和Mb。混合解决方案是交在CL细胞,产生CL发射和检测到的光电倍增管(PMT)。大黄素的浓度可以量化的基础上CL强度的衰减,gydF4y2Ba,在那里gydF4y2Ba和gydF4y2BaCL信号在大黄素的存在,没有分别。gydF4y2Ba
2.3。样品制备gydF4y2Ba
五块SANHUANG雅司病(由山西雅宝制药集团的产业。有限公司)重和地面使用杵和臼然后细粉均质;样本相当于大约425±10毫克的大黄素重准确并溶解在乙醇,然后与双去离子水稀释校准烧瓶和超声波10分钟。解决方案由一个普通的滤纸过滤,和合适的滤液整除该解决方案被稀释一个大黄素浓度在校准范围内。gydF4y2Ba
3所示。结果与讨论gydF4y2Ba
3.1。相对CL Intensity-Time概要文件gydF4y2Ba
CL的行为反应,在没有和大黄素,使用5.0×10测试gydF4y2Ba−8gydF4y2Ba摩尔·LgydF4y2Ba−1gydF4y2BaMb和2.5×10gydF4y2Ba−5gydF4y2Ba摩尔·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba鲁米诺在2.5×10gydF4y2Ba−2gydF4y2Ba摩尔·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba氢氧化钠溶液。从图可以看出gydF4y2Ba3gydF4y2Ba后在8 s CL强度达到最大,在25 s采样和消失;CL明显随大黄素浓度的增加而减小。gydF4y2Ba
3.2。鲁米诺的影响,Mb,氢氧化钠浓度gydF4y2Ba
在不同的鲁米诺浓度从1.0×10gydF4y2Ba−6gydF4y2Ba1.0×10gydF4y2Ba−4gydF4y2Ba摩尔·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba并从1.0×10 Mb的解决方案gydF4y2Ba−8gydF4y2Ba1.0×10gydF4y2Ba−6gydF4y2Ba摩尔gydF4y2Ba·gydF4y2BalgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,CL强度检验。发现CL强度到达最大值为2.5×10gydF4y2Ba−5gydF4y2Ba摩尔gydF4y2Ba·gydF4y2BalgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba鲁米诺和5.0×10gydF4y2Ba−8gydF4y2Ba摩尔gydF4y2Ba·gydF4y2BalgydF4y2Ba−1gydF4y2BaMb。因此2.5×10的鲁米诺的解决方案gydF4y2Ba−5gydF4y2Ba摩尔gydF4y2Ba·gydF4y2BalgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba和5.0×10 Mb的解决方案gydF4y2Ba−8gydF4y2Ba摩尔gydF4y2Ba·gydF4y2BalgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba被用于后续的实验。gydF4y2Ba
由于鲁米诺反应的性质,这是更有利的在碱性条件下,氢氧化钠被引入鲁米诺的解决方案来提高系统的灵敏度。一系列不同浓度的氢氧化钠溶液从0.01到0.1摩尔gydF4y2Ba·gydF4y2BalgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba分别进行了测试。CL的情节强度与氢氧化钠浓度达到峰值2.5×10gydF4y2Ba−2gydF4y2Ba摩尔gydF4y2Ba·gydF4y2BalgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,这个浓度是用于后续实验。gydF4y2Ba
3.3。流量和混合管的长度gydF4y2Ba
这是发现CL强度增加而增加流量。作为妥协之间良好的精度和降低试剂消耗,2.0毫升·分钟gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba每一行的流量推荐。发现10厘米混合管提供最好的结果与良好的灵敏度和重现性。因此,10厘米被选为最优混合油管的长度。gydF4y2Ba
3.4。大黄素测定的性能的方法gydF4y2Ba
在最佳条件下,CL强度的校准曲线线性大黄素浓度范围为0.5 -300 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,考虑到回归方程gydF4y2Ba,检出限为0.2 ng·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(3gydF4y2BaσgydF4y2Ba)和标准偏差小于3.5%。gydF4y2Ba
3.5。干预研究gydF4y2Ba
在最佳条件下,外来物质的影响研究通过分析大黄素的标准溶液(ng 50毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba)越来越多的干扰物质被添加。外国物种的容许极限拍摄的相对误差小于5.0%。在制药辅料平板电脑,如淀粉、乳糖,纤维素,硬脂酸,琼脂,滑石,果糖,蔗糖不干扰测定10的容许浓度gydF4y2BaμgydF4y2Bag·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba,容许其他分析物浓度是5.0gydF4y2BaμgydF4y2Bag·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba为gydF4y2Ba,gydF4y2Ba,我gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba,gydF4y2Ba,2.5gydF4y2BaμgydF4y2Bag·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba为gydF4y2Ba,gydF4y2Ba,gydF4y2Ba0.1、乙醇、明胶蛋白gydF4y2BaμgydF4y2Bag·毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba为铜gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba、锌gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba、铬gydF4y2Ba3 +gydF4y2Ba和菲gydF4y2Ba2 +gydF4y2Ba/铁gydF4y2Ba3 +gydF4y2Ba,分别。gydF4y2Ba
3.6。可能Luminol-Mb-Emodin CL机制gydF4y2Ba
可能的CL luminol-Mb-emodin反应机理讨论了荧光和CL。可以看出,一个强大的荧光发射的Mb (gydF4y2Ba海里)显然就熄了大黄素的存在,如图gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。线性方程是gydF4y2Ba,在那里gydF4y2Ba和gydF4y2Ba的荧光强度是1.0gydF4y2BaμgydF4y2Ba摩尔·LgydF4y2Ba−1gydF4y2BaMb的缺失和大黄素的存在与它的浓度从0.1到10gydF4y2BaμgydF4y2Ba摩尔·LgydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。从Stern-Volmer方程gydF4y2Ba21gydF4y2Ba淬火速率常数)gydF4y2BaL·摩尔gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba·年代gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba是获得远远大于各种饮料和生物聚合物的最大分散collision-quenching常数2.0×10吗gydF4y2Ba10gydF4y2BaL·摩尔gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba·年代gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。是推断Mb与大黄素的荧光猝灭是由形成极化子复杂而导致的CL强度luminol-Mb系统减少呈现在图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
4所示。应用程序gydF4y2Ba
4.1。测定大黄素在制剂gydF4y2Ba
上面详细的过程后,提出的方法应用于测定大黄素在制剂SANHUANG平板电脑。表中列出的结果gydF4y2Ba1gydF4y2Ba显示,回收率范围从93.3到105.0%不到的rsd为3.0% (gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
4.2。人血清样品中大黄素的测定gydF4y2Ba
大黄素在人类血清样品准备在实验段测量,结果是总结表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。可以看出,大黄素测定的复苏从94.0到106.3%,rsd小于3.5%,证实了该方法的适用性在生物样品中大黄素的决心。gydF4y2Ba
5。结论gydF4y2Ba
建立了一个简单的和敏感的CL程序基于大黄素的淬火效果luminol-Mb CL系统测定大黄素在制剂。比较建议的CL程序与其他方法提出了在桌子上gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。很明显,拟议中的CL方法提供了最高的灵敏度和试剂消耗最少的决心大黄素在制剂和biofluids。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
作者欣然承认金融支持重点实验室的合成与天然功能分子化学教育部,中国,陕西省自然科学基金会(没有。2006 b05), NWU研究生创新和创造力基金(没有。10 yzz29和09年yzz45), NWU研究生实验研究基金、中国(没有。09年ysy18)。gydF4y2Ba