文摘

Spectrofluorometric量化分析的新一代抗抑郁药属于选择性5 -羟色胺再摄取抑制剂类和选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂。五种不同的药物,舍曲林、帕罗西汀、西酞普兰、文拉法辛和氟西汀,分析spectrofluorometric制药配方中检测和尿液和血浆样本。校准曲线发现荧光强度之间的线性和药物浓度范围内的5 - 500 ng /L系数确定在0.9985以上所有分析物。方法回收率均高于85%,所有的三个矩阵。观察内部和interday变异系数小于8%和13%,分别。检测的局限性(LOD)和量化(定量限)被发现在极限的范围0.016 - -0.084 ng /-0.285 ng / L和0.090分别L。此外,每个分析物的结果相比,统计发现在所有的三个矩阵和等价的,这意味着基体效应的缺失。因此,该方法将应用成功的决心表示药物在纯或剂型以及生物流体具有良好的准确度和精密度。

1。介绍

抗抑郁药物代表第一选择治疗中度到重度抑郁症压力和焦虑障碍和强迫症等抗抑郁药盖品种的药物有不同的行为模式对某些神经递质受体和转运蛋白。他们也通常被认为是1日,2日,3日或新一代取决于发达时(1]。新一代抗抑郁药是最普遍的一类药物,事实上成为首选的药物治疗抑郁症,因为他们被认为是更有效的比其他抗抑郁药组。这一类的高度规定类选择性血清素再吸收抑制剂(SSRIs)和选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂(snri类)2]。这两个类的一般管理药物舍曲林(SER),帕罗西汀(PAR),氟西汀(FLX),西酞普兰(CIT) (SSRIs),文拉法辛(甚低频)(去甲肾上腺素重摄取抑制剂),鉴于治疗重度抑郁障碍(图1)。抗抑郁药物的治疗药物监测提供了可能性减少副作用和优化治疗抑郁症患者。因此,有必要开发简单、可靠、快速、灵敏的分析方法测定这些代理的药品配方和生物矩阵。

几种方法已报告的测定气相色谱法(GC)等生物矩阵(3,4),高效液相色谱法(HPLC) [5,6),液相色谱串联质谱(质/ MS) (7,8),和胶束电动毛细管色谱法(9,10]。然而,先进的仪器和高分析成本有限的分析实验室的常规使用。

因此,发展替代常规分析方法是可取的。因此,这项工作的目的是开发简单、快速、灵敏的方法测定上述药物使用spectrofluorometric技术在生物体液。

荧光光谱测定法被认为是一个方便的分析技术由于其简单,成本低,广泛的可用性在大多数实验室。它测量荧光属性(发射)的化合物。发光物质的排放强度是线性分析物浓度成正比,因此,成为一个有用的工具等量化的物种(11]。荧光谱仪所提供的选择至关重要,调查涉及分子的电子和结构特点,是很有价值的定性和定量分析和分析工作。

在文献中,很少有光谱光度测量的方法测定已报告的新一代抗抑郁药物片剂剂型和生物液体。这些方法是昂贵的,因为他们需要各种昂贵的化学物质(12]。一些是基于形成离子对复杂的反应与溴甲酚绿(BCG),溴酚蓝(BPB)和溴百里酚蓝(BTB) [13];虽然一些基于电荷转移复合物的形成与氯醌,2、3 dichloro-5 6-dicyanoquinone和碘14]。也很少有基于的反应N-alky lvinylamine形成互动的自由二氨基的3种类型的药物haloquinones(氯醌、bromanil和2,3-dichloronaphthoquinone)给彩色vinylamino-substituted奎宁(15]。此外,分析反应和程序也耗时很长。

我们所知,没有发达的决心spectrofluorometric方法SSRIs和SNRI生物体液(尿液和血液),尤其是不使用任何化学溶剂。因此,本文代表SER的方法分析,PAR, CIT,甚低频,PAR制药配方和尿液和血浆样本。

2。材料和方法

2.1。化学物质

舍曲林、帕罗西汀、氟西汀、文拉法辛请提供Zydus Cadila制药(阿默达巴德,印度)。西酞普兰是洪流所提供的药物(阿默达巴德,印度)。平板电脑是来自不同公司的采购,舍曲林英联25毫克(Unimark制药工作室、昌迪加尔、印度);西酞普兰C-pram 10毫克(Unichem、Zirakpur、印度);帕罗西汀Cinpar-CR 25毫克(灰质、昌迪加尔、印度);氟西汀Afzot 20毫克(辉瑞,孟买,印度);文拉法辛FAXIVEN-XR 37.5毫克(Triton,钦奈,印度)。准备在水溶液Milli-Q水从微孔净化系统和所有实验在室温下进行。绘画纸滤纸。42是用来过滤解决方案。

2.2。生物样本

在正常情况下,尿液收集从健康志愿者血液采购时通过一个地方血库的等离子体离心后分离进行分析。样本存储在适当的polytetrafluoro-ethylene (PTPE)烧瓶−20°C到分析。

2.3。荧光光谱测定法的条件

Spectrofluorometric分析Jasco fp - 6500荧光谱仪。测量与10毫米石英进行细胞。它包括两个单色仪,选择两种类型的激发和发射波长(荧光)。Fluorometeric cuvetts都明确的石英和不透明(2国在紫外线)。激发和发射波长根据个人分析物的分析,总结在表1。氙气闪光灯作为光源。数据采集和分析进行了使用厂家提供的标准软件。图2显示所有分析物的发射光谱。在发射光谱(荧光),使用一个固定的波长激发的分子,而发出的辐射强度监测是波长的函数。

2.4。标准制剂

标准或股票的解决方案的所有分析物被溶解10毫克准备在10毫升的水为了得到1000 ng /μ股票的解决方案。药物的工作方案(5 - 500 ng /μL)准备从原液稀释了蒸馏的水每一天。股票和参考标准的解决方案是从光存储和保护在4°C 6个月。

2.5。来估计所有分析物的样品制备片剂剂型

分析平板配方的药物获得的(使用十片相应的特定化合物的分析)。平板电脑被提供一个均匀的粉末和数量相当于10毫克重10毫升容量瓶,溶解与水形成1000 ng /μ我的股票的解决方案。解决方案是Whatmann滤纸过滤没有。42。一个适当的体积的滤液稀释用水,这样所有的分析物的浓度在最后的解决方案是在工作范围内。股票的解决方案都是储存在4°C和稳定三个月被发现。激发和发射波长设置对于每个分析物,如表中所述1。

2.6。估计样品制备的尿液和血浆中的所有分析物

1毫升尿液样本,5毫克的酒石酸(对蛋白质沉淀)和1 (1000 ng / mL的股票解决方案μL)结合,离心机在3000 rpm,持续15分钟。是得到上清液用于进一步分析。上层清液是用蒸馏水稀释10倍。这种稀释是用于制备特定10 and100 ng /之间的尿药浓度μl .同时,空白样品也准备不强化药物。每个分析物的荧光强度是衡量在一个特定的发射和激发荧光谱仪波长(表1),浓度计算回归方程。

血浆样本由飙升0.5 1毫升的样品(1000 ng / mL的标准解决方案μL)感兴趣的分析物。这飙升样本处理1毫升的乙腈和1毫升的甲醇沉淀蛋白,然后离心20分钟的3000 rpm。上层清液转移到10毫升容量瓶,然后蒸发干燥。残留的重组与水痕。这种稀释是用于制备特定的血浆药物浓度10至100 ng /μl .空白样品也没有了飙升的药物。然后每个浓度的相对荧光被记录,和浓度计算回归方程。

2.7。验证的方法

我指导方法验证后(16,17]。浓度范围(线性)估计的基础上回归曲线和相关系数()获得药物的参考标准的解决方案)。研究的准确性提出了方法和检查辅料干扰出现在剂型中,复苏实验的标准添加法在三个不同的水平。一个已知的药物添加到preanalyzed平板粉,和复苏计算百分比。同样,对准确测定SSRIs和SNRI尿液和血浆样本,标准添加法是应用。的复苏药物决心在三种不同浓度的生物样本(尿液和血浆)。经济复苏的计算是通过比较得到的浓度上升与每个样本纯药物。

实验重复一天六次的三个不同浓度(三胞胎)来确定盘中精度和精度在六个不同的日子来确定interday制药配方,尿液和血浆样本。因此,重复性和再现性经重复相同的方法和不同的日子。检测极限(LOD),限制量化(定量限)估计的信噪比(S / N)。这些限制被定义为最低浓度水平提供了荧光强度与信噪比高于3:1检测和10:1量化。

3所示。结果和讨论

所选类抗抑郁药物显示本机强烈的荧光特性,因为它们包含孤立的芳环或荧光团的结构使荧光的性质。所有分析物的水溶性和兴奋时会发出特定波长荧光在特定波长。因此,兴奋的在一个波长和监测在发射的时间越长,发出的光波长变得非常有选择性的检测分析物的方法。

该方法的最佳实验条件下,intensity-concentration阴谋被发现线性范围的5 - 500 ng /μL的所有分析物。这些浓度在临床或治疗的满意的范围以及SSRIs和去甲肾上腺素重摄取抑制剂药物的毒理学分析(18]。该方法的线性回归数据表2。LOD和定量限的基础上评估信噪比三个十,分别。LOD和定量限达到0.016 - -0.084 ng /μ-0.285 ng / L和0.090μ分别L。

3.1。分析制药配方

盘中反复精度进行了研究分析,同日,六个复制三个不同浓度水平的线性范围内。从连续六天Inter-day精度值测定。确定执行的实验可重复性(inter-day),值得注意的是,的值相对标准偏差(RSD)小于7%为每个分析物在不同浓度。再现性研究(当天),它已被观察到,每个分析物的相对标准偏差小于12%。结果总结在表3。

复苏的方法在不同制剂的剂型为可能的干扰标准添加法进行了测试。经济复苏的决心通过添加已知数量的纯分析物一定数量的preanalysed平板样品分析浓度范围内的方法。个人的添加量药物被上面的估计方法。的平均百分比复苏(86 - 102%)获得令人满意的和良好的协议与标签数量(表4)。这显示了所选药物开发方法的准确性商业制剂。

3.2。尿液和血浆样品的分析

人们已经发现,口服后,所有分析物的生物利用度是70%以上。约20%仍然不变形式和咒骂的尿液,而等离子体浓度大约是20 - 200 ng /水平μL (18]。因此,精确的浓度范围选择和恢复研究治疗以及毒理学范围内biofluids中的所有分析物。采收率和标准差(SD)显示良好的精度。盘中inter-day精度研究从尿液和血浆样品测定三个不同浓度一式三份。实验来确定执行重复性(inter-day),值得注意的是,相对标准偏差小于8%的值为每个分析物在不同浓度在尿液和血浆。再现性研究(当天),它已被观察到,RSD小于12%为每个分析物在尿液和血浆样本(表5和6)。

它也观察到温度的增加有负面影响分析物的荧光强度由于分子之间的更频繁的碰撞和溶剂增加。同样通过减少溶剂粘度、荧光自动减少类似的原因。与基本官能团的分析物,pH值的变化可能会改变分析物的结构,因此,其荧光性质(11]。因此,控制这种严格的变量在室温下所有的分析,和水被用作溶剂。尿液尿素和尿酸等的主要成分,并没有显示任何类型的主要干扰影响分析。准确和恰当的感兴趣的分析物的定量测定尿液和血浆样本,使用标准添加法。尿液和血浆样本满意的复苏(表85 - 103%的范围7)。

3.3。统计分析

展示统计缺乏基体效应的情况下,以及回归分析的适用性,校准块被策划准备每个分析物浓度和排放强度之间的值。因此,分析了获得的数据之间的单向方差分析三组在95%置信区间。每组由三个不同浓度的分析物的强度。方差分析分析允许接受零假设,每个分析物的排放强度观察三个矩阵统计上是等价的,换句话说,有缺乏矩阵对每个分析物的排放强度的影响。方差分析的结果分析中描述表8。

虽然有数量的色谱分离过程进行了分析选择抗抑郁药物制剂和尿液和血浆。awever这样决定是耗费时间和需要专业知识来处理。因此,快速分析方法需要节省成本、时间和劳动力的分析。因此,记住这些方面的检测方法开发了爵士,PAR, CIT,甚低频,散装FLX剂型和生物液体。

4所示。结论

验证统计证实了该方法的标准偏差值低,变异系数比例和标准误差。该方法选择性和快速。它不受到任何干扰由于常见的辅料平板电脑(葡萄糖、淀粉、滑石、乳糖和蔗糖)或任何成分的血浆和尿液(尿素,尿酸)。此外,没有在分析用作分析试剂准备工作和标准的解决方案都是在水里。方法很简单,成本效益,不包含任何严格的实验变量影响结果的可靠性。因此,很明显从开发方法的结果将为舍曲林常规分析非常有用,帕罗西汀、西酞普兰、文拉法辛和氟西汀药物配方和尿液和血浆和其他生物液体。