文摘

脂氧合酶(lox)形成同源非血红素家族,非硫含lipid-peroxidizing铁酶,催化dioxygenation多不饱和脂肪酸的相应hydroperoxy衍生品。大豆lipoxygenase-1 (Lox-1)被广泛用作原型为研究脂肪氧合酶的结构和功能的性质。大豆胰蛋白酶的消化Lox-1生产60 kDa片段,称为“mini-Lox”,显示增强的催化效率和膜结合能力高于本机酶(m . Maccarrone马丁Salucci, g . van Zadelhoff f . Malatesta g . Veldink J.F.G. Vliegenthart和a . Finazzi-Agro生物化学40(2001),6819 - 6827)。在这项研究中,我们调查的稳定性mini-Lox在盐酸胍盐(GdHCl)和高压下荧光和圆二色性光谱。变性实验证明mini-Lox是一个相当不稳定的分子,它经历了一个两步展开过渡。化学和physical-induced变性表明mini-Lox比Lox-1水化,观察也证实了1 - 8 anilinonaphtalene磺酸结合研究。我们也调查了发生substrate-induced蛋白质三级结构的变化的荧光技术。特别是eicosatetraynoic酸(ETYA),脂肪氧合酶的不可逆抑制剂,被用来模拟底物结合的效果。我们证明mini-Lox确实具有更大的构象变化比发生在本机Lox-1 ETYA绑定。所有这些研究结果强烈支持的假设更大的水化mini-Lox呈现这个分子更灵活,因此更不稳定,另一方面可能是导致其高催化效率。