文摘
胃肠道线虫的主要限制因素(杜松子酒)畜牧生产在世界范围内的成功。耐药性菌株的出现以及稀缺性和现有药物导致的高成本的评估其他寄生虫控制选项,主要来自植物。目前的研究旨在调查在体外打虫药疗效的原油methanolic提取两个传统上重要的药用植物,艾herba-alba和石榴,而Haemonchus contortus使用成人运动性化验(AMA)和鸡蛋孵化抑制试验(EHIA)。四个梯度浓度的提取进行了测试的AMA(10 5 2.5和1.25毫克/毫克)和EHIA(0.1, 0.25, 0.5, 1毫克/毫升)的复制。阿苯达唑和磷酸盐(AMA)或蒸馏水(EHIA)作为积极的和消极的控制,分别。原油中提取的一个。herba-alba和P。granatum表现出一个潜在的打虫药活动在所有剂量水平的浓度和时间的方式。最高浓度(10毫克/毫升)的提取造成显著( )上级nematocidal活动比消极的控制。此外,重大和浓度蛋孵化抑制植物提取物效果观察。最大(98.67%)蛋孵化抑制效应表现出了花中提取的一个。herba-alba1毫克/毫升的浓度。相对蛋孵化抑制效果表明,植物造成显著( )更大的蛋孵化抑制在48小时的曝光。当前的研究验证了传统使用的植物天然的驱虫剂H。contortus证明需要进行详细的药理学和毒理学调查在两个工厂。
1。介绍
胃肠道线虫(杜松子酒)仍然是一个主要威胁全世界小反刍动物的健康和福利(1]。杜松子酒代表了经济发展的主要障碍在反刍动物系统通过死亡率,减肥,减少了牛奶和肉类生产(2,3]。在埃塞俄比亚,总损失8180万美元每年报告是由于寄生虫寄生虫(4]。
Haemonchus contortus是一个重要的abomasal小反刍动物负责疾病的寄生虫和全球主要生产损失5]。此外,它是一个主要的家畜寄生虫在热带和温带农业地区6]。与其他线虫相比,H。contortus是小反刍动物的高致病性寄生虫并能引起急性疾病和高死亡率在所有类的股票7]。沉重的负担的食血寄生虫能引起严重的贫血和快速死亡影响牲畜(5]。据报道是绵羊和山羊生产的十大约束在东非(7]。
杜松子酒控制有着重要的作用在提高畜牧业生产从有限的自然资源基础和改善动物健康和福利8]。合成驱虫剂代理通常用来控制杜松子酒(9]。然而,不当和独家应用这些药物导致了广泛耐药寄生虫的发展。反过来,这残留的风险增加这些动物的肉和奶和环境(5,10]。此外,这些合成代理很可能无法负担的和昂贵的。因此,对替代控制措施的需求不断增加在过去的年1]。因此,药用植物在民间医学可以作为一种负担得起的和有效的打虫药制剂(11]。在当前的研究中,我们试图将传统声称驱虫剂活动的上下文中两种植物的实验证据。
这种植物艾herba-alba(Chukun阿姆哈拉语),这属于菊科家庭,用作驱虫剂代理以及其他常见应用程序在民间医学(12,13]。千屈菜科的家庭,石榴(罗马)对胃肠道线虫(14]。P。granatum被用在自然和整体医学驱逐绦虫和治疗各种疾病(15,16]。因此本研究的目的是评估在体外驱虫剂这些植物提取物的抑菌效果H。contortus。
2。材料和方法
2.1。植物样品的收集
基于初步采访对象包括牲畜饲养者Midaga-Tola区,两个工厂(一个。herba-alba和P。granatum)被选中。这些植物是常用的作为驱虫剂代理商在埃塞俄比亚的药。因此,鲜花和天线部分的茎和叶一个。herba-alba皮和根的部分P。granatum收集从他们周围的自然栖息地Midaga-Tola区,东Hararghe区,582公里远离亚的斯亚贝巴。草药收集植物的识别是由分类学者在植物科学部门的植物标本,Haramaya大学,凭证标本(AH001/17一个。herba-alba和AH002/17P。granatum为未来的引用)沉积。
2.2。植物提取物制备
阴凉干燥,收集植物材料清洁机械,并使用实验室研钵和研杵粗粉。然后,粉标本受到冷浸渍提取技术使用甲醇溶剂系统72人力资源。对于每一个样本,共计250 g的粗粉植物材料分别浸泡在提取溶剂(1:10)。提取过程是促进使用机械搅拌器在120 rpm。同样体积的溶剂被用于remacerate另一个72小时的残渣,两次。最后,滤液被重组,集中在rotavapor(瑞士Buchi)在40°C下减压。此外,浓缩滤液在冻干机,冻干干提取。
提取干重,提供百分之一的收益率为14.3% ( )和12.5% ( )花和空中的部分一个。herba-alba,分别。提取的皮和根P。granatum另一方面,收益率为13% ( )和9.4% ( ),分别。结果提取被转移到已标示瓶和保存在冰箱里,直到所需的使用。
2.3。植物化学的筛选
所有提取筛选的存在和缺乏不同的植物化学物质。使用传统的协议标准筛查、过程和试剂进行了识别中描述的选民Trease和埃文斯17]和Sofowora [18]。
2.4。生物测定
2.4.1。收集的寄生虫
成人的寄生虫H。Contortus收集从取得的羊皱胃Haramaya市政屠宰场。屠宰后立即皱胃收集和运输Haramaya大学的兽医寄生虫学实验室。在实验室里,皱胃被自来水洗和蠕虫被孤立的雕饰大曲率abomasa和寄生虫在磷酸缓冲盐(PBS)直到在体外评估开始。雌性蠕虫被地面使用杵和臼解放鸡蛋。
2.4.2。成人运动性化验(AMA)
总共约368成年人H。contortus寄生虫被用来评估提取物对成熟的打虫药效果H。contortus蠕虫在成人运动性化验(AMA),根据Sharma描述的技术et al。19]。每个植物提取物不同浓度测试(10 5 2.5和1.25毫克/毫升)准备在PBS。
试验进行了六组。第二组我和组收到粗甲醇提取物和花的天线答:herba-alba,分别。第三组是处理粗甲醇提取的P。granatum皮部分在第四组收到的甲醇提取物P。granatum根的部分。集团V和VI收到0.25毫克/毫升的阿苯达唑(积极控制)和PBS(负控制),分别。
抑制活性被视为虫死亡率/瘫痪。评估活性提取物的抑制效应,以固定时间间隔被观察到7th小时后治疗。蠕虫不显示任何能动性被取出,放在温水PBS 10分钟,在运动性复苏的情况下,观察到的虫子被算作活着;否则,他们算作死了。
2.4.3。鸡蛋孵化抑制试验(EHIA)
提取物抑制卵孵化的能力是根据高斯过程描述进行et al。20.]。鸡蛋是洗了三次蒸馏水和调整100 - 200鸡蛋/毫升的浓度使用麦克马斯特技术(21]。暂停在1500转离心5分钟,浮在表面的被丢弃。大约,200年100个鸡蛋μL的蒸馏水也用移液器吸取到每个48-well微量滴定板。每个试验井,200μL每个植物提取物浓度的0.1,0.25,0.5,1毫克/毫升于400年添加到最后一卷μL /。同样,200年μL(阿苯达唑(99.8%的纯标准参考)浓度为0.25 mg / mL被用作积极控制,而蒸馏水(200μL)作为消极的控制。每个浓度的实验是在重复进行三次和复制。在这个试验中,所有板块在37°C 48小时孵化。一滴Lugol的碘溶液添加到每个停止进一步孵化,和所有未孵化的鸡蛋和L1幼虫在每个解剖显微镜下计数。最后,鸡蛋孵化的抑制百分比计算:
在哪里P= EHIA的蛋孵化。
2.4.4。数据分析
数据组织、编辑、分析使用SPSS版本20。从化验结果生成进行了分析与单向方差分析其次是图基HSD多重比较。小于0.05被认为是具有统计学意义的价值。
3所示。结果
3.1。植物化学的筛选
植物的植物化学的初步筛选材料揭示了生物碱的存在、皂甙、黄酮类、单宁、苷、酚类提取物(表在所有的测试1)。此外,强大的生物碱的存在、单宁类黄酮苷类,酚类,根粗提物的检测P。granatum。
3.2。成人活性测试
目前的研究表明,所有methanolic花和地上部分提取物的浓度一个。herba-alba以及methanolic皮提取物的浓度最高P。granatum产生一个相对可比驱虫剂活动与传统的打虫药剂、阿苯达唑(图1)。植物提取物的打虫药活动随时间增加。因此,7小时后接触的成人H。contortus最高浓度(10毫克/毫升)的提取物,植物产生显著( )死亡的成年H。contortus。阿苯达唑,另一方面,杀死了所有寄生虫在5人力资源在浓度为0.25毫克/毫升(表2)。
3.3。鸡蛋孵化抑制试验
这两个一个。herba-alba(花和空中提取)p . granatum(皮和根提取物)诱导显著蛋孵化抑制效应浓度的方式。花和空中methanolic提取部分答:herba-alba表现出抑制98.67%和88.3%,分别在1毫克/毫升的浓度。此外,鸡蛋孵化的抑制效果P。granatum提取,比例的蛋未孵化的末端的观察期,如下;46.33%和49.33浓度为0.1毫克/毫升,在0.25毫克/毫升60.67和54.33,72.67和68.33为0.5 mg / L, 1和94.63和90.33毫克/毫升的浓度皮和根粗提取,分别(图2)。
值是 。所有标指示意义 ,一个与未经处理的(PBS)相比,b阿苯达唑相比,c而methanolic提取物的最低浓度一个。herba-alba花,d而methanolic提取物的最低浓度一个。herba-alba地上部分,e而methanolic提取物的最低浓度P。granatum皮部分,f而methanolic提取物的最低浓度p . granatum根。
4所示。讨论
耐药菌株的出现,驱虫剂的存在药物残留在动物产品,和合成药物的毒性导致了重生的兴趣使用天然产品(22]。植物材料的测试在体外驱虫剂活动在目前的研究中发现了当地牲畜饲养者。在体外技术,如美国医学会和EHIA首选在活的有机体内方法由于其低成本、简单和快速周转23]。此外,对于在体外研究中,H。contortus被证明是一个好的测试蠕虫病毒,因为它不再在PBS生存。最近这abomasal寄生虫在体外其他工人的研究(23,24]。
在当前的在体外研究中,10毫克/毫升甲醇浓度皮提取的P。granatum产生了显著驱虫剂活动与传统的打虫药剂相比,阿苯达唑。这一发现是另外符合临床研究,证实了植物对线虫的功效在小牛25),优于一个在体外研究报道适度打虫药皮的活动P。granatum(26]。此外,类似于一个研究由普拉卡什et al。27的酒精萃取物P。granatum,我们的研究表明一个重要的打虫药活动揭示了植物的浓度抑制卵到幼虫的转换H。contortus。
一些以前的作品同样表示P。granatum对绦虫、线虫有显著影响(28)以及原生动物感染(29日]。此外,我们的研究证实了以前的报告的传统应用程序P。granatum植物,植物的各个部分可以作为一个传统的打虫药剂(30.,31日]。
植物,一个。herba-alba,主要用作驱虫剂剂在传统10]。整合,在目前的研究中,EHIA花甲醇提取部分一个。herba-alba诱导一个重要蛋孵化抑制98.67%,1毫克/毫升的浓度。这是符合一项研究由Boonmasawai et al。11)拍摄的部分是用作驱虫剂H。contortus感染绵羊作为其蛔蒿素的结果。结果展示在AMA的工厂,此外,与先前报道的协议活动在同一属的植物,一个。苦艾,显著影响能动性和可行性H。contortus,在体外(32]。此外,属富含倍半萜烯内酯和黄酮可能驱虫剂哺乳动物毒性风险较低的活动(33]。
表现出两个工厂的打虫药效果可能归咎于现有的次生代谢物。Joshi et al。34同化,单宁可能施加驱虫剂活动通过减少孵化,阻碍其发展的感染性幼虫阶段,降低成年人的能动性。此外,单宁可以干扰耦合的氧化磷酸化和块ATP合成H。contortus(35]。王等人。36已确认的打虫药疗效的植物性生物碱。主机上的环境刺激导致幼虫酶的释放,降低鸡蛋膜(37]。植物生物碱的作用在这两个可能与抑制这些酶的活动。
一旦植物已被证明其效率在体外,进一步在活的有机体内测试将需要确认结果和评估风险,副作用,和未来的适用性38]。因此,在活的有机体内之前打虫药评价这些植物是必要的临床使用。
5。结论
的在体外打虫药的活性测试植物的特点是降低孵化和减少蠕动的幼虫和成人阶段H。contortus。因此,他们有潜在贡献控制反刍动物的胃肠道寄生虫。因此,原油的分离提取和分离的化合物进一步评估这些植物的打虫药疗效涉及其他寄生虫的发展阶段是必要的。
缩写
| AMA: | 成人活性测定 |
| ATP: | 三磷酸腺苷 |
| EHIA: | 鸡蛋孵化抑制试验 |
| 杜松子酒: | 胃肠道线虫 |
| PBS: | 磷酸缓冲盐。 |
数据可用性
在合理的请求,支持数据集可从相应的作者。此外,干标本检测植物和他们的凭证号码存入Haramaya大学植物标本。
伦理批准
本研究工作是研究和伦理委员会批准Haramaya大学的埃塞俄比亚。
的利益冲突
作者宣称他们不会面临任何利益冲突。
作者的贡献
Aliyi•哈桑•艾哈迈德Mebrat Ejo,与Teka Feyera构思。收集的植物材料Aliyi•艾哈迈德。所有的实验都是由Dereje Regassa, Bahar妈妈,和Aliyi•哈桑。Aliyi•艾哈迈德进行实验。数据分析是由Mebrat Ejo,与Teka Feyera,所罗门Assefa Huluka, Dereje Regassa,和Bahar妈妈。手稿是由所罗门Assefa Huluka和与Teka Feyera。所有作者阅读和批准最终的手稿。
确认
作者感谢贡德尔Haramaya大学大学提供金融支持和实验室设施,分别。