体外的驱虫剂的评估活动萝芙木属vomitoria(夹竹桃科)干细胞对寄生阶段的树皮和树根曼氏裂体吸虫和细胞毒性的研究

文摘

血吸虫病是一种被忽视的热带疾病是可以预防和质量除寄生虫化疗。依赖单一药物吡喹酮,是小说的动机搜索antischistosomal化合物。本研究调查的干树皮和树根的打虫药活动萝芙木属vomitoria对两个阶段的生活曼氏裂体吸虫。植物部分被发现是积极反对cercariae和成虫。2 h内暴露所有cercariae丧生的浓度范围62.5 -1000µ克/毫升和250 - 1000µ克/毫升r . vomitoria干树皮和根,分别。LC₅₀价值观决定的干树皮1和2 h后分别为207.4和61.18µ分别g / mL。所有成虫暴露于250 - 1000的浓度范围µg / mL 120 h内死于孵化植物部分。常对HepG2和肝细胞细胞毒性影响评估使用MTT测定方法表明,这两种植物提取物的抑制与IC细胞系的增殖₅₀> 20μg / mL似乎是安全的。这份报告提供了第一个体外schistosomicidal效力的证据r . vomitoria茎皮是适度,但相对更加活跃和选择性血吸虫寄生虫。这表明有前景的药用成分的存在。

1。介绍

血吸虫病(或血吸虫病)被称为全球最普遍的热带病之一。它是排名第二被忽视的热带疾病导致的死亡人数而言(1]。血吸虫病是负责每年超过200000人死亡仅在撒哈拉以南非洲地区(2]。疾病更出名的是它的长期性和衰弱发病率导致高成本在发展中国家的公共卫生和经济生产力3]。

尽管公共卫生的重要性血吸虫病和疾病的风险可能进一步传播和强化,血吸虫病流行国家控制项目主要基于化疗(4]。像今天对一些被忽视的热带疾病如锥虫病和利什曼病、血吸虫病的治疗几乎是困难和有毒,直到1970年代,吡喹酮(PZQ)被发现5,6]。1988年,PZQ被带到市场(5),这是迄今为止唯一可用的药物和世界卫生组织(WHO)推荐的治疗和控制血吸虫病(6]。这种药物是安全的,有效的对所有裂体吸虫属物种(7),用于过去30年。PZQ不是免费的问题,尽管它是安全和耐受性良好。例如,几十年的大规模和独家使用单一药物也明显增加合法担心迟早会出现[PZQ-resistant血吸虫病7]。此外,PZQ针对成人血吸虫蠕虫,但它对血吸虫病的年轻阶段是低效的,像schistosomula preadults,成年人和青少年。因此,重复治疗有时是必需杀死那些已经成熟的寄生虫。

在单一药物治疗疾病,影响数以百万计的人在不同的地理区域是一个真正的问题。因此,必须开发新的有效和安全antischistosomal药物。新型药物的发展越来越需要对血吸虫病主要从天然来源,近年来,领导科学界加强寻找潜在schistosomicidal代理。天然产品,主要是植物,几千年来一直在药品的来源(8]。高等植物被用作天然来源新药物先导物的发现,从药用植物的科学评估用于制备偏方为现代医学提供了有效的药物治疗由寄生虫引起的疾病。例如,青蒿素、奎宁,licochalcone植物衍生产品(9]。不同分子结构的其他天然产品显示抗寄生物的效力在实验室和代表有趣的结构发展的新和急需的抗9]。纯化合物的发现植物中活跃的原则是第一次描述了19世纪初(9]。结果,一些从植物中提取或天然化合物与承诺antischistosomal属性已确定(9- - - - - -15]。在这种背景下,自然产品和自然product-derived化合物也好都尽可能的控制和治疗血吸虫病的新药。这些新化合物对血吸虫的功效是使用不同的策略定义如治疗策略,通过杀死成年蠕虫;预防策略,通过杀死cercariae schistosomula;抑制策略,通过抑制蠕虫产卵。因此,几个参数,如汽车活动,形态/ tegumental变化,和产卵,通常评估指标与血吸虫物种的生物活性和毒性研究(16]。

萝芙木属vomitoria是一种热带灌木属夹竹桃科的家庭。在非洲,草药制剂由这种植物的各个部分。然而,根、根皮、树皮和干的这种植物被广泛使用,尤其是对他们的春药,antipsoric,流产,杀虫,痢疾、驱虫剂,涩,强心剂,发汗的,催吐剂,祛痰剂、止血剂、降血压药、外伤药,febrifugic属性(17]。他们也用于传统医学治疗各种疾病如发烧、全身无力、胃肠道疾病、肝脏疾病、精神病、痛苦,癌症(18]。ethanolic提取的r . vomitoria已被证明含有生物碱、丹宁酸、皂甙、黄酮类化合物、类固醇、萜类化合物,和心脏苷(19]。各种生物碱分离从这种植物18,20.),这些生物碱分离出茎和根。这些显示生物活性如抗疟、抗癌,schistosomicidal属性。生物碱的r . vomitoria被发现有抗癌活性18,21]。的提取r . vomitoria被用作2000多年在非洲传统医学用于治疗高血压和精神障碍和最近的研究已经证实其有效性作为抗精神病药物,抗高血压和抗炎剂,改善血液化学。在加纳,根标本r . vomitoria被用作催吐剂、泻药和治疗皮肤寄生虫病(22和黄疸及胃肠道功能紊乱23]。据报道,树皮r . vomitoria可以用来对付寄生虫如虱子和疥疮。Attah et al。(2013)显示,根的r . vomitoria拥有antifilarial属性对盘尾属肠扭结(24]。在这项研究中,我们评估的根和茎皮r . vomitoria作为一个重要但不清楚的方面schistosomicidal效应在两个不同的生活阶段美国曼。两种植物提取物对哺乳动物细胞随后被筛查:人类肝癌细胞系(HepG2)和常肝细胞系细胞毒性的支票。

2。材料和方法

2.1。化学物质

乙醇、3 - (4,5-dimethyl thiazol-2-yl) 5-diphenyl溴化四唑(MTT),胎牛血清(的边后卫),磷酸缓冲盐(PBS),杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)、抗生素(青霉素和链霉素),RPMI 1640年,胰蛋白酶,二甲亚砜(DMSO),盐酸,和异丙醇从西格玛奥德里奇有限公司获得美国。

2.2。收集的植物材料

的干树皮和树根r . vomitoria收集在Mampong,加纳,在2016年和认证的工厂开发部(PDD)植物医学研究中心(CPMR)和凭证标本存放标本的PDD(凭证标本编号3827 - 3829)。

2.3。植物提取物的制备

植物提取物的准备如前所述[19)做了一些调整。短暂,茎皮和收集植物的根风干在室温(25日至27日°C),磨粉。每个粉材料受到提取使用绝对乙醇(99%)。一(1)公斤粉厂的部分在2 L的乙醇溶剂浸渍玻璃容器72 h后在室温下的过滤与绘画纸1。每个植物提取物的滤液蒸发在55°C下减压使用旋转蒸发器(Buchi Rotavapor, R 200)获得粗提物。每个提取的总萃取率表示为一个百分比约为11.2%和15.1%,分别r . vomitoria干树皮和根。植物提取物是储存在−20°C到使用。

2.4。体外研究美国曼

2.4.1。股票和植物提取物的解决方案工作

体外研究进行了两种不同的生命阶段美国曼,cercariae和成虫。股票的解决方案提取的提前准备100毫克/毫升的浓度在100%二甲亚砜(DMSO,默克公司,德国)。股票的解决方案被整除,保持在−20°C。生物测定,工作解决方案被稀释股票刚做好的解决方案到10毫克/毫升用蒸馏水cercariacidal活动和RPMI 1640与成虫药物敏感性测定。最大的最终化验≤1% DMSO溶液的浓度。自DMSO是细胞毒性更高的浓度,我们测试了DMSO浓度的1%,没有发现任何破坏性影响的生活阶段的寄生虫。对于每一个实验,1% DMSO溶液作为溶剂的控制。

2.4.2。动物

一个非洲的美国曼,来自加纳、维护实验室使用Biomphalaria pfeifferi蜗牛和女性远系繁殖ICR小鼠。所有动物实验进行的动物实验部野口纪念医学研究所(NMIMR),之后NMIMR机构动物保健和使用委员会(NIACUC)动物福利法规。

Four-to-five-week-old ICR小鼠获得植物医学研究中心(CPMR) (Mampong-Akwapim、加纳)。所有的动物都被允许调整1星期受控条件下(温度、ca。22°C;湿度、ca。50%;12 h光和12 h黑暗周期;免费的啮齿动物的饮食和水),然后开始实验。老鼠tail-infected 150美国曼cercariae和牺牲在感染后12周。

的蜗牛b . pfeifferi是血吸虫中间宿主蜗牛美国曼,收集来自流行地区在自然栖息地Tomefa在加纳Weija河沿岸。蜗牛蜗牛被运送到了实验室的寄生虫学,NMIMR,维护。他们检查了cercariae脱落和保存在塑料水族馆50蜗牛每水族馆包含dechlorinated自来水在室温(25°C)。

2.4.3。制备尾蚴的悬架

从实验感染血吸虫cercariae得到b . pfeifferi蜗牛。短暂,五个实验室感染蜗牛大约4周和已知剥离cercariae放入试管中包含2毫升蒸馏水和允许棚cercariae人造光源,让他们在28°C±1 2 h。的cercariae 50μL是显微镜下计算样本一式三份,平均计算用于anticercariae评估平均20 cercariae当时估计。实验小鼠感染,每只动物被曝光的尾巴悬挂的大约150——在玻璃试管cercariae 60分钟。

2.4.4。准备工作的成年人美国曼蠕虫

十二(12)周后感染,ICR小鼠安乐死与氯仿和解剖。成虫都恢复从肝门静脉和肠系膜静脉灌注柠檬酸盐(氯化钠0.85%;1.5%柠檬酸钠)如前所述20.]。血吸虫病在洗RPMI 1640培养基补充10%胎牛血清的边后卫,100 U /毫升青霉素,100μ美国g / mL链霉素(西格玛奥德里奇)和统计。蠕虫是转入RPMI 1640培养基,修改消息灵通的20毫米和谷酰胺,碳酸氢钠。

2.4.5。体外Cercariacidal活性试验

一系列粗糙的植物提取物浓度(31.25、62.5、125、250、500年和1000年μg / mL)在24-microtiter刚做好的板(配角),与积极的分析与控制(青蒿琥酯10μg / mL)。平均数量的20刚摆脱cercariae也转移到每个板使用微量吸液管(配角)。相同数量的cercariae是放置在一个包含1% DMSO -控制。所有的实验都是在重复,重复进行。的机动性和生存能力裂体吸虫属感染性阶段(cercariae)观察2小时30分钟每隔30分钟因为传染性cercariae是迅速失去了12 h后(25]。影响自由游泳的幼虫、固定和死cercariae井的底部与倒置显微镜观察到4 x放大(奥林巴斯CK 300)。生存和死亡的连续区间15、30、60、90、120和150分钟都被记录下来。Cercariae推定死亡当他们停止运动,沉下来,他们的尾巴是分离(26]。LC₅₀值的植物提取物血吸虫cercariae测定1 h和2 h。最小致死浓度(多层陶瓷),杀死所有cercariae,所需的最低浓度和最小有效浓度(MEC),这是所需的最低浓度观察cercariae可行性或形态学的改变,2 h后确定。

2.4.6。药物敏感性试验与成虫

与成人的体外药物敏感性测定血吸虫蠕虫,RPMI 1640培养基,修改消息灵通的20毫米和谷酰胺,没有碳酸氢钠和补充10%的边后卫,青霉素和链霉素1%用移液器吸取(2毫升/)的平底24-well盘子。蠕虫是分布式一双每口井的成虫和37°C 5%孵化有限公司₂氛围2 h,以便适应之前添加不同浓度的植物提取物。最后每个粗糙的植物提取物浓度的250年,500年和1000年μg / mL的最后一卷2毫升/。成虫孵化只有介质和介质有1% DMSO(药物浓度最高的溶剂使用)担任负面和溶剂控制,分别。积极控制,成虫和10孵化μ克/毫升PZQ。2 h后的孵化成虫个体井可行性的倒置显微镜下观察。植物提取物对蠕虫的效果评估(如前所述1,13,14,27- - - - - -29日]。寄生虫对120 h和人员每24小时监控评估他们的一般情况与强调虫运动活动的变化(活性),形态/ tegumental变化,配对的变化,和死亡的蠕虫放大4倍在倒置显微镜下(300年奥林巴斯CK)。死亡是没有运动的观察评估至少2分钟的考试和其他观察跨度为没有运动。表型变化记录手动之前报道,who - tdr (30.)和加州大学旧金山分校桑德勒中心(31日]。短暂的变化转化为“严重程度得分”使用可行性范围从0(严重受损)3(无效):(0 =所有虫子死了,1 =最小活动(严重减少运动性),严重的形态/ tegumental变化,2 =减缓活动(减少运动性),第一形态/ tegumental变化,3 =完全至关重要,通常活跃,没有形态变化)基于标准化合物筛选程序。所有的实验进行了一式三份,至少重复两次。

2.5。准备提取的细胞毒性

两个工厂部分显示活动对两个寄生虫阶段测试浓度响应(CR)分析对两种细胞系:HepG2(人类肝癌)细胞株从美国采购类型文化集合(写明ATCC)和Chang的肝脏从欧洲获得验证细胞培养(ECACC)的集合。股票肝脏细胞HepG2和张,分别在DMEM和RPMI1640培养。每个介质与10%的边后卫和1% penicillin-streptomycin补充和文化被孵化在37°C下5%的股份有限公司₂在充分湿润条件下,直到80%的融合。股票文化是生长在25厘米²培养瓶和细胞脱离表面的培养瓶0.25%胰蛋白酶溶液。所有的实验都是在乘96孔进行微量滴定板(美国康宁公司合并)。

植物提取物的新股票的解决方案是由DMEM (HepG2细胞)和RPMI1640 (Chang肝细胞)补充10%的边后卫和1% penicillin-streptomycin获得10毫克/毫升浓度和消毒过滤。连续两个稀释股票的准备。单层细胞培养是使胰蛋白酶化和细胞计数被调整至1.0×10⁵细胞使用DMEM /毫升或相应RPMI1640 penicillin-streptomycin含有10%的边后卫和1%。每个好96 -微量滴定板,100μL细胞悬液稀释的大约100000个细胞的密度是镀。孵化24小时后,部分单层形成时,细胞治疗的另一个72 h和不同浓度的植物提取物(62.5 -1000μg / mL)和姜黄素(2.30 - -36.84μM)积极控制。随后,20μL(2.5毫克/毫升麻省理工在PBS被添加到每一个细胞,孵化为另一个4 h。沉淀MTT-formazan产品于100年解散μL (0.04 N HCl-isopropanol在黑暗中,在室温下过夜。甲瓒形成的量测量的波长570 nm使用标(TECAN无限M200 Pro板读者,奥地利)。细胞毒性计算活细胞的比例相对于控制文化使用以下公式: 测试药物抑制细胞生长所需的浓度50% (IC₅₀)值为每个细胞株产生的剂量反应曲线。

2.6。选择性指数(SI)

在目前的研究中,每个植物乙醇提取物的程度的选择性和IC的比值表示₅₀获得了LC的细胞系₅₀为美国曼cercariae。

2.7。统计分析

图绘图和统计分析进行使用GraphPad软件(版本7.00)。数据被表示为±SD,和学生的以及用于确定平均值之间的差异的重要性。一个小于0.05被认为是具有统计学意义的价值。

3所示。结果

3.1。体外研究Cercariae:倒置显微镜评估

r . vomitoria干树皮和树根显示不同cercaricidal效力美国曼cercariae这活动是在更高浓度的提取更加明显。孵化与不同浓度的影响r . vomitoria根和茎皮中提取的可行性cercariae长达2 h和30分钟描述了数据1和2。的接触美国曼cercariae乙醇提取r . vomitoria15、30、60、90、120、和150分钟cercariae的死亡率的增加。没有的植物提取物,cercariae显示正常的生存没有任何形态变化(尾损失)2 h。

在这项研究中,anticercarial活动被定义为一个信用证₅₀< 1000的价值μ克/毫升。孵化后,r . vomitoria茎125 - 1000的浓度μg / mL, cercariae 1 h内生存能力显著降低。在最高浓度(1000μg / mL),在90分钟(图完成死亡率1),没有运动观察孵化后60到90分钟。1 h, cercariae孵化与31.25μ克/毫升r . vomitoria茎皮显示放缓动作而cercariae孵化为62.5 -500μg / mL显示严重减少活动。然而,2 h与62.5孵化后,125年,250年和500年μ克/毫升r . vomitoria茎皮有100%的死亡率(图1)。31.25所有cercariae孵化μg / mL显示死亡率100% 2 h和30分钟时间点。因此,多层陶瓷和MECr . vomitoria茎皮2 h后cercariae确定是62.5和31.25μ分别g / mL。

另一方面,r . vomitoria根效果低于干树皮。没有观察到的效应在cercariae低浓度的31.25和62.5μg / mL 90分钟的时间点。然而,所有cercariae浓度更高(500和1000年去世μg / mL)在90分钟时,享年250岁μg / mL,完整的死亡发生在2 h(图2)。2 h时间点,cercariae孵化与31.25 - -62.5μ克/毫升r . vomitoria根仍然显示正常运动控制相比,虽然,享年125岁μ带尾g / mL, cercariae活动减少损失。因此,多层陶瓷和MECr . vomitoria根在cercariae 2 h后决定250年和125年μ分别g / mL。

LC₅₀值1 h和2 h后测定植物提取物(表1)。LC₅₀的值美国曼cercariae使用r . vomitoria茎皮明显不同(曝光时间)的1 h和2 h,分别。这些值通常是低于获得相同的曝光时间r . vomitoria根(表1)。没有cercariae对照组死亡或显示显著的行为变化在2 h的接触。的r . vomitoria茎皮中提取显示更明显cercaricidal效力比r . vomitoria的根源。

3.2。体外分析成人美国曼蠕虫

我们分析了乙醇提取物的schistosomicidal活动两部分r . vomitoria(干树皮和根)美国曼成虫和活动被定义为一个抑制值< 1000μ克/毫升。的微分schistosomicidal活动r . vomitoria提取得到的显微观察美国曼成虫孵化和两个植物提取物的浓度范围250 - 1000μg / mL检查分离耦合对,蠕动减少,形态变化,和死亡率使用可行性范围从0到3。的剂量反应关系r . vomitoria在成虫120 h在表2。女性和男性血吸虫病控制显示正常生存在48 h和减少运动性从72 h和仍然可行的120 h。24小时后显示减少运动性孵化血吸虫病r . vomitoria茎皮(表2)和严重减少运动性r . vomitoria根(表2)伴随着配对蠕虫的分离。所有成虫暴露于250年μ克/毫升r . vomitoria根和茎皮已经死了120 h内孵化(表2)。在植物提取物的存在,发现女性比男性相对更加活跃在48 h,虫皮出现黑暗和不透明。

3.3。细胞毒性的r . vomitoria干树皮和根

基于对cercariae和活动美国曼成虫,在目前的研究中,干细胞的体外细胞毒性树皮和根乙醇提取物r . vomitoria评估在不同浓度(62.5 -1000μg / mL)对人类肝癌HepG2常和正常肝细胞株。百分比的细胞毒性研究的结果发表在条款的可行性细胞增殖(表3)。

乙醇提取的细胞毒性百分比r . vomitoria被发现剂量依赖和浓度增加而增加(图3)。剂量反应曲线(图3)的影响r . vomitoria常对人类HepG2和肝细胞被用来定义集成电路₅₀提出了在表4。仅考虑细胞毒性,这两种植物提取物没有强烈对HepG2细胞毒性,常与IC肝细胞系₅₀大于20μ克/毫升。

看着植物提取物作为驱虫剂,我们定义了选择性指数(SI)(表4)。在这项研究中,茎皮的如果是1.26张肝细胞(正常细胞线)和8.01 HepG2(癌症线)虽然小于1根细胞系(表4)。

考虑到提取的抗癌效应,如果对正常细胞行显示是0.16和1.56,分别为干树皮和树根。因此,茎皮似乎非常少有毒癌症肝细胞系但相对正常肝细胞株毒性而根似乎更有毒抗癌细胞比正常细胞。

4所示。讨论

研究药用植物作为实验治疗血吸虫病的新方法是可行的和有希望的研究项目之一。世界卫生组织鼓励对药用植物的研究,考虑到某些传统知识有疗效的植物可以添加新药品的开发特别是抗击疾病不发达国家的人口32]。文献搜索显示,许多植物被用来治疗血吸虫病在许多非洲文化(11,33- - - - - -35]。在马里ethnopharmacological调查报道55植物30家庭用于治疗尿和肠血吸虫病,而9个组合使用的植物被报道对泌尿系疾病的形式(34]。白粉藤属quadrangularis和Stylosanthes erecta被报道的植物对血吸虫病最常用在马里34]。Mølgaard et al。(2001)报道,21日津巴布韦植物,传统上用来对抗血吸虫病具有活动对schistosomula蠕虫,Euclea natalensis拥有最高的活动(11,35]。获得的结果在津巴布韦植物用于治疗血吸虫病建议提取物制成的Abrus precatorius,Pterocarpus angolensis,和Ozoroa旧址被致命的成虫在体外(33]。其他植物已被证明具有不同程度的活动等cercariaeGlinus lotoides(36),Balanites aegyptiaca(37),Combretum aculeatum,Combretum hartmannianum, Combretum glutinosum,和榄仁树属laxiflora(38]。在这项研究中,承诺antischistosomal活动r . vomitoria首次报道了体外测试使用酒精原油提取干细胞的树皮和根美国曼cercariae和成虫。

感染血吸虫病时cercariae渗透,通过完整的皮肤进入身体。因此,预防此类cercariae渗透到皮肤也是一种潜在的传输控制(6]。多年来,许多局部药物评估的能力阻止cercariae渗透到皮肤,有些化合物高效但尚未应用于临床,由于其潜在的毒性和困难的配方和/或应用在现场条件下(39]。这些其他因素激发了寻找新的代理商,更安全,能够提供这样的保护。在这种情况下,第一个方面是分析评价cercaricidal活动潜在的化合物。在这项研究中获得的结果对cercariae美国曼表明提取物r . vomitoria(干树皮和根)是活跃的浓度低于1000μ克/毫升。从茎皮中提取活性浓度从31.25μg / mL,提取从根活跃在更高浓度从125年到1000年μ克/毫升,这个活动是时间和剂量依赖性。目前的观测表明,乙醇提取物r . vomitoria干树皮和树根拥有cercariacidal活动美国曼cercariae。这个结果是类似于Kiros et al。36和穆罕默德等。40报告的cercariacidal活动Glinus lotoides水果和黑种草碎种子,分别为时间和浓度依赖性。其他研究也报道了各种植物提取物的浓度之间的关系:Millettia thonningii(41),虹膜蠊(42),麻风树(43),而龙葵(44]。我们的研究结果表明,茎皮cercariacidal活动更有效的根部,也有很好的选择性HepG2细胞。的cercariacidal活动r . vomitoria可能是由于植物中类黄酮和其他化合物的存在。黄酮类化合物分离Millettia thonningii已报告体外cercaricidal展览活动。

植物部分产生100%的死亡率60分钟后暴露的浓度小于1000μ克/毫升(10⁻³g / mL)。这是远高于那些报道Ajayi et al。45物种)Tetrapleura tetraptera(水果)Lagenaria杂草(种子),60分钟的接触后产生了100%的死亡率在1000 g / mL的浓度和250毫克/毫升,分别。

成虫的生存能力是影响所有的测试浓度(250、500和1000μg / mL)。因此,存在的可能性r . vomitoria有不同的有效性对寄生虫的生命周期的不同阶段。

在这项研究中,cercaricidal活动所表现出的植物提取物高于或相当于schistosomicidal活动。这些结果可能表明cercariae可能比成人更容易受蠕虫。然而进一步研究的作用机制将需要了解这个特性。cercariae trilaminate层所覆盖,保护内部从任何外部代理作用于它46]。后立即渗透到脊椎动物宿主,结果schistosomulum heptalaminate膜保护,这使得它更容易比cercariae [47]。

r . vomitoria提取造成电动机活动减少和成人的死亡美国曼蠕虫120 h后体外暴露。在同一浓度,提取还导致所有成对的分离蠕虫和破坏他们的外皮。这种植物的不同效力的组件可能是由于不同类型的化合物存在于他们。先前的研究已经确认的存在的植物化学成分如生物碱、丹宁酸、皂甙、黄酮类化合物、类固醇、萜类化合物,和心脏苷ethanolic提取的r . vomitoria(48)和各种生物碱也孤立和特征(18,49]。

萜类化合物被称为最大的天然家庭碳氢化合物具有广泛的生物活性,包括抗疟药(50和抗癌51]属性和schistosomicidal活动。萜类化合物是已知的杀死成年美国曼蠕虫和导致完全分离的配对蠕虫与tegumental中断(52]。一些生物碱如piplartine [8血根碱)、胡椒酰胺epiisopiloturine, solamargine和solasonine52],mefloquine [53,54[],青蒿素55,56)已被证明显示广泛的有前途的生物活性包括schistosomicidal财产。许多生物碱通过展示他们的活动造成破坏的外皮,如脱落,或减少运动活动和死亡美国曼成虫后暴露在体外(57]。也会导致减少鸡蛋生产和分离所有成对的蠕虫(57]。至于黄酮类化合物,他们不能够杀死虫子,但他们可以表现出显著减少运动的活动或配对美国曼成虫(57]。

重要的是要建立一种化合物或药物候选人接受调查antischistosomal活动浓度可以实现体内没有诱导宿主细胞毒性作用。在目前的研究中,r . vomitoria常是评价其细胞毒性肝脏正常肝和HepG2(人类肝癌细胞使用MTT试验。本研究利用互补的方法生物表型筛选体外测量r . vomitoria提取功效,以发现潜在的打虫药体内测试候选人。这些植物提取物对血吸虫病的疗效被定义为治疗,杀死成年虫,和预防性,cercariae死亡。几个参数,如汽车活动,tegumental变化,和死亡,被评为schistosomicidal生物活性指标对寄生虫。另一方面,细胞毒性测试使用一系列增加antischistosomal产品的浓度来确定浓度导致50%的宿主细胞的死亡。这个值被称为中位数细胞细胞毒性浓度,由集成电路₅₀。细胞的能力生存有毒侮辱已经大部分细胞毒性检测的基础。常对肝细胞,正常肝细胞株,茎和根显示集成电路₅₀值为77.5μ克/毫升和112年μ分别g / mL。这些结果表明,茎皮相对比根有毒Chang肝细胞。HepG2的,这是一个人类肝癌细胞,IC₅₀值分别为490.7和72.68,分别为干树皮和树根。这意味着根是肝癌细胞株毒性比干树皮。根据上述的观察,茎皮不太活跃的对抗癌症细胞系。在美国国家癌症研究所植物筛选程序,粗提物通常认为体外细胞毒性的活动,如果IC₅₀孵化后48 h和72 h值小于20μ克/毫升(58]。根据这一标准,所有的集成电路₅₀本研究中定义的值远高于20μg / mL,表明不是强细胞毒性的植物部分。

的相对有效性的候选药物在抑制寄生虫的增长相比,诱导细胞死亡定义为治疗或选择性指数。的选择性指数r . vomitoria茎皮是1.26对HepG2 Chang肝细胞系和8.01。基于SI,茎皮的活动是相对有效的反对裂体吸虫属寄生虫。根,如果是0.25和0.16张肝脏和HepG2细胞线,分别(< 1)。虽然根是活跃的反对裂体吸虫属寄生虫和肝癌细胞(HepG2),活动不是特定的,他们也有毒正常细胞系(Chang肝细胞)。是理想的治疗指数高(> 2)给予最大驱虫剂活动以最小的对正常细胞毒性。的干树皮r . vomitoria在这项研究可能更活跃和具体针对血吸虫寄生虫。

显然,许多变量生物活性正面和负面影响。仅在体外测试并不一定确认植物体内生物活性是由于很多因素。此外,提取缺乏体外活动可能仍然具有体内活动因为它可能作为前体药物。理想情况下,应该测试植物提取物在体外和体内都确认antischistosomal活性和毒性。因此建议可以进行进一步的研究r . vomitoria干树皮和树根。

5。结论

从目前的研究中,可以得出结论:乙醇粗提取物r . vomitoria干树皮和根具有温和antischistosomal属性对两个阶段的生活美国曼:cercariae和成虫。两个工厂的部分显示不同活动对时间和浓度与干树皮被更积极的和特定的血吸虫寄生虫。因为独自在体外实验中不适合药物的驱肠虫的活动的覆盖所有方面,特别是对药理和免疫宿主相互作用,本研究提供了第一个证据的驱虫剂的影响r . vomitoria这可能导致考虑这种植物作为antischistosomal新药的潜在来源。因此,进一步的研究是必要的评估分数和确定引起活动的化学成分美国曼。

缩写

ECACC:	欧洲的经过身份验证的细胞培养
写明ATCC:	美式文化收藏
DMEM:	杜尔贝科修改鹰的媒介
DMSO溶液:	二甲亚砜
博士:	剂量反应
的边后卫:	胎牛血清
哈佛商学院:	汉克的平衡盐溶液
麻省理工:	3 - (4,5-Dimethyl thiazol-2-yl) 5-diphenyl四唑溴离子
MEC:	最小有效浓度
多层陶瓷:	最小致死浓度
NIACUC:	NMIMR机构动物保健和使用委员会
NMIMR:	野口勇纪念医学研究所
nt:	新改造schistosomula
PBS:	磷酸缓冲盐
PDD:	工厂开发部门
PZQ:	吡喹酮
RPMI:	罗斯威尔公园纪念研究所
如果:	选择性指数
热带病研究和培训特别规划:	热带疾病研究和培训
加州大学旧金山分校:	加州大学旧金山
美国国家癌症研究所:	美国国家癌症研究所
人:	世界卫生组织。

伦理批准

所有动物实验进行的动物实验部野口纪念医学研究所(NMIMR),之后NMIMR机构动物保健和使用委员会(NIACUC)动物福利法规。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突

确认

这项工作得到了比尔和梅林达•盖茨基金会支持的博士后和研究生培训在传染病研究授予野口纪念堂医学研究所(全球卫生批准号OPP52155)。Emmanuel Mouafo Tekwu先生承认Boamah丹尼尔博士和苍鹭Blagogee的植物药研究中心(CPMR-Mampong)协助植物收集和识别和阿比盖尔的女士和尤妮斯Dotse(研究助理,临床病理学部门NMIMR)为他们的援助在细胞毒性研究。

引用

1. l . g . Magalhaes g . j . Kapadia l·r·达席尔瓦Tonuci等。”在体外schistosomicidal一些粗茎鳞毛物种的间苯三酚衍生物的影响血吸虫曼森我成虫。”寄生虫学研究,卷106,不。2、395 - 401年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. 血吸虫病流行病学情况,http://www.who.int/schistosomiasis/epidemiology/en/。
3. p . j . Hotez d·h·莫利纽克斯a芬威克et al .,“控制被忽视的热带病,”新英格兰医学杂志》上,卷357,不。10日,1018 - 1027年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. d·j·格雷·d·p·麦克马纳斯,y,通用威廉姆斯,r . Bergquist和a·g·罗斯,“消灭血吸虫病:教训过去指导未来,”《柳叶刀传染病,10卷,不。10日,733 - 736年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. 芬威克,“吡喹酮:我们需要另一个antischistosoma治疗?”未来药物化学,7卷,不。6,677 - 680年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. e . m . Tekwu w . k . Anyan d Boamah et al .,“机械生产schistosomula作为表型的更高的吞吐量工具事先在药物敏感性分析:研究现状和未来的趋势,”生物标志物的研究,4卷,不。1,第二十一条,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. d . Cioli l . Pica-Mattoccia a低音部,a . Guidi“永远血吸虫病控制:吡喹酮?”分子和生化寄生虫学,卷195,不。1,23-29,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. l·f·j·德·莫拉埃斯,c . Nascimento山口,m·j·加藤和大肠Nakano,”曼氏裂体吸虫:体外schistosomicidal活动和tegumental schistosomula piplartine引起的改变,”寄生虫学实验,卷132,不。2、222 - 227年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. 欧凯塞、a . f . Kiderlen和s l·克罗夫特,“天然产物抗寄生虫药物,”寄生虫学研究,卷90,不。2,S55-S62, 2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. Tagboto和s . Townson“杀寄生虫药药用植物和其他天然产品的性质,“寄生虫学的进步,50卷,第295 - 199页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. p . Mølgaard s b·尼尔森d·e·拉斯穆森r·b·德拉蒙德n . Makaza和j . Andreassen”驱虫剂筛查的津巴布韦植物传统上用来对抗血吸虫病,”民族药物学杂志,卷74,不。3、257 - 264年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. c . g . Braguine e·s·科斯塔,l . g . Magalhaes et al .,“Schistosomicidal评价花椒属植物naranjillo及其分离化合物曼氏裂体吸虫成虫。”Zeitschrift毛皮Naturforschung-Section C生物科学杂志》上,卷64,不。11 - 12,793 - 797年,2010页。视图:谷歌学术搜索
13. l . g . Magalhaes c . b . Machado极其e . r . et al .,“姜黄素对体外schistosomicidal活动曼氏裂体吸虫成虫。”寄生虫学研究,卷104,不。5,1197 - 1201年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. j·d·莫拉,c . Nascimento, p . o . m . v . Lopes et al .,”曼氏裂体吸虫:在体外piplartine schistosomicidal活动”,寄生虫学实验,卷127,不。2、357 - 364年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. 布洛斯f . Yousif g . Wassel l . et al .,“贡献体外筛选schistosomicidal埃及工厂的活动,“生物制药,50卷,不。6,732 - 739年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. j·德·莫拉埃斯,”Antischistosomal天然化合物:现在挑战新药屏幕,”当前热带医学的主题InTech,艾德。d . a . Rodriguez-Morales的哲理开放、里耶卡,克罗地亚,2012。视图:谷歌学术搜索
17. m . Eluwa n . Idumesaro m . Ekong a . Akpantah和t . Ekanem水提物的影响萝芙木属vomitoria根皮的细胞结构的小脑和neurobehaviour成年雄性wistar鼠”互联网替代医学杂志》上》第六卷,没有。2、1 - 7,2008页。视图:谷歌学术搜索
18. j . Yu,问:陈抗肿瘤的活动萝芙木属vomitoria提取对胰腺癌和吉西他滨的强化效果,”综合癌症治疗,13卷,不。3、217 - 225年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. e . m . Tekwu a·c·Pieme v . p .大麻,”调查一些喀麦隆抗菌活性的药用植物提取物对细菌和酵母与胃肠道相关性,”民族药物学杂志,卷142,不。1,第273 - 265页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. 美国和r . j . r .史密瑟斯特里,”实验室的感染宿主cercariae曼氏裂体吸虫和成虫的复苏,”寄生虫学,55卷,不。4、695 - 700年,1965页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. j . Yu y, j . Drisko问:陈,“萝芙木碱抗肿瘤活性vomitoria提取和势差卡铂对卵巢癌的影响,“目前治疗Research-Clinical和实验卷。75年,8 - 14,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. g . a . Pesewu r·r·卡特勒和d·p·亨伯,“抗菌活性的植物与特定加纳传统药物使用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,”民族药物学杂志,卷116,不。1,第111 - 102页,2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. o . Fapojuwomi和i Asinwa”的药用价值的评估Rauvolfia vomitoria(Afzel)在伊巴丹市。”绿色医学科学杂志》上,3卷,不。2,37-41,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. s . k . Attah p . f . Ayeh-Kumi a . a . Sittie诉Oppong,和a . k . Nyarko”提取的大戟属植物hirta林恩。(大戟科),Rauvolfia vomitoriaAfzel(夹竹桃科)展示活动盘尾属肠扭结微丝蚴在体外”,BMC补充和替代医学第66条,卷。13日,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. m . c . Holtfreter m . Loebermann s Klammt et al .,”曼氏裂体吸虫:schistosomicidal mefloquine和伯氨喹体外,”寄生虫学实验,卷127,不。1,第276 - 270页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. m . m . Eissa s . El Bardicy, m . Tadros”对水生miltefosine阶段的生物活性曼氏裂体吸虫,埃及血吸虫和蜗牛主机,由扫描电子显微镜”,寄生虫和向量,4卷,不。1,第73条,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. a . l . l .多亏尤文和g·p·g·维埃拉,w·r·达et al .,“化学成分,antischistosomal的精油和细胞毒性的影响薰衣草花angustifolia生长在巴西东南部。”巴西《生药学,23卷,不。6,877 - 884年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. j·k·a·l·内维斯·m·d·c·a·德利马v r·a·佩雷拉et al .,“Antischistosomal行动thioxo-imidazolidine化合物:超微结构和细胞毒性研究中,“寄生虫学实验,卷128,不。1,第90 - 82页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. e .耶佩斯R.-E。Varela-M, j . Lopez-Aban e . l . h . Dakir f·曼纽尔,a•姆洛。”在体外和在活的有机体内anti-schistosomal alkylphospholipid模拟edelfosine活动。”《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。10篇文章ID e109431 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. b·拉米雷斯Bickle, f . Yousif f . Fakorede M.-A。Mouries, s . Nwaka“血吸虫病:挑战化合物筛选”,专家意见在药物发现,卷2,不。s1, S53-S61, 2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. c·r·凯弗雷·d·l·威廉姆斯,m·h·托德·d·l·纳尔逊·j . Keiser和j . Utzinger血吸虫病化疗发展战略,“抗寄生虫和抗菌药物发现:从分子靶点药物的候选人,第321 - 299页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. r . n . De Oliveira v . l . g .出版a . s . s .奥利维拉v . d . l . s . Jeraldo a . x Linhares和s·m·Allegretti打虫药活动在体外和在活的有机体内的Baccharis trimera(少)直流对不成熟和成虫曼氏裂体吸虫”,寄生虫学实验卷,139年,第72 - 63页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. j . Ndamba n . Nyazema n . Makaza c·安德森和k . c . Kaondera”传统草药用于治疗尿路血吸虫病在津巴布韦,”民族药物学杂志,42卷,不。2、125 - 132年,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. 呸,d·迪亚洛s Dembele, b . s . Paulsen”Ethnopharmacological植物用于治疗血吸虫病的调查Niono区,马里,”民族药物学杂志,卷105,不。3、387 - 399年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. s . g . Sparg j . Van Staden, a . k . Jager”传统上使用的南非工厂的效率对血吸虫病,”民族药物学杂志,卷73,不。1 - 2、209 - 214年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. g . Kiros b . Erko m·吉戴伊和y Mekonnen molluscicidal和cercariacidal效果的实验室评估Glinus lotoides水果。”BMC研究笔记第220条,卷。7日,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. e . Molla m·吉戴伊和b . Erko实验室molluscicidal cercariacidal活动的评估Balanites aegyptiaca”,亚洲太平洋热带生物医学杂志》上,3卷,不。8,657 - 662年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. a . h . Albagouri a . a . Elegami w . s .可可·e·e·奥斯曼,达哈伯和m . m .”在体外anticercarial活动的苏丹家族使君子科药用植物,”森林产品和行业杂志》上,3卷,不。2、93 - 99年,2014页。视图:谷歌学术搜索
39. k . Ramaswamy y。他,b . Salafsky和t .涩谷,“局部应用对血吸虫病避蚊胺,”寄生虫学的趋势,19卷,不。12日,第555 - 551页,2003年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. a . m .默罕默德·n·m·Metwally, s . s .艾哈迈迪。”漂白亚麻纤维卷种子对曼氏裂体吸虫不同的阶段,”Oswaldo Cruz记忆做网页,卷100,不。2、205 - 211年,2005页。视图:谷歌学术搜索
41. 佩雷特s, p . j . Whitfield和l·桑德森”衰减的曼氏裂体吸虫灭螺剂来源于cercariaeMillettia thonningii”,寄生虫学,卷109,不。5,559 - 563年,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. a . n . Singab a·h·艾哈迈德·j . Sinkkonen诉Ovcharenko和k . Pihlaja Molluscicidal活动和新埃及的类黄酮虹膜蠊l . (var. alba),“Zeitschrift毛皮Naturforschung C,卷61,不。1 - 2,页57 - 63,2006。视图:谷歌学术搜索
43. m .地毯和a .晋升“有毒植物的活动麻风树针对中间蜗牛主机和幼虫血吸虫病”,热带医学与国际卫生,5卷,不。6,423 - 430年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. a·h·艾哈迈德和r·m·r·Ramzy”实验室评估埃及molluscicidal cercaricidal活动的杂草,龙葵L。”《热带医学寄生虫学,卷91,不。8,931 - 937年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. g . Ajayi n . Awujo和l . Abulu miracicidal和cercaricidal活动methanolic提取的Lagenaria breviflora罗伯特家庭葫芦科的水果曼氏裂体吸虫”,尼日利亚季度医院医学杂志》上,12卷,不。1 - 4,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. d·j·d·j·麦克拉伦,照片”曼氏裂体吸虫:皮的外膜的变化从尾蚴成人蠕虫在开发过程中,“国际寄生虫学杂志,3卷,不。1,13-20,1973页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. h·托马斯·p·安德鲁斯,r . Pohlke, j . Seubert“吡喹酮”,药用研究评论,3卷,不。2、147 - 200年,1983页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. o . o . Ojo s s Ajayi和l . o . Owolabi“植物化学的筛查、anti-nutrient成分,直接分析和水和有机提取物的抗菌活动的树皮Rauvolfia vomitoria和叶的豆瓣绿属方可成功”,国际研究生物化学和生物信息学杂志》上,卷2,不。6,127 - 134年,2012页。视图:谷歌学术搜索
49. m . m . Iwu和w·e·法院“根生物碱的萝芙木属vomitoria Afz。”足底》,32卷,不。1,第99 - 88页,1977。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. m·t·安萨里z s Saify: Sultana et al .,“疟疾和青蒿素衍生物:更新的评论,”本文着重在药物化学,13卷,不。13日,1879 - 1902年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. 黄m j j。陆,m q。黄,J.-L。包,X.-P。陈,Y.-T。王”,为癌症治疗萜类:天然产品,”专家意见试验性药物,21卷,不。12日,第1818 - 1801页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. j·德·莫拉埃斯,”与antischistosomal活性天然产物”,未来药物化学,7卷,不。6,801 - 820年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. j . Keiser j . Chollet工程学系。肖et al .,“Mefloquine-an氨基醇与承诺antischistosomal属性在老鼠身上,“《公共科学图书馆·被忽视的热带疾病,3卷,不。1,文章e350, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. 工程学系。肖,J.-Y。梅,P.-Y。娇,“甲氟喹合成的体外效果和吡喹酮对青少年和成年日本血吸虫,”寄生虫学研究,卷106,不。1,第246 - 237页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. h·l .董w .段,陈、太阳、c·乔,C.-M。夏,“青蒿素衍生物的吡喹酮作为口服antischistosomal代理,“《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。11日文章ID e112163, 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. m·e·m·赛义德·克里希纳,h . j . Greten p·g . Kremsner和t . Efferth”Antischistosomal青蒿素衍生物的活性体内的病人,”药理研究卷,110年,第226 - 216页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. b . j .七巧板、c·h·安德拉德和p v . l . Cravo”天然产物是导致血吸虫药物发现,”分子,20卷,不。2、1872 - 1903年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. j . Boik癌症治疗的天然化合物俄勒冈州医学出版社,普林斯顿,明尼苏达州,美国,2001年。

版权

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