向量和空间格局摘要cantonensis在菲律宾新埃西贾省Muñoz的水稻种植村

摘要

在菲律宾，田鼠和蜗牛作为害虫和一些当地人的食物来源在农业地区大量存在，这构成了寄生虫传播给人类的风险，例如摘要cantonensis．这项研究是为了确定答:cantonensis从Nueva Ecija的Muñoz种植水稻的村庄收集的老鼠和蜗牛感染。共采集大鼠209只，淡水螺781只，陆生螺120只。对大鼠和蜗牛的心脏和肺组织进行检查，人工消化收集寄生虫。用SSU rDNA基因对大鼠成虫进行鉴定。7个线虫序列得到匹配答:cantonensis．结果显示，31%的大鼠检测阳性答:cantonensis．鼠形和r . tanezumi患病率分别为46%和29%。此外,只有Pomacea canaliculata(2%)和Melanoides maculata(1%)为阳性答:cantonensis在收集的蜗牛中。寄主分布分析显示，鼠类和钉螺生境重叠，以及居民区和农业区对公共卫生存在风险。本研究提出了一种可能的人类感染途径答:cantonensis通过处理和消费p . canaliculata和m . maculata或者被这些蜗牛污染的农作物。

1.介绍

摘要cantonensis或者，大鼠肺线虫是一种人畜共患的蠕虫，会导致血管线虫病。它的生命周期包括啮齿动物作为最终宿主和软体动物作为中间宿主。它还可以感染其他动物，例如虾和青蛙，但没有进一步发展，摄入后仍然具有传染性。然而，人类是终极宿主答:cantonensis并可通过摄入受感染的软体动物而感染，例如被受感染软体动物污染的东西，土壤和蔬菜[1，2]，并摄取副产宿主。作为一个结果,答:cantonensis是人类嗜酸性脑膜炎的主要原因，特别是在其流行的印度-太平洋地区。动物-人类-环境的界面答:cantonensis很难评估，其中一个原因是它的宿主很容易受到环境变化的影响[3.］．生态和环境的变化也可能导致这种寄生虫的流行病学的变化。因此，评估寄生虫可能的传播途径很重要，因为它对兽医和公共卫生都有风险。

Nueva Ecija是菲律宾的米仓，据观察，菲律宾的一个城镇Muñoz拥有米仓答:cantonensis［4，5］．在以前的研究中，观察到的寄生虫的强度和分子生物学尚未确定。然而，重要的是要提出更有力的证据答:cantonensis因为它可能会被误认为是其他物种摘要．此外，该区域的中间宿主仍然未知。这是评估感染的一个重要关键答:cantonensis尤其是对人类，因为这些宿主是寄生虫感染阶段的港湾。因此，本研究是为了确定感染的程度答:cantonensis在Muñoz收集的老鼠和蜗牛中。

2.材料和方法

2．1．研究网站

Muñoz位于菲律宾的Nueva Ecija，由37个村庄组成，总人口为85,461人。它在全球位于北纬15.71°和东经120.90°，总土地面积为16,305公顷，主要用于农业利用(9,819公顷)，其次为居住区(2,847公顷)[6］．在2014年6月至2015年10月期间，随机选取5个水稻种植村进行研究。

2．2.收获的摘要cantonensis在老鼠身上

采用单活捕鼠器捕鼠。对大鼠实施安乐死并解剖答:cantonensis．对大鼠的心、肺进行成虫检查。收集的蠕虫在100%的乙醇中保存。成人答:cantonensis女性有一副理发师的外表，而男性有一副交配囊[7］．用胃蛋白酶- hcl溶液在37°C±2°C磁搅拌热板中人工消化1小时。它被过滤并放在有盖培养皿中进行幼虫的显微镜检查。

2．3.大鼠成虫的DNA提取、PCR扩增和测序

利用土壤线虫的标准分子条形码，小亚基核糖体RNA基因(SSU rDNA)的5 '端进行鉴定[8- - - - - -10］．采用PureLink®基因组DNA (Life Technologies)试剂盒提取成虫总基因组DNA。利用引物SSU_F_07 (sense) 5 ' -AAAGATTAAGCCATGCATG-3 '和SSU_R_09 (anti-sense) 5 ' -AGCTGGAATTACCGCGGCTG-3 ' [10］．总共50个μL的PCR混合物由5μL PCR buffer with 1.5 mM MgCl₂, 1.0μL 10毫米dNTP, 2.5μL 10μ每个引物M, 10μL Q缓冲液(Qiagen，荷兰)，0.25μL 1.25 T Taq (Roche .™(美国)μL DNA样本。利用Labnet MultiGene进行扩增™热循环器的PCR条件94°C为3分钟，43个循环，94°C为30秒，45°C为30秒，65°C为1分钟，最后在72°C延伸5分钟。PCR产物在1%的琼脂糖凝胶中，溴化乙酯在紫外线照射下可见。试剂盒™采用凝胶萃取试剂盒(美国)从凝胶中提取PCR产物。将纯化的PCR产物送到马来西亚的1st Base进行反义链测序。DNA序列使用STADEN package 1.5.3版本进行组装[11]并使用BioEdit序列比对编辑器7.0.9.0进行比对[12］．利用核苷酸基本局部比对搜索工具(BLAST，http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi/, (13])。

2．4．潜在中间螺宿主的收集

淡水蜗牛是在河流、稻田、灌溉地和房屋周围手工采摘的，而陆生蜗牛则是沿着墙壁和树木手工采摘的。所有采集的钉螺均放置在标记的容器中，并转移到实验室进行鉴定和寄生虫检查。每只蜗牛都被切成小块，放在装有Ash消化液的培养皿中[14］．37℃过夜，显微镜下观察活幼虫。答:cantonensis第三期幼虫(L3)前端有两根几丁质棒，尾微弯尖[7］．

2．5．当地居民对鼠、螺类寄生虫的知识和行为调查

在研究现场采访了100名受访者，并向每个受访者发放了一份问卷。调查对象包括农民和家庭主妇，这些人都是高机会的人答:cantonensis。

2．6．数据分析

计算鼠和钉螺的患病率和平均强度。用差异指数来确定其分布格局答:cantonensis在两种鼠种中[15］．此外，采用独立卡方检验和Fisher精确检验比较鼠种间患病率和Mann Whitney用试验比较不同鼠种间的强度。所有的统计分析都在95%置信水平上使用一些统计分析软件程序，包括Windows的Quantitative Parasitology version 3.0和Predictive analysis software version 18.0。

3.结果

共采集大鼠209只，淡水钉螺781只，陆生钉螺120只答:cantonensis感染。这些老鼠被鉴定为r形（),r . tanezumi（)．淡水蜗牛按其种类分组:Indoplanorbis exustus（），Jagora asperata（），Melanoides maculata（），Pomacea canaliculata（），基数quadrasi（），Tarebia granifera（），前庭神经上只（),只carinata（)．采集到的陆生钉螺均为Achatina fulica（)．

３．１．大鼠成虫SSU rDNA基因序列的检测

成功地对7只具有代表性的成虫进行了DNA提取、PCR扩增和测序。Floyd等人[8]提出，当SSU rDNA基因5 '端450 bp序列的相似性达到99.5-100%时，这两个序列属于同一物种。因此,答:cantonensis根据GenBank BLAST结果确定为物种水平(表1)．

３．２．摘要cantonensis感染的老鼠

共64只(31%)鼠被感染答:cantonensis(表2)．属于r形46% (11/24)答:cantonensis感染而r . tanezumi患病率为29%(53/185)。统计分析显示不同鼠种间无显著差异(，)．此外,强度答:cantonensis为r . tanezumi(62只/鼠)高于r形(43只/鼠)，亦无显著差异(；)．

3．3．摘要cantonensis从蜗牛

共检出84只钉螺(9%)感染线虫幼虫(见表)3.)．然而,只有m . maculata(1/89),p . canaliculata(3/200)拥有的答:cantonensisL3。这些受感染的蜗牛是从稻田和灌溉地里采集的。

3．4．Muñoz鼠、螺的分布

分布图显示，受感染的大鼠和钉螺的采样点重叠，提示潜在宿主在同一地区(图)1)．地图还显示，选定的村庄有老鼠和蜗牛的巢穴答:cantonensis和其他寄生虫。两个村庄，即萨邦卡瓦扬和纳蒂别墅有已知的确定和中间宿主答:cantonensis．然而，也有一些村庄答:cantonensis感染的老鼠，但没有答:cantonensis被感染的蜗牛。

3．5.当地居民对鼠类和蜗牛寄生虫的知识和实践

在“Muñoz”中，100名成年男性()及女性()为本研究进行了访谈(表4)．根据调查，大多数受访者吃老鼠。当地人相信它能治疗皮肤病。显然，大多数当地人都吃过一两次老鼠肉，尤其是在他们还小的时候。他们中的一些人还让他们的孩子吃鼠肉，主要是因为他们认为鼠肉有药用价值。与此同时，大多数当地人通常会吃饭r . quadrasi，m . maculata,只物种和一些吃p . canaliculata．此外，当地人并不知道食用带有寄生虫的蜗牛会导致人类疾病。

4.讨论

的传播摘要cantonensis非常复杂且难以评估。它涉及寄生于温血动物和冷血动物，它们不一定具有相同的空间分布和生态需求[16］．此外，其幼虫期易受温度、氧气、pH等环境因素以及寄主范围和时空变化等因素的影响。然而，有必要进一步调查其传播，以便了解如何控制和预防其相关疾病。

对于线虫引起的疾病，快速和准确诊断工具的重要性在于了解其患病率和地理分布[17这是特别正确的答:cantonensis几乎所有的软体动物作为中间宿主的。此外，还有两种大鼠肺虫与之有相似的生命周期答:cantonensis，a . malaysiensis和答:mackerrasae．这些线虫的诊断大多基于形态特征;然而，由于不同种类的线虫在体型和体型上的描述相似，因此无法对这些线虫进行特别鉴定[17］．因此，对这些线虫的错误识别和误诊可能会导致对其感染的低估。这就是为什么大多数关于线虫的研究都选择了rDNA区域，因为它们在诊断、系统学和分子进化研究中是有用的遗传标记[17］．因此，利用遗传标记被广泛应用于近缘种的鉴别，如在菊科植物中摘要．

在本研究中，取样地点主要是农业区r . tanezumi是丰富的。此外，这些地点位于稻田和水库，这是蜗牛的完美栖息地。r . tanezumi主要以昆虫、蜗牛、蛞蝓和其他在其栖息地发现的无脊椎动物为食，特别是在非水稻时期以青蛙和蜗牛为食[5］．这可能导致了更多的接触r . tanezumi可能的中间宿主答:cantonensis导致了寄生虫的传播另一方面，r形通常位于城市和城镇，较少出现在耕地地区[18］．然而，其他因素也可能导致了艾滋病的流行程度和强度答:cantonensis在这两种鼠种中，如这些鼠暴露于中间宿主，行为，喂养习惯，以及它们的遗传特征。

患病率低答:cantonensis在淡水螺的研究中可能已经导致了多种因素，如鼠的季节性感染答:cantonensis．根据Antolin等人的研究[4),女r . tanezumi在菲利斯农场发现了感染答:cantonensis在六月到九月。这可能意味着寄生虫在宿主之间的传播可能就发生在这几个月里。与此相关，研究用的蜗牛是在一年的其他月份收集的。此外，生态特征p . canaliculata和m . maculata例如它们的底栖生物生命周期也可能是低流行率的原因答:cantonensis感染。根据Lv等人[16]，只有少数淡水蜗牛会自然传播答:cantonensis因为含有L1的老鼠粪便在淡水中会被稀释。先前的研究表明答:cantonensis陆生蜗牛及蛞蝓的感染率高于淡水蜗牛[19- - - - - -21］．在本研究中，没有答:cantonensisL3见于答:fulica．原因尚不清楚;然而，存在着诸如季节变化和宿主栖息地对寄生虫传播的影响等可能性。根据观察,答:fulica下雨的时候就活跃起来。在对Salibay和Luyon的研究中22，在下雨天捉到的老鼠更少。这表明老鼠和答:fulica．其他国家的研究也表明了这一点答:fulica自然感染了寄生虫[8，17，19，23- - - - - -25］．在菲律宾，很少有关于答:cantonensis可在蜗牛中发现感染。答:fulica和Laevicaulis altae都被发现感染了答:cantonensis［9，10，26但是除了这只蜗牛，没有其他的报道。然而，这项研究是第一个记录答:cantonensis受感染的p . canaliculata和m . maculata在菲律宾。

地图可以用来预测某一地区出现动物的概率[27- - - - - -29在这个例子中是老鼠和蜗牛。啮齿动物有地盘行为[30.];然而，在本研究中，两种鼠的采样点存在重叠。这可能是由于居住区与农业用地相邻。r形是世界上主要的城市害虫，但在菲律宾的一些地区也被报道为野外害虫。它们也经常出现在河流和灌溉等水源附近[18］．此外，Salibay和Luyon [22在他们的研究中发现r形主要是在哪里观察到的r . tanezumi也被抓住了。栖息地的不寻常变化r形从住宅到农业可能是由于栖息地的变化。此外，捕获鼠的食物消耗量也可作为捕获鼠分布的一个因素。当它们的栖息地没有食物时，老鼠就会诉诸同类相食[5或寻找其他食物来源。同时，在稻田、水道和老鼠容易接近的房屋附近收集了蜗牛。的位置答:cantonensis被感染的蜗牛与答:cantonensis受感染的老鼠。因此，老鼠和蜗牛之间的寄生虫传播一直在研究地点发生。

嗜酸性脑膜炎是由几种寄生虫和非寄生虫引起的[31但最常见的原因是答:cantonensis［32这与引进、养殖和食用一些蜗牛种类有关。2001年至2006年和2008年至2010年，脑膜炎被记录为菲律宾儿童死亡的主要原因之一[33］．分析脑脊液和血培养对中枢神经系统感染的分类作用然而，由于病人的限制，它可能并不总是被遵循。因此，最终诊断取决于主治医生的评估和意见[34］．尽管脑膜炎的病例不是完全基于答:cantonensis单是感染，这种寄生虫的流行就令人担忧，如果大多数时候对人类寄生虫的诊断被忽视，就更令人担忧了。总之，Muñoz中没有记录到人类血管线虫病病例，但这可能是由于误诊和缺乏容易获得的诊断工具。这种寄生虫在潜在宿主中的存在不能消除其传播给人类的可能性。因此，应实施有关人畜共患寄生虫的公共教育。应适当处理其中间宿主和可能被其宿主污染的作物。此外,p . canaliculata和m . maculata应该进一步研究，因为在这些种群中答:cantonensis被观察到。菲律宾的其他地区也应该进行评估，特别是在水稻种植是主要生计来源的地区。

相互竞争的利益

作者声明本文的发表不存在利益冲突。

致谢

这项研究由科学技术部、加速科学技术人力资源开发计划(DOST-ASTHDRP)、菲律宾水稻研究所(PhilRice)和菲律宾大学国际联系办公室(UP-OIL)资助。作者还想伊冯·多明戈博士承认她的吕宋岛中部州立大学(CLSU),瑞安·伊曼纽尔•德•查韦斯教授和大学的Leendel Punzalan菲律宾Los Banos (UPLB)和Ronniel踏板菲律宾大学的Diliman(乌利希期刊指南)在这项研究的贡献。

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