识别和保护肠道寄生虫使用亚甲基Blue-Glycerol山:粪便显微镜的新方法

文摘

我们已经尝试一个新的方法常规粪便显微镜采用亚甲蓝和甘油在潮湿的新鲜粪便样品的准备演示医学上重要的肠道寄生虫。这种组合是评估寻找不同的形态和内部结构的细节和清晰度寄生虫在低收入和高功率显微镜相比,碘和盐山。它进一步评估估计时间由亚甲基blue-glycerol山枯竭相比碘和盐水湿山。

1。介绍

寄生虫感染,造成肠道寄生虫和原生动物,占人类疾病负荷很大的负担在发展中国家。据估计,大约35亿人港口寄生虫和4.5亿生病由于这些感染1]。肠道寄生虫,然而,很少导致死亡。寄生虫腹泻病因学普遍存在的水的供应,感染人类人口的很大一部分在第三世界国家2),尤其是在亚洲次大陆。人口爆炸导致过度拥挤和不卫生的行为,这些寄生虫构成严重威胁恶化的有限的资源(3]。在过去的十年里,新方法的诊断、治疗和预防肠道原生动物寄生虫已经开发出来。然而,一个相当大的改善肠道蠕虫感染的诊断和治疗尚未实现。

粪便是最频繁的标本收集和检查胃肠道寄生虫的示范。经常在寄生虫学实验室,每个标本通常由两个准备每个幻灯片:一个清白的准备和另一个暂时染色标本。生理盐水湿山是一个清白的准备由使用生理盐水。盐水制备的优点是,它有助于证明营养体的能动性。然而,它并不提供明确囊肿的诊断或营养体,因为内部结构往往是不可见的。为了克服这个缺点,几个污点的解决方案已被用于制备暂时沾湿坐骑的粪便标本。直接湿挂载的优点包括以下:(i)是一种快速、简单的过程,提供了一种快速回答当积极的(4];(2)它提供了一个近似的寄生负担4];(3)它可以用于unpreserved标本检测的特征运动性营养体(4];(iv),它可以用来作为保障,像一些原生动物有时不能正常集中因为未知因素(5];(v)它可以探测到运动型的营养体阶段原生动物物种(6]。

描述的经典技术的显微镜检查寄生虫是碘挂载方法,艾滋病在分化和识别寄生虫的形态特征和内部结构的细节特征。方法简单,快速,便宜,方便直接可视化的寄生卵和囊肿的形态。这种技术的缺点是,准备干几分钟,使其不可读和不可靠的可视化住nematodal幼虫(7]。每次浏览幻灯片需要新鲜的准备是为以后咨询或示范,消耗大量资源和技术人员的宝贵时间。这些缺点是可以克服采用亚甲蓝染料和甘油的组合。这潮湿的山是一个简单、经济替代碘坐骑和盐水坐骑持久和提供更好的可视化和分化从蔬菜事项和其他碎片在凳子上,从而促进任何后续专家确认。甘油,其吸湿特性,从环境中吸收水分子,防止干燥湿坐骑。

2。目的和目标

目标1。这项工作的目的是评估不同的形态细节和清晰的寄生虫从周围的碎片和文物在低收入和高功率显微镜下凳子。

目标2。还旨在评估时间由亚甲蓝染料不同稀释的甘油干燥山在热带实验室环境温度(°C)相比,时间控制(常规坐骑没有甘油)。

3所示。材料和方法

3.1。标本

一百五十新鲜unpreserved粪便标本被收集从症状患者参加三级保健医院从南印度历史上各种肠道症状如腹泻、腹痛、呕吐、perirectal瘙痒,超过1年的研究期间。所有粪便标本检查使用二blue-glycerol湿挂载并与碘甲烷和盐水湿坐骑没有甘油。

3.2。准备湿坐骑的粪便

3.2.1之上。亚甲基Blue-Glycerol湿山

厚涂片的粪便样本准备通过增加粪便的体积更大的亚甲基blue-glycerol解决方案在一个显微镜载玻片和盖玻片在涂片。亚甲基blue-glycerol准备的解决方案是混合亚甲蓝染料分别与越来越多的甘油浓度为10%,12.5%,16.6%,25%,50%。

3.2.2。生理盐水湿山和碘潮湿的山

盐水湿坐骑和碘湿山被单独准备的混合体积小的粪便样本一滴生理盐水,亚甲蓝染料,和Lugol碘(1:5稀释蒸馏水),分别在载玻片和盖玻片在涂片。

3.3。粪便显微镜

盐水湿山和碘湿标本山第一次检查之后的亚甲基blue-glycerol湿支架的安装使用含有不同浓度的甘油的解决方案。整个湿坐骑进行最初通过使用低功耗(10 x)的目标,然后再通过使用大功率(40 x)复合显微镜的目的。

4所示。结果与讨论

共一百五十个样本观察使用美blue-glycerol,盐,和Lugol碘,五十是积极为各种寄生虫。大多数寄生虫被发现痢疾阿米巴和类圆线虫属stercoralis和一个示例中,污染草履虫spp,被送往观察有机体的形态细节(表1)。

后观察各种寄生虫通过不同的安装技术,发现亚甲基blue-glycerol组合提供了一个很好的对比寄生结构和文物比生理盐水和碘。营养体的内部结构、囊肿和卵巢被亚甲蓝染料染色好,帮助他们识别和鉴定的标本。甘油的折射率大于水,这有助于限定内部结构的形态学特征和细节特征,从而协助分化和寄生虫的识别。类似的研究是由Parija和角色8)评估使用乳酚棉蓝湿山准备代替常规坐骑,发现类似的结果用不同的寄生虫。我们发现制备乳酚棉蓝色需要更多数量的试剂,是昂贵的,是更多的麻烦比methylene-glycerol山。

Vignesh等人评价0.25% iodine-glycerol湿山准备肠道寄生虫的检测(9]。碘湿坐骑的缺点之一是,囊肿的碘染不了,不如无污点的伸缩自如的囊肿盐水制备;因此,他们很难想象,可以很容易地错过了。相比之下,囊肿在亚甲基blue-glycerol湿坐骑是彩色蓝可以很容易地观察到即使在粪便样本的筛选低能耗的目标。这是非常宝贵的快速筛查寄生虫的粪便样本,毫不费力。这将是特别有益的不熟练的学生为粪便做显微镜检查寄生虫。此外,这个方法很简单,节省时间,而且便宜。它允许直接可视化的寄生卵和囊肿的形态。可以想象生活和能动的有机体。

指出缺点的盐水湿坐骑是无色,nonbile-stained钩虫和卵子膜壳绦虫属娜娜等等,往往错过了由于粪便检查相同的背景下,主要在筛选低能耗的目标。在亚甲基blue-glycerol湿坐骑,驱虫的卵彩色深蓝从而提供一个很好的对比,使他们很容易想象即使在低功耗微观检查。此外,植物细胞、粘液和其他文物在凳子上显然是彩色亚甲基blue-glycerol山,让他们区分文物(图1)。

亚甲基blue-glycerol挂载的缺点之一是,bile-stained驱虫的卵子,卵子等答:蛔虫和t . trichiura失去了天生的棕色和染色是蓝色的。这使得很难区分从nonbile-stained bile-stained鸡蛋。这个困难,显然,发生任何潮湿的山准备使用临时的污渍。例如,在碘湿坐骑,bile-stained和nonbile-stained驱虫的卵是染色棕色。亚甲基的这个缺点blue-glycerol山可以避免考试的盐水湿挂载相同的粪便样本检测bile-stained鸡蛋。

甘油提供了一个暂时的准备,作为防腐剂由于其吸湿特性,从而防止山的早期干燥。它也作为一个固定的工作。因此,重复安装并不是必需的。碘或盐山,这是作为一个控制,干在不到10分钟,而亚甲基blue-glycerol山持续了更长的时间而不干燥。6个小时后才开始干燥,可以保留5天在不同的稀释。时间由亚甲基blue-glycerol山枯竭随甘油在山上。表2清楚地显示了甘油的用量之间的关系在山上,山的时间干涸。优化稀释甘油预防寄生虫囊肿形态改变,卵子,营养体和保存他们的内部结构,这将一直在扭曲使用纯甘油由于其水提取属性。

山中甘油浓度在50%可以保存的最长时间,也提供了最好的对比时,在显微镜下观察。类似的结果Vignesh et al。9使用0.25% iodine-glycerol组合。

5。结论

亚甲基blue-glycerol潮湿的山很容易执行和保持更长时间;试剂是经济和容易准备。过程还艾滋病大便中更好的检测和识别寄生虫在外围实验室,诊所的医生,和其他发展中国家的实验室永久染色涂片的凳子不形式的一个组成部分,常规粪便检查。我们提倡使用亚甲基blue-glycerol湿山连同盐水湿挂载在一个常规寄生虫学实验室。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

引用

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2. r . Vignesh p·e·m . Shankar et al .,“短报告:高比例等孢球虫病的感染艾滋病毒的患者腹泻在印度南部,”美国热带医学和卫生杂志》上,卷77,不。5,823 - 824年,2007页。视图:谷歌学术搜索
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4. h . Afroz r·阿拉姆·m·侯赛因et al .,“评价iodine-glycerol粪便湿山准备,”国际生物和医学研究杂志》上,4卷,不。4、3615 - 3618年,2013页。视图:谷歌学术搜索
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9. r . Vignesh r . Sekar e . m . Shankar et al .,“湿安装使用iodine-glycerol提供了一种半永久的准备显微观察粪便的寄生虫,”医学微生物学杂志》卷,57号5,679 - 680年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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