治疗疟原虫chabaudi寄生虫与姜黄素结合抗疟药物:药物的相互作用和影响的泛素蛋白酶体系统

文摘

对抗疟药物的耐药性疟疾控制仍然是一个主要障碍。来自东南亚的证据表明,耐青蒿素联合疗法(ACT)是不可避免的。Ethnopharmacological研究已经证实姜黄素的功效疟原虫spp。药物之间的相互作用分析姜黄素/胡椒碱/氯喹青蒿素和姜黄素/胡椒碱/组合和药物治疗的潜在干扰泛素蛋白酶体系统(UPS)进行了分析。在活的有机体内研究了姜黄素的功效在BALB / c小鼠感染疟原虫chabaudi克隆耐氯喹和青蒿素,由isobolograms药物的相互作用进行了分析。开始剂量姜黄素、氯喹和让老鼠服用青蒿素,信使rna治疗后收集的rt - pcr分析基因编码deubiquitylating酶(配音)。姜黄素被发现在BALB / c小鼠无毒。姜黄素的结合/氯喹/胡椒碱降低寄生虫血症37%七天治疗后与对照组的65%,和一个添加剂交互了。姜黄素/胡椒碱/青蒿素联合并没有显示出良好的小鼠模型的疟疾药物相互作用。治疗的老鼠开始增加剂量的药物导致瞬态基因编码配音说明UPS干扰。如果姜黄素加入阿森纳可用的抗疟药,未来的研究探索合适的药物伙伴会感兴趣的。

1。介绍

疟疾仍然是一个死亡率和发病率的主要原因,特别是在撒哈拉以南非洲地区。5岁以下儿童和孕妇仍是最弱势群体受到这种疾病(1]。控制程序是强烈影响抗杀虫剂和抗疟药物,包括最近实施的联合疗法与青蒿素及其衍生物(2,3]。开发新的抗疟药物虽然昂贵和费时,是必要的和一些潜在的抗疟药物存在来自植物或新合成的化合物(4]。寄生虫的耐药性及其传遍世界发展非常迅速(如以药物乙嘧啶/磺胺多辛)(4),有必要加强寻找新的抗疟药物最好是作用于新目标。姜黄素、活性化合物来源于植物姜黄抗癌,抗炎、抗病毒和抗疟活性(5- - - - - -10]。姜黄素也显示出强有力的活动对其他生物,包括:曼氏裂体吸虫成虫,隐孢子虫以及,鲁兹锥体(8- - - - - -10]。

之前的研究表明,口服姜黄素和肌内青蒿素衍生物α- - - - - -β蒿乙醚,p .鼠来华的老鼠提高了生存率和预防复发6]。相比之下,以前的工作由我们组(7]表明,口服300毫克/公斤体重(bw)姜黄素结合20毫克/公斤/ bw的胡椒碱和150毫克/公斤的青蒿素没有决定性的影响的过程中感染(7]。然而,抗疟活性和峰值寄生虫血症达成的姜黄素和姜黄素/胡椒碱治疗组相比显著降低控制治疗组(7]。

目前尚不清楚姜黄素的目标是什么。一些作者认为姜黄素的目标可能是类似于那些最初被认为是青蒿素的目标(PfATP6)[11];然而,最近的一项研究表明,青蒿素的目标尚不清楚(12]。其他人已经表明,姜黄素可能是一个抑制剂组蛋白乙酰转移酶(HAT)和它也能诱导活性氧的生产可能导致寄生虫的死(13]。然而,最近的一项研究表明,姜黄素可能会干扰许多信号通路(14)包括:增殖蛋白激酶(MAPKs),酪蛋白激酶ⅱ(CKII)和COP9 signalosome (CSN)以及泛素蛋白酶体通路(UPS)将在本研究进行分析(14]。

一个在网上研究[15显示的基因组疟原虫种虫害包含几个基因编码的蛋白质参与预测UPS (15]。Ubiquitylation是一个监管的蛋白质转译后的修改一个泛素分子与靶蛋白的赖氨酸氨基酸(15,16]。附件的泛素分子催化的蛋白质是泛素激活酶的作用(E1) ubiquitin-conjugating酶(E2),和泛素连接酶(E3) [15,16]。一般来说,ubiquitylation联系通过Lys29或Lys48有四个或更多的泛素分子的目标是通过蛋白酶降解[17,18]。另一方面,通过Lys63 ubiquitylation与目标蛋白参与无数细胞过程的监管17,18]。

的泛素分子是由de-ubiquitylating酶(配音)15- - - - - -19),负责免费的泛素分子的生成和mono的拆卸或连锁polyubiquitin基质蛋白(15- - - - - -19]。的疟原虫基因组编码至少20到40假定的配音(15- - - - - -19被归类为半胱氨酸蛋白酶和zinc-dependent metalloproteases基于泛素蛋白酶域(15- - - - - -19];这些是:泛素C末端水解酶(排序),特定于泛素蛋白酶(USP / ubp) Machado-Joseph疾病蛋白质域蛋白酶(MJDs)的Otubains(辣子鸡)的JAMM主题metalloproteases (JAMMs)和交换木瓜蛋白酶折叠肽酶(PPPDE)以及15- - - - - -19]deubiquitylating-like酶(DUBLs)已经被别人彻底审查(15- - - - - -19]。

变得明显,deubiquitylation中发挥着重要作用的规定确认的UPS畸变在基因编码配音20.]。此外,配音也被卷入抗疟药物抗性突变的发现证实了基因编码一个de-ubiquitylating酶UBP-1 (MAL1P1.34b)疟原虫chabaudi寄生虫对青蒿素、青蒿琥酯(21]。V2697F和V2728F突变谎言接近酶的催化部位和可能影响蛋白质的结构和功能21]。然而,这些突变在青蒿素耐药性的作用尚未阐明通过转染化验21]。综合这些数据表明,UPS代表一个有前途的抗疟药物目标(22]。

本研究的目的是分析疗效和药物之间的相互作用curcucmin /胡椒碱/氯喹和姜黄素/胡椒碱/青蒿素疟原虫chabaudi疟原虫抗氯喹(AS-3CQ)和青蒿素(艺术)和验证姜黄素的影响,氯喹,青蒿素药物治疗在UPS。

2。材料和方法

2.1。疟原虫chabaudi寄生虫克隆

疟原虫chabaudi克隆在我们的数据库,并使用在本研究AS-3CQ(耐氯喹)和从克隆中选择AS-Pyr受到六每日剂量氯喹(CQ) 3毫克/公斤(23]。这种寄生虫是克隆和命名AS-3CQ [23]。为艺术克隆耐青蒿素从克隆获得被称为AS-30CQ容忍300毫克/公斤/天的青蒿素(24)通过串行通道的存在增加subcurative剂量的青蒿素(23,24];这种寄生线克隆和命名为艺术(24]。表型稳定显示的克隆即使冻结/解冻串行血液通道通过老鼠没有或药物治疗,并通过蚊子传播按蚊stephensi。

2.2。姜黄素的急性毒性

雄性BALB / c小鼠体重15克,购买了6 - 7周大的动物房设施IHMT(卫生与热带医学学院,里斯本,葡萄牙)。姜黄素的LD50 BALB / c小鼠测定5个剂量的口服2克/公斤/ bw;2、5 g / kg / bw;3 g / kg / bw;3、5 g / kg / bw;和5克/公斤/ bw每个鼠标经过四小时的禁食。5克由其他人(集中报道27,28)是已知的最高剂量接种小鼠急性毒性试验的任何药物。动物观察14天的任何生理毒性的迹象包括颤抖,昏睡的行为和身体运动受损。

2.3。在活的有机体内为期四天的姜黄素抑制试验,姜黄素/胡椒碱,姜黄素/胡椒碱/氯喹,青蒿素和姜黄素/胡椒碱/

在目前的研究在活的有机体内疗效和姜黄素/胡椒碱的相互作用结合青蒿素和氯喹化验使用为期4天的抑制试验(29日]。姜黄素94% cucuminoid内容(Sigma-Aldrich,马德里,西班牙)和青蒿素(Sigma-Aldrich,马德里,西班牙)溶解在DMSO (Sigma-Aldrich,马德里,西班牙)和氯喹(Sigma-Aldrich,马德里,西班牙)是溶解在水中。寄生虫在液态氮被解冻,老鼠注射受感染的红细胞。寄生虫血症被允许发展一旦寄生虫血症达到30%,受感染的血液收集和柠檬酸盐溶液稀释。

的腹腔内注射受感染的红细胞是管理个人的老鼠。笼子里最多包含5个老鼠都被保存在一个明暗周期和老鼠的食物和水随意。三小时后小鼠由口腔填喂法单独服用氯喹,姜黄素单独或组合的姜黄素/胡椒碱/氯喹胡椒碱97% (Sigma-Aldrich,马德里,西班牙)已经被报道在此前的一项研究中没有抗疟活性(7),但据报道提高姜黄素的吸收30.]。

同样的程序进行了艺术抗寄生虫感染的老鼠。受感染的老鼠收到的培养液感染红细胞和三小时后5组小鼠笼单独服用口服剂量的青蒿素,姜黄,姜黄素/胡椒碱,另一组接受姜黄素/胡椒碱/青蒿素的结合。所有实验对照组包括无毒。药物的口服药物4天(天0,1,2,3)。寄生虫血症后每天监测药物治疗一段连续7天,因为以前的工作表明,姜黄素/胡椒碱组合与对照组的差异可以观察到药物治疗结束后5 - 7天(7]。薄血涂片染色准备和沾20% / PBS溶液(Sigma-Aldrich,马德里,西班牙)pH值7.2,并通过光学显微镜微观分析了幻灯片。

2.4。在活的有机体内药物相互作用研究和Isobolograms

ED50值(生产减少50%的寄生虫血症浓度)的药物单独和组合的计算是通过绘制日志剂量和相对比例抑制使用GraphPad棱镜4软件(GraphPad棱镜4、钙、美国)使用非线性回归,剂量反应曲线根据4-parameter逻辑斯蒂方程(山坡)。ED50和小山斜坡ED90值计算使用公式和方程(25]。为了生成isobolograms [25]ED90值的药物和药物组合的线性方程计算药物的剂量反应曲线,结合治疗结束后7天。ED90值被用来计算isobolar等效(IE)值(25,26]。Isobolograms设计包括对角线(黑色固体)代表的可加性(数据2和4)。Isobolograms允许添加的可视化、合作或对抗。如果IE值低于1它产生一个倾斜的isobologram添加以下行指示合作(25,26]。当IE值相等或接近1最值将谎言紧密相加性线指示可加性。如果大多数IE值高于1,这表明对抗(25,26]。

2.5。统计分析

一个学生以及和方差分析测试被用于统计分析使用GraphPad棱镜4软件和SPSS软件9.0版本。所有实验都是根据动物的指导方针进行设施的卫生和热带医学学院(IHMT),葡萄牙里斯本和根据FELASA指南。

2.6。表达谱的基因编码酶的泛素/蛋白酶体途径p . chabaudi

正如前面提到的姜黄素是已知干扰UPS (14]。这是通过rt - pcr验证。在这项研究中我们选择了三个基因编码deubiquitylating酶和序列从PlasmoDB检索数据库,用于引物设计(表2)。人类的同系物PcUCH-L3调节上皮细胞钠离子通道的顶端膜回收31日]。人类的同系物PcUCH-L5似乎与TG所涉及的蛋白体和可能有关β信号(19]。UBP-8基因在酵母转录调节机制,它负责组蛋白的deubiquitylation H2B [32]。鉴于这些基因在其他生物系统的重要性,我们分析了基底这些基因的表达p . chabaudi在寄生虫的生命周期和他们对治疗的反应开始剂量氯喹(2毫克/公斤),青蒿素(2毫克/公斤),姜黄素(2毫克/公斤)。

2.7。疟原虫chabaudiRNA提取和互补脱氧核糖核酸的合成

疟原虫chabaudi红细胞被收集在来华的时间点0 h;显微镜分析显示,主要是年轻的营养体的寄生虫礼物。感染红细胞是通过列纤维纤维素粉(CF11) (Sigma-Aldrich,马德里,西班牙)去除淋巴细胞。最终的解决方案是在700 g离心5分钟和RNA提取获得的颗粒使用试剂盒(Sigma-Aldrich,马德里,西班牙)和遵循制造商的指示。RNA (1μ混合5 g)μL DNase我缓冲和1μL DNase我(Promega,曼海姆,德国)和孵化在37°C 15分钟。通过添加1 DNaseI被灭活μL (EDTA (Promega,曼海姆,德国)和孵化在65°C 5分钟。RNA (50 ng)此前接受DNase我用作模板和混合Maxima合成第一链cDNA工具包的rt - pcr (Fermentas,马德里,西班牙)和水的最终体积25μL根据制造商的指示。样本孵化10分钟25°C,紧随其后的是30分钟在50°C和互补脱氧核糖核酸合成的反应被终止孵化在85°C 5分钟。

2.8。实时聚合酶链反应分析p . chabaudi基因编码Deubiquitylating酶和rt - pcr条件

实时PCR使用智商SYBR绿色supermix (Bio-RAD,里斯本,葡萄牙)使用微安96 -孔板(应用生物系统公司,马德里,西班牙)和25个一式三份μL最后一卷包含智商SYBR绿色supermix染料,0.025 U /μL iTaq DNA聚合酶(Promega,曼海姆,德国),200年μM核苷酸(Promega,曼海姆,德国),3、5毫米MgCl₂(Promega,曼海姆,德国),每个单独的混合物包含300海里的正向引物(StabVida,里斯本,葡萄牙)和300海里(StabVida,里斯本,葡萄牙)的反向引物特异性PcUCH-L3,PcUCH-L5,PcUBP-8;最后,2μL (cDNA稀释1:10获得感染的老鼠用姜黄素治疗,氯喹,青蒿素被添加到每个单独的混合物。

以下放大条件下执行的反应是:10分钟的预培养在95°C,紧随其后的是40周期为15秒95°C和1分钟以60°C 7500快rt - pcr thermocycler(应用生物系统公司,马德里,西班牙)。引物设计与p . chabaudi电脑β-actinI基因(个人电脑β-actinI)被用作内生控制别人之前报道(33]。为了确定为每个单独的基因,PCR效率样本稀释在连续10倍范围,在每个稀释和CT值测量。

曲线被构造为每个基因的效率决定。实时PCR效率()从给定计算斜坡根据方程:,在那里对应于100%的效率(34]。

2.9。分析使用的相对表达方法

的方法用于计算的相对量化目标基因(34]。目的是分析首先研究基因的表达在寄生虫的生命周期,在缺乏任何形式的治疗。第二个目标是分析研究基因差异表达的寄生虫暴露于药物治疗与样本收集在时刻0 h并没有暴露于药物治疗。具有多个表达式的差异相比,使用学生未经处理的样品进行了分析以及(化验)在GraphPad棱镜4软件和SPSS软件9.0版。

3所示。结果

3.1。在活的有机体内独自疗效和药物相互作用的研究姜黄素和姜黄素/胡椒碱/氯喹和姜黄素/胡椒碱/青蒿素的药物组合

鉴于青蒿素的联合疗法(ACT)的出现,迫切需要新的抗疟药物耐药性。本研究的目的是确定的在活的有机体内姜黄素单独或结合的功效:姜黄素/胡椒碱/氯喹青蒿素和姜黄素/胡椒碱/为了澄清他们的药物相互作用疟原虫chabaudi抗寄生虫。

急性毒性研究表明,姜黄素是无毒的老鼠甚至在2 g / kg / bw(表1);14天的小鼠存活没有中毒的迹象。结果表明,姜黄素单独能够推迟高峰寄生虫血症剂量依赖性的方式(数字1和3)在两个p . chabaudi克隆。统计上没有显著差异()之间的控制治疗组和治疗组50毫克和150毫克姜黄素。重要结果发现特别是在500毫克/公斤/ bw AS-3CQ克隆寄生虫血症降至47%和45%为艺术克隆控制相比治疗组()(65%和62%的数字1和3)。

姜黄素与胡椒碱结合显示轻度抗疟效应是与之前的工作相一致7]。又在两个克隆姜黄素/胡椒碱组合在高剂量更有效地减少寄生虫血症。在250毫克姜黄素+ 20毫克的胡椒碱寄生虫血症小鼠降至45%感染了耐氯喹克隆(AS-3CQ)和44%的青蒿素耐药性感染的小鼠克隆(艺术)相对于控制()(图3)。姜黄素在500毫克结合20毫克的胡椒碱寄生虫血症小鼠降至42%感染了寄生虫仍然线和40%出现青蒿素耐药性的寄生虫感染的老鼠线值显著(),这表明姜黄素的功效/胡椒碱组合p . chabaudi克隆也存在剂量依赖的相关性的方式。药物相互作用研究的四个剂量氯喹的口服药物仍然寄生虫感染的小鼠行(AS-3CQ)和4个剂量的2、5毫克的氯喹发现减少寄生虫血症48%,药物治疗后7天。AS-3CQ寄生虫服用5毫克/公斤,10毫克/公斤寄生虫血症降低15%和9%,分别。因此选择了不把这些高剂量姜黄素/胡椒碱就像面具相结合的效果。

当姜黄素/胡椒碱结合固定剂量的2、5毫克/公斤的氯喹,减少寄生虫血症时比使用姜黄素单独或与胡椒碱结合使用时(图1)。当姜黄素/胡椒碱/氯喹在寄生虫血症小鼠显著减少管理是实现与对照组相比。减少更明显在较高剂量(150毫克+ 2,+ 20毫克5毫克)寄生虫血症45% (),(250毫克+ 20毫克+ 2、5毫克)寄生虫血症39% (),(500毫克+ 2,+ 20毫克5毫克)寄生虫血症37% (相对于控制样本(图)1)。

有趣的是,当姜黄素/胡椒碱/氯喹联合在一起少姜黄素实际上需要看到一个显著抑制寄生虫血症。这是明显的寄生虫血症降至50%的组合(curc 50毫克+ pip 20毫克+ CQ 2、5毫克)()相比,对照组65%,表明一个添加剂/弱协同效应,证实了isobologram(图25)与最值达到低于1,。虽然姜黄素的相互作用/胡椒碱/氯喹是有利的,并帮助减少寄生负载,后续的寄生虫血症8天(15天)显示一个完整的间隙的寄生虫亚微观的水平并没有实现。总会有残余寄生虫血症< 2%检测到的幻灯片。表明寄生虫没有失去仍然表型。

群出现青蒿素耐药性的寄生虫感染的小鼠行艺术也仅4个剂量的青蒿素治疗(50毫克,150毫克,250毫克和350毫克)和350毫克/公斤的青蒿素单独寄生虫血症降至5%相比,对照组67% ()(图3)。减少寄生虫血症也观察到50毫克,150毫克和250毫克(图3)和150毫克/公斤被选为用于结合的剂量姜黄素/胡椒碱(图3)。

再一次的治疗疟原虫chabaudi抗寄生虫作为艺术与姜黄素单独只在高剂量导致寄生虫血症明显降低。在500毫克/公斤的姜黄素寄生虫血症降低到45% ((图)相比,对照组62%3)。减少更明显的姜黄素结合胡椒碱时导致寄生虫血症减少从67%到40% ()(图3)。

增加固定剂量150毫克/公斤的青蒿素姜黄素/胡椒碱不减少导致寄生虫血症明显区别与对照组之间的青蒿素、姜黄素、胡椒碱(),这是与之前的工作相一致7]。事实上,即使在高剂量(500毫克姜黄素+胡椒碱20毫克+ 150毫克青蒿素)寄生虫血症降至50%相对于对照组()62%(图3)。

看来,姜黄素、姜黄素/胡椒碱和青蒿素分开单独表现的更好而不是当这三个化合物(图相结合4)。isobologram表明大多数值都大于1,5导致一个isobologram远离的值相加性线,指示组件之间对抗的药物组合。

3.2。表达的基因PcUCH-L3,PcUCH-L5,PcUBP-8在p . chabaudi寄生虫和药物治疗的影响这些基因的表达

三个基因编码de-ubiquitylating酶PcUCH-L3,PcUCH-L5,和PcUBP-8rt - pcr分析的存在和缺乏药物治疗,以验证药物治疗是否妨碍了UPS。结果表明,克隆AS-3CQ和艺术研究以下三个基因高表达在6小时时间点(数据5和6)。显微镜幻灯片准备在那个时间点当信使rna收集显示大多数寄生虫主要是在成熟的营养体阶段,也是最复制的阶段的寄生虫的生活(35),统计上没有区别的基底之间的三个基因的表达两个克隆()。

治疗AS-3CQ寄生虫subcurative单剂量氯喹和subcurative单剂量姜黄素诱导增加这三个基因的表达(数字7和8)特殊药物接触后6 h和12 h,比未经处理的样品收集在时间点0 h ()。统计分析也适用于比较基础的表达基因6小时和12小时时间点和相同的样品暴露于治疗,这显示差异()。显微镜幻灯片分析显示大部分裂殖体的存在在12 h时间点,这也是舞台的疟原虫氯喹是已知的行为。与所有基因似乎影响瞬态回到水平类似于未经处理的样品24小时后。显微镜幻灯片显示的存在ring-stage寄生虫在24小时收集点。在这两种治疗方法PcUBP-8是表达的基因表现出最高的增加相对于未经处理的样品0 h ()(数据7和8)。

在艺术寄生虫接受单个subcurative剂量的青蒿素和单subcurative剂量姜黄素也有这三个基因的表达增加相对于未经处理的样品0 h,这是更加突出6小时和12小时后药物暴露()。在这两种治疗方法PcUBP-8是基因表现出最高的增加具有表达相对于控制未经处理的样品()。表达水平与三个基因药物治疗引起的瞬态回到水平类似于未经处理的样品0 h(数字9和10)。

4所示。讨论

鉴于药物抵抗行为的出现,迫切需要新的替代治疗疟疾。姜黄素已经显示了巨大的潜力在体外和在活的有机体内对疟原虫spp。6,7]。然而,它可怜的可用性和快速的新陈代谢问题克服,以利用这种植物的化合物的全部好处36]。增强剂,如胡椒碱来源于黑胡椒粉是已知提高姜黄素的生物利用度(36)在此测试作为一个组合:姜黄素/胡椒碱/氯喹和姜黄素/胡椒碱/青蒿素。

结果表明,姜黄素/胡椒碱/氯喹是添加剂之间的相互作用,并帮助减少的寄生虫负荷治疗结束后7天。结果是很有趣的:虽然这两种药物有不同的结构和不同的行动模式,它们都有消炎作用,可能有助于减少寄生虫血症(37]。姜黄素是众所周知的免疫调节特性包括:激活TLR2增加il - 10和生产物质抗体(37]。为其抗疟药氯喹是众所周知的schizonticidal活动以及其抗炎特性如抑制肿瘤坏死因子-α,il - 1β,il - 6 (38)让在治疗其他疾病的药物组合有趣的过多的促炎细胞因子的产生。相信姜黄素是一个有吸引力的化合物辅助治疗脑型疟疾的39通常用奎宁,氯喹派生。因此进一步的药代动力学研究姜黄素与奎宁及其衍生物在抗疟治疗需要开发他们的潜力。

姜黄素的结合/胡椒碱/青蒿素没有有利的药物相互作用。虽然能够减少寄生虫血症在统计学上没有差异控制青蒿素治疗组和姜黄素/胡椒碱/组。事实上老鼠独自处理青蒿素和姜黄素单独有显著减少寄生虫血症与小鼠相比治疗药物组合姜黄素/胡椒碱/青蒿素(图3)。

一个在体外研究在恶性疟原虫揭示姜黄素和青蒿素之间的合作,在活的有机体内化验,α,β蒿乙醚是肌内注射p .鼠来华的老鼠跟着姜黄素喂养能防止复发(6]。然而,在这项研究中提到的胡椒碱并不是作为增强剂和生物学的差异p . chabaudi和p .鼠寄生虫也需要考虑。在目前研究的三个化合物的混合物的口服药物导致了不利的药效学相互作用。最近的研究在P。鼠体内来华的老鼠使用青蒿素和姜黄素也表明,虽然可以从血液中清除寄生虫,他们仍然在脾脏和肝脏(37),支持复发。

青蒿素的半衰期大约8 - 14小时(37)和姜黄素半衰期为8 h (37]。在老鼠的研究报道,只有0 0 1%,25%的胡椒碱口服药物可在肝脏中发现胡椒碱导致腹腔内管理1 - 2,而5%的肝脏中胡椒碱检测6小时后(40]。考虑到这三个药物有不同的结构和不同的行动模式,显然需要更多的研究包括不同的管理路线和高效液相色谱法分析小鼠组织与姜黄素/胡椒碱/青蒿素治疗后为了阐明药物分布和消除。

青蒿素衍生物以及姜黄素衍生物可以提供替代纯化合物。吡唑模拟的研究表明,姜黄素(甲基姜黄素)7 - 9折活动恶性疟原虫CQ-sensitive和CQ-resistant菌株IC50值为0.48和0.45μ米(41姜黄素相比,有一个在体外IC50 5μ米(41]。之前的研究也表明,青蒿素在50毫克/公斤/ bw结合姜黄素在100毫克/公斤/ bw封装在传统脂质体治愈p .鼠疟疾感染的老鼠相比,免费药物(42]。本研究得出结论:交付系统,如脂质体和纳米粒子可能交付的关键药物半衰期较短,可怜的生物利用度42]。它也表明,姜黄素在绑定到壳聚糖纳米粒子能够完全治愈p . yoelii受感染的老鼠(43]。因此,未来的研究与姜黄素的目的在于找到合适的药物传输系统(43)和更好的药物伙伴为了最大化姜黄素作为抗疟剂的好处。

基因表达分析显示一个活跃的UPS的证据p . chabaudi寄生虫主要在营养体阶段,伴随着高代谢活动,这对于寄生虫是必要的复制(35]。在目前研究这三个药物的口服药物能够引起瞬态变化的三个基因的表达PcUBP-8显示最高增加暴露在所有三个药物(数字7,8,9,10)相对于未经处理的样品。如前所述,PcUBP- - - - - -8基因在酵母酿酒酵母需要优化基因激活和负责组蛋白H2B的de-ubiquitylation,这是参与染色质重塑(32]。在p . chabaudi寄生虫的作用PcUCH-L3,PcUCH-L5,PcUBP-8酶是未知的。目前尚不清楚这些酶的转录控制表观遗传机制或调节p . chabaudi基因。以前的工作使用基因表达系列分析(SAGE)技术表明,chloroquine-treated恶性疟原虫文化增加了5.5倍的基因编码一个ubiquitin-specific蛋白酶和增加5.5倍的基因编码蛋白体亚基α观察(44]。另一方面,与阿霉素治疗人类乳房癌MCF-7细胞,也具有抗疟活性(45),显示一个18.6倍增加26 s蛋白酶体调节亚基(46]表明变化的UPS可能代表一个一般适应寄生虫药物治疗。

现在已经知道,药物治疗可能会干扰离子体内平衡,这将导致一些细胞器的细胞内的pH值变化对寄生虫的存活至关重要,从而干扰酶活性和功能(47),这将解释的必要性增加转录和翻译的PcUCH-L3,PcUCH-L5,PcUBP-8基因产物,以弥补酶损伤。受损蛋白质有可能作为刺激诱导的表达基因编码酶参与蛋白质合成和蛋白质降解,以便应对胞内寄生虫压力。因此,upregulation UPS的一般需要帮助这种寄生虫生存在药物压力下,它很可能是一个防御机制,或阻力,使UPS一个有吸引力的药物目标(48]。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

Zoraima否决权写道。Zoraima否决权,玛尔塔马查多和安娜Lindeza负责维护疟原虫chabaudi感染、药物治疗和药物相互作用研究中,RNA提取,数据收集和数据分析。Virgilio罗萨里奥和马科斯l . Gazarini Dinora Lopes批判性回顾了纸。Dinora Lopes协调研究。所有作者都阅读和批准。

确认

作者感谢d Karine流行Le罗氏制药,博士,助理教授的细胞生物学和神经科学,加州大学河滨分校(加州大学)、钙、美国和d·安娜·朱莉娅·阿方索博士,研究员寄生虫学的单位,卫生与热带医学学院,葡萄牙里斯本的支持和思想向项目(deubiquitylating酶的生物学特性(排序/美国邮政总局)疟原虫spp)。这项研究是由Fundacao对位Ciencia & Tecnologia (FCT)参考:PTDC BIA_MIC / 65861/2006。Zoraima否决权是由FCT,收到奖学金参考:SFRH / BD / 46203/2008。

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