患病率和反抗体水平疟原虫种虫害与进口疟疾临床病史的旅行者

文摘

在这项研究中,我们表明,40.29%的旅客可能历史反疟疾暴露是积极的疟原虫种虫害的抗体,而这些人被显微镜负面。这里描述的抗体测试是有用的说明疟疾暴露在microscopy-negative旅行者从流行国家。

1。介绍

疟疾是一种传染性疾病引起的原生动物寄生虫属的疟原虫咬的,这是人类之间传播感染的女性按蚊蚊子。这些寄生虫有一个复杂的生命周期,矢量无脊椎动物和脊椎动物宿主。在肝细胞在人体寄生虫繁殖,然后入侵红细胞(红血球),启动血液感染阶段,对应于疾病的症状期(1]。

疟疾仍然是最严重的公共卫生问题之一,不仅在流行国家,有20亿人(约占世界人口的40%)在感染疾病的风险,而且在nonendemic地区,进口越来越多的疟疾病例是令人担忧的2]。在发达国家,进口疟疾主要见于游客和移民前往本国拜访亲戚、朋友。每年,大约有1.25亿国际旅客前往疟疾流行地区,其中30000合同疾病(3,4]。在葡萄牙,每年50的发生这种情况下(5]估计根据国家公共卫生系统。

感染后的五种疟原虫能够感染人类,恶性疟原虫,p .那,间日疟原虫,三日疟原虫,和诺氏疟原虫,特定抗体产生一个或两个星期后最初的感染和持续三到六个月后寄生虫间隙(6]。这些抗体可能会持续几个月或几年semi-immune患者在疾病流行国家再感染是常见的。然而,在天真的病人,抗体水平下降更快。再感染或复发导致继发反应抗体滴定度高和快速上升(6,7]。

因此,在目前的研究中,我们的目标是评估患病率和反的水平疟原虫种虫害抗体血清样本中旅行者可能临床疟疾的信号和症状。使用ELISA-based商业免疫测定工具来衡量抗疟抗体,我们确定原始血清学的这些人。此外,我们为对照的比较后者血清学资料和实验室诊断、基于直接显微镜。

2。材料和方法

2.1。研究人群

这项研究包括335人的人口可能临床疟疾和23名健康个体的历史(健康的葡萄牙人从未在疟疾流行的国家)。所有的435受试者有潜在风险疟原虫种虫害旅行回到葡萄牙从非洲疟疾流行地区,巴西、厄瓜多尔、印度、印度尼西亚、泰国、和海地,随着居民或游客,其中大部分都是成年人。本研究主题为积极招募后看到的疟疾临床单位的热带疾病的症状(IHMT、葡萄牙)。

显微镜检查Giemsa-stained血液的电影后,受试者可能暴露在寄生虫和伴随的积极显微镜分为组1 ();受试者可能暴露在寄生虫但显示-显微镜分为组2 ();最后,健康的天真的受试者被分为3组()。

2.2。微观诊断疟疾

从每个病人血液通过静脉穿刺(5毫升的血液抗凝剂),和两个血涂片准备(血厚和薄的电影)。血液学的数据从一个自动获得Coulter Sysmex k - 1000分析仪(埃米利奥de Campos代理)。血液的电影都是染色的染色的染色法和光学显微镜观察。厚血涂片被用来实现定性诊断疟疾感染,血液薄膜是用来识别疟原虫物种,当感染。此外,当感染成立,薄血膜也被用来计算200年寄生虫白细胞的数量,然后转换成,这组数字是1微升血液寄生虫数量(8]。样品没有明显的寄生虫进球后100字段为这个测试被认为是消极的。这些程序是用于疟疾的诊断测试。本临床研究协议的机构伦理委员会批准学院Higiene e药物热带,葡萄牙里斯本新大学德葡京(PN临床研究注册4年,2012年,2012年2月)。

2.3。抗疟疾抗体的血清学检测

总反疟原虫spp。(抗疟)抗体分析从血清样本收集所有个人()。纽马克特实验室疟疾环评工具包(美国Bio-Rad)是本研究评估中使用的流行总抗疟疾抗体描绘对象组。该系统是基于反的绑定疟原虫种虫害的抗体(免疫球蛋白、IgM IgA)使用的四个重组抗原检测抗原恶性疟原虫,p .那,间日疟原虫,和三日疟原虫。由制造商推荐的方式进行试验,如下。50μL个人稀释血清样本添加到每一个。对于每个检测板,50μL(积极的和消极的控制也分发。消极的控制测试在副本一式三份和积极控制。混合在一个盘子瓶30秒后,板上覆盖和孵化30分钟37°C之前洗了5次洗涤缓冲。50μL(稀释辣根peroxidase-conjugated抗体被添加到每个好,和盘子孵化30分钟37°C。井又洗了5次,50μL的基质溶液添加到每个。板覆盖,在黑暗中孵化30分钟。最后,50μL 0.5硫酸被添加到每个停止反应,和吸光度是阅读450海里,一个参考波长620 nm。获得的抗体指数除以每个样本的OD值(490海里)的截止值,这是计算的均值-控制价值+ 0.100,根据制造商。

2.4。数据分析

建立学习小组后,一个商业免疫测定疟疾环评工具包(美国Bio-Rad)是用来确定总反疟原虫种虫害抗体。疟疾环评工具是基于抗体的存在(IgM、免疫球蛋白和IgA)活性四重组抗原检测恶性疟原虫,p .那,间日疟原虫,和三日疟原虫。截止值计算的均值-控制价值+ 0.100。验证试验、光密度(OD)每个消极的控制应低于或等于0.080,和每一个积极的OD控制应大于或等于1.000。获得的抗体指数除以每个样本的OD值由截止值(490海里)。指数小于或等于1的样品被认为是负面的。此外,抗体指数大于1的样品被认为是阳性抗疟疾抗体的存在。这种免疫测定不区分免疫球蛋白、IgM IgA抗体或抗体之间恶性疟原虫,间日疟原虫,p .那和三日疟原虫。

3所示。结果与讨论

在这项研究中,患病率和水平的总抗疟抗体(抗-疟原虫spp)测定患者可能的疟疾病史。这些患者在临床单位积极招募热带疾病(IHMT、葡萄牙)。疟疾抗体环评(英国纽马克特;反Bio-Rad)是基于绑定疟原虫抗体血清样品中抗原固相固定。抗原是四种重组类型特定的恶性疟原虫与大p .那和三日疟原虫和一个特定的抗原间日疟原虫。测试总免疫球蛋白(Ig)抗体检测恶性疟原虫和间日疟原虫并显示80%大p .那和67%三日疟原虫。疟疾抗体环评进行推荐的制造商。

表1显示两组个体的分布和特征可能接触到疟原虫种虫害基于微观诊断疟疾(血液电影),而第三组nonexposed个人组成。

图1和表1显示总抗疟疾抗体的分布和水平三组:组没有。1(旅行者可能接触到疟原虫种虫害和疟疾),显微镜下呈阳性组没有。2(旅行者可能接触到疟原虫种虫害和显微镜下负疟疾),和组没有。3 (nonexposed个人健康的人居住在葡萄牙)。从所有人可能接触到疟原虫spp。(),13.43% ()有积极的血液的电影。另一方面,40.29% ()的ELISA血清学反应呈阳性疟原虫spp。(表1)。正如预计的一样,天真的人(集团号3)血清学和显微镜下负面结果疟疾。

结果有关的流行程度和水平抗疟抗体显示对象的组没有。1(积极的血涂片)和组没有。2(-血涂片)详细数据2(一个)和2 (b),分别。两个比较的组没有结果。3 (nonexposed个人)。的显微镜下积极的个人(),80% ((图)显示一定程度的抗疟抗体2(一个))。此外,所有个人的显微镜下负疟疾(),34.1% ()抗疟疾抗体和65.9% ()没有血清学反应疟原虫spp。(图2 (b))。

使用免疫荧光测定抗疟疾的流行疟疾抗体被用来估计风土性[9,10),但它的使用是有限的依赖的寄生虫,昂贵的荧光显微镜,和幻灯片的主观性质阅读。然而,抗疟疾抗体的ELISA测定已被证明是一个潜在的有用的流行病学工具(11,12]。例如,环子孢子抗原抗体与传播强度相关(10)和累积(年龄相关的)接触感染在巴西13和斯里兰卡14]。此外,血清学数据相对简单的收集:收集血液或血液处理点。处理血液或血滴在滤纸是一个合适的血清来源如果适当地收集和储存15,16],ELISA-based抗体检测是健壮的,相对较低的技术与高吞吐量和便宜。

然而,抗体检测是不能代替血涂片检查在诊断急性发作的疟疾,它主要用于筛选潜在献血者避免transfusion-transmitted疟疾(17,18]。血涂片应取自那些症状和历史的旅行建议疟疾。在临床实践中,血清学没有在诊断急性疟疾,但在某些情况下,它可以用于更好地理解可能的历史当没有疟疾寄生虫通过显微镜发现,这是黄金标准方法的诊断疟疾。这可能发生在一个血涂片的话题从来没有分析或者因为他们采取了抗疟药剂量足以抑制寄生虫血症检测水平与疟原虫前联系。在这种情况下,血清学调查可能证实或排除疟疾,根据先前的报道表明抗体测试是有效的检测疟疾感染在旅客从海外回来19),在他们离开后多发地游客流行地区(19,20.]。

36从第1组45例(80%)受试者显示级别的反疟原虫种虫害抗体滴定时商业免疫测定疟疾环评装备,而其余9例(20%)受试者无显著水平的反疟原虫种虫害抗体,与对照组相比(集团号3)。这些9个人可能在初始阶段的感染或疾病的急性期,这就解释了为什么没有检测到抗体血清,在显微镜下积极的幻灯片或假阳性显微镜下。在这些情况下,检测到的抗体水平太低这个方法或还没有被生产。另一方面,200年335例(66%)受试者没有显示显著水平的反疟原虫种虫害抗体在这项研究中使用的商业工具。此外,135例(40.29%)受试者显著水平的反疟原虫种虫害抗体,与对照组相比(集团号3)。在我们的研究中,抗体的存在34.1%的受试者与负面显微镜证实了显微镜的局限性,和一个额外的抗体测试是一种资产接触了解疟原虫流行国家的旅行者。此外,往往很难区分物种,特别是如果病人已经治疗或化学预防。

这项工作补充了新的研究,评估这些患者的血清学反应性和识别主要抗原蛋白负责生产的抗体在这项研究中发现21]。

4所示。结论

这项研究显示,40.29%的旅客可能疟疾暴露是积极的反的历史疟原虫种虫害的抗体,而这些人被显微镜负的40.29%。这里描述的抗体测试是有用的说明疟疾暴露在microscopy-negative旅行者从流行国家。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者要感谢所有的受试者都同意坚持学习和葆拉·马杜罗和劳拉Cravo实验的支持。

引用

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