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Roger Wumba, Menotti Jean, Longo-Mbenza Benjamin, Mandina Madone, Kintoki Fabien, Zanga Josué, Sala Jean, Kendjo Eric, Guillo-Olczyk AC, Thellier Marc那 “肠内毒素生物血清鉴定刚果民主共和国金沙卡艾滋病毒感染人类的实时聚合酶链反应和限制性片段长度多态性“,寄生虫学研究杂志那 卷。2012那 文章ID.278028那 6. 页面那 2012. https://doi.org/10.1155/2012/278028
肠内毒素生物血清鉴定刚果民主共和国金沙卡艾滋病毒感染人类的实时聚合酶链反应和限制性片段长度多态性
摘要
客观的.以确定患病率和基因型肠内毒素生物血清HIV患者的粪便样本中方法.这种横断面研究是在2009年至2012年至2012年的金沙萨医院进行的。检测苗期孢子虫包括大肠bieneusi和E. intestinalis.在242名艾滋病毒感染患者中进行。键入是基于核糖体DNA的DNA多态性其区域大肠bieneusi.用两种限制性内切酶(Nla III和Fnu 4HI)在pcr扩增的ITS产物中生成PCRRFLP,用于将菌株划分为不同的谱系。间接免疫荧光单克隆抗体(IFI-AcM)的诊断性能与实时荧光定量PCR作为金标准进行了比较。结果.在242名艾滋病毒感染者中,使用实时聚合酶链反应大肠bieneusi是7.9%()在19个大肠bieneusi,一个被互化E. intestinalis..19.大肠bieneusi采用PCR-RFLP方法检测5株I型菌株大肠bieneusi(26.3%)和5株IV型大肠bieneusi(26.3%)被鉴定出来。IFI-ACM的敏感性较差,估计估计为42.1%。结论.尽管PCR方法不同,但艾滋病毒卷积,地理位置(法国,Cameroun,刚果民主共和国)之间存在关联,以及I型和IV型菌株的同意。
1.介绍
已确定肠内毒素生物血清(大肠bieneusi)是人类中最常见的苗癣。microsclidia,缺乏细胞内寄生虫,缺乏真核核糖体特征和过氧化物血清[1].他们的孢子在各种无脊椎动物和脊椎动物生物中渗透和感染真核细胞。文献报告了患有患者患者的流行病学,导致,诊断和消化系统疗程[2-7.].
在刚果民主共和国首都金沙萨地区,我们发现了这种情况大肠bieneusiHIV患者的感染仅使用光学显微镜和真菌荧光[8.]以及常规的聚合酶链式反应(PCR)方法[9.].我们可以确定诊断的敏感性大肠bieneusi与传统方法相比,通过实时PCR测定进行感染[10.那11.].
大肠bieneusi通过PCR限制性片段长度多态性(RFLP)分析还鉴定基因型[12.那13.].
因此,本研究的目的是确定该病的患病率和基因型大肠bieneusi通过开发快速有效的实时PCR和PCR-RFLP方法,在HIV患者中粪便标本。
2.材料和方法
2.1.研究设计
本研究在2009年12月至2012年1月期间被设计为描述性横断面方法。
2.2.道德的考虑
机构审查委员会和金沙卡大学医学院伦理委员会批准了该研究的议定书,该研究符合赫尔辛基宣言的原则。解释了该研究的程序,并在必要时由每个参与者或指定的识字替代品签署了明智的同意书。
2.3.研究背景
刚果民主共和国金沙萨社区,倩碧的大学医疗de金沙萨(CUK)作为教学医院在金沙萨的西南部城市,一般推荐医院的金沙萨(HGRK)在金沙萨的中心城市,一般推荐医院Kintambo (HGRKint)金沙萨东北部城市,和金沙萨市西部科科罗营地军事转诊医院是随机抽取的。
2.4.患者及临床标本
我们包括242名连续感染艾滋病毒的患者。收集所有参与者的HIV疾病的临床特征。
2.5.的诊断大肠bieneusi感染
我们在pH 7.2的缓冲液中收集了242份新鲜粪便样本分析前°C。所有242名患者的粪便标本在PBS溶液中稀释以进行微观检查。
显微镜检查和特异性染色均在金沙萨大学寄生虫学实验室(CUK)和Pitié Salpêtrière医院(PSL)寄生虫学真菌学实验室(Paris, France)进行。使用光学显微镜(直接检查和Weber修改的三色特异性染色)对粪便样本(每个患者一个)进行研究,以检测微孢子虫[14.].
间接免疫荧光 - 单克隆抗体(IFI-ACM)技术用于鉴定大肠bieneusi和E. intestinalis.[15.那16.].
2.6。基因组DNA提取
DNA提取使用QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany),按照供应商的协议进行。
2.7。实时聚合酶链反应
我们在法国巴黎圣路易斯医院寄生虫学体系中的所有样本进行了实时PCR,使用了所有三种物种识别的7500个实时PCR系统(Applied Biosystems,Ca,USA)(大肠bieneusi和E. intestinalis.).
为了大肠bieneusi,采用FEB1 (5 ' -CGCTGTAGTTCCTGCAGTAAACTATGCC-3 ')和REB1 (5 ' -CTTGCGAGCGTACTATCCCCAGAG-3 ')引物和荧光TaqMan探针(5 ' -ACGTGGGCGGGAGAAATCTTAGTGTTCGGG-3 ')扩增小亚基核糖体RNA基因的102bp片段,如前所述[10.].为了E. intestinalis.,采用FEI1 (5 .'-gcaagggaggaatggaacagaacag-3')和Rei1(5'-cacgtcagaagcccatcactacacagc-3') - 引物,具有以下荧光taqman探针:5'-fam-cgggcgcgcacgcgcactacgata-tamra-3',如前所述[10.那11.].
2.8。PCR-RFLP for大肠bieneusi基因型鉴定
PCR-RFLP测定在9700PCR系统(Applied Biosystems)上如前所述进行[12.那13.].在2%琼脂糖凝胶上进行RFLP分析,比较Fnu4HI和NlaIII酶切得到的PCR未酶切片段和酶切片段的数量和长度。
2.9。统计分析
对分类变量用比例(%)表示,对连续变量用标准差表示。通过比例卡方检验和学生的比例来比较差异T.- 对于连续变量,结果被认为是统计学意义的价值.所有分析都是通过使用STATA(版本11)软件包进行的。
结果
3.1.患者临床概况
242例艾滋病毒/艾滋病患者,35.9%()是男性和64.1%()为女性:性别比例为2女1男。参与者的平均年龄为39.2岁 11.8 years (range: 15–73).
表格1报告研究人群的临床体征。虚弱和腹泻是参与者中最常见的症状。
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3.2。分子评估和患病率
在242名艾滋病毒感染者中,使用实时聚合酶链反应大肠bieneusi是7.9%().之间的19大肠bieneusi,一个被互化E. intestinalis..
表格2介绍了IFI-AcM、实时PCR和基因型的研究结果。与real-time PCR比较,IFI-AcM诊断效率如下:灵敏度为42.1%,特异性为100%,阳性预测值为100%,阴性预测值为95%。
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数字1根据周期数显示相对荧光信号(Rn)的功能。