文摘
病毒是专性细胞内寄生虫和宿主细胞条目在病毒生命周期的第一步。SARS-CoV-2 (COVID-19)过程进入易感宿主组织细胞是复杂的要求(1)附件的病毒通过守恒的峰值(S)蛋白受体结合主题遏制的宿主细胞血管紧张素转换酶2 (ACE2)受体,(2)S蛋白蛋白水解处理,(3)膜融合。突起蛋白处理发生在两个乳沟网站,即。,年代1/秒2和 。劈理的年代1/秒2和网站最终产生一代主管融合元素重要的宿主细胞和病毒膜融合。劈理后,脱落的年代1皇冠导致显著的构象变化和融合肽为目标重新定位膜插入和融合。识别特定的蛋白酶参与困难了许多细胞类型和研究使用。然而,看来S蛋白蛋白水解乳沟是依赖于(1)furin和(2)丝氨酸蛋白酶2跨膜蛋白酶丝氨酸蛋白酶作用。虽然目前不清楚,增加SARS-CoV-2年代受体结合主题亲和力和复制效率在传染性可能部分解释观察到的差异。乳沟ACE2的受体似乎是另一层复杂的问题除了没收和/或变更ACE2函数在心血管和免疫功能起着重要的作用。
1。介绍
冠状病毒(x)包围,单链RNA病毒,引起胃肠道、呼吸道和神经症状,在许多哺乳动物和鸟类1]。前爆发的严重急性呼吸系统综合症冠状病毒(冠)在2002年至2003年在中国南部造成大约10%的人感染致命的肺炎,浸在很大程度上被认为是无害的人类(2,3]。然而,由于出现的高致病性MERS-CoV(2012年中东呼吸系统综合症冠状病毒)(4)和冠最近发现在武汉,中国(SARS-CoV-2 / COVID-19 [5]),非典型重型肺炎的病原体现在被称为近代最严重的流行病(6),这种观点已经改变了。
病毒是专性细胞内寄生虫。因此,宿主细胞条目在病毒生命周期的第一步。浸基因组编码三个表面蛋白,即。斯派克(S),膜(M),信封(E) (7]。然而,S蛋白密切参与病毒最初输入绑定到宿主细胞表面受体前病毒和宿主细胞膜的融合。浸使用广泛的受体进入靶细胞中总结表1。受体识别被认为是关键的初始事件决定病毒传染性、发病机制、宿主范围。
深入浸条目过程从化合物的比较调查的能力抑制冠状条目(14]。组织蛋白酶L, endosomal半胱氨酸蛋白酶,被证明是所需初始蛋白水解乳沟冠的蛋白质(15,16]。最初,理论化,冠S蛋白绑定到宿主细胞受体触发微妙的年代蛋白质构象的变化。反过来,这些变化呈现S蛋白容易宿主细胞蛋白水解乳沟,融合肽的解放,和随后的病毒和宿主细胞膜的合并,即。,进入宿主细胞(7]。这些早期的事件已被阐明不同程度是本文的重点。
2。SARS-CoV-2与宿主细胞结合ACE2受体通过峰值(S)的蛋白质
最初的一步SARS-CoV-2入门级联是S宿主细胞表面受体蛋白结合,即。血管紧张素转换酶2 (ACE2) [12]。使用海拉细胞ACE2表达蛋白质,周和同事从传染性研究得出结论,SARS-CoV-2 ACE2的细胞,和细胞不表达ACE2受体没有促进病毒进入宿主细胞从而支持ACE2作为SARS-CoV-2收益条目的受体(17]。同样,墙壁、Letko和Wan证明ACE2介导SARS-CoV-2进入细胞(18- - - - - -20.]。符合这一事实冠和-CoV-2 S蛋白含有高度保守的氨基酸残基的ACE2受体结合(21],大多数这些残留物缺席S蛋白SARSr-CoV(蝙蝠)以前观察到的不使用ACE2条目(22- - - - - -24]。
3所示。浸峰值(S)蛋白经历“启动”和“激活”分裂
浸年代蛋白是一个类我病毒融合蛋白合成的单链前体约1300个氨基酸(25]。结构组件给予的“冠状”外观原名“冠状病毒”。浸S蛋白的功能性组织相似的其他病毒进入的蛋白质,如流感病毒血凝素(HA)和人类免疫缺陷病毒包膜蛋白(26]。类我融合蛋白形式homotrimers,每个单体包括两个域,S1和S2。的年代1域促进绑定到目标细胞受体。的年代2域负责主机cell-viral膜融合(27]。S蛋白是广泛糖化和显示重要的适当的蛋白质折叠,调制的宿主细胞蛋白酶底物可访问性、和抗体绑定(28- - - - - -32]。如图1的示意图蛋白质一级结构和先决条件蛋白水解分裂成年代1和S2子单元。
第一个劈理(S1/秒2网站)称为“启动”产生1(表面)和S2(跨膜)功能单元保持共价结合在“十二”构象25]。不管手机网站、蛋白质或涉及的蛋白酶,“启动”和“激活”(网站乳沟)融合蛋白转化为fusion-competent状态(33,34]。第二个乳沟,即。,activation, results in activation of membrane fusion. An early consequence of “activation” is the repositioning of the viral fusion peptide (or loop) that engages the target membrane lipid bilayer. The fusion peptide which is initially buried and inaccessible becomes exposed and repositioned, i.e., inserted into the target membrane forming the defining “prehairpin” fusion intermediate conformation.
3.1。年代1/秒2启动乳沟
浸年代蛋白质是不寻常的,因为它们有多个卵裂网站和多个主题。因此,他们函数作为广泛的宿主细胞的基质蛋白酶(35由不同家庭,例如,组织蛋白酶(36),trypsin-like丝氨酸蛋白酶,如跨膜丝氨酸蛋白酶(TTSP)家族成员(37- - - - - -40),furin-like proprotein转化酶(35,41)给x和广泛的灵活性入侵新细胞,组织,和主机物种。
初始SARS-CoV-2在人类细胞中蛋白水解处理与识别有关多元(几个精氨酸残基,即。,-RRAR685年↓在S -) furin网站1/秒2裂解位点(42]暗示参与多种蛋白酶影响病毒传染性和宿主范围。多元furin站点不在残冠,而是包含单个参数(39,43- - - - - -45]。类似的多元furin网站被发现在高度致命的禽流感和人流感病毒的HA蛋白(46]。根据camostat抑制肺细胞的甲磺酸,SARS-CoV-2年代1/秒2“启动”乳沟RBD和融合肽已被证明是依赖于人类丝氨酸蛋白酶TMPRSS-2(跨膜蛋白酶丝氨酸2)(47trypsin-like蛋白酶),已被证明裂开一价,即。,R↓网站。
的年代1/秒2裂解位点表现出不同的图案在浸其中许多展示乳沟特异性后基本残渣(42)确保“启动”是由不同的宿主细胞蛋白酶。因为冠S蛋白可以通过TMPRSS-2裂解展品trypsin-like特异性,很明显,胰蛋白酶可以作为替代蛋白酶。在这两种情况下,精氨酸667首次冠年代是至关重要的蛋白质“启动”TMPRSS-2虽然这对TMPRSS-2残留物似乎可有可无的“激活”48]。相反,精氨酸797需要冠“激活”胰蛋白酶(49]。然而,很明显,667年精氨酸和精氨酸797需要冠S蛋白乳沟TMPRSS-2 [48]。不同的年代1/秒2裂解位点图案和特异性蛋白酶的分配到一个特定的事件,例如,“启动”和“激活”,往往是困难的。如上所示,TMPRSS-2已经涉及到“启动”的过程;然而,最近的报告显然Bestle和同事表示乳沟。,“activation” of SARS-CoV 2 in human airway cells occurs via TMPRSS-2 after “priming”, i.e., furin cleavage at the S1/秒2启动网站(49]。
有趣的是,虽然有些冠数据不支持furin发挥作用蛋白质乳沟激活,插入furin裂解位点的年代1/秒2连接已经被证明可以提高信息融合而不影响病毒入口(50]。SARS-CoV-2 S蛋白的小说特点设置除了冠和SARSr-CoV(蝙蝠)是“裂开”furin裂解位点的年代1/秒2边界在合成。然而,墙壁和同事最近的数据表明,乳沟年代期间蛋白质生物合成为S-mediated条目没有必要条件下研究和推测,这可能有助于扩大这种病毒的取向18]。独有的SARS-CoV-2多元furin裂解位点是一个领先的脯氨酸,创建一个转51]。有人认为这是一个可能的o类型“mucin-like”糖基化网站(Ser673、Thr678和Ser686),这仍有待建立的存在和功能(52]。Bagdonaite和同事指出,这种mucin-like域侧翼的裂解位点可能盾和/或其他关键SARS-CoV-2功能残留物使他们无法访问(53]。相关的重要性、高效furin-like乳沟MERS-CoV S蛋白已被证明是重要的MERS-like从蝙蝠和感染的人类细胞浸22]。
重要的是,第一个乳沟事件与宿主受体“绑定”促进进一步的乳沟网站(44]。看来具体浸S蛋白的参与蛋白酶依赖蛋白酶可用性,即。、膜的位置和方向。TMPRSS-2浸S蛋白激活似乎需要特定病毒蛋白和膜结合蛋白酶之间的空间关系。Glowacka [39]观察TMPRSS-2激活只有当底物,即。,年代protein, and protease are located in different membranes suggesting a trans-like cleavage. Conversely, it has been shown that TMPRSS-2 can cleave SARS-S when both proteins are localized in the same membrane, i.e., a cis-cleavage that has been hypothesized to result in shedding of soluble SARS-S protein into the extracellular space [54]。
3.2。激活乳沟
出现多种蛋白酶能够参与这个过程。形成鲜明对比1/秒2网站,furin-like裂解位点(KR↓科幻)下游的内部融合肽是相同的在冠状和SARS-CoV-2 [55]。Coutard和同事提出了一个或多个furin-like酶裂解网站(KR↓科幻)(42]。蛋白酶特异性和位置是重要的决定因素就是明证蛋白水解融合激活发生在几个细胞隔间(56]。TMPRSS-2处理冠年代主要在细胞膜,而furin-mediated处理发生在细胞表面和早期内体35,41,56]。看来冗余是内置在浸S蛋白furin和相关proprotein转化酶识别的多元乳沟网站(56]。
存在许多不同的规范furin裂解位点周围除了20个氨基酸拉伸确定绑定的裂解位点特异性(57]。有趣的是,生物信息学分析和功能研究已经发现了超过100 furin乳沟网站在哺乳动物蛋白(58]。虽然大多数furin目标“激活”分裂后,furin乳沟也已被证明能够“灭活”各自的目标,可能意味着剩余蛋白水解特异性病毒条目控制研究[59,60]。这取决于病毒株和细胞类型用于感染,浸年代“激活”多种蛋白酶包括furin、胰蛋白酶、组织蛋白酶、TMPRSS-2/4,和人类呼吸道trypsin-like蛋白酶(帽子)被描述35,37,38,47,55,61年- - - - - -63年]。表所示2和图2概述SARS-CoV-2 S蛋白水解处理的蛋白质和病毒条目。
4所示。的年代1亚基参与宿主细胞受体结合
浸年代1亚基C末端由一个核心β富域(指定的A, B, C, D, 0)和球状的外部区域中存在重要的氨基酸受体结合(12)以及membrane-anchored年代的稳定2十二单元包含融合元素(64年- - - - - -69年]。尽管域B展品最高的序列变化,它包含β结合单核心子域名协调针对受体相互作用[70年- - - - - -76年]。
的年代1亚基组成的顶点年代三聚物中驻留的C末端保守氨基酸残基统称为受体结合域(RBD)。RBD包含结构信息所需的细胞表面ACE2受体结合(21,43,73年,76年- - - - - -78年]。受体结合主题(遏制该地区(carboxy-terminal RBD的一半),包含接口与主机的残留ACE2受体(21]。SARS-CoV-2,年代三聚物存在于不同的构象州因开放B域的三聚物顶端(18]。三聚物“开放”暴露了受体识别所需图案/否则埋的元素和宿主细胞受体参与导致启动所需的融合肽构象变化(29日,30.,66年,69年,79年]。
位于S蛋白的n端引入初期所需的信号肽S蛋白进入宿主细胞的分泌ER通路(54)广泛糖化的地方(12]。与主题一致,糖基化可能限制蛋白酶可访问性,周围的地区1/秒2和乳沟网站不太密集的糖化(29日,30.]。
5。的年代2亚基参与膜融合
的年代2亚基由α螺旋,一个反平行的核心β表,β丰富的连接器领域,干细胞螺旋导致七个重复2和跨膜区域(12]。比年代更保守1,年代2包含了“激活”立即蛋白水解站点位于上游的融合肽(44,56]。融合肽,短段较大的融合蛋白,有多个卵裂网站和主要由15 - 25疏水性氨基酸。“激活”乳沟事件产生成熟的(具有了广泛的不可逆的构象变化80年,81年])疏水融合肽插入到宿主细胞膜目标(35,44,54]。
一致的界面疏水性分析和肽库扫描数据,残留770 - 788位于上游的立即裂解位点被认为是融合肽(27]。序列(873 - 888)残留上游的七个重复区域1 (HR1上)形成了“内部”融合肽(80年)这是至关重要的在调节膜合并双分子层脂质主要是变得更加有序(81年]。融合肽插入被认为是整体有脱水效果;之间的排斥力,,删除对方膜允许他们检查定位,因此实际方法之前彼此融合(82年,83年]。有趣的是,融合肽的冠和SARS-CoV-2是相同的42]。冠年代protein-induced膜融合已被证明是calcium-dependent高钙离子浓度提高膜顺序效应(81年]。钙的正电荷被认为加强与脂质双分子层的膜融合通过静电相互作用带负电荷的头组,从而减少静电斥力的两种对立的膜融合之前挨得很近。膜融合后,类我融合蛋白采用定义良好的螺旋结构被称为“6-helix包”或6 hb。
6。冠条目“早期”或“晚”取决于进入的通路
正如前面指出的,蛋白水解分裂事件必不可少的浸条目出现困惑很大程度上归因于许多不同类型的细胞进行了研究。在典型的细胞培养系统中,冠收益条目通过网格蛋白和受体后nonclathrin通路参与(84年,85年),但治疗的细胞与胰蛋白酶和/或trypsin-like蛋白酶(TTSPs)进入产生年代protein-mediated融合(25,40,86年,87年)在某些情况下,已被证明是细胞泛型类型(48]。这个途径进入小鼠肺上皮细胞(冠和-CoV-2感染)的网站被认为是TTSP介导就是明证,丝氨酸蛋白酶抑制剂减少冠感染(48,88年]。
在培养细胞中冠条目的一个重要特性是它开始在延迟时间(89年]表明endosomal成熟是必需的。尽管x和已被证明是内化通过受体介导clathrin-dependent, caveolin-dependent或其他途径(41,84年,90年),冠已被证明进入通过clathrin-dependent和网格蛋白/ caveolae-independent入口通路(84年]。体外和体内的研究基础上,通过细胞表面受体识别和膜融合病毒进入被称为“早期”[27)(cf图2SARS-CoV-2宿主细胞条目)。相反,如果条目时通过内体要求核内体成熟(cathepsin-driven),这样的条目被称为“末”[88年]。在“晚期”条目,首先内源性病毒,随后由furin proprotein转化酶(35,45),组织蛋白酶L (44,45,47,61年),和/或组织蛋白酶B (51]。重要的是要注意,protease-enriched endolysosomal环境也能生成钝化浸S蛋白裂解导致效率(减少条目88年]。由于溶酶体和等离子体具有独特的脂质膜组件配置文件,这种差异会产生差异蛋白水解作用[91年]。此外,其他因素也可能发挥作用,例如,形成三元复合物(receptor-tetraspanin-protease复杂)MERS-CoV细胞一样入口(88年]。
7所示。冠年代蛋白质并不是唯一受到蛋白水解乳沟
TMPRSS-2和metalloprotease (ADAM17 disintegrin和金属蛋白酶域17日)已被证明打通ACE2受体接近其跨膜域(7,92年,93年]。这解理可能导致ACE2受体脱落(不要混淆的年代1皇冠),表明TTSPs和其他蛋白酶会影响蛋白质条目由方式除了年代蛋白质启动/激活(93年,94年]。在脱落过程中,蛋白酶(称为Sheddase)裂解膜蛋白底物接近或在其跨膜域导致释放可溶性细胞外域(ectodomain)膜和一个片段仍然绑定到膜(95年]。
8。后绑定和乳沟,大型构象发生变化
绑定和裂后,浸S蛋白存在于一个亚稳态“十二”构象进行重大结构重排病毒和宿主细胞膜的融合(25,96年]。绑定的年代1亚基宿主细胞受体触发这个过程。的年代1RBD经历hinge-like构象运动可以暂时性隐藏或暴露RBD决定因素,促进参与宿主细胞受体(97年]。这些运动或州被称为“向上”和“向下”构象对应受体(打开)和receptor-inaccessible(关闭),分别为(30.,33,64年,67年]。RBD经历这hinge-like构象改变,S1亚基似乎改变形状。“呼吸”。这种受体介导Coronaviridae[中触发机制被认为是守恒的30.,65年]。当前数据表明S蛋白三聚中发现高致病性人类冠状病毒存在于部分打开状态,而少或不致病的人类冠状病毒一直关闭。
Kirchdoerfer和墙壁假定裂解1和S2子单元相互作用[68年,70年]。这被证明是稳定的情况下“十二”2构象。蛋白水解乳沟释放融合肽允许的年代1皇冠和随后的重折叠的融合元素(69年]。互动的年代1B域在十二“封闭”构象和S2结果在稳定的“弹簧”亚稳十二构象。看来受体参与和年代之间的连接事件1/秒2和劈理的年代1皇冠带来了构象变化的年代2和融合肽和随后的插入(大约100埃)到目标膜(68年,69年]。重折叠的年代2从十二“弹簧”postfusion基态构象被认为是自由能的来源将附近的病毒和宿主细胞膜膜合并(26]。
9。SARS-CoV-2似乎绑定与ACE2高亲和力受体
冠相比,SARS-CoV-2似乎更容易在人与人之间传播(98年- - - - - -One hundred.]。然而,冠冠2 S蛋白的整体构象RBD是相似的,只有细微的差别在各自的“向下”构象(97年]。尽管它们共享相同的功能宿主细胞受体的亲和力SARS-CoV-2 ACE2的受体被观察到高于冠(19,101年]。这可能部分解释传染性的缓解SARS-CoV-2冠。有趣的是,墙壁和同事使用S蛋白B域从冠和SARS-CoV-2结合配体观察大于4——4.4倍下降KD和k从值,分别为SARS-CoV-2 [18]。虽然符合SARS-CoV-2不再“on”率,这似乎并非如此k在值几乎相同的SARS-CoV-2和冠表明传染性的差异不是一样的约束力但可能效率的一个宿主细胞的复制。
10。绑定不是万能的
而病毒S蛋白RBD-host细胞受体特异性的宿主范围的行列式,大量的数据支持的主要宿主蛋白酶处理作为一个物种中所扮演的角色障碍(22,101年,102年]。最初的2012年冠爆发后,出现在人类主要归因于在RBD突变。然而,现在存在的作品表明传播人畜共患类似非典病毒在东南亚蝙蝠能够感染人类细胞通过绑定ACE2受体没有适应表明浸S蛋白受体结合特异性x出现(不是唯一的障碍102年,103年]。虽然没有受体结合或兼容主机蛋白酶活动限制某些人畜共患病毒感染,现在看来,这种障碍是可以克服的,无处不在的宿主细胞蛋白酶参与。Menarchery和同事指出,蛋白水解乳沟MERS-CoV年代的蛋白质可能是原发感染事件(22)建议未被描述复杂cleavage-binding连接。
11。SARS-CoV-2年代差异蛋白质RBD或许可以解释不同的传染性
理解的关键区别冠和SARS-CoV-2及其引发的疾病可能驻留在微妙的结构差异在受体识别元素。SARS-CoV-2年代蛋白质RBD绑定联系人ACE2受体类似观察冠状(20.,54]。虽然年代蛋白质RBD是最变量x和基因组的一部分(16,103年)、6 RBD氨基酸残基已被证明对绑定ACE2受体至关重要,因此,宿主范围的确定(20.]。比较各自的RBD残留物(Tyr442、Leu472 Asn479, Asp480, Thr487,和Tyr491)在冠状对应的残留物(Leu455、Phe486 Gln493, Ser494, Asn501,和Tyr505) SARS-CoV-2表明5 6残留不同。而实验数据支持增加SARS-CoV-2 ACE2受体亲和力,计算评估表明相互作用并不理想也不是预测序列所示一致最优冠受体结合(20.]。
因此,必须有其他的考虑,占观察到的亲和力。使用冠状和SARS-CoV-2晶体结构,商和同事观察到S蛋白的变化RBD受体结合脊由残留482 - 485 (Gly-Val-Glu-Gly) [104年]。这种变化使脊更紧凑从而实现更好的接触的氨基端螺旋ACE2 SARS-CoV-2 RBD的受体。几个氨基酸残基的改变存在于SARS-CoV-2 RBD稳定病毒RBD / ACE2接口绑定地区。SARS-CoV-2,插入的疏水性Phe486 r基团成疏水性RBD的口袋里形成一个更强大的比少接触疏水性亮氨酸r基团相应RBD的冠。以前,这是表明两个疏水环境中赖氨酸r基团必须与之相适应。因此,赖氨酸r基团电荷中和是x绑定的关键ACE2受体(105年,106年]。在SARS-CoV-2,这是实现与Gln列伊替换在493年和455年,分别和Asn在501位置。
进一步的证据支持的亲和力增加SARS-CoV-2 RBD来源于分子建模数据表明提高灵活性的一个独特的循环与甘氨酸取代刚性的和限制性的脯氨酸残基组中观察到冠状。(107年]。尽管冠之间存在高度的同源性,SARS-CoV-2单克隆抗体对SARS-CoV-2 RBD年代重组蛋白片段所示的干涉有正确折叠没有冠RBD的交叉反应。这是符合RBD变化观察到广域网和同事(20.]。年代中微妙的变化1RBD和宿主细胞受体可以显著影响冠状病毒跨物种传播的。两个赖氨酸残基(31日和353年)是人类ACE2 SARS-S蛋白质绑定的关键受体(106年,108年]。替换在353位置与组氨酸鼠ACE2受体呈现这种蛋白质不适合高效SARS-S蛋白结合(21]。同样,河鼠ACE2同系物包含一个糖基化的天冬酰胺残留在位置82 sterically块冠S蛋白宿主受体相互作用。
12。结论
SARS-CoV-2进入宿主细胞是一个复杂的过程,涉及绑定ACE2遏制病毒的受体,和蛋白水解处理引起大S蛋白构象变化之前所需的膜融合。识别特定的蛋白酶参与困难了许多细胞类型和研究使用。似乎通过S蛋白对病毒进入细胞表面受体ACE2紧随其后的膜融合取决于(1)furin和(2)TMPRSS-2蛋白酶作用在串联,通过内吞作用需要多个蛋白酶而条目,例如,furins,组织蛋白酶等。虽然目前不清楚,增加SARS-CoV-2年代受体结合亲和力和复制效率可能部分占增加SARS-CoV-2传染性。自从ACE2受体入住率的病毒开始感染,正常ACE2函数起着至关重要的作用在心血管和免疫系统109年)是妥协/丧失会计在很大程度上观察到的临床后遗症。ACE2受体高表达在心脏和肺(109年),符合SARS-CoV-2肺泡上皮细胞的入侵,并增加分泌ACE2引起心血管和呼吸道症状。血管紧张素转换酶(ACE)及其同系物ACE2,都属于王牌家族dipeptidyl carboxydipeptidases,两种对立的生理功能。血管紧张素I ACE裂解生成血管紧张素ⅱ,肽结合并激活AT1R受体引起血管收缩,从而提高血压。相反,血管紧张素ⅱACE2灭活而生成血管紧张素1 - 7,heptapeptide拥有强有力的血管舒张功能通过马斯的激活受体(110年),因此作为负调节肾素-血管紧张素系统(111年]。
如图3ACE信号通路的示意图和ACE-mediated生理反应。SARS-CoV-2的绑定,以及政府的冠状蛋白质,导致[差别ACE2对这些111年,112年)导致血管紧张素ⅱ水平上升由于血管紧张素(1)ACE酶乳沟我血管紧张素ⅱ和(2)可转换的ACE2血管舒张血管紧张素ⅱ的heptapeptide血管紧张素1 - 7 (113年]。这反过来导致肺损伤,血管紧张素ⅱ刺激AT1R(血管紧张素ⅱ1型受体)引起肺血管通透性增加,从而调节增加肺部病理学(112年,114年]。ACE2和AT1R可以保护小鼠免受严重的急性肺损伤,而ACE和乳沟产品血管紧张素ⅱ促进疾病病理诱发肺部水肿和损伤肺功能(114年]。
的利益冲突
作者声明不存在相关利益感知或与提交的工作冲突。
确认
这部分工作是支持UTSA卓越中心感染基因组学培训格兰特(美国国防部# w911nf - 11 - 1 - 0136),美国国立卫生研究院的资助(1 r21ai124021) BPA的简和罗兰·布隆伯格基金会,和各种养老(G02312) JPC捐赠者的研究。