收益率的比较金黄色葡萄球菌复苏与静态和激动肉汤孵化

文摘

由于缺乏标准化的方法从构建环境微生物复苏,我们试图比较的产量金黄色葡萄球菌汤浓缩方法时在激动与静态条件下孵化。5种不同的菌株金黄色葡萄球菌在五个不同浓度培养比较直接电镀,激动汤浓缩,和静态肉汤富集培养的方法。所有的样品都在35°孵化环境空气。最低浓度恢复跨三个复制和5株文化方法之间没有差别(确切概率法,p = 0.50);值得注意的是,恢复金黄色葡萄球菌之间等效静态和激动肉汤孵化。当汤浓缩(静态和激动),使用的负担金黄色葡萄球菌增长高(通过四象限裸奔的半定量的评估)而直接电镀培养法。优化微生物复苏策略是至关重要的,特别是在生物量较低的地区,由于缺乏关于建造环境的微生物群落的研究。这项研究的结果,结合其他实验研究建立环境的微生物,可以帮助通知协议标准化培养方法在构建环境。

1。介绍

越来越多的兴趣在微生物和“resistomes”(抗性基因的混合物)1)建立环境,如医院、学校、和长期使用护理设施2]。理解这些微生物群,他们的传播动力学,和他们对人际传播的病原体可以减少院内感染的数量(3]。标准化的方法对微生物恢复从建筑环境尚未建立,使它具有挑战性的调查(之间的比较结果2]。目前接受培养的方法金黄色葡萄球菌在实验室环境中推荐汤浓缩但尚不清楚关于激动孵化的必要性4,5]。孵化与搅拌需要专用设备,在高容量的研究可以非常麻烦。本研究的目的是确定孵化条件,具体是否激动肉汤孵化优于静态肉汤孵化,收益率最高的复苏金黄色葡萄球菌。

2。材料和方法

使用五个独特的菌株金黄色葡萄球菌在五个特定的浓度,我们将恢复产量与直接电镀与静态汤浓缩与汤浓缩风潮。两个五金黄色葡萄球菌菌株是参考菌株(写明ATCC 43300:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,葡萄球菌盒式染色体mec(鳞状细胞癌mec)II型和写明ATCC 25923: methicillin-susceptible金黄色葡萄球菌(MSSA)鳞状细胞癌mec负面的)。剩下的三个菌株金黄色葡萄球菌从社区个体(脓肿引流标本:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,鳞状细胞癌mecIV型(6];一个殖民前鼻孔隔离:MRSA,鳞状细胞癌mecII型(7];和殖民腹股沟褶皱隔离:MSSA,鳞状细胞癌mecIV型(7])。每个应变悬浮在生理盐水,准备0.5麦克法兰标准的密度。对于每个应变,五10倍稀释准备实现浓度范围从0到10⁴集落形成单位(CFU) /毫升。,正欲ESwab(富兰克林湖,NJ)是淹没在每个准备稀释,然后放入ESwab传输介质(洗出液)和涡10秒。从洗出液,100年μ那时L的洗出液接种到每个三个媒体:trypticase大豆琼脂5%绵羊血液(血琼脂板(BAP)洗液;)和正欲成两个管trypticase酱油汤(TSB)和6.5%氯化钠(洗液,BD),然后涡10秒钟。软面包卷和两个tsb(一个静态的,一激动250 rpm)是在一个环境空气孵化器孵化24小时35°C。孵化后,100μL(每个TSB暂停接种到求饶采用四象限裸奔法半定量的分析(8- - - - - -10)和孵化为一个额外的24小时。三个独立复制的实验进行。确切概率法进行了使用IBM SPSS为Windows第23节(芝加哥,IL)三种文化方法之间的比较收率。

3所示。结果

复苏的范围的三种文化方法是相同的(真空度⁴CFU /毫升)。最低浓度恢复跨三个复制和5株文化方法之间没有差别(确切概率法,p = 0.50);具体地说,经济复苏的金黄色葡萄球菌之间等效静态和激动肉汤孵化。当汤浓缩(静态和激动),使用的负担金黄色葡萄球菌增长高(通过四象限裸奔的半定量的评估)而直接电镀培养法。汤浓缩方法恢复金黄色葡萄球菌在所有四个象限10⁴CFU /毫升,而直接电镀才恢复正常金黄色葡萄球菌在前两个象限10⁴CFU /毫升(表1)。

复苏的范围对MRSA和MSSA真空度⁴CFU /毫升。最低浓度恢复两个参考金黄色葡萄球菌菌株10 CFU / mL,孵化后静态肉汤。两个殖民菌株,最低浓度恢复也是10 CFU /毫升,发生六次:一旦直接电镀,与静态肉汤孵化两次,三次搅拌汤孵化。感染的最低浓度恢复隔离是10²CFU /毫升每个文化的方法。

4所示。讨论和结论

随着兴趣建造环境的微生物群落,微生物采油的最优策略是必不可少的,特别是在地区的生物量较低。事实上,美国国家科学院周围扩展调用缩小知识差距如何最好地调查建立的微生物环境(11]。本研究试图检查不同的培养和孵化方法最好的隔离金黄色葡萄球菌从构建环境。在收益率没有显著差异金黄色葡萄球菌观察之间的静态和搅拌汤浓缩,而汤浓缩方法恢复较高丰度的金黄色葡萄球菌比直接电镀的方法。

目前的研究结果与以往的研究,调查汤浓缩文化方法恢复的作用金黄色葡萄球菌。具体来说,Mernelius等人采用直接电镀和搅拌汤浓缩孵化文化方法阐明汤浓缩的作用金黄色葡萄球菌种植在新生婴儿的喉咙,发现增加了46%的收益率相比汤浓缩使用时直接电镀(12]。此外,曾荫权等人使用一个静态的肉汤富集培养的方法来查询的潜在低估金黄色葡萄球菌马车恢复与标准直接电镀技术,导致增加了31%金黄色葡萄球菌收益率(13]。

虽然有局限性,本研究包括小样本大小和包含只有一个物种(尽管五个不同菌株),收集的见解的研究领域提供有价值的信息关于建立微生物的环境。这项研究中,结合上述研究,有助于应对国家科学院调用(11)来帮助阐明协议标准化培养方法在构建环境。

数据可用性

对数据的访问底层这个研究的发现将被相应的作者。

信息披露

这些资金来源没有参与这项研究的设计和实施;的收集、管理、分析和解释数据;准备、审查或批准的手稿;或者决定提交出版的手稿。内容是完全的责任作者和不一定代表美国国立卫生研究院的官方观点或卫生保健研究和质量。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

该项目资金是由孩子们的发现华盛顿大学圣路易斯儿童医院研究所;美国国立卫生研究院的资助K23-AI091690和UL1-TR000448;卫生保健研究和质量(赠款R01-HS021736和R01-HS024269)。

引用

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