文摘

耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)常见临床样本或相关环境构成一个主要全球卫生挑战。人口的夫人的马车速度很高,尤其是在印度但研究机载夫人的分布是稀疏的。本研究旨在评估夫人的患病率在住宅的室内和室外环境。空气样本收集使用撞击器空气取样器。可行的细菌的总数、葡萄球菌和夫人以及不同大小的粒子是决定从14个住宅的室内和室外环境。夫人被确认为甲氧西林耐药的细菌金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)或凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)采用生化和PCR检测。夫人的平均浓度的房屋内外细菌总数的5.9%和4.6%,分别。室内和室外总细菌的最大相关性与颗粒物10μ米(),5μ米(),分别。统计上显著的正相关,葡萄球菌和夫人被发现粒子的汽车销售μ米内的房屋。分子监测抗生素管理计划,和感染控制政策可以帮助管理在发展中国家增加负担夫人。

1。介绍

本篇主要和室内和室外环境的颗粒物对人体健康有直接影响(1]。细菌的直径约2 - 8μ但这些仍然很少自由在空中。一般来说,他们倾向于聚合或附加不能存活的粒子形成大团(2]。细菌总数也显著相关的数量和大小的颗粒(3,4]。葡萄球菌非常耐寒,nonspore成型,且相对耐热共生的细菌可以存活较长时间干燥和无生命的表面在每一个环境中人类共存。的患病率在其居住环境是十分关注的。

耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)包括金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)和凝固酶阴性葡萄球菌(MR-CNS)会导致浅到深危及生命的疾病,即使在健康或个人的职业5]。最初,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染通常是医院(HA-MRSA)直接影响人与医疗设施由于高风险或弱免疫系统。随后,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染扩散到健康的人没有住院等菌株被称为community-associated耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)。这些基因杰出HA-MRSA和可能导致的迅速进步和致命的疾病像坏死性肺炎,严重脓毒症和坏死性筋膜炎6]。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是不断发展的,现在的区别CA-MRSA和传统HA-MRSA是模糊7]。

在先前的研究在印度,马车的速度和参与夫人发现院内感染MRSA的高于美国(8- - - - - -10]。研究显示,超过50%的人鼻运营商金黄色葡萄球菌独自的3.89%是阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(11,12]。空气中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染可能会导致但他们发射频率低于通过直接接触传播(13]。然而,机载传输涉及医院暴发的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(14,15]。在先前的研究中,我们发现在其夫人在瓜廖尔交易会,印度(16]。因此,一个直接的方法分离和鉴定分子监测的机载夫人是可取的夫人这些细菌的国家有更高的患病率。本研究旨在优化协议直接隔离机载夫人和研究他们分布在瓜廖尔住宅的氛围,印度中部。几项研究已经使用的方法嵌入在琼脂媒体。然而,在这项研究中,我们使用了抗生素的直接选择耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的第一次。其他研究人员首先分离菌株,然后进行抗生素敏感性试验。这个过程需要一个额外的一天来确认是否耐甲氧西林或敏感。

2。材料和方法

2.1。样品收集

总共14个住宅坐落在7个不同的殖民地(2房子从每个殖民地)被选为室内和室外细菌从瓜廖尔气溶胶采样,印度中部(经度78°13′E,纬度26°13′N)。这些房子被选中的城市没有不良健康问题和居民医疗保健工作人员和住院都没有在过去的1年。空气样品进行微生物分析收集使用路透社离心取样器(生物监测、德国)的高度1.5米从表面来模拟人类的呼吸区。

空气取样器的消毒用酒精棉签之前每个空气取样,取样器开启2分钟前抽样允许酒精蒸发。无菌媒体条包含微生物内容测试琼脂(MCA)补充与环己酰亚胺(100μg / mL)、甘露醇盐琼脂(MSA)和MSA包含6μg / mL甲氧西林被加载到消毒空气取样器。空气样本收集的2分钟重复从每个房子的内部和外部的流量280升/分钟(仪器的分离卷40 L / min)。MCA、MSA、MSA含有甲氧西林被用于枚举的总需氧细菌,葡萄球菌,分别和耐甲氧西林葡萄球菌。媒体将在35°C孵化24和48 h来确定他们将杂草丛生。空气取样结果可培养的细菌被报告为每立方米空气集落形成单位(CFU / m³)使用以下公式: 因此,最多1062年殖民地现在的地带。每一条包含34个隔间或水井,这意味着每个好包含31个殖民地(1062/34 = 31)。

2.2。空气颗粒物测量

空气中的颗粒物浓度的六种不同尺寸(空气动力学直径0.3μ0.5米,μm, 1μ5米,μ10米,μ25米,μ米)测量与商业气溶胶粒子数计数器(Lasair ll粒子计数器;粒子测量系统,美国)。粒子数在4组(每组2分钟),每组后2分钟的延迟。粒子计数器和RCS取样器都同时操作。

2.3。夫人的生化鉴定

5代表殖民地的甘露醇发酵和nonfermenting细菌从每个房子从包含甲氧西林MSA(室内和室外)培养在脑心浸液(BHI)琼脂。假定的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌凝固酶进一步筛选和thermonuclease生产。殖民地的一部分在生理盐水乳化与兔血浆混合;凝结显示阳性结果(17]。殖民地种植在BHI琼脂进一步孵化2 h 60°C和覆盖thermonuclease琼脂和进一步孵化37°C到粉红色区域的发展积极的控制(18]。

2.4。PCR鉴定夫人

细菌菌落的生长在磅肉汤18 h。一毫升的肉汤离心机和颗粒处理DNA提取使用基因组DNA提取设备按照制造商的指示(MBI Fermentas维尔纽斯,立陶宛)。的数量和纯度的DNA被分光光度计测量(澳大利亚nanodrop - 1000)。进行多重PCR在其他地方,所述使用引物目标葡萄球菌16 s rDNA的特定区域,金黄色葡萄球菌具体的clf基因编码一种surface-associated fibrinogen-binding蛋白质,台面式晶体管基因,methicillin-resistance的主要决定因素金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)和凝固酶阴性葡萄球菌(MR-CNS)物种19,20.]。

2.5。抗菌药物敏感性试验

所有的隔离夫人受到抗生素敏感性试验采用纸片扩散法根据临床实验室标准协会指南(21]。新鲜文化从大豆胰蛋白酶的琼脂板被拾起,悬浮在PBS的浊度管被调整为0.5 MacFarland标准。一个100μL悬挂的擦洗平均到每个Mueller-Hinton琼脂(尼古拉斯)板(Difco实验室、火花、MD)。琼脂表面是干和抗生素光盘放在尼古拉斯表面用无菌钳。磁盘被允许定居和盘子孵化倒在37°C的18 - 24 h。大环内酯物、lincosamide streptogramin B (MLS)抗性表型测定红霉素片20毫米远离克林霉素片。每个隔离的测试进行复制和生物给相同的电阻在盘子都包括在这项研究。

2.6。统计分析

使用SigmaPlot 2000进行了统计分析。室内和室外细菌总数和葡萄球菌和伯爵夫人使用成对比较以及。细菌数量和粒子数之间的关系被斯皮尔曼相关分析研究。

3所示。结果与讨论

3.1。本篇主要的室内和室外浓度(细菌、葡萄球菌和夫人)

住宅内的总细菌浓度变化范围5650 - 12425 CFU / m³()。室外总细菌浓度范围从1775 - 13350 CFU / m³()。室内/室外平均(I / O)比是1.35(表1)。室内和室外的区别意味着总细菌是不重要的()。葡萄球菌浓度为室内住宅被发现在1225 - 4125 CFU / m³()。室外总细菌浓度范围从700 - 2713 CFU / m³()。平均1.18 I / O比率被发现。之间的区别意味着室内和室外葡萄球菌的浓度是不重要的()。夫人浓度为室内住宅被发现在162.5 CFU /米的范围³1175 CFU / m³()。这是总细菌浓度的5.9%。室外总细菌浓度范围从87.5 CFU / m³806 CFU / m³()总细菌浓度的4.6%。平均1.7 I / O比率被发现。夫人之间的区别意味着室内和室外的浓度是统计学意义(,配对以及)(表1)。

机载夫人的平均浓度明显高于住宅内比室外环境(表1)。葡萄球菌的平均浓度和总可行的细菌也较高的住宅内但室内和室外浓度之间的差异在统计学上不重要的。室内的细菌浓度的主要因素是人类活动包括漂流,皮肤脱屑尺度,和干面料4,22]。Bed-making活动也解放的浓度明显高于空气中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(23]。美国epidermidis的共生微生物区系的组成部分,人类皮肤和相信行人皮肤菌群也贡献了机载葡萄球菌浓度升高。

3.2。相关的室内和室外本篇主要与颗粒物的大小

在室内条件下,显著正相关的总细菌被发现时,粒子大小为10μ米(枪兵),其次是5μ米()(表2)。显著相关的葡萄球菌10被发现的粒子μ米(),其次是25μ米()。然而,夫人与粒子25μ米(),其次是10μ米()。在户外条件下,总细菌的显著相关性被发现的粒子大小5μ米(),其次是10μ米(),1μ米(),25μ米()。显著相关的葡萄球菌被发现的粒子1μ米(),其次是5μ米(),0.5μ米(),10μ米(),而夫人被最大限度地与粒子的10μ米(),其次是5μ米()和25μ米()。

空气中的细菌生存往往聚合和存在于大颗粒(2]。葡萄球菌中室内空气通常附在皮肤脱屑尺度4的直径范围μm。皮肤碎片分散机织物有一个中等大小的20倍μ米(24]。在另一项研究的细菌恢复皮肤碎片,48%的细菌是8.2μ米或更大(25]。室内葡萄球菌的显著正相关性包括与汽车夫人μ米粒子的结果表明这些细菌与皮肤和鼻运营商协会(表2)。整个室内细菌与粒子5 - 10浓度显著相关μm大小。金黄色葡萄球菌在空气中显示平均四个可行的生物粒子的平均当量直径14μ米(24,26]。打喷嚏和咳嗽也是其的重要来源。在一项研究中可行的细菌和颗粒大小之间的关系,细菌> 7.5μm与呼出二氧化碳表明鼻航空公司(4]。细菌的大小在3和7.5之间μ(气管和支气管地区)留在团而细菌在1 - 2的尺寸范围μ米(终端支气管地区)保持自由(4]。我们先前的研究显示出显著升高空气微生物包括夫人在人类收集或人为活动在城市环境16]。

3.3。多重PCR鉴定的夫人和他们的抗生素耐药模式

的夫人从甲氧西林菌株选择包含MSA条被发现是PCR阳性葡萄球菌特定16 s rDNA基因。在他们中,94%菌株被发现阳性台面式晶体管基因(图1),其余菌株观察PCR阴性台面式晶体管基因磁带但能够生长在甲氧西林浓度超过麦克风。在女士中,9.5%的菌株存在clf基因特定金黄色葡萄球菌。

总共的87.4%台面式晶体管正面(夫人)菌株被发现耐药(两个以上不同类型的抗生素耐药性)。MLS抗性表型被发现在27.4%的菌株包括16.7%的诱导表达(iml)和10.7%的本构(cml)表达表型。M抗性表型(耐红霉素但不lincosamides或streptogramins)被发现只有在6株(7.1%)。其他抗生素,47.6%的菌株耐sulfamethoxazole-trimethoprim观察,42.9%对喹诺酮类、庆大霉素8.3%,7.1%莫匹罗星和4.8%的菌株被发现中间耐四环素。所有的菌株被发现是容易linezolid夫人和万古霉素。

夫人感染,包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,最经常发生在人在医院和医疗机构高危或削弱了免疫系统。现在CA-MRSA (USA300)已经开始取代传统的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(医疗)大规模在医院,成为危险的全球流行病毒株(27]。本研究的主要目标是优化的方法直接隔离机载夫人和确定其分布模式。隔离其随后的识别(葡萄球菌)或属物种水平和筛查抗生素耐药的存在因素(台面式晶体管基因型)是一个耗费时间的活动。在我们以前的报告我们做隔离的细菌其其次是识别和描述台面式晶体管基因型是劳动密集型和需要额外的时间16]。因此,空中的直接方法隔离夫人完成及时监测项目是至关重要的。

夫人是众所周知的在正常鼻殖民者社区和致命的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的殖民化是相当高的28,29日]。机载夫人可能感染一个人以两种方式通过吸入或直接沉降到敏感区域,如伤口(24]。夫人感染是世界各地卫生部门和研究人员关心的重要问题,因为它引起了近似两倍增加的直接成本和长期住院感染相比,由于甲氧西林敏感葡萄球菌(30.]。感染耐药,使治疗非常困难,因为药物的选择依赖于新一代又一代的药物可能是成本效益和容易获得当地市场。不适当,不充分实践,如误用、滥用、摄食和抗生素也导致多药耐药性的发展(31日]。青霉素、头孢菌素、复方磺胺甲恶唑和喹诺酮类覆盖大部分的抗菌素规定在印度(32]。青霉素、头孢菌素和喹诺酮类耐药性DNA损伤因子,可以刺激通过SOS独立的方式,通过感应RecA-mediated修理,一个容易出错的修复机制,诱发突变(33]。这个维修积累各种突变可导致耐药性进化。

因此,研究证实,机载夫人通常出现在住宅的室内和室外环境。他们的浓度明显高于房屋内比室外环境。分子监测抗生素管理计划,和感染控制政策可以帮助管理在发展中国家增加负担夫人。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢导演,DRDE,瓜廖尔提供必要的设施和金融支持工作。p·库马尔由于科学与工业研究理事会(CSIR),新德里,提供高级研究奖学金。