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Simeon Idowu Cadmus, Bassirou Diarra, Brehima Traore, Mamoudou Maiga, Sophia Siddiqui, Anatole tonkara, Olutayo Falodun, Wole Lawal, Isaac Folurunso Adewole, Rob Murphy, Dick van Soolingen, Babafemi Taiwo， ＂从尼日利亚伊巴丹结核病嫌疑人中分离出非结核分枝杆菌”,杂志的病原体， 卷。2016， 文章的ID6547363， 5 页面， 2016． https://doi.org/10.1155/2016/6547363
从尼日利亚伊巴丹结核病嫌疑人中分离出非结核分枝杆菌
摘要
尼日利亚是结核病负担最严重的国家之一，在直接观察短期治疗(DOTS)中心，痰涂片镜检通常用于结核病诊断。这个诊断算法不区分结核分枝杆菌非结核分枝杆菌(NTM)复合物(MTC)。2008年12月至2009年1月期间，在尼日利亚伊巴丹的10个直接督导下短程化疗中心对诊断为结核病的连续患者进行筛查，以便纳入。来验证分枝杆菌我们使用PCR、line probe assay和spoligotyping技术培养和鉴定分枝杆菌分离株。从48例筛查的患者中，有23例符合纳入研究的标准。23例患者培养均为阳性。总的来说，我们发现11/23(48%)的患者仅患有MTC, 9/23(39%)的患者仅患有NTM, 3/23(13%)的患者同时患有MTC和NTM。MTC菌株为拉丁美洲地中海(LAM)基因型()，m . africanum（)和基因型家族T ()．四个m . avium-intracellulare-M。scrofulaceum复合物,一个m . chelonae复杂,一个m .脓肿,一个m . intracellulare被确定。我们的研究结果强调，需要在DOTS中心采用分子技术来更精确地诊断结核病，以改善临床结果和保障公共卫生，特别是在结核病流行国家。
1.介绍
多年来，尼日利亚一直是世界上结核病负担最重的国家之一，目前在全球排名第四[1］．尼日利亚直接观察短期治疗(DOTS)中心常规使用痰涂片显微镜进行结核病诊断[2］．诊断算法需要解释存在抗酸杆菌痰涂片镜检结核病。这个算法不区分结核分枝杆菌非结核分枝杆菌(NTM)复合物(MTC) [3.，是普遍存在的环境分枝杆菌[4- - - - - -6]，逐渐从有免疫能力和免疫缺陷的宿主中分离出来[2，7，8］．还有其他抗酸杆菌，比如红球菌属使用这种方法不能识别spp。由于NTM的临床意义和治疗选择与结核的临床意义和治疗选择明显不同，准确区分结核和NTM感染对于避免两种疾病治疗不足或过度至关重要，同时要考虑到潜在的患者护理和经济后果[6，8］．
为了探讨尼日利亚是否存在误诊问题，我们在尼日利亚西南部伊巴丹的DOTS中心，根据当地诊断算法，对已诊断为结核病的患者进行了痰培养，并对抗酸分离物进行了分子鉴定。
2.材料和方法
2．1．病人群
这项研究是在2008年12月至2009年1月期间在尼日利亚西南部伊巴丹的10个DOTS中心进行的。连续诊断为结核病的患者(基于阳性涂片镜检或症状加上胸部x光片)被筛查纳入。治疗3天以上者除外。从医疗记录中提取符合条件的参与者的人口统计学、临床和放射学数据。作为正在进行的结核病项目的一部分，该研究获得了Oyo州卫生部伦理审查委员会的伦理许可。
2．2.细菌培养及形态鉴定
每位患者的痰标本用n -乙酰- l-半胱氨酸(4% NaOH)消化并去污;高速离心浓缩;沾auramine-rhodamine;并用荧光显微镜检查每个样品的微球在含有油酸-白蛋白-葡萄糖-过氧化氢酶和多粘菌素-两性霉素- b -萘啶酸-甲氧苄啶-氮洛西林的分枝杆菌生长指标(MGIT)管和米德布鲁克7H11琼脂培养基上同时培养(用于形态鉴定)。接种培养基在37°C和7% CO下培养2如前所述，为期6周[9］．采用Ziehl-Neelsen和革兰氏染色筛选阳性培养物，以排除其他革兰氏染色阳性菌。观察菌落形态，识别混合感染(不止一种)分枝杆菌种)，通过Middlebrook 7H11培养板上的生长物显微镜检查，将患者培养物分化为MTC和NTM [5］．
2.3。分子识别
NTM的最终分子鉴定主要使用innol - lipa assay (innol - lipa mycobacterium v2;Innogenetics®n.v.，根特，比利时)用于16S-23S rRNA的扩增。只有5例经形态学鉴定为NTM的患者样本可用。spoligotyping技术使用一种商业可用的试剂盒(spoligotyping Isogen Life Science, De Meern, Netherlands)进行，该试剂盒主要用于MTC(用于所有形态学鉴定的MTC样品)。
3.结果与讨论
共有48例患者被筛选纳入。其中，有25名患者接受了三天以上的结核治疗，并被排除在外。因此，研究人群包括23例患者(3例既往完整结核治疗过程中诊断为结核复发，20例诊断为新结核病例)。其中22例患者在涂片镜检阳性的基础上诊断为结核病，1例患者镜检阴性但胸部x线片阳性(见表)1)．23例患者培养均为阳性。基于Middlebrook 7H11琼脂培养板上的形态学生长和分子分析，我们发现11/23(48%)患者仅存在MTC, 9/23(39%)患者仅存在NTM, 3/23(13%)患者同时存在MTC和NTM(表)1)．通过spoligotyping鉴定的MTC菌株代表拉丁美洲地中海(LAM)基因型()，m . africanum（)和基因型家族T ()(表2)．采用innol - lipa鉴定分析，四m . avium-intracellulare-M。scrofulaceum复合物,一个m . chelonae复杂,一个m .脓肿,一个m . intracellulare被确定(表1)．通过在Middlebrook 7H11固体培养基上菌落形态鉴定的7株NTM菌株无法用于innolipa检测。我们共鉴定了28株分枝杆菌(即两种分枝杆菌)结核分枝杆菌复合体和NTM)。
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指痰涂片阴性但x线片阳性的患者; 正面或负面;NR:不需要;ND:不确定。 但是复杂:鸟分枝杆菌-细胞内-结核分枝杆菌复合体． |
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在这项研究中，伊巴丹直接督导下的短程化疗中心从23名诊断为结核病的患者中回收的分枝杆菌分离物中，有50%(14/28)发现了NTM。重要的是，使用培养，40%(8/20)的新结核患者和33%(1/3)的复发结核患者(即，在新结核患者中，40%的患者只有NTM，没有混合感染结核分枝杆菌复发患者中仅1例为单次感染NTM而无合并感染结核分枝杆菌)．这是一个重要的发现，因为结核误诊仅对NTM感染患者的潜在公共卫生影响深远。通常，这些患者接受抗结核药物治疗，其中包括在假定复发和耐多药结核病(MDR-TB)的患者中使用稀缺且更昂贵的二线药物。当症状性NTM未得到治疗时，相关毒性如异烟肼肝毒性可能危及生命。NTM治疗的一个基本组成部分(大环内酯)没有包括在任何结核病治疗方案中。此外，公共卫生对结核病和耐多药结核病的估计也因这些误诊以及不必要的医疗资源支出而相应扭曲[6］．
本研究的结果应在其局限性的背景下进行解释，其中包括评估每个患者的单个痰样本[3.，7］．重复分离相同的NTM将提供更明确的证据，真正的NTM感染。由于DOTS中心的临床评估有限，未对与NTM肺病相关的危险因素进行全面评估。具体来说，只有少数患者可获得有关艾滋病毒血清学状况的信息;然而，2008年研究地区的流行率数据仅为2.2% [10］．这是相关的，因为艾滋病毒影响结核病的临床表现，并可增加NTM的肺部定植[6］．最后，7个NTM分离株无法使用innolipa分析进行分子鉴定。
4.结论
尽管我们的研究结果有局限性，但这项研究表明，在我们的人群中，NTM感染患者可能存在误诊和治疗结核的可能性。正在进行的国家耐多药结核病调查等研究将进一步揭示尼日利亚这一问题的范围。我们的研究结果强调，迫切需要在DOTS中心采用分子技术来更精确地诊断结核病，以改善临床结果和保障公共卫生，特别是在结核病流行国家。
相互竞争的利益
两位作者宣称没有相互竞争的利益。
致谢
作者感谢美国芝加哥西北大学范伯格医学院传染病学部的Baiba Berzins为这项工作的所有后勤方面提供了便利。还特别感谢荷兰比尔托芬国家公共卫生和环境研究所国家结核病参考实验室的整个团队协助进行了部分实验室分析。最重要的是，作者感谢DOTS中心的患者的合作，使这个项目成为可能。所描述的项目部分由第5号助学金资助。D43TW007995，来自福格蒂国际中心。内容完全由作者负责，并不一定代表福格蒂国际中心或美国国立卫生研究院的官方观点。最后，作者特别感谢在本文提交前去世的tonkara Anatole教授(作者之一)。
参考文献
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版权所有©2016 Simeon Idowu Cadmus et al。这是一篇发布在知识共享署名许可协议，允许在任何媒介上不受限制地使用、传播和复制，但必须正确引用原作。
