体内抗疟活性Annona Muricata.叶提取物感染小鼠Plasmodium Berghei.

摘要

疟疾是世界上最重要的传染病之一。由于耐药性，治疗的选择非常有限。因此，迫切需要找到治疗疟疾的新化合物。本研究试图评价其抗疟活性Annona Muricata.叶水提取物Plasmodium Berghei.受感染的老鼠。叶水提取物答:muricata制备并对小鼠进行急性毒性试验。有效性测试体内，进行标准4天抑制试验。ICR小鼠接种10⁷寄生红细胞p .鼠腹膜内注射的肛门。然后通过Gavage每天每天口服给予提取物（100,500和1000mg / kg），连续4天。随后计算寄生血症，抑制率和包装细胞体积。将氯喹（10mg / kg）给予感染的小鼠作为阳性对照，同时仅给予未处理的对照仅给予蒸馏水。有人发现答:muricata叶水提物100、500和1000 mg/kg的剂量依赖性抑制率分别为38.03%、75.25%和85.61%。该提取物能延长感染小鼠的生存时间。此外，该提取物在4000 mg/kg剂量下对小鼠无致死作用。总之,答:muricata叶水提取物具有显著的抗疟活性，无毒性作用，且能延长存活时间。因此，该提取物可能含有潜在的铅分子，用于开发一种治疗疟疾的新药。

1.介绍

疟疾是一种热带寄生疾病，是世界上最重要的传染病之一。估计33亿人口总人口居住在疟疾风险的地区，估计死亡660,000。非洲是受影响最大的大陆，占所有疟疾死亡的90％[1］．这种病是由疟原虫物种并由女性叮咬传播按蚊蚊子。全球疟疾战略主要侧重于通过提供能够减少或消除寄生虫的药物进行病例管理。然而，多重抗疟药耐药疟原虫寄生虫和杀虫剂抗药性的出现按蚊蚊子不仅导致疟疾对新地区的传播，而且导致其在其先前被删除的地区的症状[2］．此外，氯喹耐期性现在发生在整个世界中[3.］．因此，寻找新的抗疟种，合成或自然，对杀害疟疾寄生虫是重要的。用于治疗疟疾的药用植物提取物具有漫长而成功的传统[4］．例如，奎宁是从金鸡纳树来自青山的蒿素[5］．这解释了为什么当前目前的研究专注于天然和植物衍生的产品，因为它们可以很容易地采购，可以在本地可用，并可根据其药理用途选择[6，7］．

Annona Muricata.番荔枝属番荔枝科的一员，现已广泛分布于世界各地的热带和亚热带地区，如南美洲和北美洲、非洲、亚洲和东南亚，包括泰国[8］．答:muricata提取物呈抗氧化，抗炎，抗微生物，抗哌啶，抗糖尿病，抗高肺血症，肝保护和抗癌活动[9- - - - - -14］．广泛的植物化学评价答:muricata提取物中含有多种化合物，包括生物碱、多酚、类黄酮、精油、环肽和山奈酚[15］．此外,答:muricata已被证明是通常丰富的醋酸乙炔化合物来源，其在该植物中是活性化合物[8，15］．此外，叶提取物答:muricata被测反对P. falciparum.显示出很有希望的抗疟疾效果[12，16］．然而，该植物提取物的抗疟活性对p .鼠感染小鼠模型尚未报道。因此，本研究旨在评价体内抗疟活性答:muricata水浸叶提取物p .鼠受感染的老鼠。

2。材料和方法

2.1。含水叶提取物的制备

干枯的叶子Annona Muricata.从皇家项目基金会，清迈，泰国购买。使用电搅拌器研磨干燥的叶，然后通过将10g干燥的粉末植物材料分散在100ml蒸馏水（DW）中进行萃取。微波法在360W中使用5分钟，并在室温下温育24小时[17］．然后通过Whatman 1号滤纸进行过滤，然后进行冻干。叶水提取物答:muricata储存在-20°C直至使用。在实验之前，然后将提取物溶解在适当剂量的DW中。

2.2。急性毒性测试

急性毒性答:muricata叶水提取物采用改进的Lorke 's法进行[18］．将15只雌性ICR小鼠随机分为5组，每组3只，分别口服100、500、1000、2000、4000 mg/kg。在最初的4小时内观察小鼠的毒性症状，如舔爪、流涎、全身伸展、虚弱、睡眠、呼吸窘迫、昏迷和死亡，随后每天观察7天。口服半数致死剂量按以下公式计算:

2.3。实验小鼠

从泰国曼谷Mahidol大学国家实验动物中心获得体重25-30 g的无病原体(细菌、真菌和寄生虫)4周龄雌性ICR(印迹控制区)小鼠，用无菌过滤自来水和颗粒饲粮(CP饲粮082,Perfect Companion Company，曼谷，泰国)自由．实验开始于5-6周大的小鼠。动物实验程序已由西安大略大学医学技术学院动物实验伦理委员会批准。

2．4．啮齿动物疟原虫

Plasmodium Berghei.使用anka（pbanka）。在实验之前，股票中的冷冻寄生虫至少通过ICR小鼠传代。寄生虫每天通过显微镜检查Giemsa染色薄血液涂片。使用公式计算寄生症（％寄生虫血症）的百分比

当寄生虫显示15-20％时，通过心脏穿刺收集感染的小鼠血液并悬浮在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。实验的感染是通过腹膜内（IP）注射约10的感染⁷寄生小鼠红细胞。

2.5。测定平均存活时间

每天监测死亡率，记录每只小鼠从接种寄生虫到死亡的天数。平均生存时间(MST)计算如下:

2.6。填充细胞体积的测定

将每只小鼠的尾血收集到肝素化的红细胞压积管中，用Critoseal密封，置于10000 rpm的红细胞压积离心机中5分钟，以测量细胞体积(PCV)。然后使用红细胞压积仪按以下公式读取PCV:

2.7。标准抗疟药药物

在本研究中使用氯喹（CQ）作为标准的抗疟药剂。选择剂量的药物在DW中新制备并通过饲养口服给药。根据小鼠的重量，在给药时调节以mg / kg体重表示的药物剂量。

2.8。抑制试验

采用小鼠PbANKA感染的标准4天抑制试验[19］．Naïve ICR小鼠接种IP注射10⁷寄生的红细胞。将感染小鼠随机分为5组，每组5只，口服100、500、1000 mg/kg浸提液，连续4 d。采用2个对照组:阳性对照组每天给予10 mg/kg的CQ，未处理组每天给予DW。试验第5天，按以下公式计算寄生率和抑制率:

2.9。统计数据

单向ANOVA用于分析和比较结果95％的信心。价值观被认为是重要的。结果以平均值表示标准差(SEM)。

3.结果

3.1。急性毒性

急性毒性评价结果答:muricata含水叶提取物显示出在施用小鼠中没有显着的行为变化。在7天的观察期内没有死亡率。然而，在4000mg / kg的小鼠中观察到毒性的行为迹象，其包括爪子舔，延长和拉伸和减少活性。然而，所有剂量都没有死亡率。口头中位数LD_50.估计是2500 mg / kg。

３．２．效果答:muricata叶水提取物对寄生虫病和平均存活时间的影响

标准的4天抑制试验结果答:muricata在表格中总结了寄生血症和生存时间的含水叶片提取物1．的答:muricata含水叶提取物给药依赖于小鼠Pbanka感染的剂量依赖性抗疟效应，并导致显着（)的抑制作用。当剂量为1000 mg/kg时，抑制率最高，为85.61%。然而，在所有的治疗剂量下，小鼠并没有完全治愈感染，但效果显著(）延长所有剂量水平的平均存活时间。

3．3．效果答:muricata填充细胞体积的含水叶提取物

的效果答:muricata在第0天和第4天的PCV上的含水叶提取物在表中显示2．提取液对PCV的抑制作用呈剂量依赖性，但100 mg/kg的剂量对PCV的抑制作用显著()减少PCV。

4.讨论

药用植物含有有药用潜力的活性成分，制药公司利用这些植物[7，20.，21］．的提取答:muricata据报道含有不同种类的代谢物，如单宁、生物碱、黄酮类化合物、多酚、皂苷、二萜、精油、山奈酚和醋酸元化合物[8，15，22，23］．二萜类、黄酮类、多酚类、皂苷类、生物碱类、山奈酚类和乙酰胆碱都具有抗疟活性[24- - - - - -27］．此外，该植物的抗氧化作用也可能有助于抗疟活性。有报道称，抗氧化活性可以抑制血红素的聚合，因为血红素在聚合之前必须被氧化，而未聚合的血红素对疟原虫具有很高的毒性[28，29］．此外，该植物提取物中的活性化合物可能是单独作用或协同作用，以观察其抗疟活性。与未处理对照相比，所有剂量的提取物均表现出显著的剂量依赖性抑制。因此，这种活性可能是由于在提取物中发现的代谢物，如生物碱、黄酮类化合物、多酚、皂苷、山奈酚和乙酸乙酯等代谢产物的单独或协同作用。它发现了与之前的研究相似的抗疟疾活性P. falciparum.［12，16］．

用于评估小鼠毒性迹象的评分系统尚未实施。对小鼠毒性迹象的物理观察刚刚完成。在这项研究中，所有用这种提取物治疗的小鼠在体力活动方面都是正常的，并且存活了下来。血液生化测试，以确保毒性没有进行。然而，在这一观察中，毒性的迹象已被用于其他研究[18]。有趣的是，答:muricata水叶提取物在剂量为4000毫克/公斤的情况下，7天内没有显示死亡率，表明该提取物是安全的。一般而言，如果试验化合物的致死剂量是最低有效剂量的3倍，则该化合物被认为是进行进一步研究的良好候选者[30.，31］．结果与对同一植物粗提物进行的其他研究一致，表明在1000、3000和4000 mg/kg的不同剂量水平下，没有观察到死亡[12，16］．然而，用4000mg / kg含水叶提取物观察到抑郁症，弱点和粗糙的毛发外壳等异常答:muricata．

的答:muricata叶水提取物延长了感染小鼠的MST，表明它抑制了PbANKA，降低了寄生虫对感染小鼠的整体病理作用。此外，被感染的小鼠由于红细胞的破坏而出现贫血，这可能是由于疟疾的增殖或脾脏网状内皮细胞的作用[32］．在这项研究中，与第0天相比，提取物显示出对PCV减少的保护，表明该提取物的抗氧化和抗疟作用可能发挥了关键作用。所以,答:muricata含水叶提取物抑制和降低血液血症，然后通过保护PCV还原，从而延长受感染的小鼠的MST。

5.结论

根据这些发现，口服给药答:muricata叶水提物(100 - 1000mg /kg)灌胃4 d，可显著降低实验性小鼠PbANKA的寄生率，且无毒。这一发现的含义是答:muricata叶水提取物具有强大的抗疟作用，因此可作为安全、有效和负担得起的抗疟药物的潜在来源。显示的高体内抗疟性性能和缺乏毒性效果呈现答:muricata用于生物测定引导的化合物的候选者，该化合物可以发展成新的铅结构和患有人类疟疾的药物开发计划的候选者。

相互竞争的利益

作者宣布他们没有竞争利益。

致谢

这项工作得到了西部大学研究和学术科学服务部门的支持。博士Uthaibull博士在Biotec，NSTDA和相关教授Somdet Srichairatanakool博士，蒋迈大学医学系，特别感谢他们的帮助讨论和疟疾感染的建议体内．

参考文献

1. N. J. White，S.Pukrittayakamee，T.T.Hien，M. A. Faiz，O. A. Mokuolu和A. M. Dondorp，“疟疾，”柳叶瓶，卷。383，没有。9918，pp。723-735,2014。查看：出版商的网站|谷歌学术
2. T. Barik，《抗疟药:从开发到破坏》目前的药物发现技术，卷。12，不。4，pp。225-228,2015。查看：出版商的网站|谷歌学术
3. L. A.Gonçalves，P.Cravo和M. U.Ferreira，“新兴疟原虫vivax南美洲抗氯喹：概述，“奥斯瓦尔多·克鲁兹研究所的纪念，第109卷，第2期。5, pp. 534-539, 2014。查看：出版商的网站|谷歌学术
4. K. Kaur, M. Jain, T. Kaur和R. Jain，《来自自然的抗疟疾药物》，生物有机与药物化学，卷。17，不。9，pp。3229-3256，2009。查看：出版商的网站|谷歌学术
5. D. Rathore，T.FCutchan，M. Sullivan和S. Kumar，“抗疟药：现状和新的发展”，关于试验用药的专家意见第14卷第2期7，第871-883页，2005。查看：出版商的网站|谷歌学术
6. A. S. Negi，A.Gupta和A. Hamid，“与植物分子的疟疾混淆：简要更新，”目前的药用化学，卷。21，不。4，pp。458-500,2014。查看：谷歌学术
7. F. Mojab，《抗疟天然产品:综述》，Avicenna植物杂志杂志,没有。2，第52-62页，2012。查看：谷歌学术
8. S. Z. Moghadamtousi, M. Fadaeinasab, S. Nikzad, G. Mohan, H. M. Ali和H. A. Kadir，”Annona Muricata.（Annonaceae）：对其传统用途，分离的丙酮素和生物活动进行审查，“国际分子科学杂志，卷。16，不。7，pp。15625-15658,2015。查看：出版商的网站|谷歌学术
9. D. O.Adeyemi，O.A.Komolafe，O.S.Adewole，E.M. Obuotor，和T.K.Adenowo，“抗高血糖活动Annona Muricata.(林),“非洲传统，互补和替代药物杂志，第6卷，第2期1，第62-69页，2008。查看：谷歌学术
10. S. O. Adewole和J. A. O. Ojewole，Annona Muricata.林恩。（Annonaceae）叶片脂质曲线叶片水提取物和链脲佐菌素治疗的糖尿病大鼠肝细胞中的氧化胁迫，“非洲传统、补充和替代医学杂志，第6卷，第2期1，第30-41页，2009。查看：谷歌学术
11. R. Baskar, V. Rajeswari和T. S. Kumar， "体外叶片的抗氧化研究粮食供给物种，”印度实验生物学杂志第45卷第5期5，页480-485,2007。查看：谷歌学术
12. E. Osorio，G.J.Arango，N.Jiménez等，“抗丙酮和细胞毒性活动体外哥伦比亚·安纳科伊，“民族科医生学杂志号，第111卷3，页630-635,2007。查看：出版商的网站|谷歌学术
13. J. A. Takahashi, C. R. Pereira, L. P. S. Pimenta, M. A. D. Boaventura, and L. G. F. E. Silva，“八种巴西番荔枝科植物的抗菌活性”，天然产物的研究，第20卷，第2期。1，页21-26,2006。查看：出版商的网站|谷歌学术
14. P. Padma，J.P.Chansouria和R.L.Khosa，“Hepatopotective活性Annona Muricata.林恩。和polyalthia cerasoides.bedd。”古代生命科学，卷。19，PP。7-10,1999。查看：谷歌学术
15. A. Matsushige，Y.Kotake，K. Matsunami，H.Otsuka，S. Ohta和Y. Takeda，“Annonamine，来自叶子的新的白胺生物碱Annona Muricata.，“化学和制药公报，第60卷，第2期2, pp. 257 - 259,2012。查看：出版商的网站|谷歌学术
16. M. R. Mohd Abd Razak，A. Afzan，R.Ali等，“选定的局部药用植物对氯喹抗性的抗性血液阶段的影响疟原虫疟原虫，“补充和替代医学第14卷第2期2014年第492条第1款。查看：出版商的网站|谷歌学术
17. E. Nkhili，V. Tomao，H. El Hajji，E.S.El Boustani，F. Chemat和O.摇摆，“绿茶多酚的微波辅助水提取”，植物化学分析，第20卷，第2期。5、2009年。查看：出版商的网站|谷歌学术
18. D. Lorke，“实用急性毒性测试的新方法”，档案的毒理学，卷。54，不。4，pp。275-287,1983。查看：出版商的网站|谷歌学术
19. W. Peters, J. H. Portus和B. L. Robinson，“啮齿动物疟疾的化疗，二十二。耐药菌株的价值p .鼠在筛选血液杀裂殖细胞活性时，热带医学和寄生虫学年鉴，第69卷，第2期2，页155-171,1975。查看：谷歌学术
20. K. C. Chinsembu，《撒哈拉以南非洲的植物作为抗疟疾剂》，Acta Tropica，第152卷，第32-48页，2015。查看：出版商的网站|谷歌学术
21. J.O.Adebayo和A. U. Krettli，来自尼日利亚植物的潜在抗疟药：审查，“民族科医生学杂志，卷。133，否。2，pp。289-302，2011。查看：出版商的网站|谷歌学术
22. C. Yang, S. R. Gundala, R. Mukkavilli, S. Vangala, M. D. Reid，和R. Aneja，“Graviola中类黄酮和acetogenin之间的协同作用(Annona Muricata.）叶子对前列腺癌进行保护，“致癌物第36卷第2期6, pp. 656-665, 2015。查看：出版商的网站|谷歌学术
23. V.C.George，D.R.N.Kumar，P.K. Suresh，以及R.A.Kumar，“抗氧化剂，DNA保护效果和HPLC分析Annona Muricata.（Soursop）提取物，“食品科学与技术杂志号，第52卷。4, pp. 2328-2335, 2015。查看：出版商的网站|谷歌学术
24. H.Ginsburg和H.Atamna，“疟疾感染的红细胞的氧化还原状态：概述强调未解决的问题，”寄生虫， vol. 1, no. 11，第5-13页，1994。查看：出版商的网站|谷歌学术
25. A.Indale，D. Bisrat，A.Conimut，F. Bucar和K. Asres，“在活的有机体内来自叶片的Labdane diterpenoid的抗疟疾活性ostostegia integrifolia百分点，“植物疗法的研究，卷。27，不。12，pp。1805-1809,2013。查看：出版商的网站|谷歌学术
26. l.p.s. Pimenta, g.m. Garcia, s.g.d. V. Gonçalves, b.l. Dionísio， É。M. Braga和V. C. F. Mosqueira，“在体内的抗疟效果的乙酸根，生物碱和黄酮类化合物富集的馏分Annona Crassiflora.集市。”天然产物的研究第28卷第2期16, pp. 1254-1259, 2014。查看：出版商的网站|谷歌学术
27. M. I. Barliana, E. W. Suradji, R. Abdulah et al，“山奈酚-3-的抗疟原虫性质O-鼠李糖苷，从斯皮亚沃奇希对仍然疟原虫疟原虫，“生物医学报告，第2卷，第2期4, pp. 579-583, 2014。查看：出版商的网站|谷歌学术
28. P. A. Berman和P. A. Adams，“青蒿素增强血红素催化的脂质膜氧化”，自由基生物学和药物第22卷第2期7，第1283-1288页，1997。查看：出版商的网站|谷歌学术
29. H. Vial，“最近的发展和理由对疟疾化疗的新策略”，寄生虫，第3卷，第2期。1，页3-23,1996。查看：出版商的网站|谷歌学术
30. J. M. Nguta，J.M. Mbaria，D. W.Gakuya，P.K.Gathumbi和S. G.Kiama，“肯尼亚的Msambweni的抗疟药疗法”，“民族科医生学杂志，卷。128，不。2，pp。424-432，2010。查看：出版商的网站|谷歌学术
31. B. Medhi，S. Patyar，R.S.Rao，P. Byrav DS，A. Prakash，“青蒿素化合物的药代动力学和毒理学概况：更新”药理学(第84卷)6，页323 - 332,2009。查看：出版商的网站|谷歌学术
32. M. Chinchilla, O. M. Guerrero, G. Abarca, M. Barrios，和O. Castro体内研究植物提取物抗疟疾能力的模型，”Revista de Biologia热带，卷。46，没有。1，pp。35-39,1998。查看：谷歌学术

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