文摘
本研究的目的是探讨化学成分和精油的抗菌活性的叶子留兰香植物对常见食源性致病菌(金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌、单核细胞增多性李斯特氏菌、鼠伤寒沙门氏菌,大肠杆菌O157: H7)。精油的化学成分是由气相色谱法结合质谱检测器(gc - ms)。精油的抗菌活性是评价肉汤磁盘采用微量法和琼脂扩散试验。根据气相分析的结果,18个组件被确定,占整个的99.89%精油。主要成分是香芹酮(78.76%)、柠檬烯(11.50%)、β-bourbonene (11.23%),独联体-dihydrocarveol (1.43%),反式石竹烯(1.04%)、薄荷酮(1.01%)、薄荷醇(1%)、和terpinen-4-ol (0.99)。精油表现出温和的水平对所有测试微生物的抗菌活性。一般来说,革兰氏阳性细菌更容易m . spicata精油比革兰氏阴性细菌。l . monocytogenes是最敏感的微生物的抗菌活性m . spicata精油(抑菌圈= 22毫米,麦克风和MBC = 2.5µL /毫升)。基于我们的研究结果,精油m . spicata植物从科曼莎省,收集伊朗西部,有一个潜在的应用作为抗菌剂。
1。介绍
由于增加消费者的担忧关于加工食品和即食食品含有抗生素、杀虫剂、激素、和合成添加剂和增加需求来取代人工与自然选择,抗菌药物的使用天然和有机食品市场已经经历了爆发式增长1- - - - - -3]。然而,未经处理的产品和天然食品可能更容易受到食源性致病菌的增长比常规食品版本(4]。最重要的食源性致病菌,在这些产品包括生存和成长金黄色葡萄球菌,芽孢杆菌spp。单核细胞增多性李斯特氏菌,沙门氏菌spp。大肠杆菌,鼠疫spp。,梭状芽胞杆菌spp。5,6]。这些细菌引起食源性疾病暴发的比例在不同的食物,如奶制品、蔬菜,肉类和鱼类产品(7]。在这种背景下,植物精油感兴趣吸引作为天然食品防腐剂,以确保食品的安全8]。
精油挥发性芳香成分是来自不同地区的植物包括芽、种子、根、离开,茎、木材、树皮、和花(8,9]。一般来说,精油被广泛用于制备化妆品,药物,和香水10]。属各种,最重要的一个唇形科家族的成员,是由19种和13个自然混合动力车。最常见的和流行的薄荷栽培m . spicata(11]。世界广泛种植于温带地区,尤其是非洲,温带亚洲和欧洲,但现在它是种植在世界所有地区(12]。在伊朗,新鲜和干植物及其精油一直被用作调味剂在各种食品,包括奶酪和doogh(伊朗酸奶饮料),巧克力,饮料,果冻,糖浆,糖果、冰淇淋和口香糖13,14]。此外,它已被广泛应用于治疗各种疾病,如恶心、呕吐、胃肠道功能紊乱,也是呼吸清新剂,抗菌漱口水,和牙膏11,15]。的主要成分m . spicata精油是酚类化合物,如香芹酮和柠檬烯(16]。
相比,基于我们的知识,各种芳香植物物种,如大蒜,百里香,丁香,几乎没有信息的化学成分和抗菌活性m . spicata精油来自西方的伊朗。因此,本研究的目的是:(1)确定的化学成分m . spicata精油来自Gilane Gharb城市,科曼莎省(伊朗以西),通过gc - ms,(2)探讨抗菌活性精油对常见的食源性细菌(金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,蜡样芽胞杆菌,单核细胞增多性李斯特氏菌,鼠伤寒沙门氏菌,大肠杆菌O157: H7)肉汤磁盘采用微量法和琼脂扩散试验。
2。材料和方法
2.1。收集的植物材料
新鲜的叶子m . spicata得到从Gilane Gharb城市,科曼莎省,伊朗西部(纬度:3776583统一横轴墨卡托(UTM),经度:585年,86 UTM和高度:833米海拔(a.s.l)),在2014年March-July full-blooming阶段。植物植物的识别是由赛义德·穆罕默德Masoumi博士(Razi大学农业学院、科曼莎、伊朗)和一个代表凭证标本(1267号)已经被放置在自然资源研究中心的植物标本的德黑兰,伊朗。
2.2。精油隔离
风干叶(100克)m . spicata植物被使用hydrodistilled 3.5 h clevenger-type装置根据标准技术(17]。收集到的油层的水蒸馏是分离的,干过无水硫酸钠(0.5 g)(默克公司,达姆施塔特,德国),透过一个0.22μm过滤器(美国微孔,贝德福德MA),保存在密封的密封玻璃小瓶,并存储在4°C之前进一步分析(化学分析和抗菌测试)。
2.3。精油的气相色谱分析-质谱法(gc - ms)分析
最不稳定的化合物m . spicata精油被识别和量化的分析气相色谱法结合质谱检测器(gc - ms)(英国热追求Finningan)。gc - ms仪器配备HP-5MS 5%苯基甲基硅毛细管柱(30.00米长×0.25毫米ID和0.25μ米膜厚度)。传质线和喷射器的温度设定在290°C和250°C,分别。最初的烤箱温度保持在50°C,提高到120°C程序斜坡速度每分钟2.5°C,然后提高到265°C和保持6分钟。氦与认证作为载气纯度大于99%,在恒定流量1.2毫升/分钟。1μL的样本注入自动分割模式(分流比1:20)。一式三份的进行了gc - ms分析。质谱是通过电子电离(EI) 70 eV。此外,精油的化学分析是由分析气相色谱法(GC)(英国热追求Finningan)相同的温度程序如上所述。GC分析是一式三份完成的。精油的主要成分的识别是伴随着基于对比他们的保留指数(RIs)保留指数的发布数据。进一步识别是由匹配他们的记录存储在威利/质谱与国家统计局gc - ms数据质量的光谱库系统。每个精油成分的百分比计算从GC峰地区不使用修正因素。
2.4。准备测试微生物的
的抗菌活性m . spicata精油对细菌包括测试金黄色葡萄球菌(写明ATCC 6538,写明ATCC 29213,写明ATCC 25923),枯草芽孢杆菌(写明ATCC 6633),b的仙人掌(写明ATCC 11774),l . monocytogenes(写明ATCC 19118),美国沙门氏菌感染(写明ATCC 14028)大肠杆菌O157: H7(写明ATCC 10536和写明ATCC 25922)。所有菌株都购买了冻干文化文化集合的伊朗科学技术研究组织(IROST),德黑兰,伊朗。细菌培养都维持在4°C在脑心浸液琼脂(嗨,默克,达姆施塔特,德国)和重新激活了亚文化在测试之前的两倍。细菌的微生物菌剂制备(1×106CFU /毫升),三到五well-isolated殖民地与无菌线圈被移除,接种到管包含5毫升的BHI肉汤培养基(默克公司,达姆施塔特,德国)和孵化37°C 18 h。18 h后,悬浮体调整到0.5麦克法兰标准浊度和稀释到适当的浓度。同时,细菌菌落的数量被枚举一式三份电镀BHI琼脂培养基。
2.5。抗菌测试
2.5.1。确定的最低抑制浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)
肉汤采用方法用于确定的最低抑制浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)根据指南的国家临床实验室标准委员会(18]。首先,5% (v / v)二甲亚砜(DMSO)(默克公司,达姆施塔特,德国)作为乳化剂和0.05% (w / v)琼脂(默克公司,达姆施塔特,德国)作为稳定剂的添加了精油在10毫升Mueller-Hinton肉汤(MHB,默克,达姆施塔特,德国)媒介。经过高压灭菌法的介质,不同的精油的浓度(0.017,0.035,0.07,0.156,0.312,0.625,1.25,5、10、20和40μL /毫升)被设置在MHB媒介。96 -与圆底井采用塑料托盘(美国Extragene) 90年被分配到每个准备好μL MHB含有不同浓度的植物精油和10μL的细菌培养液,大约是106CFU /毫升。积极的和消极的控制被认为是如下:积极的控制:MHB包含DMSO和细菌培养液没有精油和消极的控制:MHB包含DMSO和精油没有细菌培养液。每个内容混合在一个板块在250 rpm 20年代和孵化瓶37°C 18 h。精油的最低浓度显示视觉上没有增长(与第一个增长通过比较控制)为麦克风。最低浓度测定的精油,可以减少99.99%的人口(MBC)是由细菌培养10μL的没有任何无形的增长。培养是Mueller-Hinton琼脂(尼古拉斯,默克,达姆施塔特,德国)中、孵化24小时37°C。金黄色葡萄球菌(写明ATCC 29213)被认为是控制微生物培养基采用的方法。
2.5.2。磁盘琼脂扩散试验
的抗菌活性m . spicata精油是由磁盘琼脂扩散试验还研究了根据指南的国家临床实验室标准委员会(19]。15分钟内,调整后的浊度剂悬浮液,无菌棉拭子是浸入调整悬架然后尼古拉斯介质的表面上传播方法。5分钟后,滤纸片(直径6毫米;绘画纸数量1)浸满20岁μL的精油放在尼古拉斯介质的表面。一夜之间,盘子被孵化37°C和检查区域的抑制。抑菌圈的直径以毫米,使用滑动卡钳。正(四环素)和负(只有DMSO)控制被认为在目前的测试。金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923)和大肠杆菌(写明ATCC 25922)被认为是控制生物磁盘扩散。所有的实验都重复一式三份。
3所示。结果与讨论
3.1。化学成分的m . spicata精油
gc - ms的调查的结果m . spicata精油如表所示1。根据我们的结果,18个组件,并用gc - ms鉴定,占整个的99.89%精油。主要成分是香芹酮(78.76%)、柠檬烯(11.50%)、β-bourbonene (11.23%),独联体-dihydrocarveol (1.43%),反式石竹烯(1.04%)、薄荷酮(1.01%)、薄荷醇(1%)、和terpinen-4-ol (0.99)。我们的研究结果的最丰富的化合物m . spicata精油来自西方的伊朗依照先前的研究[20.- - - - - -24]。Chauhan et al。(2009)报道,香芹酮的主要组件精油来自印度。其他成分的精油是柠檬烯、1,8-cineole,Z -β-ocimene,独联体-muurola-4 [20.]。Sertkaya et al。(2010)和Mahboubi Haghi香芹酮(2008)报道的主要成分m . spicata精油(13,21]。此外,戈文达拉扬et al。(2012)的化学成分研究m . spicata从Tamilnadu、印度和报道香芹酮(48.60%),独联体-carveol(21.30%),柠檬烯(11.30%)是主要组件(22]。与我们的结果不同,Telci et al。(2010)研究了抗菌活性和化学成分的环境变化m . spicata并指出pulegone和piperitone主要组件(16]。一般来说,观察到精油的化学成分含量的差异,与先前的研究相比,可以归因于几个因素包括不同的方法用于提取精油,地理条件、气候和季节性变化,物种和植物材料的植物生长和加工阶段之前提取的油1,2,8,9,13]。
3.2。抗菌活性
精油的抗菌活性m . spicata对常见食源性细菌通过肉汤采用测试磁盘和琼脂扩散试验表所示2和3。目前的研究结果显示,对微生物的精油表现出温和的抗菌效果。一般来说,本研究的结果表明,革兰氏阳性细菌更容易m . spicata精油比革兰氏阴性细菌。革兰氏阴性细菌的低敏感性可能归因于存在外膜的疏水脂多糖提供保护不同的代理3,25,26]。如表所示3,l . monocytogenes是最敏感的微生物的抗菌活性m . spicata精油(抑菌圈= 22毫米)。
以前的抗菌研究表明m . spicata精油在抗菌效应革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌的生长。Mahboubi和Haghi(2008)检查的抗菌效果m . spicata精油的肉汤采用和磁盘扩散方法和报道,精油有很高的抗菌活性金黄色葡萄球菌,l . monocytogenes,b的仙人掌,大肠杆菌(13]。这些研究人员报道,精油的MIC值金黄色葡萄球菌l . monocytogenes b .仙人掌,和大肠杆菌0.5、1、1和4μ分别L /毫升。不同报道麦克风在这项研究可能的结果,使用不同种类的细菌,媒体和精油的酚类化合物。此外,Gulluce et al。(2007)表示的精油m .叶收集来自土耳其有很强的抗菌活性等众多的细菌金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,b的仙人掌,l . monocytogenes,美国沙门氏菌感染,和大肠杆菌O157: H7 (27]。一般来说,相信精油的抗菌活性可能与酚类化合物的百分比,萜烯,aldoketones [27- - - - - -29日]。的抗菌活性m . spicata精油可以归因于香芹酮和柠檬烯的存在。据报道,香芹酮是最有效的抗菌药物之一,各种植物(30.]。香芹酮的抗菌活性机制并不完全清楚详细。已经证明,微生物增长上的香芹酮的作用机制包括不稳定的磷脂双分子层结构,与膜的酶和蛋白质,其作为质子交换器降低pH梯度跨膜(31日]。然而,扫描电子显微镜研究是必要的检查准确的作用机制m . spicata精油。
4所示。结论
本研究的结果表明m . spicata精油具有显著的抗菌活性与暴发相关的对常见食源性细菌(金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,b的仙人掌,l . monocytogenes,美国沙门氏菌感染,大肠杆菌O157: H7)。精油的抗菌活性可以归因于不同的活性化合物的存在。主要成分是香芹酮(78.76%)、柠檬烯(11.50%)、β-bourbonene (11.23%),独联体-dihydrocarveol (1.43%),反式石竹烯(1.04%)、薄荷酮(1.01%)、薄荷醇(1%)、和terpinen-4-ol (0.99)。基于我们的研究结果,精油各种植物从科曼莎省,收集伊朗西部,有一个潜在的应用作为抗菌剂。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。