脆皮Tinospora crispa茎提取物对伯氏疟原虫感染小鼠肾损伤和溶血的保护作用

摘要

疟疾诱导的肾损伤和溶血与成年患者的死亡率有关。据推测，疟疾感染诱导的氧化应激病症涉及其病理学。因此，我们旨在调查保护效果Tinospora crispa.茎提取物对肾损害和溶血期间鼠体内感染。t . crispa使用热水方法制备干萃取物，并用于小鼠的口服处理。ICR小鼠群体感染了寄生的红细胞p .鼠ANKA采用腹腔注射，每天2次(500、1000、2000 mg/kg)，连续4天。为了评估肾脏损害和溶血，分别评估血液尿素氮(BUN)、肌酐和红细胞压积(%Hct)水平。疟疾感染可导致肾脏损伤和溶血，其表现为BUN和肌酐升高，%Hct降低。而1000和2000 mg/kg的提取物对感染小鼠的肾损伤和溶血有保护作用。总之,t . crispa茎提取物对疟疾感染引起的肾损伤和溶血有保护作用。这种植物可以作为开发各种治疗疟疾的草药配方的潜在来源。

1.介绍

疟疾是世界领先的杀手之一，具有比任何其他传染病更高的发病率和死亡率，具有更高的儿童死亡率和孕妇。疟疾是由属的寄生虫引起的疟原虫并由女性传播按蚊蚊子(1］．特别是疟疾引起的肾脏损害和溶血P. falciparum.和P. Vivax.，发生在2至6％的住院患者的死亡率，可能达到高达50％[2］．疟疾感染过程中肾脏损害和溶血的发病机制是多因素的，但没有很好地描述，但几项研究表明，与被寄生红细胞的细胞粘附和促炎反应以及氧化应激有关[3.- - - - - -5］．此外，寄生虫的入侵和随后的红细胞破裂也有助于溶血的发病[6］．这促使研究人员在疟疾感染期间发现和开发新的、安全的和负担得起的抗溶血药物。在这方面，药用植物是潜在的研究对象。

植物提取物通常在世界上一些地区进行研究，以确定其用于治疗疟疾的可能活动[7- - - - - -10］．此外，许多研究最近支持使用传统药用植物治疗疾病[11- - - - - -16］．Tinospora crispa.钩。f.和Thomson是一棵属于门蕨科的树。这种植物广泛分布于亚洲和包括泰国在内的东南亚，用于治疗全身虚弱、疟疾热和慢性风湿病[17］．据报道，t . crispa干萃取物具有高抗氧化性能。该结果通过存在酚类和黄酮类化合物，例如儿茶素，木犀草素和硼丙酮来证实[18］．这些物质具有高的抗氧化活性和其他活动，包括抗炎、抗菌剂和抗癌[19- - - - - -21］．抗氧化性能t . crispa茎提取物可用于治疗由氧化应激引起的疾病，如心血管疾病、癌症、肝脏损伤和肾脏疾病。它还被用作抗疟疾剂在活的有机体内［22，23］．然而，它还没有被报道使用t . crispa干萃取物治疗肾损伤和溶血诱导的疟疾感染。因此，本研究旨在调查保护效果t . crispa茎提取物对肾损伤和溶血的作用p .鼠感染的老鼠。

2.材料和方法

2．1．植物原料及粗提物的制备

新鲜的茎Tinospora crispa.在素攀武里府，泰国，从3月的自然环境，收集到2015年四月由Sakaewan Ounjaijean博士，药学系，Payap大学，泰国清迈进行鉴定的样品。茎被切碎成小块并在60℃下在热空气烘箱中干燥72小时，然后将干燥的植物研磨，然后在360的微波以1：10（w / v）的比例在蒸馏水中萃取。 W for 5 min [24］．然后在室温下反复搅动培养过夜。提取液通过Whatman 1号滤纸过滤，然后进行蒸发去除溶剂。粗提物保存在−20°C。实验前，将粉末提取物溶于蒸馏水中，取适当剂量用于小鼠实验，体积不大于1 mL。给药时根据小鼠体重调整给药剂量(以mg/kg体重表示)。

2.2。老鼠

无菌雌性ICR小鼠，4-6周龄，体重25-30 g，购自泰国曼谷Mahidol大学国家实验动物中心。置于22-25℃，光照/暗循环12 h，给予标准小鼠颗粒和水随意．动物实验的所有程序均由西安大略大学医学技术学院动物实验伦理委员会批准。

2.3。鼠体内寄生虫

鼠体内本研究使用ANKA (PbANKA)菌株。通过1 × 10次腹腔传代维持PbANKA存活⁷寄生于naïve小鼠红细胞。每日采用吉氏染色薄血涂片镜检监测寄生虫血症。收集尾静脉至肝素化红细胞压积管，10000 g离心10分钟，监测红细胞压积(%Hct)。最终计算红细胞体积与总血容量的比例。

2．4．肾功能试验的评估

血尿尿素氮（BUN）和肌酐用作肾功能的指标。将小鼠血液从尾静脉收集到肝素化的血细胞比容管中，并以10,000g离心10分钟。随后收集血浆，并用作使用可用的商业套件（生物系统）根据制造商的指令测量面包和肌酸酐的受试者。

2．5．有效性测试体内

水提物的保护作用t . crispa基于标准4天抑制试验对疟疾感染期间肾脏损害和溶血进行了研究[25］．随机分为ICR小鼠组(每组5只)，按1 × 10进行感染⁷通过IP注射寄生PBANKA的红细胞。感染后两小时，通过饲料口服给予500,1000和2000mg / kg提取物，每天每天24小时连续两次，每天两次。使用了三组;将正常对照蒸馏水或提取物，同时仅给予未处理的对照仅给予蒸馏水。在实验第4天，收集尾血以通过测量％HCT评估溶血。此外，随后还用于测量面包和肌酐等离子体。

2．6．统计数据

使用GraphPad Prism 5.01版本进行统计分析。结果以均数±均数标准误差(SEM)表示。采用单因素方差分析比较几个治疗组。在95%的置信度下考虑显著差异，P< 0.05。

3.结果

3．1.肾损伤和溶血鼠体内小鼠的Anka感染

在感染后第1天首次检测到寄生虫血症，寄生虫血症为0.5%，第10天达到65%(图)1(一))．其次，我们观察到感染小鼠的BUN和肌酐水平显著升高，第一显著性(P< 0.05和P< 0.001)在感染后第4天发现增加(图1 (b)和1 (c))．此外，我们还观察到，在感染小鼠中，由于寄生虫血症的存在，%Hct逐渐下降(图)1 (d))．

(一)

(b)

(c)

(d)

３．２．的保护作用Tinospora crispa.肾脏损伤期间的茎提取物鼠体内小鼠的Anka感染

有人发现t . crispa茎提取物对小鼠植物感染诱导的肾损伤的保护作用，并且在2000mg / kg提取物治疗组的剂量下发现了最高活性（图2)．BUN和肌酐水平显著升高(P< 0.01和P(p < 0.001)，与正常对照组相比，疟疾感染组(未处理组)和500 mg/kg提取物处理组感染小鼠的差异显著。有趣的是，口服后t . crispa茎提取物、BUN和肌酐水平显著下降(P< 0.01和P<0.001，ARCH。），特别是在1000和2000mg / kg的剂量，与未经处理的对照相比。该提取物对正常小鼠无明显影响。然而，t . crispa干萃取物不能降低寄生虫水平。

(一)

(b)

图2

的保护作用Tinospora crispa.茎提取物对肾损伤的作用鼠体内感染。ICR小鼠(每只5只)接种1 × 10⁷通过腹腔注射寄生PbANKA红细胞。分别灌胃500、1000、2000 mg/kg，口服，连续4 d。试验第4天，测定(a) BUN和(b)肌酐水平。结果以平均值±SEM表示。< 0.01和<0.001，与正常控制相比，和< 0.001和< 0.001，与未处理对照组相比。N:正常对照，N + E:正常小鼠，2000mg /kg提取物处理，UN:未处理对照。结果来自3个独立的实验。

3．3．Antihemolytic的影响Tinospora crispa.茎中提取鼠体内小鼠的Anka感染

t . crispa茎提取物对PbANKA感染小鼠有溶血作用。如图所示3.，未处理的对照组和用500 mg/kg提取物处理的感染小鼠出现溶血现象，显示Hct %显著降低(P< 0.01)，与正常对照组比较。有趣的是，%Hct显著(P< 0.01)。当剂量为2000毫克/公斤时，效果最高。该提取物对正常小鼠无明显影响。此外，该提取物还能延长感染小鼠的生存时间。

图3

的保护作用Tinospora crispa.茎提取物对所致溶血作用鼠体内感染。ICR小鼠(每只5只)接种1 × 10⁷通过腹腔注射寄生PbANKA红细胞。分别灌胃500、1000、2000 mg/kg，口服，连续4 d。实验第4天，测量红细胞压积水平。结果以平均值±SEM表示。< 0.01，与正常对照组比较< 0.001，与未处理对照组相比。N:正常对照，N + E:正常小鼠，2000mg /kg提取物处理，UN:未处理对照。结果来自3个独立的实验。

4。讨论

在目前的研究中，我们提供了证据来描述t . crispa茎提取物对肾损伤和溶血的作用p .鼠感染的老鼠。ICR小鼠感染PbANKA后第4天开始出现肾损害和溶血，并通过感染小鼠BUN、肌酐升高、Hct %下降等表现证实肾损害和溶血的发生。肾损伤和溶血被认为是寄生虫粘附和感染过程中对氧化应激产物的免疫反应加剧的结果[26］．此外，在肾脏微血管部位寄生的红细胞隔离也被讨论引起肾脏损害。血期感染过程中红细胞的破坏积累了高水平的无毒血红素，该血红素能够通过Fenton/Haber-Weiss反应产生羟自由基，从而诱导氧化应激[27］．此外，血红素来源的氧化应激被认为是铁诱导的脂质过氧化导致氧化LDL形成的主要因素[28］．因此，这些受感染血液阶段的这些病症导致肾损伤和溶血。

然而，在感染的小鼠中发现了疟疾损伤和溶血的保护作用t . crispa茎中提取。多酚和类黄酮显示出高的抗氧化和抗炎特性，然后保护氧化应激的发展[17］．t . crispa已显示干萃取物含有大量的多酚和黄酮醇[29］．因此，这种提取物的有效抗氧化活性可能在保护疟疾胁迫下保护肾脏损伤和溶血中的肿瘤感染引起的氧化胁迫作用。而且，t . crispa据报道茎提取物具有抗疟疾活性P. Yoelii.小鼠感染[22］．所以，要抑制抗疟活性p .鼠生长和随后的抑制肾损伤和溶血也可能提到。

5.结论

综上所述，我们的结果表明t . crispa茎提取物有保护作用p .鼠导致肾损伤和溶血。适当的药物策略现在可能被设计出来，以增加这种提取物的低生物利用度，并防止快速在活的有机体内代谢转化，以这样的方式使它们更加可用作组合疗法中的替代抗疟药。

利益冲突

作者宣称不存在利益冲突。

致谢

作者感谢临床化学学部的所有学生在动物实验方面的帮助。作者还感谢Sakaewan Ounjaijean博士对植物提取物制备的讨论。作者特别感谢Chairat Uthaipibull博士和Somdet Srichairatanakool副教授对疟疾感染的讨论。

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