评价抗生素敏感性的革兰氏阳性厌氧球菌分离出癌症患者的n . n .高烧的俄罗斯的癌症研究中心

文摘

总共有81 nonduplicate革兰氏阳性厌氧球菌(GPAC)参与了这项研究。GPAC被隔绝的癌症患者在2004年至2014年之间收集的样本。物种鉴定是由matrix-assisted激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)。大多数的隔离被确定为Finegoldia麦格纳(47%)和Peptoniphilus harei(28%)。六种GPAC的易感性是八抗生素根据决定的以及方法。此外,所有隔离都容易imipenem,万古霉素和linezolid。对青霉素G,阿莫西林/ clavulanate,甲硝哒唑,环丙沙星和左氧氟沙星不同为不同的物种。一个Finegoldia麦格纳隔离是耐多药(即。,parallel resistance to five antimicrobial agents, including metronidazole, was observed). TwoParvimonas微米隔离是高度耐甲硝哒唑(麦克风256μg / mL),但对其他测试抗生素敏感。

1。介绍

革兰氏阳性厌氧球菌(GPAC)约占25 - 30%所有从临床标本分离出厌氧细菌(1]。GPAC共生的菌群的一部分,但他们往往会成为机会致病菌。GPAC可以从各种各样的孤立的网站,如血液、脓肿、皮肤和软组织感染,关节和骨头、口腔、呼吸道、肠道和尿道。

分类法的异质群体发生了广泛的变化在过去的几十年,由于分子鉴定方法的发展和应用,包括PCR和测序的16 s rRNA基因(2,3]。最近推出了新方法对细菌鉴定、matrix-assisted激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)。这种快速的、精确的和具有成本效益的技术已成功实现准确识别GPAC [4]。

自1998年以来,属消化链球菌属已被重新分类成几个新的属物种。目前,重要的属GPAC通常从临床分离材料消化链球菌属(主要是体育。anaerobius),Peptoniphilus(Pt. harei),Anaerococcus(答:鞘突),Finegoldia麦格纳,Parvimonas微米(5,6]。他们经常与本地和系统性感染。GPAC大多是孤立的感染从幼童腹壁薄弱。然而,他们也可以隔离在一个纯粹的文化,特别是f·麦格纳。

GPAC主要是容易内酰胺/内酰胺酶抑制剂、碳青霉烯和氯霉素。尽管如此,抗生素敏感性不同在不同的物种7]。GPAC有可变电阻对青霉素(7 - 10%)、克林霉素(7 - 20%)和甲硝唑(5 - 10%)。他们也耐四环素,红霉素。由于抗生素敏感性的差异GPAC物种,是非常重要的正确识别分离和测试他们的敏感性来管理有效的抗菌治疗。

本研究的目的是确定GPAC孤立的物种多样性从癌症患者感染性并发症,分析这些厌氧菌对抗生素的敏感性,并计算出阻力位在我们医院。

2。材料和方法

2.1。标本收集和生长条件

研究了1500个床位的n . n .高烧的癌症研究中心,这对成人和儿童在莫斯科,俄罗斯卫生部的支持下。所有临床标本包括在本研究收集2004年6月至2014年10月从各种恶性肿瘤患者。临床样本收集到一个实验室的两小时内运输不使用特殊的厌氧运输系统。他们被接种到Schaedler琼脂(bioMerieux、法国),补充与氯高铁血红素、甲萘醌,5%血。此外,他们被置于巯乙酸汤(bioMerieux、法国)进行浓缩。所有盘子都孵化厌氧使用jar和AnaeroGen系统(英国Oxoid) 37°C 48小时。同时每个菌落形态类型亚文化Schaedler琼脂板和血琼脂平板。的主要板块reincubated厌氧而亚文化是孵化耗氧检测任何没有严格厌氧的细菌。识别分离的菌株(直到2012年它仍无法使用MALDI-TOF女士设备)是由用革兰氏染色法和快速ID 32 (bioMerieux、法国),VITEK - 2 (bioMerieux、法国),或微扫描噪声检测(西门子、英国)系统。这些菌株被复检通过MALDI-TOF女士GPAC菌株被存储在20%脱脂牛奶−70°C,直到他们在这项研究中使用。

2.2。MALDI-TOF标识隔离

为了确保最终的识别隔离在物种水平,matrix-assisted激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)。纯文化的冻结压力是亚文化在血琼脂厌氧和两次分析基于直接转移法。单个或几个殖民地直接涂抹到薄膜的金属靶板用接种针。用1点都覆盖μL的-cyano-4-hydroxycinnamic酸矩阵解决方案在一个有机溶剂(乙腈和2 50%,5%三氟乙酸)。每个菌株应用于三个名额。然后,目标板在室温下晾干。大肠杆菌核糖体蛋白(细菌测试标准,力量Daltonik,德国)被用作一个积极的控制和校准标准。质谱得到使用MicroFlex LT质谱仪(力量Daltonik,德国),然后分析与生物型FlexControl内3.0软件程序。细菌鉴定,峰列表一个未知的隔离与参考光谱库。图书馆5629标准光谱(4.0.0.1版)。的MALDI-TOF生物型输出日志(分数)在0到3.0的范围。根据制造商提出的标准,一个日志(分数)在1.7和1.99之间表明属水平鉴定,而日志(分数)≥2表示物种鉴定水平。

2.3。抗菌药物敏感性试验

最低抑制浓度(MIC)是由使用M.I.C.评估者(M.I.C.E.),一个新的梯度端点设备(Oxoid,英格兰)。M.I.C.E.地带运行原理类似于原来的以及设备(8]。八个抗菌药物进行了测试:甲硝哒唑,阿莫西林/ clavulanate imipenem,青霉素G,万古霉素,linezolid,环丙沙星和左氧氟沙星。每个隔离剂制备了在生理盐水密度相当于1.0麦克法兰标准。布鲁氏菌的接种血琼脂平板后,将为每个代理被放置在板根据制造商的指示。盘子被孵化48小时37°C的厌氧气氛。麦克风被记录在点的椭圆区域分割的地带。自从M.I.C.E.条有时可能会导致错误的结果与参考琼脂法相比,耐药菌株都重新测试两次。根据EUCAST断点麦克风数据解释。在每一批易感性进行使用的质量控制b . fragilis写明ATCC 25285。

3所示。结果与讨论

3.1。细菌的分离

GPAC被孤立的从72年的81株临床样本,从头部和颈部,肺癌、腹部、骨骼和关节和软组织感染的癌症患者。在9个临床样本,两个不同的物种GPAC被分配在同一时间。总共74隔离(91 4%)被正确识别在物种水平MALDI-TOF女士,分数超过2.0。三个分离株(Finegoldia麦格纳,Peptoniphilus harei,和Anaerococcus鞘突)被确定属得分在1.8和2.0之间。四个种族(菌株之一Finegoldia麦格纳两个菌株的Anaerococcus鞘突,和一个应变的Peptoniphilus gorbachii)不能可靠地识别和分数低于1.7。GPAC的分布如表所示1。最常见的物种Finegoldia麦格纳。Peptoniphilus harei(Pt. harei)是第二个最常见的孤立的物种,紧随其后Parvimonas微米(Pa。微米),消化链球菌属anaerobius(体育。anaerobius),分别。最常见的来源隔离所有GPAC皮肤和软组织,胃肠道和泌尿生殖器的大片。没有GPAC物种分离血液样本在这个研究。

GPAC之间,f·麦格纳是最致病生物,这是最常见的隔离在一个纯粹的文化从不同临床感染网站(1,9]。在我们的研究中,f·麦格纳被隔离在一个纯文化七个临床样本(18日4%的吗f·麦格纳隔离和8、GPAC总额的6%)。作为唯一病因代理人,f·麦格纳隔绝骨癌患者骨科手术后(3例),从手术伤口(3例),和一个病人与癌症的纵隔(1例)。f·麦格纳主要是隔离手术伤口(45%)、体液(29%),和脓肿(24%)。

Pt. harei从各种各样的感染源在大约相等的比例(表吗1)。Pt. harei经常与临床样本等体液(43%)和手术伤口(39%),很少从脓肿(13%)。所有菌株的Pt. harei被正确地识别在物种水平MALDI-TOF女士在过去,Pt. harei经常被误认为吗Pt. asaccharolyticus,因为这两个物种有相同的生化特征和不能互相分化表型(10]。

Pa。微米和体育。anaerobius很少是孤立的。Pa。微米主要是感染肺部和腹部的隔绝,而体育。anaerobius是最常见的隔绝皮肤和软组织的感染,以及泌尿生殖系统感染。取得了类似的结果体育。anaerobius其他作者(11]。Pa。微米主要是来自液体(62 5%),而体育。anaerobius是最常分离手术伤口(57%)。所有菌株的Pa。微米和体育。anaerobius被MALDI-TOF可靠地确定在物种水平。

四个隔离Anaerococcus鞘突得到从皮肤和软组织感染,以及伤口()和皮下脓肿()。两个菌株的鉴定是不可靠的,因为物种鞘突/hydrogenalis属Anaerococcus有非常相似的模式。因此,区分他们的物种是很困难的。一个紧张的Pt. gorbachii是一起孤立f·麦格纳从一个卵巢肿瘤。这是一种新的GPAC 2007中描述12]。

在欧洲研究抗菌药物敏感性299 GPAC隔离,主要从皮肤和软组织感染,大多数隔离被确定为f·麦格纳(37 1%),Pa。微米(17日7%),Pt. harei(14 7%),答:鞘突(7 0%)体育。anaerobius(6 7%)(6]。我们的数据的物种多样性GPAC是协议的研究,这是在10个欧洲国家进行的。然而,有不同的比例比各种物种,特别是Pa。微米和Pt. harei,可能是由于更加多样化的来源隔离GPAC在我们的研究中。此外,我们检查了GPAC物种中遇到癌症患者。

3.2。抗菌药物敏感性

抗菌药物的麦克风分布测试GPAC隔离展示在表2。所有隔离都容易imipenem、万古霉素和linezolid;麦克风范围是0.004 - -0.12,0.03 - -0.5,-4.0和0.5,分别。对青霉素G,阿莫西林/ clavulanate,甲硝哒唑,环丙沙星和左氧氟沙星不同为不同的物种。在我们医院,甲硝哒唑是厌氧感染的预防和治疗的首选药物。这药最高在体外活动与imipenem和beta-lactam / beta-lactamase抑制剂组合,特别是阿莫西林/ clavulanate。对于大多数GPAC隔离,灭滴灵的麦克风范围是0,赔率是,0μ克/毫升。一个f·麦格纳应变隔离在纯文化从一个腐烂的纵隔肿瘤耐甲硝哒唑(32μg / mL)。这一毒株也耐青霉素G (32μg / mL)、环丙沙星(32μg / mL)和左氧氟沙星(32μg / mL),同时展示中间电阻阿莫西林/ clavulanate (8μg / mL)。8例术后纵隔炎由于f·麦格纳有被描述在文学、3 monomicrobial。然而,分离菌株容易常规抗生素(13]。

f·麦格纳隔离了青霉素的MIC值最高(0.12μg / mL),阿莫西林/ clavulanate (0.06 - -0.12μg / mL), imipenem (0.03 - -0.06μ其他GPAC g / mL)相比。尽管如此,所有菌株都容易受到这些抗生素除了一个耐多药菌株(表2)。26(68%)和27(71%)的隔离f·麦格纳耐环丙沙星(32μg / mL)和左氧氟沙星(32μ分别g / mL)。一个应变敏感性降低左氧氟沙星(8μg / mL)被孤立。氟喹诺酮类耐药性在GPAC报道耐环丙沙星和左氧氟沙星14%和27%,分别为(14]。

Pt. harei显示最高的MIC值环丙沙星(1 - 2μg / mL)和左氧氟沙星(4 - 8μg / mL)相比其他GPAC物种。一个隔离耐环丙沙星(32μg / mL),而一个应变显示中间电阻(8μg / mL)。的电阻Pt. harei菌株左氧氟沙星远远高于环丙沙星。共有12个分离株(52%)耐药或显示中间电阻左氧氟沙星(MIC 8-32μg / mL)。除氟喹诺酮类原料药,Pt. harei隔离是容易测试药物。

在Pa。微米两个隔离是高度耐甲硝哒唑(麦克风256μg / mL),并对其他测试抗生素敏感。两个隔离敏感性降低甲硝哒唑(4μg / mL),以及减少对青霉素的敏感性(0,5μg / mL)。Pa。微米菌株的抗甲硝哒唑也报告了研究从荷兰15]。此外,Pa。微米菌株显示最低的阿莫西林/ clavulanate(0.015 - -0.03的MIC值μg / mL)和imipenem (0.004 - -0.008μg / mL)相比其他GPAC物种(表2)。不同菌株的敏感性Pa。微米对青霉素高度变量。五分离青霉素麦克风值0.004 - -0.015μ克/毫升,而两个隔离中间电阻(0.5μg / mL)和一个菌株对青霉素耐药(32μg / mL)。后一种应变也对左氧氟沙星(32μg / mL)和敏感性降低环丙沙星(8μg / mL)。此外,火盆指出8%的阻力Pa。微米青霉素(16]。

为体育。anaerobius青霉素显示,最大的变化。麦克风的范围是0.008 -32μ克/毫升。一株耐青霉素(1μg / mL)、环丙沙星和左氧氟沙星(32μ每个g / mL)。第二个压力只有耐青霉素(32μg / mL)。所有体育。anaerobius隔离容易甲硝哒唑,阿莫西林/ clavulanate, imipenem。然而,三个菌株对环丙沙星和左氧氟沙星(32μg / mL)。与我们的数据,10%的体育。anaerobius隔离显示耐阿莫西林/ clavulanate [11]。阿莫西林/克拉维酸的组合报道是不那么有效体育。anaerobius隔离相比其他GPAC16]。

所有答:鞘突隔离是耐环丙沙星和左氧氟沙星(32μg / mL),但对其他测试抗生素敏感。一个Pt. gorbachii分离是容易受到药物,除左氧氟沙星(16μg / mL)。的电阻答:鞘突和Pt. gorbachii隔离左氧氟沙星是其他作者所指出的(12,15]。

总之,正确的识别GPAC物种水平及其对抗菌药物的敏感性是必要的为了管理有效的抗生素治疗,这些数据可以变化明显不同的诊所。此外,必须考虑GPAC对青霉素的敏感性降低,以及频繁的报道抗甲硝哒唑,通常用于GPAC引起的感染的经验性抗菌治疗。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

补充材料

引用

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