Sesamol:天然酚类化合物与承诺Anticandidal潜力

文摘

我们调查的抗真菌作用sesamol (Ses),天然酚类化合物,例如,它可以通过破坏钙调磷酸酶信号通路的调节白念珠菌,一个人类真菌病原体。抗真菌的曲目活动不仅限于白念珠菌和它的六个临床分离株测试,但对非也白色的种假丝酵母。有趣的是,Ses的抗真菌效果影响MDR流出运输车活动和被动扩散的药物。我们发现白念珠菌对待Ses副本所显示的表型细胞在钙调磷酸酶信号缺陷导致灵敏度对碱性pH值,离子,膜,盐度、内质网和血清强调,但仍对热应力。此外,麦角固醇含量显著下降了63%确认膜扰动响应Ses也通过透射电子显微图可视化。尽管Ses治疗模拟破坏钙调磷酸酶信号的表型,这是独立于细胞壁的完整性通路所揭示的化验和扫描电子显微图。综上所述,从这项研究中获得的数据清楚地确定,Ses是一种有效的抗真菌剂,可以胜任地用于治疗假丝酵母感染。

1。介绍

白色念珠菌人类真菌病原体,投机取巧,侵袭性真菌病是最常见的原因(1]。通常驻留在宿主的身体但在免疫抑制或免疫功能不全的条件像艾滋病、癌症、器官移植;它会导致一些疾病,如口腔鹅口疮、外阴阴道炎,食管炎和皮肤感染。也是最常见的院内感染的病原体在病人接受手术或器官移植,有糖尿病,并采取过度的抗生素和粒细胞减少性(2,3]。一些最常见的念珠菌病和candidemia隔离白念珠菌、念珠菌glabrata念珠菌krusei,念珠菌tropicalis,和假丝酵母parapsilosis(4]。在所有假丝酵母物种白念珠菌是最突出的疾病的病原体5]。由于每日增加的情况下病人的疾病引起的假丝酵母物种,它已成为不可避免的找到治愈这种逃避者。

目前的治疗方案包括几个类使用的抗真菌治疗造成的感染真菌病原体。例如唑类、多基因和烯丙胺目标麦角固醇通路。Echinocandins和目标分别细胞壁和核酸合成嘧啶(6]。由于过度使用当前的治疗药物,有发生多种困境与这些药物有关。多药耐药性(MDR),严重的副作用,高成本,低效率的一些最著名的科学界和足够的原因采取主动措施寻找新的药物毒性较小,目标的新途径。天然化合物由于其成本效益和较小的毒性可能是一个更好的选择抗真菌药物的新时代的新目标和更好的活动。

4-methylenedioxyphenol Sesamol (Ses)(3)是一个著名的从芝麻油中提取的抗氧化剂胡麻属物种(7]。有几个好处以sesamol已报告像抗氧化,化学预防、抗诱变剂的,antihepatotoxic活动和诱导细胞凋亡的癌症和心血管细胞(8]。在这项研究中,我们破译Ses反对人类真菌病原体的抗真菌活性白念珠菌以及各种非白色的物种。我们发现Ses的抗真菌作用可能与阻碍钙调磷酸酶信号通路和膜内稳态的破坏。考虑麦角固醇的意义作为目标已知的抗真菌唑类、Ses很可能被用作辅助更好的抗真菌药物治疗。

2。材料和方法

所有媒体化学品YEPD(酵母提取物蛋白胨葡萄糖),琼脂,罗丹明6 g (R6G), 2-deoxy-D-glucose (2-DOG), 2, 4-dinitrophenol (2、4 DNP)n庚烷,从HiMedia购买(印度孟买)。食盐(氯化钠)、氯化钙(CaCl₂),氯化锂(氯化锂),氯化钾(氯化钾)、甘露醇、正磷酸盐氢二钠,正磷酸盐二氢钾,钾氢正磷酸盐、氢氧化钠、葡萄糖、钠十二烷基硫酸盐(SDS)得到费舍尔科学。Calcofluor白色(CFW)刚果红(CR)和sesamol (Ses)从西格玛化工有限公司(圣路易斯,密苏里州,美国)。

2.1。增长的媒体和压力

参考的白念珠菌本研究中使用的写明ATCC 10261,写明ATCC 24433。临床分离株白念珠菌D1, D2, D4, D7, D18, D20开头和非呢白色的物种包括写明ATCC 90030 (假丝酵母glabrata),D9 (假丝酵母tropicalis),这里(假丝酵母parapsilosis)和D46 (假丝酵母krusei)。所有的菌株白色念珠菌在YEPD肉汤培养酵母提取物的成分1% (w / v),蛋白胨2% (w / v)和葡萄糖2% (w / v)。琼脂板2% (w / v)琼脂(HiMedia,孟买,印度)添加到媒体。所有假丝酵母菌株保存在30% (v / v)甘油股票−80°C。这些细胞被刚恢复YEPD肉汤和转移到琼脂板。细胞种植在30°C在琼脂板每个研究以确保复苏的压力。

2.2。药敏测试

药敏测试使用现场试验,最低抑制浓度(MIC),和过滤盘分析如下所述。

2.3。现场试验

现货化验菌株测定使用方法所描述的其他地方(9,10]。简单地说,现场测定5μL(5倍系列稀释的酵母文化(每个细胞悬浮在生理盐水OD_600年0.1 nm)被发现在YEPD板块没有(控制)和药物的存在。增长不受溶剂的存在(甲醇/水2:1)用于考试(数据未显示)。孵化后增长差异测量30°C 48小时。在这项研究中使用的浓度是在图传说中指定。

2.4。最低抑制浓度(MIC)

麦克风采用肉汤稀释法中所述方法M27-A3从临床和实验室标准协会(CLSI)以前NCCLS [11]。简单地说,100年μL的媒体是放置在每一个96孔板后的药物与剩余的媒体,然后连续稀释。100年μL细胞悬液的OD(生理盐水_600年0.1)被添加到每个盘子和OD_600年测量后48小时内30°C。麦克风_80年被定义为的浓度80%的增长被抑制。

2.5。滤盘分析

滤盘试验执行所述其他地方(9,10,12]。5 - 10的药物被发现在一个卷μL在图中表示数量的传说和抑制各自的区域的直径测量板材孵化后48小时内30°C。

2.6。若丹明6 g流出

R6G的射流是由使用其他地方描述协议(13]。简单地说,大约酵母细胞从一个overnight-grown文化没有(控制)和存在Ses subinhibitory浓度(0.552毫克/毫升)由生长曲线实验(数据未显示)被转移到YEPD介质并允许增长5 h。细胞颗粒状,洗两次磷酸盐(PBS)(没有葡萄糖),和resuspended 2%细胞悬液,这对应于10⁸细胞(w / v)在PBS葡萄糖。细胞被断开1 h在2-DOG(5毫米)和2、4 DNP(5毫米)PBS(没有葡萄糖)。断开细胞颗粒状,洗,然后resuspended细胞悬液2% (w / v)在PBS葡萄糖,而添加了R6G的最终浓度10μM和孵化了40分钟30°C。平衡细胞R6G被清洗和resuspended细胞悬液2% (w / v)在PBS葡萄糖。样品体积的1毫升撤回在指定的时间和离心机在10000 g×1分钟。收集上清液,吸收测量在527海里。能源依赖流出(表示时间)测定的葡萄糖(2%)后细胞resuspended PBS(没有葡萄糖)。Glucose-free控制被包含在所有的实验。

2.7。被动扩散的药物

R6G的被动扩散是决定使用其他地方描述协议(12]。一夜之间短暂,细胞培养在30°C没有(控制)和Ses其subinhibitory浓度是收获,水洗,并与PBS resuspended 2%细胞悬液含有2-DOG 5毫米和5毫米2,4 DNP 1 h断电细胞。之后,断开电池被离心收获5000 g rpm为3分钟。然后细胞颗粒状,洗,在PBS resuspended 2% (w / v)的荧光化合物10μM R6G 40分钟,然后在5000 g细胞收获rpm 3分钟,洗净,与PBS混合葡萄糖(w / o)。在10000 g细胞被离心机转速为1分钟和OD_527年上层清液从0分钟到45分钟的测量在指定的时间点在图3。

2.8。表型的敏感性分析

表型药物敏感性测定使用现货化验如上所述。使用以下股票的解决方案(在括号给出使用的溶剂):SDS, w / v(水)10%,氯化钠5米(水),氯化锂5米(水),CaCl₂5米(水),德勤1 M(水)。最后的化学浓度下面指定用于这项研究。细胞被发现YEPD板块没有(控制)和Ses在其面前subinhibitory浓度和化学物质浓度:碱性pH值10.0,SDS 0.02% (w / v),氯化钠(1米),氯化锂(0.4米)和CaCl₂(0.3米)、德勤(20毫米)和血清(50% v / v)。为碱性pH值,YEPD 155毫米的板缓冲Tris-Cl pH值8.0和10。板块的增长差异记录孵化后48小时内30°C。

2.9。定量的麦角固醇

固醇被酒精提取KOH法和麦角固醇的百分比计算(如前所述14,15]。简单地说,一个单一的白念珠菌一夜之间从一个殖民地YPD琼脂板文化被用来接种50毫升的存在和缺乏Ses YPD。文化是孵化16 h用颤抖的在30°C。固定相的细胞被在2700转离心收获5分钟,用无菌蒸馏水清洗一次。净湿重的细胞颗粒决心3毫升刚做好的25%酒精氢氧化钾溶液(25克KOH和35毫升无菌蒸馏水,带到100毫升100%的乙醇)被添加到每个颗粒和涡旋混合1分钟。细胞悬浊液被转移到无菌硼硅玻璃螺旋帽管和孵化在85°C水浴1 h。孵化后,管子被允许冷却至室温。固醇被添加的混合物中提取1毫升无菌蒸馏水和3毫升n庚烷有力的涡流搅拌3分钟紧随其后。庚烷层被转移到一个干净的硼硅玻璃螺旋帽管和存储−20°C。麦角固醇和24(28)她吸收为281.5纳米,而只有24(28日)她吸收230海里。麦角固醇含量是由减去24的数量(28日)她(OD的计算_230年从总麦角固醇+ 24)(28)她内容(OD的计算_281.5)。麦角固醇含量计算细胞的湿重的比例与下列方程:%麦角固醇24(28日)她= + %/颗粒重量;24(28日)她= %/颗粒重量和%麦角固醇=[%麦角固醇+ % 24(28)她]−% 24(28)她是稀释的因素在石油醚和290年和518年是吗在百分比值(每厘米)确定水晶麦角固醇和24(28日)她,分别。

2.10。电子显微镜的假丝酵母细胞

细胞治疗Ses麦克风_80年值,利用SEM观察(蔡司EVOMA10)和TEM (JEOL jem - 1011)。细胞(~ 10⁶细胞)是媒体管理和没有Ses和孵化24小时在30°C。样品制备和分析进行了通过使用其它地方描述的方法(16,17]。短暂,所有的细胞都有2%戊二醛固定在0.1%磷酸盐缓冲剂1 h在室温(20°C),用磷酸盐缓冲(pH值7.2)0.1米,和1% OsO后缀₄在0.1 M磷酸盐缓冲剂1 h在4°C。然后细胞在丙酮脱水,掉在圆形玻璃盖玻片hexamethyldisilazane (HMDS),在室温下干燥,然后溅射涂上金和扫描电镜下观察(蔡司EVOMA10) 30 K magnificationand TEM (JEOL jem - 1011) 10 K放大。

3所示。结果

3.1。Ses作为有效的抗真菌白念珠菌和非白色的物种

分析Ses攻击的影响白念珠菌我们首先验证其抗真菌药敏测试活动的几个自治方法,即现货化验,纸片扩散试验,确定最低抑制浓度(MIC_80年通过汤采用微量测定)。通过敏感性测试证实,Ses是显示抗真菌活性白念珠菌。通过现场试验(图1(一))和过滤盘试验(图1(b))观察到Ses是抑制的增长白念珠菌(ATCC10261 ATCC24433)在1.104毫克/毫升的浓度。汤采用微量测定也对应于上述结果和描述Ses(图的抗真菌作用1(c))。进一步测试的有效性Ses我们还执行这些测试和估计Ses六种不同的临床分离株的易感性白念珠菌(D1, D2, D4, D7, D18,和D20开头)。我们观察到的抑制浓度Ses位于0.828 - -1.104毫克/毫升的范围。进一步详细的研究中,我们扩展我们对非药敏测试白色的物种,即c . krusei c . tropicalis c . parapsilosis和c . glabrata。我们发现Ses对所有种类的测试也同样有效假丝酵母所描述的位置、过滤和肉汤采用化验(数字2(一),2(b)2(c))。因此,所有的药敏试验结果表明,Ses抑制与参考和临床分离株白念珠菌以及非白色的物种(表1)。

3.2。抗真菌活性Ses独立于耐多药外排转运体活动

极度活跃的射流泵的主要机制之一负责开发的多药耐药性假丝酵母(6]。来验证是否Ses的抗真菌活性是由于射流泵的阻碍活动与否,R6G射流泵(衬底)射流试验进行Ses的存在和缺乏(控制)。我们的数据证实,没有显著差异(值> 0.5)R6G流出细胞外R6G浓度估计的缺席或Ses(图的存在3(一个))。我们进一步的访问是否抗真菌活性Ses可以归因于提高被动扩散。我们的结果描述,没有显著差异(值> 0.5)的被动扩散Ses相比,控制细胞没有Ses治疗(图3 (b))。因此,Ses的效果白念珠菌是独立于射流泵的活动和与其他任何途径。

3.3。白念珠菌在碱性pH值是高度敏感Ses吗

白念珠菌是一种机会性真菌,驻留在身体的不同部位有不同的细分市场。因此,它有一个必要的能力来克服这样的环境因素。其中一个重要因素白念珠菌需要处理碱性博士这个紧急的活动假丝酵母种虫害迫使我们研究的抗真菌作用Ses碱性pH值范围白念珠菌以及非白色的。这是观察到的抗真菌活性Ses抬起近50%的水平白念珠菌和非白色的物种发现pH值升高时,演示图4(a)。结果是稳定的和汤采用纸片扩散试验如图4(b)和4(c),所有这些结果证明白念珠菌以及非白色的种假丝酵母变得高度敏感,Ses碱性pH值(表2)。

3.4。Ses拟表型破坏钙调磷酸酶信号通路白念珠菌

以上结果显示高度敏感的反应白念珠菌在碱性pH值的Ses促使我们进一步研究其他表型是由钙调磷酸酶信号。像碱性pH值是通过钙调磷酸酶介导的信号级联反应,我们测试了剩下的表型反应如血清压力,压力,离子压力,薄膜应力在Ses的存在。为此,我们进行了表型敏感性测试没有(控制)和Ses的存在条件下,需要功能钙调磷酸酶信号通路。我们观察到,与控制细胞(图5(一个)(图),类似于碱性pH值5 (b)),白念珠菌无法成长50%血清处理随着Ses(图5 (c))。类似过敏的反应时观察Ses治疗已知的德勤提供ER应激细胞(图5 (d))。接下来我们研究了盐度应激反应,我们观察到白念珠菌也无法种植的Ses治疗各种盐的高剂量时,即钠⁺、钙^{+ +},李⁺为细胞提供离子压力(图5 (e))。此外,治疗的薄膜应力响应进行了测试白念珠菌SDS与我们观察到的类似过敏Ses(图的存在5 (f))。值得注意的是,Ses的细胞存在的阻力在高温37和42°C和有效地增长(图5 (g))。因此,我们的研究结果表明,Ses可能导致钙调磷酸酶信号通路的障碍白念珠菌。

3.5。Ses导致膜中断白念珠菌

过敏的白念珠菌Ses在薄膜应力,即SDS,需要进一步探索Ses在膜成分的影响。为此,我们估计的麦角固醇水平真菌细胞膜的主要成分在没有和Ses的存在。有趣的是,假丝酵母细胞治疗Ses显示麦角固醇含量减少显著水平(值≤63%左右(图0.05)6(一)和6 (b))。此外,我们评估了显微图像通过透射电子显微镜(TEM)也证实了膜破坏,因为Ses治疗(图6 (c))。

3.6。Ses并不相声细胞壁完整路径白念珠菌

细胞壁完整路径(地板)已经与钙调磷酸酶信号通路在管理响应对生存意义的暴露于抗真菌药物(18]。测试Ses是否影响细胞壁的完整性,我们现货进行化验的细胞壁破坏,即CFW和CR。我们的研究结果显示,Ses无法影响细胞壁轮廓时连同细胞壁破坏管理代理和细胞生长没有影响(图7(一))。这一事实Ses不会引起任何细胞残害效应进一步证实了扫描电镜实验材料和方法(图中描述7 (b))。这些结果证实,Ses的anticandidal效果无法与细胞表面形态的起皱。

4所示。讨论

Ses,芝麻籽油的主要成分胡麻属sp,补充传统药物有抗氧化,抗炎、免疫调节、神经保护、抗衰老的,chemopreventive, proapoptotic,抗抑郁作用[19,20.]。最近,它表明,Ses也抑制结肠癌细胞cyclooxygenase-2转录活性的影响(21)可以是一个癌症患者的重要治疗干预。sesamol的毒理学效应已经被研究了安布罗斯et al。22并发现无毒、无刺激性,甚至不会引起皮肤敏化。尽管Ses拥有等不同范围的属性对人类福利上面所提到的,没有直接研究其抗真菌活性已被证明。因此,在这项研究中,我们探索潜在抗真菌和Ses的作用方式与人类真菌病原体,白念珠菌。我们建议Ses攻击的影响白念珠菌通过停滞可能介导钙调磷酸酶信号通路通过麦角固醇损耗导致扭曲的膜组成。然而,Ses的抗真菌效果并不影响耐多药流出运输车或被动扩散通过膜非常知名的行动机制。大多数这些毒性的机制是至关重要的白念珠菌宿主体内生存(17,23,24]。

首先,我们评估的抗真菌活性Ses通过药敏测试;现场试验、纸片扩散试验和麦克风_80年。有趣的是,我们发现不仅的增长白念珠菌但也非白色的种假丝酵母影响在Ses(数据吗1和2)。这些结果促使我们进一步检查Ses的可能的作用方式。药物过度以来的射流泵是最常见的机制负责大部分的真菌的耐药性(6,25),我们检查如果Ses针对MDR流出运输车和被动扩散白念珠菌通过R6G射流试验。这是观察到流出以及被动扩散存在Ses R6G仍不受影响白念珠菌(图3)。这些结果向我们保证Ses的功效不是与这些活动而是有截然不同的作用方式。所以,我们进一步研究其他的途径,它可以影响的增长白念珠菌。最重要的一个因素的毒性和生存负责白念珠菌宿主体内生存在不同pH值范围(26,27]。药敏试验白念珠菌在存在Ses pH值升高,发现白念珠菌以及非白色的物种变得高度敏感在高架Ses博士有趣的是,过敏是观察到低浓度多用于生理的pH值,如图4。值得注意的是,对c . krusei和c . parapsilosis碱性pH响应,研究了pH值8.0,因为他们已经在pH值10高度敏感,我们无法区分任何进一步的敏感性差异由于Ses(数据未显示)。值得注意的是,不像c . krusei过敏的pH值8.0,敏感的c . parapsilosis在Ses面前尚未受到影响。的过敏的反应C。白色的Ses的存在为我们提供了Ses的暗示,抗真菌机制有一些与钙调磷酸酶信号级联关系众所周知,碱性pH值的几个表型治理通过钙调磷酸酶信号通路(28- - - - - -30.]。

钙调磷酸酶通路通过Ca是一种有效的药物目标行为^{2 +}/钙调蛋白激活对丝氨酸/苏氨酸依赖的信号通路和负责的毒性白念珠菌。钙调磷酸酶是一种二聚的蛋白质,一直在真核生物的进化高度保守的。钙调磷酸酶催化亚基包括CnA和调节亚基CnB。钙调磷酸酶激活Crz1p,转录因子(31日),这与核本地化信号(NLS) Nmd5p和把在细胞核和编码的产品帮助在酵母的生存压力条件(32)如碱性pH值压力、离子压力、膜压力、内质网应激、血清压力(33]。高度敏感的反应白念珠菌对Ses碱性pH值及其与钙调磷酸酶信号通路有义务我们分析深刻的其他表型相关功能钙调磷酸酶通路。

来证实我们的假设,Ses的抗真菌效果是因为破坏钙调磷酸酶通路,白念珠菌是管理与不同应力条件下存在Ses,至关重要的是需要功能钙调磷酸酶级联。一些强调非碱性pH血清压力,压力,离子压力、膜应力和热应力。作为一个已知的事实,入侵宿主的身体之后,第一次的情况白念珠菌脸是遇到血。布兰肯希普和海特曼34)已经报道,血清组成部分血液导致压力,是有毒的白念珠菌。这个压力是有效地靠功能钙调磷酸酶信号通路(1]。因此,我们研究Ses的影响白念珠菌在血清和观察减毒的增长假丝酵母细胞在50%浓度血清Ses(图5 (c))。同样,ER应激是另一个参数,导致钙调磷酸酶信号通路的激活通过展开蛋白质积累的蛋白质反应(UPR)在真核细胞35]。最近,宫崎骏和Kohno36)报道,UPR还负责毒性,因此激活钙调磷酸酶通路白念珠菌但不是在c . glabrata缺乏真菌UPR,拥有一个典型的和独特的替代机制来规避ER应激。观察ER应激反应,假丝酵母细胞生长在德勤的存在可能会刺激形成的UPR的阻碍N-linked分泌蛋白质的糖基化和抑制ER中的二硫键的形成37]。我们发现假丝酵母细胞是高度敏感的ER压力如图5 (d)。据报道离子压力反应的另一个参数,我们可以研究钙调磷酸酶通路(35]。我们发现离子,即CaCl₂、氯化锂和氯化钠,Ses检查的增长白念珠菌如图5 (e)。同样,这是发现假丝酵母细胞生长时变得高度敏感膜扰动代理SDS Ses如图5 (f)。另一个重要因素,控制钙调磷酸酶信号级联的激活假丝酵母以及其他真菌是耐热性。有趣的是,耐热性不需要激活的钙调磷酸酶白念珠菌但有报道称,证明它对钙调磷酸酶的影响在其他几个真菌以及假丝酵母sp。24]。因此,我们假设不会有效果的Ses高温压力在37和42°C白念珠菌。像预期的观察,无论Ses的存在,白念珠菌细胞被有效地增长在较高温度(图5 (g))。这些数据证实了这一事实热应力响应不是由钙调磷酸酶信号白念珠菌和Ses主要针对钙调磷酸酶信号也没有对耐热性的影响。

摄动膜结构和功能的进一步明显的事实,麦角固醇含量大大减少了63%左右白念珠菌在Ses(数据的存在6(一)和6 (b)),证明Ses抹平了膜的真实性。这个数据与事实一致C。白色的细胞是高度敏感的Ses生长膜扰动时代理,即SDS(如上所示)。破坏了膜的完整性白念珠菌在Ses面前也证实了TEM图像(图6 (c))明确建立Ses破坏性影响膜可可能由于阻碍了钙调磷酸酶信号通路;然而,进一步的工作是需要确认。

存在的证据表明钙调磷酸酶信号级联之间的串扰和细胞壁完整路径(17,23)和功能不可缺少的钙调磷酸酶信号级联来维持Ses作为演示了通过本研究需要调查Ses对细胞壁损伤的影响。有趣的是,没有效果的Ses细胞壁破坏细胞生长时Ses连同细胞壁微扰代理,即CFW和CR(图7(一))。这是进一步证实了通过执行扫描电镜显示了光滑的细胞壁浮出水面,有或没有Ses(图7 (b))。因此,它可能会说,Ses杀人的有效途径白念珠菌是细胞壁的完整性的破坏。

5。结论

尽管各种类抗真菌药物增强的可用性活动,耐药性的发展仍然是一个主要问题C。白色的。因此,选择一个替代治疗策略,恢复对天然化合物,可作为抗真菌药物可能是一个明智的选择。生成的数据通过这项研究清楚地建立Ses的抗真菌特性,可以利用改进治疗策略。此外,这些天然化合物也可能持有承诺作为chemosensitizing代理,可以有利于减少当前的剂量抗真菌机制。

缩写

Ses:	Sesamol
R6G:	若丹明6 g
2-DOG:	2-Deoxy葡萄糖
2、4 DNP:	2,4-Dinitrophenol
CFW:	Calcofluor白
克雷格:	刚果红
YEPD:	酵母膏蛋白胨葡萄糖
透射电镜:	透射电子显微镜法
扫描电镜:	扫描电子显微镜。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

赛义夫Hameed要感谢金融援助形式的青年科学家奖(SR /英尺/ LS-12/2012)从科学与工程研究委员会(塞尔维亚),新德里。作者承认Jasvir辛格和丽塔的帮助萨拉姆,IARI,新德里,TEM和SEM实验。作者感谢Luqman a .汗和Nikhat Manzoor, Jamia Millia Islamia,新德里,提供假丝酵母参考菌株作为慷慨的礼物。作者还要感谢Sumathi Muralidhar、区域性传播疾病研究中心,的萨夫达君医院新德里,与临床分离株的帮助他们白念珠菌和非白色的菌株。作者感谢教授s·m·保罗Khurana认为,学院院长科学、工程与技术、鼓励和提供可用的设施在研究所的研究。

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