文摘
这些研究的目的是调查如果猪断奶多系统消耗综合征(麻省)可以诱导健康猪与空气接触后从猪麻省理工的临床症状。猪被安置在不同的单位。31(研究I)或25(研究二)猪临床症状的pmw PMWS-affected群和25从PMWS-free健康的猪,但PCV2-positive,羊群被安置在单元a 50头猪从PMWS-free群被安置在单元B,由管道连接单元a单元C, 30从PMWS-free猪群被安置的控制。在研究II中,猪在A和B单位pmw PMWS-free群表现出临床症状的2 - 3周后到达。麻省理工确认尸体剖检和患病的猪增加了PCV2负载和增加血清中抗体的PCV2抗体,恰逢临床症状典型的麻省理工的发展。序列分析表明PCV2隔离属于基因型2 b。总之,目前的研究表明,麻省理工可以诱导猪由机载PMWS-free群从PMWS-affected群与猪接触。
1。介绍
断奶多系统消耗综合征(麻省)是一个重要的全球疾病在断奶猪。麻省理工在1991年首次描述了在加拿大的慢性疾病在猪4-16周的时代进步的减肥(1]。自那以后,这种疾病被诊断在许多国家在北美,亚洲和欧洲,包括丹麦(2,3]。麻省理工的临床症状包括unthriftiness /浪费,苍白的皮肤,淋巴结肿大,和偶尔的黄疸、呼吸道症状、腹泻(1,3,4]。影响猪在淋巴器官病变表现为淋巴枯竭和巨细胞和包涵体的存在4- - - - - -7]。PCV2已经证明是麻省理工的必要但不充分发展,由于病毒存在于影响和PMWS-free猪群(4,8]。
PCV2病毒传播oro-fecal猪之间的和/或呼吸道路线(9,10和垂直传播也被记录4,11]。的高患病率PCV2在几乎所有成群的生猪养殖国家表明PCV2的传播是非常有效的12- - - - - -15]。相比之下,只有很少的研究一直在进行的“传播”PCV2-associated疾病复合物(PCVDs),也就是说,是否可以“传播”麻省理工PMWS-affected PMWS-free的猪。在新西兰进行的一项研究表明健康的猪疾病发展直接或间接接触PMWS-affected猪混杂在4周时的年龄但不是当他们融合在12周的年龄(16]。空间分析在丹麦和英国进行总结重要的时空集群的存在,暗示某种传染病的传播从农场到农场(17,18]。描述性流行病学在瑞典还显示一个明确的趋势流行缓慢移动从南到北19]。
之前我们已经表明,可以从猪到麻省理工密切接触(20.]和PCV2在空气样本中收集PCV2-positive群(21),但目前仍不清楚如果麻省理工可以通过空气传播。本研究的目的是审查的可能性,麻省理工的机载传输控制semiexperimental设置。
2。材料和方法
2.1。空气传播模型
进行了两项研究。的研究中,三个容器构造成“猪单位”(B单元,单元,单元C)。A和B单位被放置1米,通过管道连接(表2- - - - - -4)。在单位,空气压力增加了通风机安装在山墙新鲜空气吹入房间通过四个可调阀门。排气空气被从屋顶上通过一个堆栈。在单元B,空气压力降低了呼吸机安装在一个堆栈的屋顶向外排气控制。空气吸进房间通过四个阀门。因此,气压单位总是高于单元B的空气压力,导致空气从装置通过管道单元B。体积的空气通过管道传输取决于管道的数量和直径以及单位之间的压力差。因此,要保持特定的空气转让、管道直径与孔可以调整。通风系统,打开阀门,管道都是校准之前研究的开始。气压差异测量每10分钟来计算传输的空气量。 The amount of air transferred from unit A to unit B, expressed as percent of ventilation intake, was on average 83% (S.D. 27%) for study I and 69% (S.D. 27%) for study II.
单位A和B计,包括两个房间。人员进入通过第一个房间(米)和换衣服。猪被安置在第二个房间17.52板条的塑料地板。每个单元有两名气候系统覆盖物和稻草床上用品。A和B单位被放置在研究机构1,从其他猪群2.2公里。
单位C是放置在研究设施2单元和单元B大约3.1公里,没有猪在2.3公里范围内的单位。单位是18米2由一个房间和板条的塑料地板和两名气候系统覆盖物和稻草床上用品。
2.2。研究设置
猪(丹麦长白猪/杜洛克猪杂交),8 - 12周的年龄,来自三个不同的群,都是PCV2感染PCV2未接种,验证了血清学反应。两个群的麻省理工(PMWS-1和PMWS-2)的影响,一个是PMWS-free (PMWS-free)。PMWS-affected群内的麻省理工的诊断是基于unthrifty猪发病率高,死亡率高的(5 - 6%和15%),和一个积极的组织病理学检查淋巴组织一起根据欧盟定义(PCV2抗体检测http://www.pcvd.org/)。PMWS-free群的特点是低死亡率断奶器(2 - 3%)。这个状态持续在研究期间,直到三个月后。
三个群都被感染了支原体hyopneumoniae和放线杆菌pleuropneumoniae血清型6。PMWS-1和PMWS-free PRRSV-EU PMWS-2和牲畜被感染答:pleuropneumoniae血清型2,产毒素的巴斯德菌multocida,PRRSV-US。猪细小病毒疫苗被用于在所有三个群播种。产毒素的疫苗p . multocida在群PMWS-1使用。
兽医PMWS-affected牛群被访问的每个研究开始前3 - 4天的时间25(31研究II)临床症状的猪麻省理工在选择断奶器和耳标记。相同的兽医参观了PMWS-free群一个星期在研究开始之前,确保没有pmw在场的临床症状。从PMWS-free群105头猪都被转移到研究机构在每一个研究断奶。
PMWS-nonaffected群的猪被随机分配到单位,单位B, C和单元大约一半的猪在单元和单元B和C的所有猪起源于PMWS-free群在这两项研究。剩下的猪在单元起源于PMWS-affected群PMWS-1在研究研究我和PMWS-2 II(表1)。
那天到来(第一天),所有的猪都标有个人耳朵标签和体重。
没有抗生素提供水和饲料随意在整个研究期间。预防腹泻2500 ppm氧化锌是饲料中使用的第一个10天后抵达这两项研究。
传播病原体的人员是通过生物安全预防措施(改变衣服在进入单位,使用一次性手套和面具覆盖头发,鼻子和嘴)。12小时猪接触隔离在进入单位,成立中采取淋浴和衣服改变。猪每天都在相同的顺序处理:第一单元C,然后单位B,最后单元a由昆虫传播的阻止了飞进气口的净单元B。这两项研究的持续时间是69天。
2.3。临床观察和尸检
临床症状的猪是监控每周至少三次麻省理工的兽医。
了严重的临床疾病的猪都在研究安乐死。在研究结束时,所有unthrifty猪被安乐死。所有的猪安乐死或自然死亡尸体剖检。
在验尸,组织样本取自腹股沟淋巴结,mesenterical淋巴结、脾脏和固定浸到4%多聚甲醛在22°C组织病理学检查。部分石蜡包埋paraformaldehyde-fixed histomorphological评价组织被苏木精和伊红染色和免疫组织化学PCV2由特定单克隆抗体(如前所述)(22]。个人头猪被诊断为麻省理工,如果他们表现出临床症状与组织病理学特征病变淋巴组织(淋巴细胞耗竭与组织细胞的渗透和/或巨细胞和/或包涵体)和中度或大量PCV2的检测抗原免疫荧光。这是按照欧盟定义(http://www.pcvd.org/)。
2.4。血液采样和血清学分析
收集血液样本的猪在研究的开始。额外的血液样本采集的猪在euthanization或终止之前的研究。死猪的血液从心脏被救出时可能的。
血清样本检测PRRSV抗体使用immunoperoxidase单层试验(IPMA)如前所述23]。IPMA是双测试(24)使用马克- 145细胞感染了丹麦的现场应变PRRSV和美国疫苗株(Ingelvac PRRS MLV,勃林格殷格翰集团),分别。抗体PCV-2由一个内部开发的ELISA测定(20.]。PCV2抗体检测,PRRS(第一种和第二种),以及PCV2量化只进行样本研究II。
几何均值计算每组和抽样研究II的算术平均指数的对数转换效价值(> 0)(表4)。样品浓度测定值的比例高于0也决定(表4)。
2.5。实时PCR和测序
在研究II, PCV2量化实时PCR在血清样本从PMWS-affected选择猪群在单元和所有猪在单位B到来,当血液获救,在死亡或终止研究。如前所述(执行实时聚合酶链反应25]。所选样本的PCV2基因组PCR扩增三个重叠的反应和测序如前所述15,26]。
3所示。结果
3.1。临床症状和尸检
猪的平均体重在表中列出1。在研究我的猪在单元B去世后第二天的开始研究由于腹泻的一个猪安乐死是因为残废后4周的开始学习。没有其他临床症状被PMWS-free的猪群中三个单位。14从PMWS-affected猪群的单位是验尸。其中9头猪被诊断出患有pmw根据欧盟(表定义2)。
在研究II,猪PMWS-free群的单位开始显示临床体征的pmw夹在两周后从PMWS-affected群猪。在单元B,从单位接收空气,临床症状被认为三周后开始这项研究的。最突出的临床症状是抑郁症,unthriftiness和浪费。一些猪呼吸困难或腹泻。在验尸的主要发现是肠炎伴随着惨重的肺和支气管肺炎。许多猪支气管和腹股沟淋巴结肿大和肠系膜淋巴结肿大(表2)。十四的猪PMWS-affected牛群在单元一个验尸,和三个被诊断为麻省理工。十PMWS-free的猪群的单位是验尸,和三个被诊断出患有麻省理工(表3)。猪的单位B, 20人尸体剖检和13的被诊断为麻省理工。在这两个单位大约三分之一的猪死亡或被安乐死由于明显的浪费。所有的猪在单元C显示任何迹象的浪费或其他疾病的临床症状。八个单位的健康猪C被安乐死,尸体剖检和显示没有麻省理工的迹象。
3.2。血清学分析
我的血液样本的研究没有分析由于缺乏临床症状和诊断证实了麻省理工PMWS-free群猪。
不同群体的血清学资料到来和终止研究II如表所示4。猪从PMWS-free和PMWS-affected牛群PCV2抗体在到来。的抗体水平PMWS-affected的猪群均明显高于PMWS-free群猪。PCV2抗体水平显著增加,被认为在所有的猪在A和B单位相比PCV2抗体水平下降的猪在单元设施2 C。
PMWS-affected的猪群有高水平的抗体PRRSV II型(美国)到达和水平仍然高,直到研究结束。PMWS-free的猪群没有抗体PRRSV II型的到来。从这群猪放在单位A和B显示,抗体水平显著增加对PRRSV II型结束的研究从一开始就与猪放在单位C设施2没有出现抗体PRRSV(表4)。除了低水平在一些猪,所有的猪都没有抗体PRRSV I型(欧盟)的到来。
3.3。血清中PCV2水平和测序
我的血液样本的研究没有分析由于缺乏临床症状和诊断证实了麻省理工PMWS-free群猪。
在研究II中,从单位的11个猪尸体剖检的PMWS-affected群被定量PCR检测PCV2在实验的开始。得到了证实pmw诊断的三个猪PCV2的滴度;;和分别在实验的开始(数据没有显示)。这些猪的血液才获救从一个验尸显示份PCV2 pr.毫升血清。麻省理工的诊断不能确认剩下的八个猪和这些猪PCV2滴度份PCV2 pr.毫升在验尸血清或更低,这是略低于年初的实验。
从单元B, 38头猪被检测PCV2 DNA定量PCR到来和尸体剖检或终止研究(图1)。在实验的开始,PCV2要么是无法觉察的猪(35)或(三猪)很低。在实验的最后,他们都PCV2浓度高,从开发的来份PCV2 pr.毫升。猪有超过八个份PCV2 pr.毫升血清在验尸,他们都证实了麻省理工情况下通过组织病理学检查。另外的四个猪与定量PCR分析经病理检查由于临床麻省理工的迹象,但没有实现的组织病理学标准pmw诊断和他们PCV2较低浓度血清(来副本pr.毫升)(图1)。
PCV2获救从PMWS-affected六血清猪群在单元的到来,组织收集尸体剖检从PMWS-free两个猪群开发麻省理工在单元B测序。所有测序隔离属于基因型2 b,丹麦PCV2隔离(循环密切相关26(数据未显示)。一些基础的位置差异中确定PCV2基因组孤立从猪单位A和B表所示5。两个变量PCV2的孤立从PMWS-affected猪群在单元到达。这些变异猪的发达也发现了麻省理工在单元B。
4所示。讨论
据我们所知这是第一个控制研究,麻省理工的文档可以从PMWS-free诱导猪群只由一个单位接收空气窝藏猪临床麻省理工。以前,我们已经表明,麻省理工可以从PMWS-free诱导健康猪群由PMWS-affected直接或间接接触猪群(20.)和其他人诱导麻省理工融合后的猪接种PCV2和天真的猪在实验条件下(13,14,27]。所有的猪从麻省理工PMWS-free群表现出临床症状后单独运输。因此,它似乎是不可能的,压力由于交通诱导pmw本身。PMWS-free成群的猪在A和B单位而不是C在血清中PCV2效价显著增加,PCV2抗体增加,同时,其临床症状典型的麻省理工的后续发展进一步支持认为猪发达麻省理工。
麻省理工的诊断不能确认实验室调查的比例麻省理工的猪有严重的临床症状。这曾被报告现场情况,可能代表晚期猪的病毒在组织水平很低,因为大规模破坏的细胞(7]。
猪PMWS-free群表现出临床症状的麻省理工两周后到达和混合如果他们直接接触PMWS-positive猪(单位)而猪在单元B没有直接接触的pmw猪表现出临床症状麻省理工研究开始的三周后。天真的先前的研究与实验PCV2感染猪表明PCV2的传播影响的接触结构和猪之间的直接联系是更有效的传播相比,间接接触(10厘米的距离)13]。此外,同一作者发现疾病世代时间是18.4天下面接触患病的猪。因此,我们曾表明,疾病在PMWS-free诱导猪3 - 4周后混合的猪群临床体征的麻省理工和密切接触是更有效的比间接接触(20.]。因此,发现目前的研究表现出临床症状的猪麻省理工2 - 3周后到达表明疾病一代次PCV2-positive猪相媲美的局势天真的猪和机载传输不延误临床症状的发展。
猪的病毒DNA序列中发现两个发达pmw单位B都是相同的,也与一个隔离在PMWS-affected发现猪的到来。不可能从PMWS-free序列PCV2病毒群到来;但是测序结果支持,PCV2病毒传播从PMWS-free PMWS-affected猪的猪群。这是按照我们的发现在早前的研究通过直接和间接接触传播麻省理工(15]。
低水平的抗体PRRSV I型(欧盟)的猪PRRSV II型(美国)正群可能反映了交叉反应PRRSV II型和低水平的剩余残猪可能反映母体抗体。水平的增加对PRRSV I型中遇到的一些猪在终止这项研究反映了PRRSV II型交叉反应,因为这些水平只有在猪身上发现高水平的抗体PRRSV我们。这些结果强烈表明,猪PMWS-free群的单位A和B被PRRSV感染了我们在研究期间,源从PMWS-affected群猪。PRRSV临床麻省理工是一个著名的传染性触发,反之亦然(28- - - - - -32),我们先前已经表明,PRRSV可以通过空气传播33]。因此,发现最发达的猪pmw增加了抗体滴度与PRRSV II型表明,这种病毒导致了临床表现在研究II。临床症状,然而,按照典型的研究多在PMWS-affected猪而不是通常出现在猪PRRSV感染(29日]。病理结果验尸的确证实,猪了麻省理工。除了PRRSV的角色,PCV2病毒等因素差异,剂量PCV2病毒的排泄的“供体”猪,甚至其他身份不明的传染性病原体的传播从PMWS-affected猪PMWS-free猪可能也起到了一定作用。总之,目前的研究表明,麻省理工可以诱导猪由机载PMWS-free群从PMWS-affected群与猪接触。这一发现可能影响在牛群麻省理工的方式处理。
确认
金融支持这项研究是由欧盟(合同编号。513928)和食品的研究委员会,渔业和农业企业(批准号23-04-0242)。