氧化应激诱导损伤和衰老早期早产胎盘

文摘

介绍。衰老细胞已被证明释放高机动组框1 (HMGB1)导致劳动力通过炎症通路。本研究旨在证明端粒缩短,炎性HMGB1与氧化损伤标记8-OHdG发挥作用相比,早产胎盘的术语。方法。67全厚度的横向研究胎盘从母亲获得任期和早产。母亲与临床症状的感染( , ,或不正常的阴道分泌物)和其他妊娠并发症被排除在外。实时聚合酶链反应进行测量T / S比和ELISA定量测量并8-OHdG HMGB1的数量。结果。共有34个胎盘从早产和33从足月分娩胎盘检查。两组之间的母性特征进行比较。没有统计学上的差异(T / S比( ),HMGB1 ( ),和8-OHdG ( )早产和术语之间的组织。HMGB1被适度与8-OHdG ( )。端粒T / S比胎盘没有早产和期限劳动之间的差异,尽管不同胎龄,建议缩短早产组。可能关键技术已经取得了端粒长度术语和早产胎盘权证劳动通过衰老过程。我们的研究结果还表明,HMGB1被不相关的端粒长度,因为HMGB1不是调节,直到衰老展的关键的端粒长度。结论。类似的端粒长度可能表现出由于早产,模仿早期的端粒缩短胎盘。胎盘端粒缩短,HMGB1释放之间的关系还有待发现。这还需要进一步的研究来发现的因素导致早产的早期胎盘端粒缩短的。

1。介绍

早产,定义为劳动妊娠37周之前发生,新生儿死亡率和发病率高有关。2018年,在全球范围内,1500万名婴儿出生的早产儿,尽管发展的研究和技术。印度尼西亚排名5^th人数最多的10个国家中早产(675700)和9^th与最多的10个国家每100活产早产(15.5%)(1]。电流假说表明炎症中扮演着主要角色共同途径导致自发早产(2]。增加无菌炎症没有感染的证据与早产有关(3]。

衰老的作用提出了早产(4]。蜕膜过早衰老会导致移植失败,胎儿死亡、早产。最近的研究报道蜕膜衰老扮演一个角色在自发的劳动。衰老通常与缩短端粒(5]。胎儿细胞衰老在正常妊娠生理上发生,特别是在项,促进自然分娩。衰老可能会增加氧化应激来自胎儿越来越大,拉伸子宫或其他未知来源6]。梅农组织学证据和生化标记在胎膜相比,早产,和早产妊娠破裂的膜(pPROM),发现所有的阳性标记细胞衰老p53、p21, p38MAPK。这一发现表明细胞衰老的作用在分娩的启动(7]。

高氧化应激导致DNA损伤增加8-hydroxy-2所示 - - - - - -脱氧鸟苷(8-OHdG)可能诱发衰老4,8]。胎盘8-OhdG越高水平曾与其他妊娠并发症,即子痫前期,宫内生长迟缓9),和胎儿死亡10]。

高机动组框1 (HMGB1)函数作为应对感染和促炎介质的压力。衰老羊膜HMGB1表达可能是与早产和pPROM [11]。研究表明,HMGB1增加il - 1的分泌βil - 6和激活基质金属蛋白酶(MMP9)和胶原重构的绒毛膜羊膜炎膜(12]。证据HMGB1注入怀孕的老鼠的羊水已经证明它的作用在诱导早产儿怀孕的老鼠的劳动过程13]。

早产的病因研究广泛关注感染,不幸的是不降低早产率。本研究探讨了在其他早产pathomechanisms除了感染。目前,没有数据可以在胎盘促炎HMGB1表达,氧化损伤标记8-OHdG,衰老标记染色体端粒的长度在自发早产没有感染。我们的目标是阐明促炎HMGB1和氧化损伤标记8-OHdG是否调节胎盘从早产和是否与端粒缩短诱导自发早产。

2。方法

2.1。人类道德和样本收集

我们进行了一项横断面研究Cipto Mangunkusumo医院和Budi Kemuliaan医院,雅加达,印度尼西亚,从2月到2019年8月。本研究获得的道德伦理委员会的批准医学院印尼伦理批准文号刃- 126 / UN2.F1 / ETIK / PPM.00.02/2019,协议号20-06-0624。

共有68个样本连续招募遵循知情同意。入选标准是女性用单例妊娠提供劳动。术语定义为分娩在≥妊娠37周,否则早产。孕龄计算基于末次月经,进一步证实了第一阶段超声记录。早产的迹象被定义为劳动(正常的子宫收缩和颈抹杀和/或扩张)表示,与< 37周的早产儿。与多个女性怀孕、宫内生长受限、先天性畸形、早破膜,孕产妇高血压或糖尿病被排除在本研究之外。患者临床症状的感染( , ,或不正常的阴道分泌物)也被排除在外。我们记录孕妇的特点和常规实验室结果,进一步控制混杂因素。

描述了样本收集和处理在前面研究[14]。大约10 g的胎盘组织收集了来自4个部分。胎盘组织样本的完整胎盘软组织的厚度。确保样品稳定性、胎盘标本交付后立即被收集在无菌条件下,运输Prodia研究实验室的组织样本提取下1小时。样本存储在PBS在-70°C进一步处理之前没有提前冷冻过程。

2.2。样品处理

胎盘组织在室温下解冻前处理。可见绒毛被移除的样本。样本漂洗三次磷酸盐(PBS) pH值7.0,然后用绘画纸干®滤纸。2毫克的组织称重和切成小块。1000年μL PBS添加到样本。样品被放入Precellys组织均质化管(贝尔坦公司技术、法国)。样品均质使用Precellys 24-Dual均质器(贝尔坦公司技术,法国)的三倍 秒速度5000转10分钟暂停之间的均质化的步骤。样品管放在冰在每个停顿不要过热。

100毫克的组织匀浆用于DNA提取。其余的是细胞溶解使用超声发生器30分钟。样本然后离心机在8500 15分钟。收集上清液测定总蛋白,8-OHdG, HMBG1浓度。如果需要稀释之前每个分析应用。

2.3。总蛋白、8-OHdG HMGB1测量

由布拉德福德总蛋白浓度测定方法使用商用染料试剂(美国Bio-Rad Bio-Rad蛋白质测定)。使用商用8-OHdG浓度测量酶联免疫试剂盒(OXIS Aoxre,伯林盖姆,美国),猫21026号。HMGB1浓度测量使用商用酶联免疫试剂盒(IBL国际,汉堡,德国),猫没有。ST51011。

2.4。DNA提取和端粒长度测量

100毫克的组织匀浆用于DNA提取。DNA从胎盘组织中提取使用高纯PCR模板准备工具包(猫。11796828001,罗氏诊断GmbH,德国)根据制造商的协议为核酸从哺乳动物组织的隔离。

2.5。统计分析

未配对的最小样本容量数值比较分析为每组21双尾假说,而最小样本量分析数值变量之间的相关性是每组31。影响大小设置为2,比较分析和标准错误也设置为2。效果相关分析设置为0.5。意义被设定在5%,和权力被设定为90%。样品有任何缺失的数据被排除在分析之外。数据分析使用IBM SPSS 20.0版(美国IBM公司,阿蒙克)。数据被视为同质如果变异系数 并提出了 (SD),否则中位数(四分位范围)。数值分析了使用独立的样本 - - - - - -测试或Mann-Whitney相应的测试。使用皮尔森和斯皮尔曼分析相关性进行了分析。早产出生进一步分类为亚组分析在某些妊娠年龄:早期早产组(< 32周)和中晚熟早产组(32 - < 37周)(15]。

3所示。结果

总共有67个样本收集,34项组和早产组各34例。主题展示在表的特性1。白细胞计数中值为12300 (9300 - 16000)μL术语组和15100 (11355 - 17100)μ早产组(Mann-Whitney L测试中, )。两组之间的其他母亲的特征是相似的。

数据的分布如图1。胎盘端粒率没有差别,8-OhdG, HMGB1两组之间(表2)。端粒比不相关的胎龄在劳动(皮尔森相关0.238, )对所有科目。进一步相关分析端粒率与妊娠年龄无相关性这一术语和早产组(皮尔森相关的0.222, 和0.232, ,分别)。HMGB1被适度与8-OHdG(斯皮尔曼相关0.314, )。胎盘8-OHdG和端粒比,HMGB1以及端粒比,没有显著相关( 和 ,分别)。

亚组分析早产的主题还发现无统计差异8-OHdG而言,HMGB1,端粒比值早期早产和中晚熟早产组(表3)。此外,孕龄之间没有相关性与端粒长度在所有科目( ;皮尔森相关的0.238, ),集团(这个词 ;皮尔森相关的0.222, ),和早产组( ;皮尔森相关的0.232, )。

4所示。讨论

这项研究表明氧化损伤的标志(8-OHdG)炎性HMGB1与衰老(端粒)表达之间的相对词和早产组。早产组之间即便如此,这些标记显示类似的结果。我们还发现8-OHdG和HMGB1之间的显著相关性,但无论是与端粒比例。

缩短端粒长度(TL)与衰老;TL是受到DNA修复机制的影响,氧化应激和炎症。TL往往是在出生时组织高度相关,但这种相关性会随着个体年龄(16]。随着人类怀孕的发展,在胎盘端粒酶活性降低,进而导致胎盘老化。胎盘TL缩短妊娠期间,与最短的TL展出怀孕(17,18]。氧化应激可以激活端粒DNA损伤反应,加速端粒缩短。在正常怀孕,劳动氧化应激山峰术语,因为成熟的胎儿代谢活动的增加会产生胎盘老化的表型。早产的危险因素导致氧化应激,触发单个和多个DNA链的断裂,导致端粒的缩短不适合孕龄(19]。

我们的数据表明,端粒缩短早些时候发生在早产,如图所示的平等的胎盘端粒T / S比值早产和期限劳动。衰老时端粒达到其临界长度,阻止细胞进一步部门(5,16]。鉴于早产之间的相似的端粒长度和术语组,有可能取得关键的端粒长度术语和早产胎盘权证劳动。这是与先前的研究,探讨DNA损害端粒磨损释放HMGB1在分娩过程中(20.]。端粒磨损,导致端粒缩短与其他产科并发症,包括子痫前期和IUGR [21]。因素导致过早的端粒缩短在未来仍然是一个有趣的研究领域。

HMGB1早产和胎盘的期限劳动没有显著差异,尽管缺乏宫内感染。亚组分析早产发生之前或之后33周的孕龄也揭示了这些组之间没有显著差异。劳动过程开始时,有一个从子宫的收缩状态明显的促炎的条件,如感染或无菌炎症(2]。Baumbusch等人的研究表明,增加浓度的羊膜HMGB1平行增加intra-amniotic炎症的严重程度和白细胞介素- 6 (22]。除了感染,梅农在胎盘衰老之前的研究表明,HMGB1激活潮湿prolabor的上调表达基因在正常分娩(7]。因此,从我们的研究可以推断,一定程度的HMGB1触发劳动力在怀孕也发生在早产。

然而,HMGB1不相关两组端粒的比例。HMGB1的致病作用诱导自发早产和出生之前已经报道过在动物模型。我们的研究与这一发现的高并发HMGB1在自发早产,比得上期限劳动。然而,我们表明,HMGB1是端粒长度无关。我们认为这是因为HMGB1不调节,直到衰老展的关键的端粒长度。但是,与期限劳动中HMGB1的增加是由于senescence-induced炎症(7),其他因素可能发挥作用在早产。

DNA氧化损伤的标记8-OHdG显示两组类似的数量。之前的研究结果表明,HMGB1在DNA氧化压力增加11),这或许可以解释HMGB1和8-OHdG之间的显著相关性。与端粒长度尽管8-OHdG没有显示相关先前声称DNA损伤导致过早衰老(4]。因此,重要的是要进一步研究其他因素,如营养和环境压力,可能影响端粒的速度消耗,从而在将来的研究中过早衰老。

5。结论

类似水平的T / S比值,HMGB1, 8-OHdG从早产儿和足月分娩胎盘样品中观察到尽管妊娠年龄的差异。类似的TL可能表现出由于早产,模仿早期的端粒缩短的TL胎盘。然而,诱发效应在变量仍然是有争议的。此外,没有8-OHdG与端粒长度之间的相关性。这还需要进一步的研究来发现的因素导致早产的早期胎盘端粒缩短的。

数据可用性

的数据集分析研究可从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

特别感谢将Prodia实验室团队的透明度和解释在实验室工作的每一步进行了研究。这项研究是由研究和技术、印尼政府。

引用

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