文摘

尿足细胞(podocyturia)研究子痫前期的诊断标志物。我们试图验证其使用在子痫前期和区分它与其他高风险怀孕。我们研究高危产科人口发展子痫前期(研究组)和简单的怀孕(对照组)通过分析尿液沉积物对足细胞在24小时内交货。足细胞通过免疫组织化学方法确定使用synaptopodin podocyte-specific蛋白质。56岁的病人登记,29名患者被诊断出患有子痫前期,9患者慢性和妊娠期高血压疾病如高血压、6 I / II和妊娠型糖尿病患者,3例患者分为其他人,和9个病人表现出简单的怀孕。Podocyturia被确定在11的29例(38%)患者子痫前期/子痫,3与妊娠9(33%)和慢性高血压,和3 6 (50%)I / II型和妊娠期糖尿病。所有的9例(0%)没有孕期并发症的podocyturia示威。的敏感性和特异性podocyturia子痫前期是38%和70%。我们的研究表明,podocyturia似乎并不敏感,也不是特定的标记诊断子痫前期。

1。介绍

影响5到10%的妊娠子痫前期是一种障碍,临床表现为最近诊断为高血压和蛋白尿。尽管我们对子痫前期的了解重大进展,需要一个可靠的诊断的生物标志物在临床实践中使用。在寻找一个生物的生物标志物,有试图调和子痫前期的临床研究结果与肾活检病理变化。例如,肾脏病理肾是子痫前期的经典描述为“endotheliosis”,或在肾小球内皮细胞肿胀。专门的内脏上皮细胞足突细胞,线条和肾小球基底膜的狭缝隔膜形式,历来被认为是未受影响。然而,最近的微观研究表明,足细胞结构改变和海港蛋白质吸收水滴(1]。此外,有证据表明,选择podocyte-specific蛋白质如nephrin synaptopodin,子痫前期和GLEPP-1表达下调,而VEGF和Flt-1增加(2,3]。Garovic等人研究了使用尿足细胞的(podocyturia)诊断标志物和发现podocyturia为子痫前期(高度敏感的和具体的4]。我们试图研究使用podocyturia子痫前期诊断和区分从其他条件可能有类似的演讲在高风险怀孕。我们发现podocyturia不是很敏感,在这个具体的诊断。此外,podocyturia经常被发现在慢性高血压等高危妊娠状态和妊娠期糖尿病。

2。材料和方法

2.1。研究和控制对象

我们招募了两组病人所有≥18岁:简单的科目(对照组)和怀孕妇女妊娠并发症的风险(高危组)如下所述的产科住院服务雅可比医学中心,布朗克斯,纽约,美国。随机尿液样本来自受试者在24小时内交货。入选标准为高危人群是子痫前期的诊断,慢性高血压(HTN),妊娠HTN, I型和II型糖尿病(DM)、妊娠期糖尿病、混合结缔组织疾病,妊娠和胎儿染色体异常。排除标准是18岁以下的患者和没有上述诊断。入选标准为对照组简单的怀孕和分娩和缺乏上述高危妊娠状态。排除标准为对照组< 18岁,先前存在的高风险怀孕状态或复杂的交付。子痫前期的诊断满足新出现的标准与HTN怀孕20周后血压140/90毫米汞柱和蛋白尿> 300毫克的蛋白质在24小时尿液标本或1 +尿液样本没有另一个原因的证据,如尿路感染或炎症。慢性HTN被定义为现有HTN或血压140/90毫米汞柱妊娠20周之前。妊娠期糖尿病被定义为任何程度的葡萄糖耐受不良的发病第一识别在怀孕期间。本研究通过爱因斯坦医学院的内部审查委员会。

2.2。尿蛋白定量

尿蛋白是量化从24小时尿样收集或推断从随机尿液试纸。例如,当只有一个试纸尿蛋白是可用的,值外推到一个24小时值基于以下:-蛋白对应少于150毫克/ 24小时,微量蛋白对应150毫克/ 24小时,1 +对应于大约200 - 500毫克/ 24小时,2 + 0.5 - -1.5 g / 24小时,和3 + 2 - 5 g / 24小时。

2.3。Podocyturia

20毫升新鲜空心尿在700 g离心5分钟。沉积物颗粒被小心翼翼地恢复吸气上层清液,洗两次PBS和resuspended 1毫升的PBS。100年整除μL resuspended沉积物的离心机在幻灯片使用Shandon Cytospin 4 Cytocentrifuge(热电子公司,阿什维尔,NC),脱水和固定1:1丙酮/甲醇10分钟。幻灯片沉浸与PBS / 1% H₂O₂15分钟,用去离子水清洗。随后,抗原检索是通过暖气在柠檬酸缓冲溶液pH值6.0,15分钟和阻塞BSA马血清在PBS为10%和2%。一夜之间,幻灯片被孵化与单克隆鼠标反人类的synaptopodin抗体在1:1稀释(礼品开发部主任彼得·蒙代尔如是说博士的马萨诸塞州综合医院,波士顿,MA)其次是马anti-mouse免疫球蛋白在1:1000稀释(Dako Inc . Carpinteria, CA)作为二级抗体30分钟。在avidin-biotin复杂部分被孵化1:25稀释(向量实验室,伯林盖姆,CA)和使用diaminobenzidine开发(DAB)发色体。洗后,部分counter-stained苏木精和盖玻片。消极的控制是由孵化没有主要的抗体。足细胞是确定积极的DAB染色,光镜观察。

2.4。统计分析

以上两组之间的差异在临床变量由克鲁斯卡尔-沃利斯法,两组之间的差异是由曼惠特尼的方法。分析占据Version 8.2和GraphPad棱镜为Windows软件5.02版本,并被认为具有统计显著性结果。podocyturia为测试特点,敏感性,特异性,阳性预测值,阴性预测值计算为每个风险很高的诊断。

3所示。结果

总的来说,56个患者。尿液收集的诊断时间如下:子痫前期()、惊厥()、高血压()、妊娠高血压()、I型糖尿病()、2型DM ()、妊娠期糖尿病()、结缔组织疾病()、边际前置(),染色体异常(),和简单的怀孕()。所有受试者的临床特点描述表1。Podocyturia(图1(一)和1 (b))出现在11的29例(38%)患者子痫前期/子痫,3 9例(33%),慢性和妊娠期HTN和3 6(50%)与妊娠期糖尿病和I / II型糖尿病(表2)。患者归类为“其他”,2(边际前置和染色体异常)3例表现出podocyturia (66%)。相比之下,0的9例(0%)没有孕期并发症的podocyturia示威。基于这些发现,我们计算的敏感性和特异性podocyturia子痫前期的38%和70%,与HTN任何类型的女性,在他们分别为33%和66%(表3)。任何类型的DM的敏感性和特异性分别为50%和68%,分别。子痫前期的阳性预测值为57%,相比之下,15%为HTN任何类型的任何类型和DM。消极的预测价值,然而,可怜了子痫前期为51%,83%和91%为HTN任何类型和DM的任何类型,分别。

4所示。讨论

Podocyturia是描述在许多肾小球疾病,如1型DM, IgA肾病,狼疮肾炎、膜性肾病5,6]。虽然内皮损伤的主要病变被认为是子痫前期,最近,紊乱的足突细胞的差别,对这些选择podocyte-specific蛋白质在肾活检和nephrin和podocalyxin(足细胞特定的蛋白质)尿液中有被描述2,7]。在这项研究中,我们试图描述的存在podocyturia在子痫前期和其他高风险怀孕状态使用的足突细胞标记synaptopodin识别。我们发现podocyturia既不敏感也不具体做出这个诊断。这些结果与早期研究Garovic et al。2]。尽管这种差异的确切原因尚不清楚,immunofluorescent podocyte-specific蛋白质染色,一般来说,似乎没有一个准确的工具来识别足细胞,这些足细胞可能在起源[壁8),也可能是凋亡[9]。因此,效用女性尿足细胞检测肾小球损伤持续的与子痫前期之前建议(10目前还不清楚。此外,我们的研究显示存在podocyturia等高危妊娠状态DM(妊娠或类型I / II)、HTN(妊娠期或慢性)。这一发现并不出人意料,因为podocyturia和尿足细胞信使rna已经妊娠的糖尿病患者(描述6和妊娠的高血压患者11分别)。有趣的是,尿足细胞的数量也显示出与血压显著相关,但没有蛋白尿在子痫前期(12]。

尽管podocyturia可能有助于阐明子痫前期的病理生理学,我们觉得它的临床效用是有限的。有几个限制依赖于足细胞作为生物标志物。识别尿足细胞是高度费力而在技术上具有挑战性的。cytospin方法(进行本研究)的足细胞和培养文化充满了困难,是不划算的。它可能不容易消除足细胞碎片当计数足细胞从cytospin标本新鲜的沉积物9]。尿足细胞在细胞培养中增长,另一方面,常常受到细菌或真菌污染的尿液在无菌条件下可能没有被收集。可能会激增,而且,这些细胞凋亡,附着在培养皿,从而错误地代表真正的足突细胞计数(9]。Interobserver偏见带来的另一个障碍,因为它需要一个训练有素的细胞学者正确识别这些细胞。

自诊断子痫前期临床指南是可用的,一些人质疑的尿标记是必要的。我们认为这个标志的效用成为重要的在子痫前期的诊断问题,当临床情况是复杂的存在既存HTN, DM,或其他肾小球疾病,如红斑狼疮肾炎。在这些情况下,治疗将齿轮对底层的条件,除了支持性护理。因此,发现一个特定的标记,通过我们对子痫前期的病理生理学的理解仍然是至关重要的。是否podocyturia标记仍然悬而未决。

5。研究的局限性

我们研究的主要限制是小样本大小。我们的目标是确认之前在子痫前期高敏感性和特异性的podocyturia显示。虽然更大的样本量是理想的,我们觉得我们的总样本量56 29患者诊断为子痫前期/子痫,其他高危患者和18诊断,是一种足够的样本量来证明podocyturia缺乏敏感性和特异性是子痫前期的诊断标志物。

6。结论

我们发现足突细胞损失存在不仅在子痫前期,在其他高风险怀孕。此外,podocyturia没有发现在大多数病人诊断出患有子痫前期。我们意识到找到一个相对较低的敏感性和特异性也站不住脚。然而,我们的研究结果提高的一个重要提醒依靠有限的研究在文献中关于podocyturia在子痫前期的预测价值,鼓励更大规模的研究。鉴于我们目前的知识的复杂疾病的病理生理学的重要作用等血管内皮生长因子(VEGF)信号在维护健康的内皮细胞和足细胞和血管内皮细胞之间的相声(13),不太可能,任何单一的测试或细胞类型能够预测子痫前期。的生物标志物反映这种复杂性可能是理想的诊断。

承认

作者感谢科恩·希勒协助统计分析和论文的编辑。