文摘
目的。本文旨在研究水的chemoprotective行动红茶提取物(耳背式)对非酒精性脂肪肝炎-(纳什)诱导大鼠骨骼变化。材料。Wistar鼠(wt。155 - 175 g)的男女,年龄在4 - 5个月,被随机分配到3组;A组(控制)、B组(60%高脂肪饮食;HFD), C组(HFD + 2.5%耳背式)。方法。几个尿(钙、磷酸、肌酐和calcium-to-creatinine比率)血清血清tartrate-resistant(碱性磷酸酶和酸性磷酸酶)和骨代谢分子标记(NF -受体激活κB配体(RANKL) osteoprotegerin(功能)和雌激素)进行了测试。同时,几个骨参数(骨密度,骨的抗拉强度,骨矿物质含量、和骨骼组织学)和钙稳态是检查。结果。结果表明,HFD-induced改变尿、血清钙和骨参数以及体内平衡,可以显著改善耳背式的补充。结论。结果显示一个潜在的角色耳背式作为保护剂对NASH-induced在大鼠骨代谢的变化。
1。介绍
非酒精性脂肪肝炎是一个条件,被描述为积累的脂肪在肝脏炎症。这种疾病可能会观察到患者无显著的饮酒史,虽然组织学检查像饮酒导致的肝损伤。它实际上可能是第一个临床表明胰岛素抵抗,并发症的高血压、冠心病(CHD)和2型糖尿病1,2]。据称,在癌症、肝硬化从纳什现在是第二个最常见的老年性死因II型糖尿病(3]。类似惊人的观察是人类骨骼疾病之间的关联与肝脏疾病,如病毒性肝硬化的危险因素增加的损失从骨矿物质4,5]。以相同的方式,淤胆型肝病患者骨代谢较低(6]。更早(7,8),据报道,肝疾病常常与骨代谢障碍有关。据报道发生在肝骨营养不良高达50%的慢性肝病患者(CLD)。这份报告的结果表明,增加骨吸收和骨形成的主要原因是肝骨营养不良患者CLD [9]。骨量减少及骨质疏松症是常见的并发症的慢性肝脏疾病。慢性肝病患者可能有其他并发症,如营养不良,肌肉,性腺机能减退,钙摄入量低,维生素D缺乏,所有这些改变正常的骨代谢(10]。一些更早的研究显示可能的脂质在骨质疏松症中的作用。高脂质水平被发现与骨密度(BMD)加上减少骨质疏松症(11- - - - - -13)以及其他疾病可能的结果高脂质,包括心血管钙化(14- - - - - -16和动脉粥样硬化11]。符合这些发现两个体内研究的结果表明,小鼠(17和鸡18食用高脂肪,高胆固醇饮食减少了骨矿物质密度。早先的研究也表明,饱和脂肪含量高的饮食可以产生有害影响膳食钙的吸收,因此产生不利影响骨矿化在越来越多的动物19]。也许更重要的是数据报告,损失的骨矿物质密度高脂饮食可以恢复抗氧化剂,暗示可能通过抑制脂质氧化水平的作用机制(18]。
茶(茶树)富含多酚类化合物,统称为茶黄酮类化合物。其治疗价值与众多前沿报告茶作为抗氧化剂,降血脂药、抗肿瘤药,hypocholesterolemic [20.- - - - - -23]。茶也被报道具有cardiovascular-protective效应(24,25]。流行病学报告中有人建议,骨骼健康是保存在老年妇女喝着茶比nontea饮酒者(26]。类似的流行病学研究已经证实,喝茶是一个可能的预防措施减少绝经后妇女的骨质疏松风险以及男性通过增加BMD (27,28]。天然异黄酮的雌激素活性的核雌激素受体结合的能力(早些时候报道29日),最近,大豆异黄酮与弱雌激素样活动调节骨代谢和血清脂质已报告在准更年期妇女30.]。最近的一项研究进一步表明,大豆异黄酮可以减少肥胖的风险,保护骨骼健康绝经期妇女(31日]。适量的饮用茶,含有大豆异黄酮类黄酮密切相关,据报道与高BMD在男性和女性26,27和较低的断裂32,33]。一系列研究结果从我们实验室水红茶提取物(34- - - - - -36)进一步支持这个想法,phytocompounds功效在预防骨质流失。本研究旨在研究红茶提取物的保护作用(耳背式)对非酒精性脂肪肝炎-(纳什)诱导骨骼功能障碍。
2。方法
2.1。动物
纳什没有任何性别特异性和被认为在两种性别中,动物从男女选择了这项研究。Wistar鼠,男性和女性,年龄在4 - 5个月,体重155 - 170克采购从本地授权增殖注册委员会的目的是控制和监督动物实验(CPCSEA),印度环境与森林部、政府。到达我们的研究所,所有动物都保持在标准条件下(12小时光明/黑暗和时间表°C室温在整个实验周期)一周免费获得饮用水和标准实验室饮食组成的碳水化合物71%,蛋白质18%,脂肪7%,和4%盐混合物(37]。所有动物实验根据提出的伦理准则制度动物伦理委员会(IAEC)和委员会控制和监督的目的动物实验(CPCSEA),印度环境与森林部、政府。
2.2。饮食和治疗
十八动物被随机分配到三组:A组(常规饮食),B组(高脂肪饮食),C组(高脂肪饮食+耳背式)。每组包含六个动物,三男三女。A组动物喂养标准实验室饮食(37]包含碳水化合物71%,蛋白质18%,脂肪7%,和4%盐混合物。B组动物被喂以高脂肪饮食(38含碳水化合物:22%,脂肪:60%包含玉米油(棕榈酸:6.3 - -18.2%,硬脂酸:0.9 - -4.5%,油酸:18.5 - -46.1%,亚油酸:36.6 - -66.8%,亚麻酸:0 - 2%,和花生四烯酸:0 - 1.4%)(39),和蛋白质:18%。C组的动物,除了高脂肪饮食,美联储2.5% (25 g / L)耳背式通过填喂法技术30天的单剂量10毫升/公斤/天(40]。动物的A和B组有去离子水填喂法技术,10毫升/公斤/天。在我们的初步研究,第四组(D组)的动物包括包含六个动物(3男3女),给出了标准实验室饮食同时耳背式2.5%填喂法技术30天的单剂量10毫升/公斤/天。独立水红茶提取物在D组动物不能产生任何重大变化的结果在纳什的标记参数,控制相比,这一群体进行进一步的详细研究没有考虑限制动物使用按动物伦理委员会的建议。
2.3。制备水耳背式
红茶(茶树)从CTC提取制备(卷、撕裂和粉碎)防喷器-(破碎的橙色Pickoe)年级黑克隆茶。处理和由Tocklai试验站,Jorhat,阿萨姆邦,印度到药物开发部门,印度理工学院的化学生物学,Jadavpur,加尔各答,印度。我们收到了一个研究所的慷慨的礼物。2.5%的新鲜水耳背式方法后准备日常魏et al。40]。25克红茶加入500毫升的沸水,浸泡15分钟。注入冷却至室温,然后过滤。茶叶提取第二次500毫升的沸水和过滤,滤液的两人组合获得2.5%水红茶提取茶叶(2.5 g / 100毫升水)。结果清晰的解决方案类似于茶冲泡被人类。
2.4。选择有效剂量的高脂肪饮食和红茶提取物
测定有效剂量(ED)的高脂肪饮食(HFD)和红茶提取物(耳背式),剂量反应研究。高脂肪,这是观察到,虽然显著变化可以看到从高脂肪的30%开始,但生化和组织学变化HFD最突出的为60%。相似的变化为60% HFD早些时候报告(38]。轻快至于耳背式,高频的剂量反应研究表明显著复苏之间的反应被认为与剂量2 - 3% (w / v)水耳背式。复苏的反应与剂量的耳背式也早些时候报道(40]。
2.5。尿液收集
禁食24小时尿液收集(9点到第二天早上9点)根据标准实验室程序(41钱德]描述了其他地方的et al。37]。是小心免得尿液被蒸发掉了。尿液测量的总量,以下参数评估。
2.6。尿估计参数
2.6.1。尿钙
尿钙测定的方法Adeniyi et al。42]。钙的测定的原理是基于金属络合染料orthocresopthalein氨羧络合剂(CPC)形成一个发色团与钙碱性溶液。二乙胺(DEA)被添加到提高色彩强度。尿钙估计,20μL的尿液1毫升共产党试剂和1毫升DEA缓冲了。色度测量在575海里一个空白通过使用UV-double光束分光光度计(日本岛津公司160;日本岛津公司公司,日本京都)。碳酸钙(CaCO3)溶液的ph值- 3.0作为标准。所有的试剂都准备与calcium-free三重蒸馏水。
2.6.2。磷酸尿
磷酸尿测定根据洛瑞和洛佩兹的方法43]。对磷酸尿估计,10μL的尿液和蒸馏水稀释50倍,1毫升钼酸试剂和200μL氨基萘酚磺酸(ANSA)补充说,混合好,一直在黑暗的10分钟。阅读是在对空白630海里。尿液中磷酸盐的浓度计算使用磷酸二氢钾(KH的标准曲线2阿宝4)。
2.6.3。尿肌酐
尿肌酐测定方法的r·l·纳和r·k·纳44]。尿肌酐估计,50μL的尿液稀释10倍和2毫升饱和苦味酸和150μL添加了10%的氢氧化钠溶液,混合并保持15分钟37°C孵化器。5毫升的水了。阅读是在对空白520海里。在尿肌酐的浓度计算肌酐的标准曲线。
2.7。血清收集
氨基甲酸乙酯麻醉下血液收集直接从心脏体重(1.7毫克/克)。血清是实验室通过使用标准的协议。
2.8。估计血清碱性磷酸酶(美联社)活动
血清碱性磷酸酶测定使用对硝基苯磷酸盐作为底物(45]。碱性磷酸酶活性测定的水解p-NPP (paranitrophenyl磷酸盐)ph值使用glycine-NaOH缓冲区在37 - 10.8°C。总之,0.5毫升的5.5毫米p-NPP在0.4毫升glycine-NaOH缓冲区(ph值- 10.8)解决方案是用移液器吸取在试管和孵化37°C 10分钟。孵化后,0.05毫升的样品补充说,混合,孵化37°C 30分钟。反应是停止通过添加4毫升0.1 N氢氧化钠,和阅读是在410海里一个空白在分光光度计(日本岛津公司160;日本岛津公司公司,日本京都)。
2.9。估计血清Tartrate-Resistant酸性磷酸酶(陷阱)活动
血清陷阱活动估计动力学方法通过使用试剂盒(LABKIT、西班牙)。简而言之,unhemolyzed血清混合测试试剂(10毫米α萘基磷酸,6毫米快红TR、酒石酸钠2毫米在50 mM柠檬酸钠缓冲,ph值- 5.2)和样品的吸光度是阅读在405海里之后1分钟间隔3分钟。吸光度的差异,平均每分钟吸光度差(ΔA /分钟)计算46]。
2.10。估计血清雌二醇
血清是实验室通过使用标准的协议。血清雌激素水平(pg / mL)决心利用ELISA EIAgen雌二醇工具包(意大利Adaltis、意大利)。都在重复样本化验。intra-assay变异系数为9.08%。为了避免inter-assay变异所有样本运行一次。
2.11。血清RANKL估计
血清RANKL估计用ELISA试剂盒(Quantikine R & D系统公司,明尼阿波利斯,MN,美国)。都在重复样本化验。intra-assay变异为11.75%。所有样本运行一次,以避免inter-assay变异。光密度的决心通过使用一个微型板块读者(热Labsystems、芬兰)。
2.12。血清Osteoprotegerin估计(功能)
血清功能估计用ELISA试剂盒(Quantikine R & D系统公司,明尼阿波利斯,MN,美国)。都在重复样本化验。intra-assay变异为10.09%。所有样本运行一次,以避免inter-assay变异。光密度的决心通过使用一个微型板块读者(热Labsystems、芬兰)。
2.13。测量骨密度
右股骨,第八胸肋,第八胸椎和第四腰椎软组织获释,清洗用小剪刀,镊子,纱布。密度测量之前,股骨是削减middiaphysis和骨髓被淘汰。骨密度测量根据描述的方法组et al。47利用阿基米德原理)。简单地说,每个骨头放在一个unstoppered瓶充满了去离子水,和瓶置于真空90分钟,以确保所有被困的空气扩散的骨头。每个骨头从瓶中删除,用纱布海绵涂抹,称重,返回包含去离子水的瓶。骨头在水和reweighed密度计算(g / cm3骨体积)。
2.14。估计的骨骼抗拉强度
牺牲的动物后,左股骨附着软组织切除和清洁。骨的抗拉强度是衡量被夏皮罗和希尼48)用一个手持力计(Excel企业、印度)。简而言之,股骨支持纬度的两端,和压力是直接放置到中间的骨头,直到断裂。打破力(公斤)被记录。
2.15。骨钙、骨磷水平的估计
右股骨,第八胸肋,第八胸椎,第四腰椎被移除,坚持组织的清洁。整个骨提取两次,1:1的混合乙醇和乙醚48小时,用乙醚24小时一次。脱水和脱脂的骨头变成灰600˚C 48小时和6 N测定盐酸水解的钙和磷酸盐(49]。钙和磷酸盐估计根据描述的方法,分别通过Adeniyi et al。42)和洛瑞和洛佩兹(43]。
2.16。制备肠循环
实验周期结束后,所有组的动物禁食16小时。动物的准备和肠道循环研究钙原位转移是由其它地方描述的方法由伊斯兰教等。50]。短暂,动物麻醉(聚氨酯、1.7毫克/公斤体重),每个动物的腹部开了通过中线纵切口,胆管结扎和十二指肠、空肠、回肠段位于。两个绷带,一个近端和远端,在每个循环应用严格测量约8厘米十二指肠,空肠、回肠段。循环是如此选择,每个包含8 - 10船只,和护理被这没有阻挡的主要血管结扎。
2.17。测量肠道钙移情
测量肠道的钙移情,1毫升prewarmed (37°C) Tris-HCl包含0.2毫米CaCl缓冲溶液2被注射25针在每个结扎段。肠道循环被放置在他们平常的位置和腹部被关闭。一个小时后,动物牺牲,预选的循环被删除,而每个循环的液体分开收集,连同一些洗液腔的三重蒸馏水。收集到的液体被增加到一个明确的体积与钙免费三重蒸馏水。这种液体的一小部分被用于估计Ca2 +使用双光束分光光度计(日本岛津公司、uv - 160)根据Adeniyi描述的方法et al。42]。Ca的数量之间的差异2 +介绍和左未被吸收的量被用来估计Ca的数量2 +吸收。肠道部分构成循环被干玻璃在90°C电炉达到恒重,这是记录为干循环的重量。肠道移情的钙被表示为μ米的钙/ g的干重/小时。
2.18。肠道粘膜提取做准备
牺牲动物的腹部开放后,整个小肠很快被删除。组成部分十二指肠、空肠和回肠分离和冷冻冰。肠道粘膜被Maenz收集所述,Cheeseman [51),和被刮削下均质根据小山的方法等。52]。
2.19。估计肠道粘膜的碱性磷酸酶活性
碱性磷酸酶的活性,肠黏膜对硝基苯磷酸估计通过使用作为底物(45]。匀浆用于蛋白质含量的研究是确定使用洛瑞的方法等。53]。
2.20。估计肠道粘膜Ca2 +激活腺苷三磷酸酶活性
酶的活性2 +腺苷三磷酸酶也是研究使用的方法从粘膜提取Rorive和Kleinzellar54]。分析基于无机磷酸盐的释放的原则(Pi)存在ATP测定的Ca2 +或毫克2 +。测定的粘膜2 +,激活腺苷三磷酸酶,250μL 0.4 Tris-HCl缓冲ph - 7.4和250μL 40毫米ATP (Tris-saltσ)添加到三个试管放在冰。管1和3,250μ40毫米CaCl L2是补充道。在时间为零,250年的反应是由加法μL的粘膜匀浆管1和2。卷管调整与钙2毫升蒸馏水。三管被孵化37°C和温柔摇30分钟。在这种条件下的释放π是线性的60分钟。的反应是停在传输管冰和添加0.4毫升冰冷的35% (w / v) trichloro乙酸(柠檬酸)。管被离心10分钟10000 rpm冷冻离心机。蛋白质颗粒溶解在1毫升1 N氢氧化钠(氢氧化钠)和蛋白质含量测定的方法,洛瑞et al。53]。在Ca磷酸中解放出来2 +atp酶酶活性的方法估计洛瑞和洛佩兹43]。
2.21。骨组织收集和处理
左胫骨近端和第四腰椎被移除,免费的软组织,解剖和4%多聚甲醛固定16小时在4°C。固定后的标本被冲12小时在5°C以下一系列解决方案:0.01 PBS包含5%的甘油,包含10%甘油0.01 PBS,包含15%甘油0.01 PBS。标本被脱钙在EDTA-G解决方案(14.5 g EDTA, 1.25 g氢氧化钠,甘油和15毫升、ph值- 7.3)10 - 14天。脱钙组织顺序洗在5°C的12小时(a) 15%的蔗糖和15%的甘油在PBS, (b) 20%的蔗糖和10%的甘油在PBS, (C) 20%的蔗糖和5%的甘油在PBS,蔗糖在PBS (d) 20%;PBS蔗糖10%,蔗糖在PBS (e) 5%, PBS (f) 100%。组织洗了PBS和分级一系列醇脱水,二甲苯随后结算,最后嵌入在石蜡(55]。标本被切成5 - 6μ米部分和haematoxylin-eosin染色。代表部分观察和显微摄影的帮助下进行亮视场显微镜配备数码相机(德国卡尔蔡司)。
2.22。统计分析
数据表示为均值±S.E.M.获得从一个特定的组由雄性和雌性动物。利用克鲁斯卡尔-沃利斯非参数方差分析比较数据,随后Mann-Whitney“U”多重比较检验(英国软件版本2.6.5 StatsDirect)。如果认为重要差异。
3所示。结果
3.1。尿钙、磷酸和肌酸酐排泄概要文件和Calcium-to-Creatinine比率
尿钙、磷酸和肌酸酐排泄资料连同Ca: Cr比对照组(A组),HFD (B组),和HFD +耳背式(C组)如表所示1。HFD-fed组与对照组相比,动物有显著提高所有尿参数研究,即钙、磷酸盐、肌酐和Ca: Cr率。高响应所有这些参数显著反监管的HFD + BTE-supplemented组大鼠(C组)。
3.2。血清碱性磷酸酶(美联社)和Tartrate-Resistant酸性磷酸酶(陷阱)活动简介
血清碱性磷酸酶(美联社)老鼠的活动轮廓控制,HFD和HFD +耳背式补充组如表所示2。老鼠的HFD-fed组(B组)有显著提高血清碱性磷酸酶活动相比,对照组的动物美联社活动(A组),增加显著降低()在大鼠接受耳背式(C组)。同样,显著增加(HFD-fed)陷阱活动组(B组)、控制(A组)相比,可以有效地降低补充水耳背式(C组;表2)。
3.3。骨密度概要文件
动物HFD-fed组(B组)显著降低右股骨密度()、第八胸肋()、第八胸椎()和第四腰椎(),而对照组(A组)。耳背式补充可以产生显著增加(在所有骨骼的骨密度:右股骨()、第八胸肋()、第八胸椎()和第四腰椎(;表3)。
3.4。骨的抗拉强度
图1显示与控制相比,骨HFD-fed动物的抗拉强度显著降低()。耳背式补充在这些动物被发现有效的恢复()抗拉强度回到对照组水平。
3.5。骨钙、骨磷水平
结果骨钙和磷酸盐水平如表所示4。动物HFD-fed组(B组)、对照组(A组)相比,表现出明显减少钙和磷酸盐水平的右股骨(钙:;磷酸:)、第八胸肋(钙:;磷酸:)、第八胸椎(钙:;磷酸:)和第四腰椎(钙:;磷酸:)。当这些HFD-fed动物补充耳背式(C组),显著复苏的矿物质被认为内容。
3.6。血清雌二醇水平
图2补充的影响显示耳背式HFD血清雌二醇水平,美联储的老鼠。控制(A组)相比,显著降低雌二醇水平被视为HFD-fed (B组)动物()。这可能是显著恢复()当耳背式补充(C组)。
3.7。血清RANKL和功能活动
图3描述了血清水平的RANKL(图3(一个))和功能(图3 (b)不同组的老鼠。控制相比,HFD-fed老鼠显示功能降低血清()水平,它被发现显著()计数器耳背式补充监管。相比之下,控制相比,血清RANKL水平显著增加(HFD-fed动物的)。在耳背式补充,明显降低(在RANKL)水平。
(一)
(b)
3.8。肠道移情的钙
结果在图4描述,来控制相比,HFD-fed老鼠(B组)显示segment-wise减少肠道移情的钙(对十二指肠、空肠和回肠)。耳背式补充可以显著纠正这些改变钙移情HFD-fed老鼠(对十二指肠、空肠和回肠)。
3.9。钙atp酶活性
图5显示喂养的HFD粘膜的影响钙atp酶活性不同的老鼠的小肠段。控制老鼠相比,结果表明HFD喂养导致这种酶的活性显著降低(为十二指肠、空肠和回肠),而耳背式补充可以显著提高酶活性(对十二指肠、空肠和回肠)。
3.10。肠碱性磷酸酶活性
图6描述,与对照组相比,HFD-fed老鼠显示显著减少碱性磷酸酶的活性在小肠的所有片段(对十二指肠、空肠和回肠)。耳背式补充恢复这种酶被发现显著有效的活动在所有这些领域(十二指肠、空肠和回肠)。
3.11。组织学分析松质骨皮质
组织学的研究两种不同类型的骨骼进行了确定在活的有机体内影响HFD-fed耳背式的动物。HFD-fed老鼠(B组)显示皮质厚度减少,空在胫骨近端骨髓空间(数字7(一)- - - - - -7 (c))和第四腰椎(数字7 (d)- - - - - -7 (f)),与控制(A组)。此外,有骨小梁体积和厚度减少第四腰椎。然而,在耳背式补充,骨修复的行为被认为在这些HFD-fed动物。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
4所示。讨论
目前的研究调查了chemoprotective行动水红茶提取物(耳背式)对HFD美联储(60%)纳什骨骼的变化。骨头是众所周知的表现为慢性肝病肝外并发症。慢性肝病患者的风险增加发展中肝骨营养不良表现为软骨病和骨质疏松症(56]。骨质疏松症是一种常见的并发症终末期肝脏疾病无关的病因(57]。
最近的研究也表明,骨质疏松症和高脂血症之间有很强的正相关关系。过量食用脂肪可能导致骨血管内脂质积累和随后的氧化,在成骨细胞的分化可能会改变。除了在成骨细胞的分化抑制作用,相信因为氧化脂质诱导内皮的单核细胞趋化因子的表达,以及其他有效监测分化的诱导物,氧化脂质也可以促进骨吸收(58]。
骨代谢生化标记物的广泛作为研究工具来衡量药物在骨重塑的影响59]。高浓度的骨标记与快速骨质流失和可能独立预测骨折的风险更大的骨矿物质密度(BMD)的变化(10]。在我们的研究中,控制相比,HFD治疗大鼠显示增加尿钙的流失,磷酸,肌酐(表1),它可以显著纠正耳背式补充,建议耳背式可能有一些积极作用在防止骨吸收和/或增加骨形成或两者兼而有之。
结果两个特定标记的骨代谢的研究,即尿calcium-to-creatinine (Ca: Cr)率和血清碱性磷酸酶(美联社)进一步支持我们的猜测(表1和2、职责)。观察到耳背式是有效地降低血清AP和尿钙增加HFD-induced: Cr率。从美联社和Ca: Cr率与胶原降解,骨吸收和骨质疏松症(60- - - - - -63年),看来耳背式可能是有效预防骨质流失。密切联系的血清浓度的增加作为一个潜在的陷阱指数监测活动是良好的64年]。在目前的研究中,控制相比,HFD-fed动物显示血清陷阱(表程度的增加2)。然而,这种反应被发现受耳背式的补充,甚至表明耳背式可能是有效的控制监测活动保持骨骼健康。
这样的猜测质证在我们研究通过测量参数如骨密度(表3)和骨矿物质含量(表4)。老鼠在HFD fed-group明显降低骨质密度和矿物质的含量,控制老鼠相比,可显著恢复耳背式补充,建议再次耳背式的保护作用与HFD-fed骨骼失调的变化。进一步确认证据支持我们的猜测是在我们的实验中获得的骨骼抗拉强度或破坏的力量,这需要打破骨。控制相比,HFD-fed动物表现出较低的抗拉强度(图1),它可以显著升高(增加破断力)耳背式补充。
慢性肝病加速性腺机能减退的发展由于下丘脑释放促性腺激素的减少和初级性腺的失败。循环雌激素的下降可能是中介的骨质流失与慢性肝病(男性和女性10]。在目前的研究中,HFD-fed雌性老鼠明显下降(图血清雌二醇水平2),它可以大大恢复耳背式补充。这一结果表明,耳背式phytoestrogenic复合功效为有效。estrogen-enhancing属性的类黄酮(65年,66年从各种extragonadal网站如间充质细胞的脂肪组织,成骨细胞、骨chondriocytes,许多网站在大脑中,乳房,和脉管系统(67年,68年]可能负责提高血清雌二醇水平通过调制芳香化酶活性(68年]。
Osteoprotegerin(功能)是一种新型受体块破骨细胞的形成。在细胞的膜结合或以可溶性形式,RANKL、nf -κ受体激活β(排名),刺激osteoclastogenesis和监测骨吸收。因素刺激骨吸收增加RANKL表达,除了一些例外,减少功能表达式(69年]。在目前的研究中,动物HFD-fed组明显下降血清水平的功能(图3 (b))和RANKL的血清水平大幅上升(图3(一个)),而对照组的老鼠。耳背式补充,然而,可以明显恢复功能改变的血清水平和RANKL,暗示更确认保护作用耳背式HFD-fed老鼠对监测分化和活动。
钙的吸收据报道发生在身体整个小肠的长度,吸收在十二指肠和空肠近端大于在回肠(70年]。的参与两个肠道酶、碱性磷酸酶和钙2 +腺苷三磷酸酶,经常提出了这一现象,因为这些酶的活性与钙质吸收的程度在不同情况下的不同部分肠道(50,71年,72年]。结果还表明,Ca2 +全身的ATP水解在肠两个酶活动的结果,即碱性磷酸酶在刷状缘管基底膜和一个更具体的Ca2 +腺苷三磷酸酶专门基底位于质膜(73年]。进一步的证据表明,雌激素更直接参与确定肠钙吸收,因为减少钙的吸收由于卵巢激素不足是纠正激素替代疗法(74年,75年]。在目前的研究中,肠道移情的Ca2 +减少在HFD-fed老鼠。结果表明,缺乏雌激素的负面影响肠道移情的钙,因为这些动物表现出更大程度的减少转移的钙比控制动物(图4)。观察发现其支持早期的发现,雌激素可能通过直接作用雌激素受体在调节肠钙吸收在体外和在活的有机体内(76年,77年]。耳背式补充本研究发现有效地纠正这样的减少钙移情,也表明耳背式对粘膜移情的钙可能有积极的影响。
确定的机制减少肠道移情的钙,两个最相关的活动粘膜钙转移酶,即碱性磷酸酶和calcium-ATPase检查。发现了这两种酶的活动抑制HFD-fed动物群体(数字5和6)。这支持早期的观察这两个酶是参与钙吸收这些酶的活动与钙质吸收的程度在肠道的不同部位在不同情况下(50,71年,72年]。耳背式补充很可能恢复这两种酶的活动表明耳背式的观察积极影响肠道移情的钙是通过调制从而介导这些转移酶的活动。
组织学(图7)的连续切片观察胫骨和腰椎显示,控制相比,显著减少皮质厚度和HFD喂老鼠骨髓内容。耳背式管理,这些变化明显纠正,表明潜在的耳背式骨修复行动。
认识到动物研究包含一些固有的设计限制。首先,限制动物的使用,因此样本大小;第二,展示疾病预防效果所需的剂量通常高于人类所食用的量。此外,由于基础设施的限制必须依靠生化和组织学的措施而不是使用同行评审DEXA-derived指数检查骨概要文件。最小化误差与这样的局限性,我们采取极端的保健而选择参数,收集数据并分析他们公认统计方法之后,我们34,35]。
5。结论
总之,本研究的结果表明耳背式的保护作用对NASH-induced在大鼠骨代谢的变化。
承认
国家的资助支持的纸是茶叶研究基金会(NTRF),印度政府。