POU2F1促进胃癌细胞生存和肿瘤增长通过转录激活lncRNA TTC3-AS1

文摘

经营领域,二班,转录因子1 (POU2F1)是参与胃癌的发展(GC)。然而,分子机制尚未完全阐明。在这里,我们发现了一个小说lncRNA命名TTC3-AS1可能受POU2F1并调查他们的角色在GC进展。生物信息学分析表明,高表达的POU2F1预测患者预后不良的GC。我们进一步筛选了lncRNA TTC3-AS1可能转录激活POU2F1根据JASPAR数据库,POU2F1和TTC3-AS1 GC细胞和组织中高度表达较正常对照组(nc)。功能分析显示POU2F1和TTC3-AS1发挥了致癌作用通过促进细胞生存能力,迁移,并在GC入侵。存在分析表明,POU2F1改善TTC3-AS1在GC细胞的表达,而TTC3-AS1击倒或超表达没有影响POU2F1表达式。染色质免疫沉淀反应和DNA-affinity降水化验的结果表明POU2F1直接绑定到TTC3-AS1和激活转录启动子区域。TTC3-AS1击倒中和的protumor影响POU2F1超表达在GC细胞系以及GC的小鼠模型,这表明TTC3-AS1介导POU2F1的致癌作用。总之,POU2F1促进转录激活TTC3-AS1 GC进展; thus, this study provided a new perspective for the mechanism of GC progression.

1。介绍

由于缺乏早期症状和疾病进展迅速,胃癌(GC)已成为最常见的恶性肿瘤之一,全球癌症死亡的第三大原因(1,2]。尽管大多数患者早期GC可以通过手术治愈,超过一半的患者先进GC患有癌症的复发,即使治疗胃切除术(3]。GC患者的5年总体生存率大约是40%4,5]。进步的肿瘤发生特点和远处转移是最重要的GC患者的不良预后的危险因素;因此,GC远处转移患者的五年生存率仅为5% (5]。因此,识别肿瘤发生的分子机制和远处转移在GC是急需的。

POU域,二班,转录因子1 (POU2F1),也称为octamer-binding转录因子1 (oct - 1)是一个无处不在的转录因子参与调节肿瘤细胞的生理和病理过程,包括细胞周期和分化、DNA损伤修复、葡萄糖代谢(6- - - - - -9]。此外,POU2F1涉及免疫和炎症、活动维护肿瘤干细胞以及肿瘤发生和发展通过调制的组织目标基因的表达(10- - - - - -14]。据报道,POU2F1高度表达的各种类型的肿瘤,包括骨肉瘤,胃癌,头颈部鳞状细胞癌(15- - - - - -17]。POU2F1也是胃癌的一个独立的预后因素。此外,击倒POU2F1导致明显的抑制肿瘤增殖和入侵在头颈部鳞状细胞癌,胃癌等(17,18]。积累的证据表明,POU2F1函数作为癌基因在肿瘤进展。然而,POU2F1的作用机理仍然是难以捉摸的。

lncRNAs被定义为非编码rna > 200个基点,与有限或没有蛋白质编码能力(19]。在过去,lncRNAs被视为无稽之谈序列在转录过程中,没有生物功能。然而,最近越来越多的研究发现,lncRNAs扮演至关重要的角色在多个生物过程,包括细胞增殖、凋亡、分化,以及干细胞多能性(20.,21]。此外,更多的lncRNAs被确定为致癌基因和肿瘤抑制基因通过调节各种肿瘤相关流程,包括epithelial-mesenchymal过渡和肿瘤转移和增长21- - - - - -25]。因此,识别小说功能lncRNAs与GC进展和阐明其作用机制对GC的认知和治疗很重要。

在这项研究中,我们证明了POU2F1 / TTC3-AS1高度表达,预测GC患者的不良预后。POU2F1可以直接绑定到TTC3-AS1和促进其表达的启动子区域。功能分析表明POU2F1提升GC细胞生存能力,迁移和入侵,并通过upregulation TTC3-AS1的肿瘤生长。我们的研究扩展的知识POU2F1机制对GC病人肿瘤和提供潜在的治疗靶点。

2。材料和方法

2.1。生物信息学分析

HCMDB(人类癌症转移数据库,http://hcmdb.i-sanger.com/index)是一个在线数据库,提供全面的转移和原发肿瘤样本的基因表达谱。差异表达基因在转移性肿瘤样本(n= 21)和原发性肿瘤样本(n= 351)从HCMD-EXP00440被网络分析评估胃腺癌样本的癌症基因组图谱(TCGA-STAD)。然后GEPIA(基因表达分析互动分析)平台是用于执行基因TCGA-EXP00440数据库的交叉分析和预后分析。明显不同的mRNA表达决心按照转移性肿瘤样本 ,和聚类分析的差异表达mrna进行使用大卫(数据库进行注释、可视化和综合发现)。

2.2。人体组织标本

肿瘤组织和邻近正常组织收集来自10个病人诊断为GC通过手术病理检查,以及从2017年7月到2019年7月。这项研究是由独立的湖南省肿瘤医院伦理委员会批准,湘雅医学院附属肿瘤医院,并从每个病人得到书面知情同意。手术前患者没有得到治疗。肿瘤组织被迅速转移到液氮后立即手术。

2.3。细胞系

人胃腺癌细胞系MGC803、BGC823 MKN28, MKN45, SGC7901和正常胃上皮细胞系(GES-1)获得中国科学院委员会类型文化收集细胞银行(上海,中国)。MGC803、BGC823和MKN28细胞培养在罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI) 1640介质;GES-1 SGC7901细胞培养在杜尔贝科的修改鹰的介质(DMEM;GIBCO-BRL)补充10%胎牛血清的边后卫,100 U /毫升青霉素、链霉素和100毫克/毫升(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA) 37°C公司5%₂。

2.4。定量实时聚合酶链反应(存在)

从组织或细胞总RNA是孤立使用试剂盒试剂(英杰公司)按照标准协议。RNA (1)μg是reverse-transcribed cDNA使用逆转录工具包(豆类,大津,日本)。执行中存在使用ABI 7500 ht快速实时PCR系统(美国应用生物系统公司,沃尔瑟姆,MA)在下列反应条件:95°C 10分钟,40周期为15秒95°C, 60°C 30年代,20年代72°C。GAPDH是作为内部控制。相对mRNA表达是比较量化的2^−△△CT方法(26]。引物序列见表1。

2.5。细胞转染

细胞转染了使用Lipofectamine 2000(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)根据供应商的指令。POU2F1 siRNA和超表达质粒以及TTC3-AS1核和超表达质粒从Ribobio(广州)。最终浓度的细胞转染50 nM,然后收集进一步的化验,孵化时间是48 h。在异种移植生长试验,lentivirus-mediated POU2F1或TTC3-AS1核设计和GC细胞系转染。

2.6。CCK-8化验

SGC7901细胞的细胞活力检测使用CCK-8工具包(Dojindo、日本)按照标准协议。SGC7901细胞转染,然后播种到96孔板的密度3000细胞。细胞培养在37°C在潮湿的气氛中有5%的公司₂。一段时间后,细胞在每个孵化了10μ2 h l CCK-8解决方案。最后,在96 -孔板细胞溶液的吸光度检测使用一个微型板块读者在570海里(VarioSkan热费希尔科学,妈,美国)。所有的实验进行了一式三份,结果被表示为±SD方法。

2.7。细胞入侵和迁移化验

细胞入侵检测,transwell膜(BD,富兰克林湖,新泽西,美国)与基底膜基质预镀。转染24小时后,SGC7901细胞在无血清resuspended RPMI 1640中等密度为1×10⁶/毫升。100年的电池解决方案μl是添加到上层transwell室,众议院增加了500μl 20%的FBS-containing RPMI 1640中。孵化后48小时,细胞transwell膜的上表面移除,和侵入性细胞在低表面与结晶紫染色10分钟。阳性染色细胞在显微镜下计数(奥林巴斯)五个随机领域。

对于伤口愈合试验,在完整的RPMI 1640培养基培养转染细胞融合的90%。在那之后,细胞和一个10层被刮花了μl吸管提示创建一个单行的伤口。这些细胞被洗PBS移除水中的悬浮细胞。接下来,细胞在无血清培养系统在37°C公司为5%₂48 h。伤口面积在0 h和48 h使用显微镜观察和量化使用ImageJ软件。

2.8。免疫印迹

提取总蛋白从细胞或组织使用一个总蛋白提取工具包(nbp2 - 37853,罗福斯生物制剂,利特尔顿有限公司,美国)。每个样品的蛋白质含量检测由BCA (bicinchoninic酸)方法。蛋白质变性后,使用10% sds - page分离(钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳)20μg每车道。蛋白质乐队被转移到PVDF(聚偏二氟乙烯)膜,阻止5%无脂牛奶在室温下4 h。顺序、蛋白质乐队是孵化主要抗体在一夜之间在4°C和辣根过氧化物酶(合)共轭二次抗体在室温下1 h。主要的抗体如下:POU2F1 (1: 500;目录:10387 - 1 - ap;Proteintech集团有限公司、武汉、中国),钙粘蛋白(1:1000;目录:20874 - 1 - ap;Proteintech集团有限公司、武汉、中国)和FN1 (1: 800;目录:30506;ProMab生物技术,中国上海)。 Goat anti-rabbit IgG or goat anti-mouse IgG was used as the secondary antibody (1 : 4000; Proteintech Group, Inc., Wuhan, China).β肌动蛋白(1:2000;目录:66009 - 1 - ig;Proteintech集团有限公司、武汉、中国)作为内部控制。发射极耦合逻辑(美国Sigma-Aldrich)是利用开发的信号。相对表达水平的蛋白质规范化使用ImageJ v1.46软件(美国国立卫生研究院)。

2.9。DNA亲和沉淀试验(DAPA)

5′生物素化的双链寡核苷酸相应的野生型和突变序列预测POU2F1 TTC3-AS1设计结合位点和由Genescript(中国南京)。如前所述(执行防卫事业厅27)做了一些调整。短暂,化验中执行最终成交量为400毫升的缓冲区D(20毫米消息灵通的,10%的甘油,50 mM氯化钾,EDTA 0.2毫米,1.5毫米MgCl₂10毫米ZnCl₂,1毫米德勤,0.25% Triton x - 100;pH值7.9),通过混合4毫克的生物素化的双链31 WT寡核苷酸与20±30毫克的核提取物。混合是在冰上孵化了45分钟,然后添加到缓冲D与平衡streptavidin-coated磁层粒子(smp) (Promega)。混合物在室温下是孵化与连续搅拌2 h。smp使用磁站被捕获,和上层清液被没有令人不安的smp颗粒。与缓冲D粒子被洗了四次,最后获得的颗粒在2×resuspended SDS±页面加载缓冲和煮5分钟解开绑定蛋白的寡核苷酸。使用磁捕获smp站后,上层清液加载在SDS凝胶±页面,并进行免疫印迹分析。

2.10。染色质免疫沉淀反应试验(芯片)

POU2F1和启动子区域之间的直接交互TTC3-AS1证明使用芯片分析。试验使用麦格纳进行芯片工具包(微孔,贝德福德,妈,美国)。总之,SGC7901细胞被孵化与甲醛交联,甘氨酸用于终止反应。核DNA通过声波降解法分散到200 - 500个基点。染色质提取与抗体或免疫球蛋白对POU2F1孵化(微孔)。免疫沉淀反应后,DNA-protein-antibody复杂的分离,蛋白质被移除。使用中存在纯化的DNA进行了分析。输入组被用作免疫球蛋白组和阴性对照组和阳性对照组,分别。

2.11。异种移植增长分析

十二BALB / c裸小鼠(5 - 6周大,20 - 25 g)从实验动物的部门获得中南大学湘雅医院(长沙,中国)。老鼠被安置在一个无菌的环境标准饲养条件下。所有程序都是独立的伦理委员会批准的中南大学湘雅医院。小鼠麻醉,2×10⁶SGC7901细胞转染的慢病毒载体包含数控序列;POU2F1-OE或POU2F1-OE + TTC3-AS1-KD皮下注射进旁边的老鼠。异种移植后10天,肿瘤体积测量每3天。在25天,所有的老鼠都牺牲了,实体肿瘤切除测量体重和进一步分析。

2.12。免疫组织化学(包含IHC)分析

肿瘤组织是嵌入在石蜡,切成4μm幻灯片。FN1抗体和Ki67从细胞信号技术。包含IHC分析中描述之前的研究(28]。

2.13。Dual-Luciferase记者分析

荧光素酶记者向量,TTC3-AS1-wild类型(WT)和TTC3-AS1-mutant类型(MT),建立了利用PmirGLO (WI Promega,麦迪逊,美国)。我们预测的潜在POU2F1结合位点TTC3-AS1子地区通过JASPAR数据库(https://jaspar.genereg.net),和两个高分POU2F1结合位点定位在786 - 797个基点和1066 - 1077个基点(图标识1(一))。三个TTC3-AS1-MT向量构造是基于两个结合位点POU2F1 TTC3-AS1子地区的潜在目标。此外,两个POU2F1结合位点突变构建其它荧光素酶同时记者向量。三个突变POU2F1绑定网站使用一个无足轻重的人表达II快速生成诱变工具包(Vazyme、南京、江苏、中国)。SGC901细胞被播种到24-well盘子,cotransfection TTC3-AS1-WT或TTC3-AS1-MT向量POU2F1超表达质粒的细胞进行使用Lipofectamine™2000(表达载体,卡尔斯巴德,加州)。荧光素酶活性检测72 h后使用Dual-Luciferase cotransfection®记者分析系统(Promega, DLR™, E1960)。

2.14。统计分析

所有使用IBM SPSS统计分析软件(版本26.0;美国IBM SPSS Inc .,芝加哥,IL)。生存曲线生成使用kaplan meier方法使用logrank测试和评估。两组之间的差异进行了分析通过双尾学生的t以及或单向方差分析事后Dunnett紧随其后的测试。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。生物信息学分析

我们首先确定转移性肿瘤样本之间的差异表达基因(n= 21)和原发性肿瘤样本(n= 351)从HCMD-EXP00440 TCGA-STAD净分析。总共18953 mrna, 3210 lncRNAs, 2588 microrna进行了分析。结果表明,与原发肿瘤样本相比,有224个差异表达ncRNAs (lncRNAs和microrna)在转移性肿瘤样本,其中203调节和21个表达下调。我们进一步用GEPIA平台执行基因的交叉分析和预后分析TCGA-EXP00440数据库。如图2(一个)上面所提及的,TCGA-ncRNA-UP TCGA-STAD-derived 203调节基因在转移性肿瘤样本,与原发肿瘤样本。GEPIA-ncRNA指的摘要ncRNAs GC之间的差异表达肿瘤组织和邻近的正常组织以及与预后相关GEPIA GC病人的数据库。发现5 lncRNAs (CATIP-AS2, TTC3-AS1, LINC01993、LINC01564 LINC02015)是调节在各种类型的癌症包括GC(图2(一个))。

mRNA分析表明603 mRNA显著调节在转移性肿瘤样本,与原发肿瘤样本( ,图2 (b))。聚类分析进行识别差异表达mrna通过大卫数据库。结果表明,转录因子(TFs)与信号通路相关突出,包括11个具体TFs (POU5F1、CUX2 TBX19, POU2F1, PLAG1, ZFP57, LMX1A, MZF1, BACH1, ONECUT1,和IRF9),这意味着这些TFs参与GC肿瘤转移。11中特定的TFs (POU5F1、CUX2 TBX19, POU2F1, PLAG1, ZFP57, LMX1A, MZF1, BACH1, ONECUT1,和IRF9), 4 TFs (CUX2, POU2F1、PLAG1 ONECUT1)被确定在GC可以预测预后不良。接下来,4 TFs的表达式中检测出5 GC细胞系(MGC803, BGC823, MKN28、SGC7901和正常GES-1)。如图3,一般来说,POU2F1表达显著高于其他三个TFs的表达在GC细胞系。接下来,我们分析了11个TF基因是否有潜在的绑定地区的倡导者上述5 lncRNAs使用JASPAR数据库。我们发现POU2F1可能是绑定到启动子区域TTC3-AS1和LINC01564 JASPAR数据库。与此同时,没有结合位点,POU2F1潜在目标被发现的启动子区域里CATIP-AS2, LINC01993, LINC02015。此外,TTC3-AS1有更高的预测分数而LINC01564;因此,我们选择TTC3-AS1作进一步调查。

的预后价值POU2F1和lncRNA TTC3-AS1 GC患者评估了生物信息学分析。多元分析的整体存活率(OV),无病生存期(DFS)和无进展生存(PFS)认为POU2F1的高表达与操作系统,减少DFS, PFS的GC病人TCGA-STAD队列( , ,和 ,分别;图2 (c))。此外,GC的高表达患者lncRNA TTC3-AS1有不良预后的DFS(图2 (d))。有显著差异TTC3-AS1表达式之间的转移性和原发肿瘤样本(图2 (e))。

先前的研究已经表明,POU2F1起着至关重要的作用在促进肿瘤进展的几个(10,18,29日,30.]。确定的表达POU2F1 TTC3-AS1 GC, 10配对胃肿瘤组织和邻近正常组织被发现使用中存在和免疫印迹。如数据所示4(一)- - - - - -4 (c)的表达POU2F1和TTC3-AS1显著增加GC组织( ),相比之下,邻近的正常组织。此外,POU2F1的表达和TTC3-AS1发现五个GC细胞系(MGC803, BGC823, MKN28、SGC7901和正常GES-1)。结果表明,POU2F1和TTC3-AS1都显著调节在GC细胞系,与正常相比GES-1细胞(数字4 (d)- - - - - -4 (f))。在这些GC细胞系SGC7901表现出最高的表达POU2F1 TTC3-AS1和随后被用作模型函数分析。总之,这些结果表明POU2F1和TTC3-AS1高度表达,并在GC预测预后不良。

3.2。lncRNA TTC3-AS1提升细胞活力,入侵,对POU2F1和迁移,但没有影响

调查的功能lncRNA TTC3-AS1在GC进展,的亚细胞分布lncRNA TTC3-AS1细胞中由PCR决定。结果在图5(一个)表明lncRNA TTC3-AS1主要位于细胞质中,而且在细胞核,建议lncRNA TTC3-AS1可能参与基因转录后的调控。接下来,TTC3-AS1核(si-TTC3-AS1)和超表达质粒(TTC3-AS1-OE)转染成SGC7901细胞。在图所示的转染效率5 (b)与对照组相比,TTC3-AS1-OE TTC3-AS1表达增加到近3.8倍,si-TTC3-AS1 TTC3-AS1表达式下降近15%。细胞生存能力使用CCK-8试验(图检测5 (c)),这表明TTC3-AS1-OE转染显著提升的可行性SGC7901细胞( ),虽然si-TTC3-AS1产生相反的效果( )。此外,transwell入侵和划痕分析还表明,细胞入侵和迁移TTC3-AS1-OE组显著增加而减少si-TTC3-AS1组相比,数控(非特异性控制)组(数字5 (d)和5 (e);所有 )。此外,POU2F1 TTC3-AS1对表达的影响和EMT - (epithelial-mesenchymal过渡)相关蛋白质进行调查。如图5 (f),TTC3-AS1-OE显著降低E-cad水平和增加FN1水平与数控(正常控制)组相比,虽然si-TTC3-AS1(所有有相反的影响 )。然而,lncRNA TTC3-AS1没有影响POU2F1 mRNA和蛋白表达(数字5 (f)和5 (g))。总之,lncRNA TTC3-AS1 GC发挥了致癌作用,这不是POU2F1介导的。

3.3。POU2F1提升细胞活力、入侵和迁移和改进TTC3-AS1表达式

在GC POU2F1进展的作用进一步调查,与TTC3-AS1决心及其可能的交互。如图6(一),POU2F1-OE有效增加POU2F1的表达和POU2F1-KD减少SGC7901细胞的表达。函数分析表明POU2F1-OE大大促进了可行性,入侵和SGC7901细胞的迁移,而POU2F1-KD抑制这些活动(数据6 (b)- - - - - -6 (d))。同样,POU2F1 E-cad表达减少和改善FN1表达式(图6 (e))。然后发现TTC3-AS1使用中存在的表达;结果显示,显著提高POU2F1-OE组和减少POU2F1-KD组,与NC组(相比 ;图6 (f))。总的来说,POU2F1充当GC的致癌基因,和功能可能是由lncRNA TTC3-AS1。

3.4。TTC3-AS1 POU2F1直接绑定到子地区

基于目前的证据表明,转录激活POU2F1调节TTC3-AS1表达式,和芯片和DAPA化验进行确定与TTC3-AS1 POU2F1直接互动。生物信息学分析显示,有两个高分POU2F1结合位点的上游TTC3-AS1启动子(图1(一))。芯片化验显示浓缩anti-POU2F1 TTC3-AS1启动子区域的集团,与免疫球蛋白g相比对照组(图1 (b))。此外,过度POU2F1增加TTC3-AS1启动子区域的浓缩与NC组(图1 (b))。DAPA化验,结合免疫印迹,建议两个野生型(WT) TTC3-AS1启动子序列可以有效地捕获POU2F1蛋白质,而几乎没有POU2F1浓缩的变异(MT)序列组(图1 (c))。dual-luciferase记者试验进行确认是否POU2F1直接绑定到TTC3-AS1启动子和确定POU2F1的结合位点在启动子区域。首先,引入POU2F1显著提高荧光素酶活性与TTC3-AS1-WT集团( )。当两个潜在的结合位点的突变,引入POU2F1仍然提高了荧光素酶活性明显比TTC3-AS1-WT集团(包括 ),同时,除非两个潜在的结合位点突变( )。其次,与POU2F1 + TTC3-AS1-WT组相比,荧光素酶的活动POU2F1 + TTC3-AS1-MT1(786 - 797个基点)组显著降低( ),在荧光素酶的活动POU2F1 + TTC3-AS1-MT2(1066 - 1077个基点)组没有显著差异( );两个潜在的结合位点的突变也减少了荧光素酶活动( ),表明POU2F1喜欢目标网站定位在786 - 797 bp TTC3-AS1启动子区域。总之,POU2F1可以直接绑定到TTC3-AS1促进剂,促进其转录激活。

3.5。lncRNA TTC3-AS1在GC细胞介导POU2F1的致癌作用

救援SGC7901细胞实验进行确认lncRNA TTC3-AS1-mediated致癌POU2F1的函数。SGC7901细胞被分为三组:(1)数控;(2)POU2F1-OE;和(3)POU2F1-OE + TTC3-AS1-KD。结果显示,TTC3-AS1表达显著增强的超表达POU2F1 POU2F1-OE + TTC3-AS1-KD但拒绝低水平组(图7(a))。POU2F1 POU2F1表达过度后显著升高( ),和cotransfection TTC3-AS1-KD对高程(图没有影响7(b))。函数分析表明POU2F1超表达促进了细胞生存能力,迁移,和入侵和激活EMT-related通路,包括减少E-cad水平和增加FN1水平。相比之下,cotransfection TTC3-AS1-KD和POU2F1-OE中和protumor POU2F1-OE(数据的影响7(c) -7(g))。立刻,lncRNA TTC3-AS1在GC细胞介导POU2F1的致癌作用。

3.6。POU2F1提升GC体内肿瘤的生长通过lncRNA TTC3-AS1

为了研究POU2F1 / TTC3-AS1 GC的肿瘤生长作用,转染SGC7901细胞是皮下注入左侧翼的男性无胸腺的BALB / c裸小鼠,GC肿瘤发生是评估。老鼠被分为三组:(1)数控;(2)POU2F1-OE;和(3)POU2F1-OE + TTC3-AS1-KD。结果表明,GC肿瘤生长被POU2F1-OE显著增强,与NC组相比,虽然cotransfection TTC3-AS1-KD GC肿瘤生长抑制(数字8(一个)和8 (b))。包含IHC检测表明POU2F1-OE提升Ki67的积极表达和FN1与NC组相比,虽然cotransfection TTC3-AS1-KD逆转的影响(数据8 (c)和8 (d))。总之,POU2F1 / TTC3-AS1轴在GC促进肿瘤的生长。

4所示。讨论

GC是全世界最常诊断的癌症之一,每年造成无数的人类死亡。近年来,科学家们已经努力探索GC的机制涉及肿瘤发生和发展,以及基因表达异常在GC发病机理(31日- - - - - -33]。在目前的研究中,通过生物信息学分析HCMD-EXP00440数据库,5 lncRNAs (CATIP-AS2, TTC3-AS1, LINC01993、LINC01564 LINC02015)和11个具体TFs (POU5F1、CUX2 TBX19, POU2F1, PLAG1, ZFP57, LMX1A, MZF1, BACH1, ONECUT1,和IRF9)被确定在转移性肿瘤样本显著调节(n= 21),相比之下,原发肿瘤样本(n= 351)。结果暗示,这些差异表达lncRNAs或信使rna可能在GC肿瘤转移起着至关重要的作用。然后,11 TF基因是否有潜在的结合区域的推动者5 lncRNAs决心使用JASPAR数据库。发现POU2F1潜在目标TTC3-AS1的启动子区域。POU2F1普是一个重要的成员(Pit-1 Oct1/2, unc - 86) homeodomain 13 POU TFs,组成的家庭和普POU2F1是唯一的家人蛋白质,广泛表达(14]。公共数据库的分析表明,POU2F1表现出更高的表达在肾,卵巢,和食道癌症而降低大脑肿瘤中表达,膀胱癌,脂肪肉瘤,相比之下,nc。最近的研究表明,POU2F1 GC中高度表达的患者(34- - - - - -36]。在这项研究中,我们还发现,POU2F1及其潜在目标TTC3-AS1显著调节GC肿瘤组织中,与正常组织相比。生存分析显示,高表达的POU5F1较短有关操作系统,DFS,和PFS, TTC3-AS1预测贫困DFS GC的病人。我们的研究结果表明,POU5F1 / TTC3-AS1可能在GC发展起到至关重要的作用。

增加研究显示POU2F1,多功能转录因子,促进肿瘤发生和进展通过调制的肿瘤特异性基因的表达。例如,在头部和颈部癌症,POU2F1可以绑定HOXD10的促进者和HOXD11激活转录,从而促进肿瘤进展(17]。POU2F1促进经济增长和转移的肝细胞癌(HCC)通过FAT1通路(10]。关于GC,肖et al。34)报道,POU2F1直接绑定到促进肿瘤抑制mir - 4490和抑制其转录促进GC发展和转移。此外,phosphorylation-activated AKT上调POU2F1的表达,从而提高GC ECD (ecdysoneless同系物)的表达(35]。披露,POU2F1提升EMT针对TWIST1和弹头,这是一群TFs诱导EMT在癌症细胞,因此促进肿瘤细胞的浸润和转移。细胞增殖和迁移以及改善了EMT POU2F1超表达在结直肠癌(CRC),并由POU2F1击倒却取得了相反的效果。此外,Spp1 / Opn, POU2F1目标基因,编码据报道骨桥蛋白高表达在一些涉及GC的癌症。在乳腺癌中,骨桥蛋白被发现促进肿瘤转移与发展(14]。

另一方面,一些研究发现POU2F1受上游信号分子,尤其是lncRNA / microrna的轴。例如,lncRNA CRNDE / mir - 539 - 5 - p促进肝癌(肝癌)进展通过抑制POU2F1 [37]。等ncRNA SND1-IT1 / microrna - 665, TUG1 / miR-9-5p, NEAT1 / miR-9-5p也扮演protumor角色通过监管POU2F1表达式(16,38,39]。然而,目前还没有研究探索POU2F1是否参与lncRNA表达的肿瘤。在这里,我们发现POU2F1 GC中高度表达的患者和促进细胞生存能力,入侵,迁移体外,体内肿瘤的生长。此外,我们发现一个lncRNA TTC3-AS1,被POU2F1转录激活。功能分析表明lncRNA TTC3-AS1介导的protumor功能POU2F1 GC。

lncRNAs已经证明在GC的发生和发展起着至关重要的作用。例如,lncRNA-RMRP产生致癌作用作为mir - 206海绵和作为一种新型生物标志物在GC [40]。据报道,在另一项研究中,lncRNA ANCR促进GC的入侵和迁移通过调节FoxO1表达抑制巨噬细胞M1极化(41]。然而,仍有许多功能lncRNAs身份不明的肿瘤。在这里,我们找到了一个致癌lncRNA TTC3-AS1 GC。到目前为止,还没有研究。我们的研究结果表明,TTC3-AS1调节在GC患者的肿瘤标本,并促进了可行性,入侵,GC细胞的迁移。此外,我们表明POU2F1可以直接绑定到TTC3-AS1并激活其转录的启动子区域。救援实验表明TTC3-AS1击倒可以扭转protumor POU2F1在GC细胞的影响以及体内肿瘤的生长。

5。结论

总之,这项研究表明POU2F1提升GC细胞生存能力,入侵和迁移以及通过直接转录激活TTC3-AS1体内肿瘤的生长。POU2F1在GC / TTC3-AS1调节肿瘤组织并预测GC患者的不良预后。这项研究提供了两个潜在的预后标志物和治疗靶点在GC。

数据可用性

生成的数据集/分析研究可从相应的作者在合理的请求。

信息披露

王Jixu和Ke肖是第一作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

王Jixu和柯小了同样的研究。

确认

这项研究是由Xiangnan大学高层次人才科研启动资金(没有。2020 gcc26),科学与健康联合湖南省科学基金会(没有计划。2018 jj6074),湖南省重点实验室医学成像的人工智能。

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