肿瘤组织的预后意义NeuGcGM3神经节苷脂表达式在接受Racotumomab免疫治疗的病人中

文摘

的表达N-glycolyl GM3 (NeuGcGM3)神经节苷脂中检测出患者的肿瘤标本Racotumomab anti-idiotype疫苗维持治疗和预后意义作为生物标志物研究。没有观察到显著关联整体存活率之间的多变量分析和组织NeuGcGM3包含IHC水平。尽管数值有差异支持的包含IHC更好的预后,这并没有达到统计力量。然而,Racotumomab剂量之间有很强的相关性和总生存期(OS)。平均超过10 Racotumomab患者应用程序的操作系统显著长于注射病人不到10(70.7个月和31.1个月, )。我们建议,不管染色强度,存在NeuGcGM3病人组织中可能的指标Racotumomab治疗中获益。

1。介绍

众多分子被认为是癌症免疫疗法的目标,因为他们的表达水平对肿瘤细胞和免疫原性的能力。其中,一个神经节苷脂GM3 (Neu5Gc)礼物脊椎动物细胞的质膜的外表面作为肿瘤特异抗原吸引了最多的关注,成为癌症免疫治疗有吸引力的目标。

NeuGc通常并不是在人类细胞中表达了由于缺乏酶的胞嘧啶核苷monophospho -N-acetylneuraminic酸羟化酶,负责其合成。异常积累NeuGc已被证明在许多人类恶性肿瘤细胞膜。特别是,神经节苷脂的异常表达NeuGcGM3在某些人类的肿瘤,如肺癌,乳腺癌,神经母细胞瘤(Scursoni et al . (Dev Immunol, 2011)),胰腺癌,和胃肠道肿瘤,这个分子免疫治疗的一个有吸引力的目标。最常见的人类唾液酸N乙酰基(NeuAc)和N-glycolyl (NeuGc neuraminic酸(图)1)[1- - - - - -6]。

有许多假说解释NeuGcGM3在人类恶性肿瘤的存在,从改变饮食习惯到修改后的恶性肿瘤细胞代谢基因突变的结果,由于肿瘤的低氧条件7]。

殷等人在他们的研究表明,低氧条件导致唾液酸转运体基因超表达sialin和人类癌症细胞中诱导癌症相关的神经节甘脂8]。

鉴于其肿瘤相关表达式GM3 (Neu5Gc)针对抗体已经被开发出来,包括鼠标14 f7单克隆抗体及其人性化变体14 f7ht [9- - - - - -11]。

Anti-idiotypic抗体功能类似于抗原本身在自己的个体基因型和Racotumomab这种单克隆抗体,模仿NeuGcGM3和触发免疫反应在各种肿瘤(12- - - - - -15]。

生产Racotumomab anti-idiotype单克隆抗体包括免疫Balb / c小鼠NeuGcGM3神经节苷脂,紧随其后的是隔离IgM单克隆抗体(有所)。这有所抗体再次用于小鼠产生IgG1单克隆抗体(Ab2),命名为Racotumomab具有高亲和力对有所个体基因型。Racotumomab通过模仿的神经节苷脂NeuGcGM3诱发特定的细胞和体液免疫反应对实际的抗原(图2)。

Segatori等人证明anti-NeuGcGM3 Abs Racotumomab疫苗接种能引起调解(ADCC)抗原依赖抗体的细胞毒性反应与非小细胞肺癌患者的肿瘤细胞(16]。

患者接种Racotumomab NeuGcGM3产生抗体。埃尔南德斯等人表明,病人的血清免疫对肿瘤细胞有细胞毒性影响L1210文化表达NeuGcGM3 [17]。

Racotumomab目前在古巴注册和阿根廷在非小细胞肺癌(NSCLC)作为二线治疗。在多中心双盲随机安慰剂对照II / III期临床试验,涉及176名晚期非小细胞肺癌的患者,阿方索等人证明了一个整体的生存利益,一年几乎翻了一番(22.5%比40.2%)和2年增长了两倍(6.7%比18.4%)支持研究小组(18]。

NeuGcGM3表达式在非小细胞肺癌的预后作用是有争议的。布兰科等人评估NeuGcGM3表达式之间的关系强度和总生存期的晚期NSCLC患者使用14 f7马伯,得出的结论是,NeuGcGM3表达式与更高的病人扩散指数和糟糕的操作系统。在他们的研究中,非小细胞肺癌患者的5年存活率NeuGcGM3表达水平较高的3到4倍低于水平降低(3]。

在另一项研究中,一组来自日本确认的高表达NeuGc神经节甘脂使用单克隆抗体GMR8在非小细胞肺癌,这是特定于神经节甘脂NeuGcα2、3 gal-terminal结构和第一次证明NeuGcGM3表达水平之间存在反比关系和无进展生存19]。

也有其他的研究声称高组织NeuGcGM3水平代表一个更激进的表型,如表皮生长因子受体和EGF表达(19,20.]。

1.1。这项研究的目的

虽然缺乏文献报道表明,高组织NeuGcGM3水平可能代表一个更激进的肿瘤,预后的影响这是不知道在anti-NeuGcGM3患者治疗。在这项研究中,我们调查了组织NeuGcGM3的预后意义的表达水平与Racotumomab开关维持治疗的病人。

2。材料和方法

这项研究是由非侵入性临床研究伦理委员会认证伊斯坦布尔Medipol大学,注册号10840098 - 604.01.01 e.44203。表达NeuGcGM3肿瘤标本中检测出25岁以上的患者,使用14 f7单克隆抗体(14 f7 Mab)免疫组织化学(包含IHC)测试和评分为0,1 + 2 + 3 +根据污渍的强度。包含IHC染色也在10良性组织标本进行控制。从老鼠获得14 f7单克隆抗体免疫纯化神经节甘脂和制造商的研究所提供的分子免疫学中心(CIM),古巴哈瓦那。

检测肿瘤组织的神经节苷脂是由包含IHC底漆抗体:14 f7马伯20 mcgr /毫升在使用通用和链霉亲和素生物素化的联系合商业工具。后来,酶活性被显示为一个diaminobenzidine (DAB)。所有样本和迈耶的苏木精复染色。免疫反应性的样本被证明为棕色染色。5微米厚的部分组织(石蜡包埋块)被用来观察NeuGcGM3的表达。

包含IHC使用14 f7马伯评估根据阳性细胞的百分比(0 - 100)和评分为0,1 +(弱),2 +(中度),或3 +(强)根据反应的强度。分数乘法计算每个样本的反应强度和阳性细胞的品位。分类的得分略修改布兰科等人使用的方法如下:0(总分0);包含IHC 1 +(总分1 - 100);包含IHC 2 +(总分101 - 150);和包含IHC 3 +(总分> 150)3,15]。

2.1。Racotumomab管理

给药途径是皮内注射;每剂分为四个不同的解剖网站内侧表面的手臂,大腿或腹部。疫苗接种程序由两个阶段组成。在感应阶段,5疫苗接种2周,其次是维护阶段,当每月10进行了疫苗接种。

3所示。结果

所有48例Racotumomab维持治疗化疗后曾至少部分缓解。共有48个患者,42有肺癌(40 NSCLC, 2 SCLC), 6有各种各样的癌症(乳腺癌、胰腺癌等)40非小细胞肺癌(NSCLC)患者中,12例是在第三阶段,28日在第四阶段时的诊断。19腺癌和鳞状细胞癌21日确认。没有一个像EGFR突变患者敏感,碱性,ROS-1。也有患者2小细胞肺癌(SCLC)。男女比例为3.36(37/11),平均年龄为63(31 - 85)(表1)。

NeuGcGM3包含IHC 25的48个患者的石蜡块可用的和足够的测试。9患者3 +强,温和的2 + 12例、4患者弱1 + NeuGcGM3染色强度。没有一个良性的组织,控制,显示出积极性。积极的包含IHC染色NeuGcGM3与非小细胞肺癌患者的肿瘤组织和良性的控制染色组织使用14 f7马伯描绘在图3。

平均总生存期(OS)时间为后续包含IHC组包含IHC 1 + 88.1个月,包含IHC 2 + 51.6个月和51.7个月包含IHC 3 +。意味着生存的患者死亡是包含IHC 3 + 22.6个月和27.9个月,包含IHC + 2,而在病人生活,意味着操作系统包含IHC 3 + 51.1个月,而在包含IHC 2 + 57.8个月和74.3个月,包含IHC 1 +病人,连续。

在多变量Cox回归模型中,所有的变量在表2包含在模型识别生存的独立预测因子。Racotumomab周期的分析表明,总数在治疗过程中使用统计与更好的整体存活率(HR = 0.750, 95% CI 0.601 - -0.936, ),在单变量分析还发现,如图4。,在调整了年龄、性别、包含IHC,重要的和治疗协议,减少死亡率是归因于Racotumomab的每个剂量。

总数Racotumomab周期中使用疗程被分为两组为≤10 (n= 23)> 10 (n= 25),发现超过10与更好的生存周期显著相关( )(图4)。

包含IHC组考虑时,2的包含IHC分数患者的死亡风险高2.6倍的患者相比包含IHC分数为1。3的包含IHC患者得分也高1.3倍患者的死亡风险比包含IHC分数为1。由于小样本大小,发现关于IHC组没有发现显著(表2)。

单变量(表3)和多元(表2生存分析进行了比较总生存期(OS)率。kaplan meier的生存曲线生成方法和生存率较被用来比较生存曲线为单变量生存分析。多元分析与Cox比例风险回归确定操作系统的独立危险因素。

平均随访时间为34.2个月,从10.1到113.7个月。经过5年的随访,27/48(56.25%)的患者死亡和11/48(22.9%)(图诊断后存活5年以上5)。

总体生存率在随访期间被发现包含IHC患者得分高的1,意味着总生存期为88.1个月(95%置信区间:43.9—-132.2)。当患者2和3被认为包含IHC分数,平均总生存时间大约是相同的(51.7个月(95%置信区间CI: 35.5 - -67.9)和51.6个月(95%置信区间:38.14—-64.97),分别)。然而,样本容量有限画任何包含IHC组之间统计上的显著差异(图6)。

4所示。讨论

Pilco-Jeneto和同事评估NeuGcGM3在五十石蜡包埋标本的表达患者诊断为肉瘤和调查的关系表达式与患者临床病理特性和总生存期。他们得出的结论是,NeuGcGM3的表达式是一个总体存活率显著不良预后因素(19]。

布兰科等人调查NeuGcGM3之间的关系表达式,表皮生长因子受体(EGFR)和表皮生长因子(EGF)和晚期NSCLC患者的总体生存。高NeuGcGM3表达式与贫穷相关操作系统的病人。此外,肿瘤的双重和三重积极性与表皮生长因子受体和EGF识别更激进的生物行为在两个单变量( )和多变量分析( )(3]。

在他们的工作中,布兰科等人评估使用14 f7 NeuGcGM3马伯的表达,提出了一个包含IHC分数称为h值。作者分类染色强度为0(0),1(1到100),2 (101 - 200),3 (> 200)。然而,随后,他们将h值分成2组低表达(分数< 150)和高表达(分数> 150),而在我们的研究中,我们决定使用一种稍微不同的计分系统像0(0),1(1 - 100),2(101 - 150)和3 (> 150)。这一修改提出了我们的病理部门由于缺乏> 200染色。

NeuGcGM3能够绑定到细胞外领域的表皮生长因子受体(EGFR)。这个绑定可能引发表皮生长因子受体系统激活生长因子配体介导的。激活表皮生长因子的过表达NeuGcGM3构成更激进immunophenotype [3]。在我们的研究中,我们计划包括组织EGFR水平和血清EGF水平除了组织NeuGcGM3表达式,为了更好地理解anti-EGF + anti-NeuGcGM3组合策略的价值。

我们所知,没有研究文献中,评估的预测和预后价值NeuGcGM3表达在肿瘤组织中anti-NeuGcGM3抗体治疗。在我们的研究中,我们展示了一个强大的关系Racotumomab剂量周期和总生存期的患者。意味着病人的生存收到超过10皮内注射是明显高于病人注射了不到10(70.7个月和31.1个月, )。

在多变量Cox回归模型中,所有的变量都包含在模型识别生存的独立预测因子(表2)。Racotumomab周期的分析表明,总数在治疗过程中使用统计与更好的整体存活率(HR = 0.750, 95% CI 0.601 - -0.936, )。这一发现也证实了单变量分析;,在调整了年龄、性别、包含IHC,和治疗协议,减少25%的死亡率是归因于Racotumomab累积剂量(log-rank值< 0.001)。

这些发现可能比得上her - 2的表达在乳腺癌。her - 2被认为是糟糕的预后的生物标志物,疾病进展的一个信使anti-HER2策略之前被发明了。然而,今天,最好的结果是实现亚型。

NeuGcGM3抗原的存在有利于Racotumomab因为其抗肿瘤活性的治疗是由免疫反应针对NeuGcGM3抗原。因此,我们可以认为,不管染色的强度,组织的存在NeuGcGM3受益Racotumomab治疗的患者是一个指标。

我们的研究没有任何明显的联系组织抗原染色强度和整体生存,可能由于小数量的病人进行了分析。然而,这也可能是Racotumomab补偿效应的结果,平衡攻击性生物表型和anti-NeuGcGM3效果。

在先前的研究中,我们调查的预后意义血清anti-NeuGcGM3细胞系使用超免疫抗体和细胞毒性测试病人的血清Racotumomab患者的治疗。在这项研究中,我们得出的结论是,细胞毒性测试是一个很好的工具作为反应的生物标记Racotumomab免疫疗法,也更好的预后相关的阳性患者。然而,在相同的研究中,组织NeuGcGM3水平并未给我们有价值的信息的预测响应或预后虽然病人的数量是有限的21]。

5。结论

没有观察到显著关联整体存活率之间的多变量分析和组织NeuGcM3包含IHC水平。尽管数值有差异支持的包含IHC更好的预后,这并没有达到统计力量。

然而,看着我们的病人的总体存活曲线,我们得出结论,无论染色强度,NeuGcGM3组织的好处Racotumomab治疗的患者是一个指标。我们相信虽然肿瘤组织高表达的NeuGcGM3通常被认为是一个贫穷的预后标志物,anti-NeuGcGM3治疗Racotumomab覆盖这一现象。

数据可用性

这份出版物中提供的数据可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称他们没有利益冲突有关的出版。

确认

作者要感谢助理教授欧雅Kalaycıoğlu博士对生物统计学的帮助。作者也感谢生物学家Arzu Baykaldı追求的对她出色的工作之间的协调中心。

引用

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