Galectin-3调节肿瘤粘多糖的表达,增加乳腺癌的转移潜能

文摘

Galectin-3 (Gal-3)是一种多功能β-galactoside-binding凝集素,一旦合成表达在细胞核,细胞质,细胞表面和细胞外环境。Gal-3扮演着一个重要的角色在乳腺癌肿瘤由于其能够促进信息之间的相互作用和cell-extracellular矩阵(ECM)元素,增加肿瘤生存和转移性传播。不过,Gal-3干扰肿瘤细胞迁移的机制和转移的形成是复杂的,不能完全理解。在这里,我们表明,Gal-3击倒增加4 t1小鼠乳腺癌细胞的迁移能力在体外。使用4 t1乳腺癌原位自发转移小鼠模型,我们表明,4 t1-derived肿瘤明显更大的Gal-3(争夺)相比,Gal-3击倒4 t1-derived肿瘤。然而,Gal-3击倒4 t1细胞数量在骨髓相比,争夺4 t1细胞。最后,我们在这里报道的内容减少细胞表面syndecan-1和硫酸软骨素蛋白聚糖的含量的增加如versican Gal-3击倒4 t1细胞在体外和在活的有机体内。总体而言,我们的研究结果证明在乳腺癌发展差别Gal-3对这些基因的调节细胞相关和肿瘤微环境葡糖氨基葡聚糖(笑话)/蛋白聚糖(PG),从而增强肿瘤细胞的转移潜能。

1。介绍

乳腺癌是女性最常见的癌症,就一直被认为是全球一个主要公共卫生问题。转移是乳腺癌死亡率的主要原因,和几个一直在努力理解肿瘤细胞浸润周围组织的机制和遥远的器官1]。肿瘤细胞之间的相互作用与周围的肿瘤微环境最重要的是影响癌症恶化。胶原蛋白、层粘连蛋白、纤连蛋白、粘多糖(笑话),和蛋白聚糖(后卫)组件的多反应对肿瘤细胞肿瘤和提供物理屏障(2]。笑话,特别是发挥关键作用在肿瘤进展调节肿瘤细胞的粘附和迁移特性,从而调节其“能动的表现型”[3- - - - - -7]。GAG分子syndecan和versican已报告增加粘附和侵袭性原发性肿瘤和被认为是预测标记(8,9]。

Galectin-3 (Gal-3)β-galactoside-binding蛋白质结合一系列glycan-containing糖蛋白表达在细胞表面和细胞外基质。在细胞外微环境,Gal-3能够聚合和交联多糖配体导致以格状结构的形成产生影响在一些生物功能(10,11]。Galectin-3报道与chondroitin-4-sulfate和chondroitin-6-sulfate蛋白聚糖(CSPGs) [12- - - - - -14];然而,这种交互时更有效的笑料硫酸。例如,它已被证明,在人类前列腺细胞,与chondroitin-4-sulfate Galectin-3互动(C4S)减少的减少活动arylsulfatase B (ARSB),一种酶,这种酶去除4-sulfate组从nonreducing chondroitin-4-sulfate年底(C4S)或硫酸dermatan (DS)。Gal-3当时可用与转录因子的一个复杂的交互AP-1(激活蛋白1)和sp 1(特异性蛋白1)网站versican启动子表达增加(15]。在另一份报告,Gal-3沉默在结肠上皮细胞显示减少的转录活动AP-1和sp 115- - - - - -20.]。此外,减少ARSB的表达与人类黑色素瘤细胞的侵袭性的增加减少Gal-3绑定C4S [21]。因此,Gal-3与糖基化的组件之间的相互作用的肿瘤微环境,如笑话,可能形成一个物理和功能支架在癌症生物学(一个重要的角色14,22]。事实上,硫酸的增加笑料在肿瘤进展可以增加Gal-3的protumoral作用在肿瘤细胞的细胞核15]。

我们之前的研究已经表明,原发性乳房肿瘤是更积极的和有一个更大的潜在转移到骨髓,当注入皮下注射Galectin-3淘汰赛(Lgals3^−−/)的老鼠23]。这些数据表明,Gal-3起着核心作用,至少在某种程度上,组织的结构组织作为物理屏障控制细胞传播。实际上,减少Gal-3通常是观察到的表达在乳腺癌的进展,而细胞在肿瘤血管栓塞Gal-3呈现高水平,这表明Gal-3维持肿瘤细胞之间的凝聚力,直到他们找到一个肥沃的土壤,建立未来的种子(转移性21,24- - - - - -26]。尽管Gal-3的角色的维护由乳腺癌细胞致瘤的表型就得以证实[27),它的作用在乳腺癌的肿瘤生物学进展和转移仍然是有争议的。

肿瘤侵犯的初始步骤涉及肿瘤细胞与细胞外基质结合。Gal-3以来在癌症生物学广泛的行动,通过细胞内和细胞外的机制,在这项研究中,我们旨在探索Gal-3的微分表达式如何在肿瘤细胞和其周围的肿瘤微环境影响肿瘤浸润和转移。期间我们发现Gal-3表达降低乳腺癌的进展增加的转移潜力4 t1小鼠乳腺癌细胞的骨髓。沉默的增加转移性潜力Gal-3乳腺癌细胞被发现与整体减少肿瘤相关内容的笑料,但增强的硫酸软骨素A和C, versican,基质金属蛋白酶9 (MMP9)表达式。这些数据是4 t1细胞生长在Lgal3时突出显示^−−/老鼠证明微环境Gal-3进一步作用控制笑料。我们的研究结果表明,在差别Galectin-3对这些肿瘤癌症恶化过程中,入侵,并进一步转移本质上是与ECM重塑,这有利于Gal-3-mediated分离的肿瘤细胞通过调节主站点笑料。

2。方法

2.1。动物

女性Lgals3^{+ / +}和Lgals3^−−/Balb / c [28]老鼠从动物设施获得核能研究所(金额)。所有实验都是在遵守有关法律和伦理委员会批准的动物使用里约热内卢联邦大学(注册号:DAHEICB069)和圣保罗的核能源研究所(注册号:203/17)。

2.2。乳腺癌细胞系

4 t1乳腺癌细胞系是阿德里亚娜博士捐赠Bonomo (FIOCRUZ Oswaldo Cruz研究所),里约热内卢,巴西,总是保持在RPMI补充10%的胎牛血清。融合性的细胞单层亚文化每3天,不超过五个段落。

2.3。生成和克隆Galectin-3击倒4 t1细胞克隆

稳定的shRNA 4 t1细胞针对Gal-3 (TRCN0000029305σ)或负控制(SHC016σ)cotransfection 30后生成μ用15克shRNA-containing质粒μg pPAX2和5μ克pMDG。2(Addgene) into HEK293t packaging cell line using the CaCl₂方法。病毒上清液回收,产生的转导细胞被感染的shRNA慢病毒粒子莫伊= 2(多种传染性单位)。第二天,细胞被替换为新的媒介,和一天后,细胞被选1μ克/毫升的嘌呤霉素为1周。病毒转导后4 t1-scramble和4 t1-shrna-gal-3细胞克隆的使用极限稀释法。

2.4。在体外伤口愈合实验

4 t1-scramble或4 t1-shrna-gal-3细胞被播种在6-well盘子汇合的单层生长。然后,无菌20 - 200μL吸管尖端垂直划痕一行举行在每个。分离的细胞被洗了1毫升的PBS和2毫升新鲜培养基添加之后,培养48 h。抓关闭后被监控和成像0 h, 24小时和48小时。细胞迁移率(像素/分钟)被确定为斜率线性回归的细胞的数量在划痕区域。数据分析使用GraphPad Prism 5.0版本,圣地亚哥,加利福尼亚州。此外,在零,抓挠后24和48小时,细胞与甲醇和固定细胞沾一个anti - ki - 67抗体(向量),检测与二次生物素化的anti-rabbit, ExtrAvidin-Peroxidase(σ)和显示与轻拍(DAKO)。

2.5。西方墨点法

4 t1-scramble和4 t1-shrna-gal-3克隆细胞细胞溶解在里帕缓冲区,和50 ug的蛋白质分离了SDS page(表达载体)。内容被转移到PVDF膜(表达载体),孵化与主anti-Gal-3抗体(M3/38;写明ATCC、美国)和显示与二级anti-rat抗体与过氧化物酶共轭(合)。与化学发光检测做了ECL试剂(通用电气医疗集团)和图像获得使用ImageQuant(通用电气医疗集团)。β肌动蛋白被用作控制。

2.6。RNA提取、逆转录和定量PCR

总RNA从4 t1-scramble和4 t1-shrna-gal-3细胞和肿瘤主要是孤立使用Tri-Reagent(σ)根据制造商的指示。从1互补DNA合成(互补)μg总RNA使用高容量的互补脱氧核糖核酸RT工具包(应用生物系统公司),根据制造商的协议。定量PCR分析进行了一式三份使用电力SYBR绿色主人混合(应用生物系统公司)。相对量化使用ΔΔCt方法,向正常化β肌动蛋白基因的表达。鼠标的引物序列β肌动蛋白,Galectin-3 (Gal-3) syndecan-1 (Sdc1) N-acetyl-galactosaminyltransferase 1 (CSGalNAcT-1),软骨素聚合因素/软骨素合酶2 (Chpf) versican, arylsulfatase B (ARSB)和基质金属蛋白酶9 (MMP9)中可以找到表1。

2.7。流式细胞术

1×10⁶4 t1-scramble和4 t1-shrna-gal-3细胞最初孵化与Fc阻滞剂抗体(克隆2.4 g2) 10分钟,然后用anti-Gal-3单克隆抗体(M3/38;美国写明ATCC) 20分钟。这段时间后,细胞被洗PBS和二级anti-rat IgG-FITC(σ)添加到细胞为20分钟。细胞周期分析根据Vindelov协议(29日]。4 t1-scramble和4 t1-shrna-gal-3细胞(1×10⁶500年)resuspendedμl propidium碘溶液(Triton x - 100年PBS, 0.1%, 0.1%的核糖核酸酶,50μg / ml propidium碘;西格玛奥德里奇,美国)。样本获得使用FACScalibur流式细胞分析仪(美国BD生物科学)在细胞探索和分析软件。

2.8。实验在活的有机体内分析

10⁵4 t1-scramble (SC)或4 t1-shrna-gal-3 (SH)细胞接种Balb / c Lgals3第四乳腺脂肪垫^{+ / +}(WT)或Lgals3^−−/(KO)雌性老鼠。肿瘤体积测量测厚计三次一个星期。为了准确计算肿瘤体积,由于乳腺肿瘤似乎承担了扁球面几何,我们使用以下公式:V= (W(2)×l)/ 2”,“V“是肿瘤体积,W“肿瘤的宽度,l”是肿瘤长度,根据Faustino-Rocha et al。30.]。原位注射(p.o.i) 28天后,老鼠牺牲,肿瘤切除的信使rna提取和免疫组织化学分析。每组由五个老鼠,他们每组中使用两个独立的实验。

2.9。粘多糖的检测4 t1-scramble和4 t1-shrna-gal-3细胞和4 t1-derived肿瘤

4 t1-scramble和4 t1-shrna-gal-3细胞培养在24-glass底部板,,融合达到时,细胞被固定为4% PFA 10分钟。p.o.i 28天。,the primary tumors were collected, fixed in 4% PFA for 24 hours, and paraffin-embedded and slices of 5 μm。细胞和组织都使用1%阿尔新蓝染色8 gx(1%的醋酸)30分钟根据王et al。31日]。对比染色使用丽春花执行1%的饱和水溶液三硝基酚和醋酸酒精(1%)2分钟。

2.10。检测Syndecan-1和硫酸软骨素的4 t1-scramble和4在初选4 t1-derived t1-shrna-gal-3细胞和肿瘤

之前细胞生长在一个玻璃底部,片5μ原发性肿瘤得到如上所述。syndecan-1的检测样本孵化与主单克隆抗体(anti-CD138)使用检测“鼠标鼠标”工具包(Histofine)。硫酸软骨素的检测中,我们使用一个特定的单克隆抗体(Abcam-ab11570)反应特别chondroitin-4-sulfate (C4S)和chondroitin-6-sulfate (c6),而不是与chondroitin-2-sulfate(硫酸dermatan)。使用软件的显微照片得到Axioplan®。染色是量化的软件TMARKER®,据Schuffler et al。32]。

2.11。检测4 t1-scramble和4 t1-shrna-gal-3髂骨骨髓细胞

髂骨骨髓样本收集的女性Lgals3 Balb / c^{+ / +}和Lgals3^−−/先前接种4 t1-scramble和4 t1-shrna-gal-3细胞,如前所述[23)和PFA 24小时固定在4%。这一时期后,样品在14天在EDTA脱钙20%和嵌入在石蜡。双染色中执行髂骨骨髓样本细胞增殖核抗原(anti-PCNA DAKO)和cytokeratin-19 (anti-CK-19 Abcam)是使用一个标准的免疫组织化学协议执行,在增殖细胞核可视化与3、3′-diaminobenzidine(轻拍;春天生物科学)染色而cytokeratin-19与nitro-blue可视化四唑氯(电视台)和5-bromo-4-chloro-3′-indolyphosphate p-toluidine盐(BCIP),根据席尔瓦多斯桑托斯et al。33]。每组三种动物被用于两个独立的实验。量化的阳性细胞每节在5个不同的领域。

2.12。统计分析

统计测试是使用图基的多重比较测试完成的(t以及)和意义阈值是固定的α= 0.05。值≤0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。修改差别Galectin-3对这些4 t1细胞形态

评估的作用Gal-3 4 t1细胞系,我们最初撞倒Gal-3 4 t1细胞Gal-3使用一个稳定的成分,然后通过克隆选择(数据未显示),我们孤立更加突出的克隆抑制Gal-3(数据进行进一步的研究1(一)和1 (b))。形态分析表明,在体外,4 t1-scramble细胞的后代更传播和分散在塑料盘(图1 (c))与4 t1-shrna-gal-3圆润和分散的细胞(图1 (d))。

这些观察表明,Gal-3击倒修改至少部分细胞与基质接触。虽然圆润和分散,但4 t1-shrna-gal-3细胞呈现相同的直径与t1-scramble(图1 (e))。值得提及的是,细胞周期细胞(补充图并没有改变1)。Gal-3的细胞表面表达,流式细胞仪分析评估,在4 t1-shrna-gal-3细胞相比,下降了85% t1-scramble细胞(图1 (f))。

3.2。增加差别Galectin-3对这些4 t1细胞入侵在体外

我们接下来研究的能力Gal-3争夺和击倒4 t1细胞迁移在划痕试验进行融合性的细胞培养。我们观察到的能力显著增加4 t1-shrna-gal-3细胞迁移在24和48小时相比,4 t1-scramble细胞(数字2(一个)和2 (b))。评估是否这种差异是由于增加4 t1击倒细胞增殖率,最终迁移实验,细胞被沾ki - 67(补充图2)。没有发现不同的增殖率之间的细胞(图2 (c))。总之,这些数据表明Gal-3沉默会增加4 t1乳腺癌细胞的迁移而不是其增殖能力。

3.3。减少乳腺癌的生长速度和增加差别Galectin-3对这些基因的骨髓转移

然后我们评估肿瘤微环境的相关性Gal-3乳腺癌生物学和执行一个原位注射4 t1-scramble (SC)或4 t1-shrna-gal-3 Lgals3 (SH)细胞^{+ / +}(WT)或Lgals3^−−/雌性Balb / c小鼠。肿瘤来源于4 t1-shrna-gal-3细胞小于4 t1-scramble-derived肿瘤原位注射后28天(p.o.i。)不管老鼠背景(图3(一个))。当4 t1-shrna-gal-3细胞生长在Lgals3^{+ / +}老鼠(图3 (b)),增长率降低相比,4 t1-scramble细胞。这种差异是更重要的在Lgals3当4 t1细胞被注入^−−/老鼠,我们能够观察到显著降低肿瘤生长4 t1-shrna-gal-3相比,4 t1-scramble细胞(图3 (c))。在实验的最后,肿瘤被收集,通过免疫组织化学方法和Gal-3表达进行了分析(数据3 (d)和3 (e))。我们可以观察减少Gal-3表达4 t1-shrna-gal-3-derived肿瘤与肿瘤4 t1-scramble相比,支持克隆生成的沉默后的稳定性。我们下一个评估微环境之间的相互作用和肿瘤Gal-3是否会影响骨髓转移。因此,我们执行的双重染色CK-19(蓝色)细胞质和PCNA、细胞增殖的一个标志在布朗(核),小鼠的骨髓中28天的订单。我(图3 (f))。我们发现数量显著增加的4 t1-shrna-gal-3 Lgals3细胞^{+ / +}和Lgals3^−−/骨髓微环境(图3 (g))与4 t1-scramble细胞。然而,PCNA-positive细胞的百分比只有4 t1-shrna-gal-3细胞生长在Lgals3时增加^{+ / +}小鼠微环境(图3 (h))。最后,双阳性肿瘤细胞(CK-19⁺和PCNA⁺)是目前在大量Lgals3的骨髓^−−/老鼠,不管Gal-3的表达(图4 t1细胞3(我))。

总之,这些数据表明,减少的表达Gal-3有利于肿瘤细胞在乳腺癌进展可能转移表型。

3.4。减少差别Galectin-3对这些笑料的整体表达在乳腺癌

然后我们研究如何减少Gal-3表达触发肿瘤细胞转移至二级器官和调查总体的搞笑内容4 t1细胞和肿瘤。观察图4(一)细胞的数量与阿尔新蓝染色(笑话)减少4 t1-shrna-gal-3细胞相比,4 t1-scramble细胞(图4 (b))。同样,积极阿尔新蓝染色在肿瘤的比例显著低于4 t1-shrna-gal-3-derived肿瘤无论老鼠背景(数据4 (c)和4 (d))。因此,表达下调Gal-3期间笑料的总含量减少肿瘤恶化。

3.5。增加了差别Galectin-3对这些合成硫酸软骨素

因为管制的笑料平衡4 t1-shrna-gal-3细胞和肿瘤,然后我们调查的内容C4S和c6 4 t1细胞和派生的肿瘤免疫组织化学。Gal-3击倒的细胞提供了一个表达C4S的增加和c6相比,4 t1-scramble细胞(数字5(一个)和5 (b))。C4S和4 t1-shrna-gal-3 c6细胞的增加伴随着mRNA水平的upregulation N-acetyl-galactosaminyltransferase 1 (CSGalNAcT-1)(数据5 (c))和软骨素聚合因素/软骨素合酶2 (Chpf)(图5 (d))。这些酶参与CS的合成和伸长,分别,可能与CS含量增加有关。有趣的是,C4S的总含量和c6只明显高于4 t1-shrna-gal-3-derived肿瘤相比,生长在Lgals3 t1-scramble细胞^−−/背景的老鼠(图5 (e)),而在Lgals3观察没有区别^{+ / +}老鼠。Gal-3可能差别因此,对这些积极影响CS的表达。

3.6。减少差别Galectin-3对这些Syndecan-1的合成

Syndecan-1 (Sdc1)是一种细胞表面蛋白多糖主要参与细胞粘附和迁移的细胞。因此,我们下一步研究的表达是否Sdc1被Gal-3监管。4 t1-scramble细胞呈现高蛋白质和mRNA水平Sdc1相比,4 t1-shrna-gal-3(数字6(一)和6 (b))。4 t1-derived肿瘤显示Sdc1增加的蛋白质和mRNA水平4 t1-scramble-derived肿瘤相比,当生长在Lgals3 t1-shrna-gal-3^−−/背景的老鼠(数据6 (c)和6 (d))。另一方面,我们可以观察Sdc1水平轻微升高4 t1-shrna-gal-3-derived肿瘤相比t1-scramble-derived Lgals3肿瘤^{+ / +}老鼠。Gal-3的差别,这些结果表明,对这些修改4 t1细胞肿瘤的行为而言,肿瘤细胞之间的粘附和ECM组件。

在乳腺癌进展监管差别Galectin-3对这些肿瘤微环境的笑料和促成了转移表型。

进一步探索Gal-3笑料的监管背后的分子机制,然后,我们调查是否versican,一个重要的PG参与细胞的能动性和入侵,被Gal-3监管。观察图7(一),versican的mRNA水平调节4 t1-shrna-gal-3细胞相比t1-scramble细胞。同样,在微环境Gal-3 (Lgals3的缺失^−−/老鼠),4 t1-shrna-gal-3-derived肿瘤提出更高的mRNA水平versican与4 t1-scramble-derived肿瘤相比没有区别在versican mRNA水平在Lgals3被发现^{+ / +}老鼠(图7 (b))。

因为Gal-3具有高度的亲和力降低硫酸笑料,我们也调查arylsulfatase B的表达(ARSB)和碳水化合物sulfotransferase 11 (CHST11),酶参与删除和添加硫酸组,分别从CS和dermatan硫酸。见数据7 (c)和7 (d),ARSB的mRNA水平调节(图4 t1-shrna-gal-3细胞7 (c)(图)和4 t1-shrna-gal-3-derived肿瘤7 (d))相比,4 t1-scramble细胞和肿瘤。不过,整个mRNA水平的ARSB肿瘤生长在Lgals3时更高^−−/老鼠Lgals3相比^{+ / +}。同时,CHST11的mRNA水平调节4 t1-shrna-gal-3细胞相比,4 t1-scramble细胞(图7 (d))。有趣的是,在缺乏Gal-3在肿瘤微环境(Lgals3^−−/),有一个减少的mRNA水平CHST11 4 t1-shrna-gal-3-derived肿瘤相比,4 t1-scramble-derived肿瘤(图7 (f))。

最后,基质金属蛋白酶9 (MMP9)的表达水平也评估以来表达式是高度相关的转移性乳腺癌表型。MMP9 mRNA水平增加4 t1-shrna-gal-3细胞(图4 t1-scramble相比的7 (g)),而大大减少4 t1-shrna-gal-3-derived Lgals3肿瘤发展^−−/老鼠相比,4 t1-scramble-derived肿瘤(图7 (h))。总之,这些数据表明,减少表达Gal-3在乳腺癌进展可能使肿瘤细胞粘附和迁移通过调节降低肿瘤的笑料和MMP9的表达,从而增加肿瘤的转移潜能。

4所示。讨论

Galectin-3最研究galectins之一,众多的报道表明,Gal-3直接与肿瘤形成有关,血管生成,肿瘤进展、转移。Gal-3调节的分子机制肿瘤肿瘤浸润和转移是影响很大的。Gal-3影响和信息交互,在细胞表面受体的活动,和cell-extracellular矩阵交互,通过绑定合作伙伴如MUC1、CD44, selectins,或整合蛋白,这是转移性细胞的特征。

在这里,我们表明,在乳腺癌的可能差别Gal-3对这些修改形态,粘合度,和迁移能力的肿瘤细胞而重塑细胞外粘多糖的内容,但不是其增殖能力。这些变化极大地反映在肿瘤细胞生物学和减少4 t1-derived肿瘤的增长速度,同时增加转移到骨髓(图8总结我们的研究结果)。

到目前为止,没有特定的机制解释Gal-3调节的大部分的细胞功能。Galectin-3′年代能力形成细胞表面晶格被调节信号阈值(34),确定信号的居住时间和持续时间的细胞表面糖蛋白(35,激活下游信号通路的36]。因此,扰乱Gal-3-generated晶格的变化的糖基化状态细胞占Gal-3的许多行动如肿瘤细胞化疗(阻力的增加37]或T细胞的生存38]。Gal-3的因此,我们可以假设一个减少表达在乳腺癌的进展可能会影响细胞表面受体的居住时间,可能间接导致管制在合成相关酶的表达水平CSPG的笑料。

Galectin-3是一个β-galactoside-binding蛋白质,特别是与LacNAc poly-LacNAc N -链和O-linked寡糖(39]。这植物血凝素交联,优先和更高的亲和力,包含笑料的GalNAc nonsulfated地区如chondroitin-4-sulfate和chondroitin-6-sulfate蛋白聚糖(CSPGs) carbohydrate-dependent方式(15]。此外,发现呕吐绑定并不是一个共同的特征galectins因为Galectin-1不与笑话(13]。自硫酸笑料能够结合生物活性分子参与信息和cell-ECM交互(40),我们可以假设Gal-3之间的相互作用和绑定和GalNAc包含笑话可能调节几个生物功能的分子基础与癌症细胞迁移和入侵。

有一个广泛的证据表明protumoral CS在迁移中的作用,肿瘤细胞的扩散和转移(41- - - - - -44]。因此,4 t1-shrna-gal-3细胞和派生提出增加肿瘤细胞迁移和转移性细胞在骨髓中,分别。考虑到野生型的情况下,可以模拟人类患者的肿瘤微环境,一些报告显示之间的直接联系的表达CHST11(参与装饰CSPG4 chondroitin-4-sulfate)和增加转移性乳腺癌细胞的潜力42,45]。同时,众所周知,在乳腺癌的进展,Gal-3通常是原发性肿瘤中表达下调,导致入侵周边地区和迁移到血管26]。因此,在WT条件Gal-3的水平在肿瘤细胞逐渐减少,upregulation CHST11可能导致整体转移性肿瘤细胞的行为。事实上,硫酸的生理意义笑料还没有完全理解。硫酸盐化作用的模式在不同阶段的癌症难以预测,但很明显,修改笑话影响肿瘤恶化,入侵和转移。不过,Kaiathas et al。46)报道,chondroitin-4-sulfotransferase-I (C4S)的酶负责硫酸盐化作用似乎是减少与增加结直肠癌的阶段。另一方面,相同的报告显示,Chpf(软骨素合成酶)高表达的肿瘤标本相比,健康的组织。CS的硫酸盐化作用以来报道减少Gal-3亲和力CS (17,47],我们可以假设减少Gal-3水平原发肿瘤的肿瘤进展,与此同时CHST11增加和减少ARSB表达,可能导致移位的Gal-3肿瘤细胞的细胞内环境。这可能会增加细胞活性和转移,同时保护癌细胞从proapoptotic事件和女性(细胞内Galectin-3的函数)48]。

据报道,Sdc1较低的表达在高转移性细胞,导致增加激活β1-integrins和粘着斑激酶,它们会导致乳腺癌细胞粘附和入侵的原发肿瘤(8,49]。同样的,我们可以观察到肿瘤细胞更容易转移,如4 t1-shrna-gal-3细胞,提出了减少Sdc1水平。此外,在转移过程中,血管内,乳腺癌细胞已报告reexpress细胞质Galectin-3,导致他们对血管26]。与4 t1细胞血管受体表达显示P selectin配体在细胞表面和硫酸CS GAG链参与P量selectin-mediated 4 t1细胞内皮粘附[50]。这些数据表明Gal-3之间的相互作用和肿瘤细胞的CS硫酸盐化作用状态,可能导致上级转移潜能。

Gal-3沉默后存在于非常低的数量和交互高度差硫酸软骨素在细胞质中,作为提出Bhattacharyya et al。18,19]。因此,我们的研究结果表明,增加arylsulfatase B (ARSB)是伴随着减少金属蛋白酶在肿瘤,表明Gal-3少可能与硫酸石斑鱼在细胞质和细胞核(18]。

我们的数据表明,乳房肿瘤由Gal-3击倒4 t1细胞更多的转移是由于细胞的减少粘性,促进其迁移、独立的金属蛋白酶9退化。在先前的研究中,我们表明,微环境的缺乏Gal-3青睐的主要肿瘤的生长和转移,表明细胞外Gal-3在肿瘤生物学的重要性23]。在这项研究中,我们首次提出了微环境的缺失Gal-3调制负碳水化合物sulfotransferase 11 (CHST11)的mRNA水平的主要肿瘤,表明肿瘤细胞系的行为可以修改的肿瘤微环境。

总之,Gal-3可能有重要的作用在调节的可用性笑话参与入侵和转移,因此,降低硫酸盐化作用的笑话可能是乳腺癌预后不良的一个标志。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

本研究支持的项目Pos-Graduacao em解剖学Patologica, Faculdade药物da里约热内卢联邦大学做RJ、巴西里约热内卢。

补充材料

补充图1:Galectin-3击倒4 t1细胞没有改变细胞周期。(一)细胞周期分析通过流式细胞术使用propidium碘(π)4 t1-scramble细胞和4 t1-shrna-gal-3细胞。结果显示为意味着南达科他州±。补充图2:细胞增殖在划痕试验。疣状ki - 67年随着时间的划痕试验。红色箭头表示核阳性ki - 67 0的时候,24日,48小时后在两组(4 t1-scramble细胞和4 t1-shrna-gal-3细胞)。(补充材料)

引用

1. j . Dittmer和b . Leyh肿瘤基质的影响在乳腺癌药物反应,”在癌症生物学研讨会31卷,3日- 15日,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. s . o . Tamimi和a·艾哈迈德”基质浸润性乳腺癌的变化:一个超微结构的研究中,“《华尔街日报》的病理,卷153,不。2、163 - 170年,1987页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. g . Chalkiadaki d . Nikitovic a . Berdiaki p . Katonis n . k . Karamanos和g . n . Tzanakakis“肝素发挥监管作用通过p53 / FAK-dependent信号在黑色素瘤细胞粘附和迁移,”IUBMB生活卷,63年,第119 - 109页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. m . Mytilinaiou a . Bano d Nikitovic et al .,“Syndecan-2是一个关键的监管机构的转化生长因子β2 / Smad2-mediated粘附在纤维肉瘤细胞,”IUBMB生活,卷65,不。2、134 - 143年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. d . Nikitovic m . Mytilinaiou a . Berdiaki n . k . Karamanos和g . n . Tzanakakis“硫酸乙酰肝素蛋白聚糖和肝素调节黑色素瘤细胞功能,“Biochimica et Biophysica学报(BBA)一般的主题,卷1840,不。8,2471 - 2481年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. m .中提琴k . Bruggemann大肠Karousou et al .,“乳腺癌mda - mb - 231细胞生存能力、能动性和矩阵附着力受硫酸乙酰肝素之间复杂的相互作用,硫酸软骨素−/ dermatan和透明质酸的生物合成,“Glycoconjugate杂志,34卷,不。3、411 - 420年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. k . m . Ilieva a .张s Mele et al .,“硫酸软骨素蛋白聚糖4和其潜在的抗体免疫治疗目标在不同的肿瘤类型,“免疫学前沿,8卷,p。1911年,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. h·哈桑·b·Greve m . s . g . Pavao l .利- s a·易卜拉欣和m .为“Syndecan-1调节β-integrin-dependent和interleukin-6-dependent功能在乳腺癌细胞粘附、迁移、耐辐照,“2月期刊,卷280,不。10日,2216 - 2227年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. 美国Cattaruzza和r . Perris蛋白聚糖控制伤口愈合过程中细胞运动和癌症扩散,”矩阵生物学,24卷,不。6,400 - 417年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. d . n, s·h·Barondes库珀·m·a·Gitt h·莱弗勒,“Galectins:结构和功能的动物凝集素的一个大家庭,”生物化学杂志卷,269年,第20810 - 20807页,1994年。视图:谷歌学术搜索
11. s·m·马萨d·n·w·库珀,h·莱弗勒和s . h . Barondes”L-29、内源性凝集素结合glycoconjugate配体与积极的协调,”生物化学,32卷,不。1,第267 - 260页,1993。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. h . Inohara s Akahani k Koths, a .拉兹”galectin-3和Mac-2-binding蛋白质之间的相互作用调节信息附着力,”癌症研究,56个卷,第4534 - 4530页,1996年。视图:谷歌学术搜索
13. m . l . Talaga:风扇,a . l . Fueri r·k·布朗,p . Bandyopadhyay和t . k .大坝,“多任务人类凝集素galectin-3与硫酸粘多糖、硫酸软骨素蛋白聚糖,”生物化学,55卷,不。32岁,4541 - 4551年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. n . Ahmad周宏儒。Gabius,安德烈et al。”Galectin-3沉淀的五聚物合成多价的碳水化合物和非均匀交联复合物形式,“生物化学杂志,卷279,不。12日,第10847 - 10841页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. 美国Bhattacharyya、l . Feferman和j . k . Tobacman”Arylsulfatase B调节versican表达式galectin-3和AP-1介导转录的影响,“致癌基因,33卷,不。47岁,5467 - 5476年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. 美国Bhattacharyya和j·k·Tobacman缺氧减少arylsulfatase B活动和沉默arylsulfatase B复制和介导缺氧的影响,“《公共科学图书馆•综合》,7卷,不。第三条ID e33250, 2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. 美国Bhattacharyya、l . Feferman和j . k . Tobacman”抑制磷酸酶活动遵循硫酸酯酶活性下降,导致转录的影响通过持续的转录因子MITF磷酸化,”《公共科学图书馆•综合》,11卷,不。4篇文章ID e0153463 2016。视图:谷歌学术搜索
18. s . Bhattacharyya l . Feferman k .毡帽,a . z .杜德克和j . k . Tobacman”arylsulfatase B下降导致增加黑色素瘤细胞的侵袭性,”Oncotarget,8卷,不。3、4169 - 4180年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. 美国Bhattacharyya、l . Feferman和j . k . Tobacman”的监管chondroitin-4-sulfotransferase (CHST11)表达反对的影响arylsulfatase B BMP4和Wnt9A”Biochimica et Biophysica学报(BBA)基因调节机制,卷1849,不。3、342 - 352年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. 美国Bhattacharyya、l . Feferman和j . k . Tobacman”表达的增加结肠Wnt9A通过Sp1-mediated转录的影响涉及arylsulfatase B,软骨素4-sulfate, galectin-3,”生物化学杂志,卷289,不。25日,第17575 - 17564页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. c . m . l . Machado l·n·s·安德拉德,v . r .特谢拉et al .,“Galectin-3破坏tumoral受损血管生成减少从TGF VEGF的分泌β1-induced巨噬细胞,”癌症医学,3卷,不。2、201 - 214年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. 答:美国Newlaczyl L.-G。在癌症Yu”Galectin-3-a万事通”,癌症的信,卷313,不。2、123 - 128年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. j . x佩雷拉et al .,“galectin-3不足的骨髓基质细胞导致增强肿瘤的生长和转移,”BMC癌症,16卷,不。1,p。636年,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. 诉Castronovo f . a Van Den火烧后,p .夹克衫et al .,“galectin-3表达降低与人类乳腺癌的发展,“《华尔街日报》的病理,卷179,不。1,43-48,1996页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. p . Nangia-Makker诉巴兰,a .拉兹“调节细胞外galectin-3肿瘤恶化的,”肿瘤微环境,1卷,不。1,43-51,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. j . t . de Oliveira a . j . de Matos j·戈梅斯et al .,“协调表达galectin-3恶性乳腺肿瘤和galectin-3-binding网站:影响肿瘤转移,”糖生物学,20卷,不。11日,第1352 - 1341页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. y Honjo, p . Nangia-Makker h . Inohara, a .拉兹”下调galectin-3抑制人类乳腺癌细胞的致瘤性,”临床癌症研究7卷,第668 - 661页,2001年。视图:谷歌学术搜索
28. d . k .许R.-Y。杨,z盘et al .,“galectin-3基因的靶向破坏导致减毒腹膜炎症反应,”美国病理学杂志》上,卷156,不。3、1073 - 1083年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. l . l . Vindeløv流仪DNA分析,“欧洲呼吸系统疾病杂志》上卷,66年,第314 - 313页,1985年。视图:谷歌学术搜索
30. a . Faustino-Rocha p·a·奥利维拉j . Pinho-Oliveira et al .,”鼠乳腺肿瘤体积估计使用卡尺和超声测量,”实验室动物,42卷,不。6,217 - 224年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. Y.-J。王,H.-G。Yu Z.-H。周et al .,“瘦素受体在原发性软骨细胞代谢障碍的青少年特发性脊柱侧凸的女孩,”国际分子科学杂志》上,17卷,不。7日,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. c . s . p . j . Schuffler t . j . Fuchs Ong p . j .野生n . j . Rupp和j·m·Buhmann”TMARKER:自由软件组织病理学的工具包和染色评估细胞计数,“病理学杂志》上的信息,4卷,不。S2, p . 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. d·席尔瓦多斯桑托斯g . v .巴西拉莫斯i . p . r . et al .,“胚胎心肌细胞干细胞治疗doxorubicin-induced心肌病,”干细胞研究和治疗,9卷,不。1,p。2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. m . Demetriou m . Granovsky s Quaggin和j·w·丹尼斯,“负调节t细胞活化和自身免疫Mgat5 N-glycosylation,”自然,卷409,不。6821年,第739 - 733页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. e·a·帕特里奇et al .,“调控细胞因子受体的高尔基N-glycan处理和内吞作用,”科学,卷306,不。5693年,第124 - 120页,2004年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. 陆p, s, m . et al .,“Hematopoietic-derived galectin-3导致细胞和系统性胰岛素抵抗,“细胞,卷167,不。4、973 - 984年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. s . n .桑托斯et al .,“O-glycan sialylation改变galectin-3亚细胞定位,减少胃癌化疗敏感性,”Oncotarget7卷,第83587 - 83570页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. 傅j .雪x高,c . et al .,“监管galectin-3-induced Jurkat细胞的凋亡bothO-glycans andN-glycans CD45,”2月的信,卷587,不。24日,第3994 - 3986页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. a . Varki r·d·卡明斯j . d . Esko et al .,糖生物学的本质,冷泉港实验室出版社,纽约,纽约,美国,2009年。
40. j . Brunetti l . Depau c·法尔恰尼et al .,“洞察硫酸聚糖的作用在癌症细胞粘附和迁移通过使用分支肽调查,“科学报告》第六卷,没有。1,p。27174年,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. c·m·威利斯和m . Kluppel软骨素sulfate-E是负的调节器的pro-tumorigenic Wnt / beta-catenin-Collagen 1轴在乳腺癌细胞中,“《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。8篇文章ID e103966 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. f·c·a·库尼Jousheghany, a Yao-Borengasser et al .,“软骨素硫酸盐在乳腺癌转移过程中扮演了重要的角色:一个角色CSPG4和CHST11gene表达式形成表面P-selectin配体在咄咄逼人的乳腺癌细胞,”乳腺癌研究,13卷,不。3,R58页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. j .杨·m·a .价格,c . l . Neudauer et al .,“黑色素瘤硫酸软骨素蛋白聚糖增强FAK和ERK激活不同的机制,”《细胞生物学》杂志上,卷165,不。6,881 - 891年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. 李j .杨·m·a .价格,g . y . et al .,“黑色素瘤基因表达蛋白聚糖修改刺激肿瘤细胞运动性,成长,和epithelial-to-mesenchymal过渡,“癌症研究,卷69,不。19日,7538 - 7547年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. d·赫尔曼·t·李基,a behren et al .,“CHST11基因表达和DNA甲基化在乳腺癌,”国际肿瘤学杂志,46卷,不。3、1243 - 1251年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. d . Kalathas d . a . Theocharis d Bounias et al .,“软骨素合成酶I, II, III和硫酸软骨素glucuronyltransferase表达式在结直肠癌,”分子医学报告,4卷,不。2、363 - 368年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. j .磐t . Minamisawa h . Tateno et al .,“Desulfated galactosaminoglycans galectins是潜在的配体:证据从额亲和色谱法,“生物化学和生物物理研究通信,卷373,不。2、206 - 212年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. 美国Nakahara:奥卡河,a .拉兹”galectin-3癌症细胞凋亡的作用。”细胞凋亡,10卷,不。2、267 - 275年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. m .为c . Kersting m·鲁杰罗et al。”预测值syndecan-1响应的表达式的原发性乳腺癌新辅助化疗,”抗癌的研究26卷,第627 - 621页,2006年。视图:谷歌学术搜索
50. b . Monzavi-Karbassi j·s·斯坦利,l·亨宁et al .,“硫酸软骨素葡糖氨基葡聚糖作为主要P-selectin配体在转移性乳腺癌细胞系,”国际癌症杂志》上,卷120,不。6,1179 - 1191年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2019 Jonathas Xavier佩雷拉等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。