优化、表征和抗菌活性的铜纳米颗粒合成塞纳didymobotrya根提取物

文摘

经济负担和高死亡率与耐多药相关细菌是一个重大的公共卫生问题。Biosynthesized铜纳米粒子(CuNPs)可能是一个潜在的替代对抗细菌抵抗传统医学。本研究首次旨在优化合成条件(的铜离子浓度、温度、pH值)获得CuNPs的最小尺寸,描述和测试CuNPs准备的抗菌功效塞纳didymobotrya(美国didymobotrya)的根源。萃取是由索格利特方法使用甲醇作为溶剂。气相色谱分析-质谱法(gc - ms)分析确定化合物美国didymobotrya根提取物。Box-Behnken设计用于获得使用粒子分析仪所确定的最优合成条件。描述了使用紫外-可见(紫外)、粒度分析仪、x射线衍射、zeta电位计,傅里叶变换红外(ir)。使用Kirby-Bauer磁盘扩散进行了生物测定磁化率测试。引用的主要化合物,并用gc - ms鉴定NIST图书馆苯甲酸,麝香草酚,N-benzyl-2-phenethylamine,苯甲醛、香草醛、苯乙酸和苯并噻唑。紫外可见光谱显示特征峰在570 nm指示CuNPs的形成。最优合成条件是80°C的温度,pH值3.0,铜离子浓度的0.0125米。傅立叶变换红外光谱显示吸收范围3500 - 3400厘米⁻¹(h), 3400 - 2400厘米⁻¹(地),988 - 830厘米⁻¹在1612厘米(碳氢键弯曲)和峰值⁻¹(C = C拉伸),1271厘米⁻¹(切断弯曲)。铜纳米粒子大小是5.55 - -63.60海里。电动电势值−69.4 mV表明他们是稳定的。biosynthesized纳米粒子表现出显著的抗菌活性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制区直径26.00±0.58毫米和30.00±0.58毫米与阿莫西林clavulanate(标准)和抑制直径20±0.58毫米和28.00±0.58毫米,分别。

1。介绍

纳米技术是对科学的兴趣由于其广泛的应用在医药产品,电子产品、生物技术和医学(1,2]。纳米粒子与固体颗粒大小大约从1到100 nm的长度至少在一个维度(3]。应用生物技术领域的增长,因为它们的大小可比范围扩展到生物分子和他们的多才多艺的属性,可以使用控制方法用于他们的生物合成4]。铜纳米粒子(CuNP)是最常见的一种纳米粒子在医学使用。他们一直使用两个物理和化学方法合成(4]。物理方法经验低生产纳米颗粒和高能源消耗来维持高温高压合成过程中使用。化学方法被使用有毒易制毒化学品,有害的副产品,并使用有毒溶剂(5,6]。

由于物理和化学方法的局限性CuNPs合成、生物方法已经开发出来。这些用细菌、藻类、真菌、植物和植物产品。铜纳米粒子的生物合成方法被认为是一种自底向上的方法,在氧化或还原是主要的反应发生在纳米颗粒的生产(7]。目前,植物化学物质合成的纳米粒子的使用正在探索这些纳米粒子是友好的环境和人类8]。Biosynthesized无机纳米粒子可以提供解决方案的出现耐多药微生物。这可以作为替代传统有机代理有限的应用程序由于分解的高速率和低的热阻。独特的化学和物理性质,低成本的制备、表面体积比,和低毒性使CuNPs命令优越地位气体传感器、催化剂、染料吸收剂,抗氧化剂,抗菌、抗疟、抗肿瘤药物在制备纳米粒子相比从金、锌、铁、银化合物(2,9- - - - - -13]。

塞纳didymobotrya(Fresen)欧文& Barneby(同义词:桂皮didymobotryaFresen),属的一种植物番泻叶和家人蝶形花科已经被全世界不同种族社区(14- - - - - -16]。在肯尼亚,这是用于治疗疟疾、真菌和细菌感染,高血压、痔疮,镰状细胞贫血,一系列影响女性输卵管炎症等疾病,子宫肌瘤,背痛,刺激泌乳,诱发子宫收缩和堕胎[17- - - - - -26]。前作者报道,水和有机提取物和分数的不同部分(叶、花,树枝,根,茎皮,不成熟的豆荚,树皮和根)美国didymobotrya引起退热的活动(27),降血脂药活动(28(如),抗菌活性与细菌蜡样芽胞杆菌,枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,肠杆菌属aerogenes,嗜酸乳杆菌,肺炎克雷伯菌,变形杆菌属寻常的,Ralstonia solanacearum,伤寒沙门氏菌,沙雷氏菌属liquefaciens,链球菌)[29日- - - - - -40)和真菌(如黑曲霉,白色念珠菌,假丝酵母glabrata,假丝酵母krusei,假丝酵母parapsilosis,假丝酵母tropicalis,假丝酵母duobushaemulonii,假丝酵母haemulonii,假丝酵母耳,假丝酵母famata,念珠菌胶、新型隐球菌,毛癣菌属mentagrophyte,Microsporum gypseum)[15,34,35,40- - - - - -42]。杀虫活性(对跳蚤和Acanthoscelides obtectus)和驱虫剂和antiamoebic活动以及毒性的提取物也被报道34- - - - - -36,43,44]。

经典的植物化学的各种提取物的筛选美国didymobotrya表明,蒽醌类、单宁,皂甙,萘醌、萜烯、类固醇、生物碱、黄酮类、酚类、萜类化合物是主要的辅助治疗次生代谢物(14,30.,34,36,45,46]。马约et al。45]首次孤立和特点2、6、4′-trihydroxy-trans-stilbene(一种在导数)和4 - (2′-oxymethylene-4′羟苯基)chrysophanol(苯蒽醌)从氯仿/甲醇提取的美国didymobotrya的根源。后来,二氯甲烷和正己烷提取物的色谱分离美国didymobotrya导致了萜类化合物的识别(3根β谷甾醇和豆甾醇)和蒽醌类(chrysophanol和physcion) (35]。最近,异松油烯和alpha-pinene被报道为主要退热剂化合物的二氯甲烷提取美国didymobotrya叶子(27]。

尽管有些不同提取物的药理作用和毒性美国didymobotrya部分已报告,没有报告CuNPs和抗菌活性的合成纳米粒子合成这种植物。因此,当前的研究首次调查CuNPs使用的合成美国didymobotrya根提取物及其抗菌功效大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。自合成的纳米颗粒更小,均匀分布大小、结晶,稳定性好,需要控制的实验条件47,48),合成条件(的铜离子浓度、温度、pH值)的CuNPs优化。

2。材料和方法

2.1。化学药品和试剂

铜(II)硫酸五水化物(CuSO₄h·5₂O)、无水硫酸钠、硅胶和甲醇从默克有限公司购买,美国。所有的化学试剂均为分析纯,使用前未经纯化。大肠杆菌(写明ATCC 25922),金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923), Kirby-Bauer磁盘,阿莫西林clavulanate,和0.5麦克法兰标准从柏树获得诊断,比利时。

2.2。样本收集和准备

美国didymobotrya根收获从植物在自然栖息地在西Uyoma sublocation,肯尼亚Siaya县( )。他们识别和身份验证的生物科学,Moi大学(肯尼亚),代金券标本(SD) 2018/03存放备查。

收集到的根与蒸馏水洗几次去除灰尘。他们在室温下干燥阴凉处三个星期。之后,他们被切成小块并使用实验室磨粉。提取是根据描述的方法进行Kigondu et al。49用细微的修改。重50克根粉被转移到索氏仪器和250毫升的甲醇提取48小时。甲醇作为提取溶剂,因为它是根据试验提取的最佳溶剂拔牙使用乙醚、甲醇和蒸馏水。集中了粗提取液旋转蒸发在40°C和转移到一个包含无水硫酸钠干燥器。粗提物的百分比收益率决定按下列方程(50]:

2.3。气相色谱分析-质谱法分析

GC - ms分析使用一个安捷伦8890 a GC系统界面上的5977 b质谱检测器融合毛细管柱(30×0.25毫米,0.25μ米)。对于gc - ms检测,电子在电子轰击电离系统模式的电离能70 eV。氦气(99.999%)作为载气的恒流模式1.2 ml / min,和注射量2μL采用(10:1)的分流比。喷油器温度维持在250°C;离子源温度为200°C;和烤箱温度程序从60°C(1.5分钟),增加20°C /分钟到220°C,然后5°C /分钟到280°C(4分钟),用10分钟和结束等温在280°C。质谱被70 eV。喷气量清洁离子源温度为320°C,和四极女士在180°C扫描间隔为0.5 s。溶剂延迟是0到3分钟,气相总运行时间是36分钟。峰的识别是基于电脑匹配的质谱与国家标准与技术研究院(NIST 08)库;直接与公布的数据也被利用。

2.4。合成、优化和表征CuNPs美国didymobotrya根提取物

2.4.1。合成CuNPs

合成CuNPs是由添加10毫升美国didymobotrya根提取物90毫升0.0125,0.03125,和0.05 M CuSO₄h·5₂O的解决方案。反应混合物一直在200 rpm电磁搅拌器和不同温度(40、60和80°C)和pH值(3、6.5和10 pH值)。反应混合物在5000转离心5分钟删除任何免费的生物质残渣。上层清液再次离心机在12000 rpm 40分钟获得颗粒。CuNPs的小球resuspended使用蒸馏水。减少铜离子测定的紫外可见分光光度计(贝克汉姆Coulter DU 720年,贝克汉姆Coulter Inc .)、美国)后4小时。

2.4.2。优化合成CuNPs

一个三级Box-Behnken实验设计用于分析参数的优化影响CuNPs(合成的51使用methanolic根提取物)美国didymobotrya。一款统计软件统计软件(美国Minitab Inc . 15,17)是用于实验设计。选定的设计矩阵从Box-Behnken由15个试验。参数优化的铜离子浓度(0.0125 - -0.05米),pH值的混合物(3.0 - -10.0),和温度的混合物(40°C - 80°C)的粒度CuNPs。响应变量的函数参数合成了二阶多项式如下: 在浓缩的=浓度和温度=温度。

2.4.3。紫外可见光谱

合成CuNPs (300μL)与3毫升蒸馏水稀释和扫描紫外可见分光光度计(贝克汉姆Coulter DU 720年,贝克汉姆Coulter Inc .)、美国)从300年到700纳米的分辨率1海里使用蒸馏水作为空白(52]。

2.4.4。粒度分析

合成的大小CuNPs使用粒度分析仪测定(Microtrac Nanotrac波二世,SL-PS-25启H)和一个激光二极管探测器。

2.4.5。x射线衍射分析

合成CuNPs受到x射线衍射(XRD)分析仪运行40千伏的电压与铜和20 mAKα辐射范围内的θ2θ配置扫描速度为0.030°C / s。微晶的大小(CS)是德拜谢乐公式计算如下52,53]: 常数(K)= 0.94,λ= 1.5406×10⁻¹⁰,因为θ=布拉格角,β是半宽度(应用)。半宽度在半径(β×)=的半最大值宽度π/ 180。

2.4.6。傅立叶变换红外光谱分析

傅立叶变换红外光谱分析确定CuNPs的表面官能团绑定。标本和溴化钾颗粒粉在一起的比例1:10 0 (w / w),然后压缩成颗粒。随后,分析了用傅立叶变换红外分光光度计测量和在400 - 4000厘米的范围⁻¹和分辨率为4厘米⁻¹(52,53]。

2.5。抗菌活性的合成CuNPs美国didymobotrya根提取物

biosynthesized 4厘米的抗菌功效⁻¹CuNPs评估使用Kirby-Bauer磁盘扩散敏试验协议(54]。测试微生物的选择根据美国国家临床实验室标准委员会2010年协议(55]。革兰氏阴性大肠杆菌和革兰氏阳性金黄色葡萄球菌进行了测试。阿莫西林clavulanate浸渍抗菌药物敏感性测试光盘被用作一个积极的控制。生物测定是用30μL解的CuNPs resuspended在蒸馏水中,美国didymobotrya根提取物,和硫酸铜溶液按照规范的积极控制(阿莫西林clavulanate)。经过18个小时的潜伏期,抑制区直径(ZOI)使用尺子测量精确到毫米和记录。测试的易感性或抗性生物每种药物测试确定使用发表临床实验室标准协会(CLSI)。ZOI列为敏感(年代)、中级(我)或耐药(R)基于CLSI解释标准(50]。

3所示。结果与讨论

产量的百分比美国didymobotrya根粉9.94%计算使用方程(1)。

3.1。气相色谱结果

气相分析美国didymobotryamethanolic根提取物进行了识别活跃的植物化学物质,可能参与CuNPs的制造。结果表明,提取包含主要脂肪酸和挥发性有机化合物。化合物以及它们的保留时间、丰度、分子式、分子量展示在表1。确定的主要化合物苯甲酸,麝香草酚,n-benzyl-2-phenethylamine、苯甲醛、香草醛、苯乙酸和苯并噻唑。

有一个缺乏文学在挥发性化合物美国didymobotrya。本研究提出了第一个综合报告中的挥发性化合物的gc - ms分析美国didymobotrya提取。此前,Mworia et al。27]报道的存在异松油烯、alpha-pinene为主退热剂化合物的二氯甲烷提取美国didymobotrya树叶采用气相。没有上述化合物被确定在本研究中。有趣的是,一些化合物确定methanolic提取的美国didymobotrya根在这项研究中有潜在的参与纳米粒子的形成。例如,茜素(dihydroxyanthraquinone有两个羟基苯基环)具有类似化合物的结构提出了参与螯合和减少铜离子CuNPs (2,56]。

3.2。CuNPs的合成和表征

Bioreduction铜离子在接触methanolic CuNPs提取的美国didymobotrya根是通过观察颜色变化和监测使用紫外可见光谱。有一个逐步解决深棕色的颜色变化从光橙色,表明形成CuNPs后4小时(57- - - - - -61年]。审判前的运行表明,3小时后没有发生显著变化。通常,小金属纳米粒子吸收可见的电磁波通过表面传导电子的集体振荡,这种现象称为表面等离子体共振(SPR)的影响62年]。因此,最后的黑暗色彩观察可以归因于表面等离子体的激发振动,说明CuNPs[的形成10,52]。铜氧化物比铜硫酸盐热更稳定,导致铜的氧化聚合和没有适当的保护(62年]。因此,附加的美国didymobotrya根提取物可能抑制铜的氧化,从而作为减少和限制代理CuNPs [10]。

methanolic根提取物的紫外可见光谱美国didymobotrya(图1(一))乐队在λ_马克斯338海里(乐队II)。乐队在338 nm(乐队II)可以是由于n⟶π∗过渡或组合n⟶π∗和π⟶π∗转换相关的杂原子双键。槲皮素的存在,一个类的类黄酮,也被报告为原油水根提取物的主要成分美国didymobotrya(63年]。可能观察到的转换与槲皮素参与了还原过程和形成CuNPs通过π电子相互作用[56,64年]。因此,提取的美国didymobotrya根进一步作为还原剂和稳定剂。

的紫外可见光谱CuNPs(图1 (b))吸光度的变化最大值由于表面SPR,展示CuNPs[的形成65年,66年]。SPR的高峰,这是一个签名CuNPs的形成,出现在可见区域(67年,68年]在542,570,604,616,638,662,到694年,纳米吸光度为0.064,0.153,0.066,0.064,0.065,0.072,和0.970,分别(图1)。根据梅的理论,一个紫外可见峰值的出现在合成纳米粒子的紫外可见光谱证实他们在形状(球形58]。

3.3。实验设计和优化分析

表2包含实验运行的列表和相应的反应从实验获得投影Box-Behnken设计。设计优化参数,将产生CuNPs最少的平均粒径。完成实验的运行秩序,消除实验偏差。的平均粒径CuNPs是记录在粒度分析仪(Nanotrac)。

回归系数(R²)0.9964得到的二阶二次方程生成的优化过程。检查模型的适当使用方差分析。预测变量,也就是说,pH值,铜离子浓度、和温度,混合物都是重要的47]。的价值 表明,pH值( )是最影响因素相比,铜离子的浓度( )和温度的混合物( )。方差膨胀因子(VIF)值接近1表明,预测(表不相关3)[69年]。拟合模型的质量评估的基础上确定的系数(R²0.9964)。模型解释了99.64%的平均大小的变化数据。的调整R²是99.00%。R²(pred)是94.31%,这表明该模型解释94.31%的变异的平均大小CuNPs当用于预测。

图2介绍了主要情节CuNPs平均大小的影响。反应混合物的温度,铜离子的浓度和pH值的媒介影响CuNPs的平均大小。的山坡上比较,可以得出结论,pH值的大小影响就越大。

图3提供了一个相互影响的情节为铜NPs平均尺寸。从情节,它被认为是温度和浓度之间的相互作用和相互作用浓度和pH值如图所示的线相交的点,但是没有可能的相互作用的温度和pH值的行大约互相平行。

3.3.1。pH值的影响

期间不同的pH值范围3 - 10 CuNPs平均尺寸优化的过程。这项研究表明,pH值作为参数的强烈影响的大小CuNPs图所示3交互作用图的平均粒径。最小的平均大小的纳米颗粒被记录在一个较低的pH值为3.0。观察到,pH值增加纳米粒子的平均直径增加。类似的观察报告Honary et al。70年和党等。62年]。观察一个可能的解释是,在pH值为3.0,纳米粒子经历高静电排斥,因此减少结块。因此,在碱性pH值,纳米粒子表现出较低的静电力因此允许粒子的增长。

3.3.2。铜离子浓度的影响

铜离子浓度(0.0125 - -0.05米)不一CuNPs平均尺寸优化。最平均尺寸的纳米颗粒被记录在低浓度的铜盐作为显示在图3。这一发现同意先前的发现(70年,71年)报道,高盐离子浓度导致大粒子大小和广泛的合成纳米粒子的大小分布。这可能是因为低浓度的盐降低铜相互作用的概率,因此减少结块。

3.3.3。温度的影响

温度控制范围40 - 80°C的CuNPs平均尺寸优化。研究表明,温度的增加从40 - 80°C导致减少CuNPs的平均大小。一个以前的研究报告了类似的结果71年]。这可能是由于可能聚集在较低的温度。(图4)。

根据图5,预测的平均粒径为1.7862海里。增加温度产量小粒径的纳米粒子。盐浓度和pH值下降有利于合成CuNPs的大小。这些观察同意那些见鬼的et al。62年]。先前的研究[72年,73年]表明,含水介质的pH值影响铜还原反应CuNPs合成。可能因此动能增强有益的微晶尺寸的减少,因为增强成核率(62年]。

3.4。CuNPs表征结果

3.4.1。粒度分析

进行粒度分析13 (13)CuNPs准备样品在不同pH条件反应的介质,铜离子浓度和温度的解决方案。最小的粒子是CuNPs准备在80°C, pH值3.0,铜离子浓度的0.03125米(图6)。

3.4.2。x射线衍射结果

XRD峰被分配相比,标准的粉末衍射卡粉末衍射标准联合委员会(JCPDS卡片。89 - 2838)。峰位置与金属铜晶体性质的数据一致。x射线衍射谱(图72)揭示了衍射峰值为43.30°,50.02°,73.41°的密勒指数(111),(200),(220),分别代表面心立方里的铜(66年]。此外,峰值为30.0°表明,少量的铜是铜(II)氧化物氧化。使用粉末的平均大小CuNPs确定的公式6海里,这是接近5.55 nm,建立了XRD分析。晶体的大小在100 nm建议的纳米晶体性质biosynthesized CuNPs低于15 nm (57]。类似的结果被其他研究人员报道,从结构分析的XRD biosynthesized CuNPs [57,58,60]。

3.4.3。CuNPs电动电势

的电动电势值biosynthesized CuNPs−69.4 mV(图8)。这表明biosynthesized CuNPs表面具有很强的静电排斥因此稳定性好。最近的一项研究[61年]表明CuNPs大小82.32 nm -电动电势−11.9 mV。这样消极ζ电位表明纳米粒子的电荷分布以及它们的大小可以扮演一个角色在促进或提高他们的生物学性质74年]。换句话说,高-电动电势之间转化为强烈的排斥的粒子引起放大或增强他们的稳定性75年]。

3.4.4。傅立叶变换红外光谱分析

傅立叶变换红外光谱分析是为了识别官能团的植物化学物质,参与合成CuNPs及其稳定。光谱图所示9显示宽带范围3400 - 3500厘米⁻¹的特征- h的胺和酰胺,一群范围3400 - 2400厘米⁻¹的地的羧酸,醇类和酚类化合物。峰在1612厘米⁻¹分配给C = C的烯烃和芳香族化合物。芳香族化合物的存在证实了988.30厘米的两座山峰⁻¹和830.60厘米⁻¹对芳香族化合物以碳氢键平面外弯曲。峰值在1271 .13厘米⁻¹归因于切断的醇、羧酸、酯。

这些官能团的存在表明还原的可能参与组织的表面CuNPs [76年]。他们也参与CuNPs的限制,在先前的研究,合成CuNPs从植物提取物10,77年]。频谱显示新的CuNPs表面化学联系,建议美国didymobotrya根提取物可以绑定CuNPs通过羟基和羰基化合物的氨基酸残基的蛋白质提取,因此作为降低,稳定和分散剂的合成铜氧化物纳米粒子和防止结块的CuNPs60,61年]。

3.5。抗菌活性的美国didymobotrya根提取和合成CuNPs

图10表明CuNPs有抑制作用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。皮尔逊积差相关的执行评估CuNPs的大小之间的关系和ZOI CuNPs反对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌(n= 13)。分析表明,之间存在着负相关的大小CuNPs和抑制区大肠杆菌(r=−0.74; )。同样,一个负相关观察CuNPs的大小和区域之间的抑制金黄色葡萄球菌CuNPs (r= 0.74; )。

最高的抑制区为30.00±0.58毫米金黄色葡萄球菌和26.00±0.58毫米大肠杆菌实现了CuNPs最少的平均粒径,在最佳条件下合成了80°C,铜离子浓度为0.03125 M, pH值3.0。这表明CuNPs至少平均粒径的表面积与体积比高,因此有效地绑定到微生物膜和可能改变其渗透性,造成抑制增长。Sathiyavimal et al。10),100年报告了类似的结果μL CuNPs准备的Sida acuta提取高度抑制大肠杆菌抑制区最大的15毫米,显示抗菌活性较低金黄色葡萄球菌而最低抑制11毫米直径p .寻常的。以前的作者(66年,78年,79年)也报告了类似的结果,大肠杆菌是最抑制细菌相比金黄色葡萄球菌和其他革兰氏阳性细菌。

越高抑制革兰氏阴性细菌的CuNPs可以部分解释为促进大量较小尺寸的纳米颗粒为革兰氏阴性细菌的细胞壁,由一个独特的外膜层和一个肽聚糖层比革兰氏阳性细菌的细胞壁和几个肽聚糖层(80年,81年]。此外,CuNPs一直猜测坚持革兰氏阴性细菌细胞壁由于静电相互作用,或铜离子促进细菌的DNA快速退化和减少呼吸(82年]。在某些革兰氏阴性菌株,铜离子改变相关的还原酶的构象和电子转移酶,最终在抑制细胞色素膜(83年]。

4所示。结论

合成的CuNPs美国didymobotryamethanolic根提取了以下最佳合成条件:温度为80°C, pH值3.0,铜离子浓度的0.0125米。CuNPs的平均粒度设计预测的最优条件为1.7862 nm。紫外分析显示特有的表面等离子体共振峰在571 nm指示CuNPs的形成。红外光谱分析表明,纳米颗粒在受羧酸,胺、酰胺、酚类、酯类。使用Nanotrac粒子分析仪进行粒度分析表明,合成CuNPs 5.55 - -63.60纳米颗粒大小的范围。x射线衍射测量证实存在集中CuNPs立方的脸。的电动电势测量值CuNPs−69.4 mV表明他们是稳定的。总之,biosynthesized铜纳米粒子稳定,显示更好的抗菌活性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌而阿莫西林clavulanate(标准)。研究建议的测试biosynthesized CuNPs对其他潜在耐药微生物,使其发展为抗菌药物。

缩写

CuNPs:	铜纳米粒子
大肠杆菌:	大肠杆菌
美国didymobotrya:	塞纳didymobotrya
SPR:	表面等离子体共振。

数据可用性

数据集支持本研究的结论可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者是感激,世界银行和大学理事会的东非奖学金授予伯纳德Otieno Sadia通过非洲第二卓越中心的植物化学物质,肯尼亚Moi大学纺织和可再生能源。本研究财务支持的非洲卓越中心的二世在植物化学物质,纺织和可再生能源(ACE 2株)Moi大学主办,肯尼亚(5798号信贷-柯)。Omara (Timothy Moi大学的化学和生物化学)承认,他不倦的指导本文的准备和英语校对。

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