纳米沉淀法在PLGA纳米粒子中加载N-乙酰琥珀酸碱的改进

摘要

n -乙酰半胱氨酸(NAC)是一种生物利用度低的亲水性化合物。它已被用作一种有效的抗氧化剂。本研究旨在加强NAC在PLGA纳米颗粒中的包封，用于药物输送系统。采用纳米沉淀法制备纳米颗粒，并改变以下参数:溶剂/非溶剂性质、粘度、pH、非溶剂中NAC的添加量、聚合物浓度和分子量、溶剂中NAC的浓度。结果表明，随着非溶剂粘度的增加，NAC在溶剂中的浓度增加，非溶剂在纳米粒子中的包封率增加。制备的纳米颗粒粒径为235.5±11.4 nm，包封效率为0.4±0.04%，比载率为3.14±0.33%。结果表明，纳米沉淀法除了能有效地包封疏水化合物外，还具有作为亲水化合物包封替代方法的潜力。然而，其在制药行业的使用，作为一种合适的具体载重车辆，仍然取决于载重能力的提高。

1.介绍

N-乙酰半胱氨酸（NAC）是粘液溶液，抗炎和肝癌剂，用作强大的抗氧化剂以保护细胞[1，2]并治疗癌症，神经精神疾病和心血管疾病等疾病[3.，4］．尽管所有这些好处，NAC具有低的生物利用度（6-8％），这限制了它的治疗效果。这是因为，一旦它进入血液，它加入了血浆蛋白和创建二硫键[5］．当静脉注射时，近30%的NAC通过尿液排出，高剂量可增加血压[5，6］．因此，运营商的运输和稳定NAC体内的发展是新的方法来提高其生物利用度研究时，主要关心的问题。在这种情况下，在材料如PLGA，可生物降解的共聚物制造的纳米粒子，正在开发[7- - - - - -9］．

诱捕低分子量的亲水化合物，如NAC在PLGA纳米颗粒中，表示挑战，因为小尺寸的物质有助于其迁移和快速释放[7，10.］．本研究旨在增加纳米沉淀法制备的纳米颗粒中的NAC包封，因为它是一种简单、经济、易于扩展的方法[11.，12.］．尽管这种方法主要用于脂溶性化合物，但文献介绍了亲水化合物包封的成功案例[13.，14.］．如图所示1该方法是将活性化合物(NAC)和聚合物(PLGA)溶解在同一溶剂中。这种溶液与另一种溶剂(称为非溶剂)接触，在这种溶剂中聚合物是不溶解的。第一种溶剂向非溶剂迁移，因为非溶剂与第一种溶剂完全混溶。这导致了聚合物的沉淀，形成了纳米颗粒。因此，在这个过程中，纳米颗粒有望捕获相当数量的活性化合物[15.］．

能被捕获的活性化合物的数量取决于分子的大小和活性化合物的溶解度，以及它与非溶剂的亲和力等因素。如果活性化合物在非溶剂中是高度溶解的，它可以迁移到非溶剂中，减少化合物被困在纳米颗粒中的数量。鉴于出于医疗目的，纳米颗粒的直径不应超过200 - 250纳米，因为网状内皮系统可以保留较大的粒径[16.］．该战略，以提升截留必须着眼于前面所说的两个限制条件。

有文献报道，以增强在PLGA纳米颗粒的亲水性化合物的包封多种策略。例如，非溶剂，通常是水，已被改变为另一非溶剂，其中所述活性化合物是不易溶。报道一些非溶剂是辛酸和癸酸甘油三酯[17.]、棉籽油[13.，14.]，甲醇，乙醇和异丙醇[18.］．It was found that cottonseed oil enhanced entrapment efficiency from 0.01 to 7.1% but increased the particle size (300 nm) and the polydispersity value (0.4). The use of alcohols as nonsolvents affects the particle size, obtaining the smaller size using methanol (102 nm) and increasing it with the hydrocarbon chain length. Bilati et al. reported no values of entrapment efficiency [18.］．另一种方法是当活性化合物作为非溶剂使用时，通过改变水的pH值使其更具疏水性。Tewes等人使用碱性pH值(8.6)使阿霉素更疏水，将包封效率从67%(使用中性pH)提高到95% [19.］．Govender等人报道了类似的结果:pH为5.8时盐酸普鲁卡因的包封率从11%提高到pH为9.3时的58.5% [20.］．Peltonen等。酸化碳酸钠的pH，提高夹带效率高达70％[21.］．歌曲和同事通过改变非溶剂的pH值和增加分子量和聚合物浓度[报道的包封率的增加22.，23.］．

目的是开发一种方法，以最大化NAC夹在PLGA纳米粒子内（)，尽量减少活性化合物向非溶剂的迁移()，得到粒径在250 nm以下的颗粒。利用菲克定律进行复合运输[24.，我们试图同时降低扩散系数()和纳米粒子内外之间的NAC浓度梯度(）.

如图解释2，我们增加了PLGA分子量，非olvent的粘度，并且PLGA浓度降低了扩散率（）.在该方法中，测试了各种溶剂/非溶剂对。不含非olvent的pH，加入钙离子以更疏疏的活性化合物。此外，将NaC加入到非溶剂中以降低浓度梯度（)在NAC溶剂和非溶剂之间。

2.材料和方法

2.1。材料

用于制备纳米颗粒的聚合物:PLGA 50:50 Resomer RG 502 (Mw 7-17 kDa)， RG 504 (Mw 38-54 kDa)和RG 505 (Mw 54-69 kDa)酯端接在Sigma-Aldrich购买。

表面活性剂:Stepan- mild L3®，Bio-Soft N1-7®和Makon NF-5®在Stepan获得。Pluronic F-127®Bioreagent在Sigma-Aldrich获得。

2.1.1。溶剂

在Panreac上获得二甲基亚砜(DMSO)和乙酸乙酯(乙酯)。丙酮和乙酸甲酯从默克公司购买。

2.1.2。Nonsolvents.

II型水，n丁醇,n-庚烷和醋酸戊酯从默克公司获得;Dow公司的丙二醇;和Stepan公司的neobee1053。

NAC处理和定量:FeCl_3.·6H.₂O和二氯甲烷是从默克公司购买的;Sigma-Aldrich的2,4,6-三-(2-吡啶)-s-三嗪;以及J. Baker公司的盐酸。

2.2。纳米颗粒的制备

2.2.1。基本情况

以丙酮为溶剂，水为非溶剂，采用纳米沉淀法制备纳米颗粒。将10mg PLGA rg502和2mg NAC溶于1ml丙酮中，装在玻璃瓶中。反应物加入后，立即关闭玻璃瓶，以防止丙酮蒸发。瓶在室温(约22°C)下溶解2小时，并通过人工倒置进行零星摇动。然后，以Pluronic F-127 1% (w/v)作为表面活性剂，手动将溶液(约1.5 ml/min)加入10ml水中，并磁化搅拌。最后的悬浮液在搅拌过程中保持了10分钟，时间足够让溶剂向水迁移并形成纳米颗粒。

在基本情况下，为了增加纳米颗粒对NAC的包封，进行了一些修饰。figure2说明了最小化NAC梯度浓度和扩散系数的策略。考虑了以下变量:(我)溶剂和非溶剂的身份：在碱的情况下，我们使用丙酮作为溶剂和水作为与普朗尼克F127非溶剂作为表面活性剂。作为一种策略，以避免扩散NAC到水中，使用丙酮 - 水新人不同。夫妇是根据四个标准选择：低毒性（根据国际委员会协调的规格类3）;混溶性;NAC不溶性的非溶剂;和相似性的介电常数值（在这些常数的值越高的差，将越高纳米颗粒聚集的概率[18.])。表格1显示了不同的夫妇探索。在基本情况下使用的表面活性剂是Pluronic F127，它不溶于所有使用的非溶剂，所以使用了其他表面活性剂。选择的表面活性剂是非离子的，以避免与NAC反应。（ii）非溶剂粘度:扩散系数与非溶剂粘度成反比。因此，为了提高其扩散率，我们加入了丙二醇，丙二醇是一种在25℃粘度为48.6 cP的溶剂。在这个温度下，NAC微溶于水。试验中使用等体积丙二醇与水的混合物(6.12 cP)，并与基本情况进行比较。在这两种情况下，Pluronic F127添加浓度为1% w/v。(3)水相pH: NAC质子化取决于pH介质。最疏水的形态在pH低于3.3时达到[25.］．测试在pH值为2.4和7.2的水溶液中进行。鉴于NAC在较高水平处变得不稳定，没有在pH 7.2上进行测试[26.］．(iv)溶剂与非溶剂比(S:NS):不同的值:1:2,1:3,1:4,1:5,1:10。这些数值来源于文献[23.，27.，28.］．(v)NAC在溶剂中的浓度:根据溶剂的溶解能力使用不同的NAC值。丙酮的溶解度为5、10和25 mg/mL(25℃~ 30 mg/mL)， DMSO的溶解度为2,25、50、80和100 mg/mL(25℃~ 100 mg/mL)。(vi)NAC浓度在非溶剂中：富含NAC的非溶剂，以避免通过降低浓度梯度朝向非溶剂迁移。因此，纳米颗粒内部的Nac的浓度增加。在这种情况下，将DMSO用作溶剂，将NAC（80mg / ml）加入Nonsolvent（水+ Pluronic F127）中。(七)溶剂类型:纳米颗粒内可被捕获的NAC的数量受其在溶剂中的溶解度的限制。虽然基本情况下使用丙酮，但由于NAC在DMSO中的高溶解度，使用DMSO和丙酮-DMSO的混合物(1:1)进行了不同的测试。(八)NAC-钙盐的形成:NAC与氢氧化钙的中和使分子更加疏水[29.］．将实验与溶剂或氯化钙（1摩尔CaCl）添加N-乙酰半胱氨酸（NaC-Ca）的钙盐。₂: 2摩尔NAC)到非溶剂(水+ Pluronic F-127)。将NAC溶液与pH为6的氢氧化钙(0.165 w/v%)混合制备NAC钙盐。然后，将混合物在−47°C、10 Pa压力下冻干32 h [29.］．在该测定中，未使用基础壳溶剂，因为NAC钙盐不溶于丙酮。因此，使用的溶剂是丙酮-DMSO以1：1的体积比例为1：1。作为对照，在溶剂中使用NaC。（IX）PLGA浓度：据报道，增加溶剂中的聚合物浓度上升了活性化合物的夹杂物和粒度[30.- - - - - -32.］．Even though the literature has reported values from 5 to 100 mg/ml [33.- - - - - -37.， PLGA浓度分别为10(基础情况)和20 mg/mL，因为浓度越高，粒径越大。(x)聚合物分子量（MW）：该变量可以影响活性化合物的释放速度和夹带效率[30.，38.］．为了评估这种效果，不同的PLGA（50:50）聚合物的分子量为7-17kDa，38-54kDa和54-59kDa。

本研究的目的是为了与最低粒度和最高的包封率获得的纳米颗粒。一旦所有的变量进行了研究，最终测定使用发现更好的值来实现。

２.３.南汽量化

用离心（Hmermle Z 233m-2）为1ml纳米颗粒含水悬浮液的离心（Hmermle Z 233 M-2）进行NaC的提取20分钟以丢弃上清液。后来，将沉淀物洗涤三次加入0.7ml II型水。溶解所得颗粒，400 µ加入L的DCM并用涡旋混合物摇动。最终溶液静置1小时以保证聚合物的完全溶解。之后，400 µ加入L的水。再将混合物摇匀，20000 g离心3分钟。

使用Kukoc和Radic的协议的调整，通过分光光度法法在优异的相（水溶液）中进行NAC定量[39.，40］．60µL of the aqueous phase, a reactant was prepared with a solution of 1.2 mL of acetate buffer (0.5 M) pH 3.6; 75 µL of aqueous Fe (III) (10 mM); 75 µ2,4,6-三(2-吡啶)-s-三嗪(TPTZ)水溶液的L (10 mM);和90年µl水。得到的最终混合物在室温下摇动并保持60分钟，直至实现紫色。

最后，在593nm波长下量化吸光度值。使用相同的处理用作II型水而不是样品的坯料。使用校准曲线测定浓度，其中检测限范率在5到140之间 µg / ml。测试至少进行两次[40］．

NAC包封效率(%NAC)的计算方法是:将纳米粒子包封的NAC质量除以其在溶剂溶液中的初始添加重量，再乘以100。具体负载(%w/w NAC/PLGA)是通过将纳米颗粒内的NAC质量除以溶剂溶液中添加的聚合物质量并乘以100来确定的。

２.４.测定粒径，多分散性指数和ζ电位

粒径分布由Malvern Zetasizer ZS设备在25°C和约1 mg/mL纳米颗粒浓度下的动态光散射(DLS)测定。多分散性指数(PDI)是与粒径同时得到的参数。该指数提供关于样品的信息:接近0的值表示样品是单分散的，接近1的值表示样品是多分散的。用激光多普勒测速和相位分析光散射测定了ζ电位。

2．5．纳米颗粒形态

The nanoparticle morphology was studied using transmission electronic microscopy (TEM) employing an FEI equipment (Tecnai 20 Twin, 200 kV), with a 120 kV voltage.

3。结果与讨论

在基本条件下进行的第一次测定获得了平均直径为210±9 nm、PDI为0.2±0.04的纳米颗粒。NAC包封效率为0.97±0.2%，比负荷为0.15±0.05%。即使粒径满足预期范围，但捕集效率和比载水平明显较低。这些结果证明了在过程中实施的修改是正确的。

3.1。溶剂和非olvent身份

NAC是一种高水溶性化合物(100mg /ml [26.]），这意味着在这种情况下，用水作为非olvent的使用将减少其陷阱。增加它的策略是用另一种与有机溶剂完全混溶的非ololvent取代水。反过来，新的非溶剂不应溶解NAC，所以，测试了几对溶剂和非溶剂（表1）.结果表明，低介电常数的电偶存在聚集现象。Dalpiaz等人也得到了类似的结果，他们用丙酮(溶剂)和棉籽油(非溶剂)实验得到了粒径为200 nm、分散度指数在0.3 - 0.4之间较高的纳米粒子。相反，没有表面活性剂的DMSO和丙二醇偶联物粒径为696.8 nm，多分散性指数为0.13。值得一提的是，两种溶剂的介电常数最高(分别为48.9和32)。虽然没有达到预期的粒径(低于250 nm)，但获得了更高的粒径和单分散(PDI < 0.250)。这对其他应用似乎很有吸引力，如在骨科应用中通过将颗粒纳入丙烯酸骨水泥来防止成骨细胞死亡[41.]，作为治疗膀胱疾病的膀胱内输送系统[42.，或在干燥器吸入器[43.]其中。

3.2。非溶剂粘度

figure3(一个)示出了颗粒大小，效率，和特定的负载与非溶剂的粘度的增加的变化。一个s you can see, when the nonsolvent (propylene glycol/water 50 : 50) viscosity augmented, the particle size increased slightly (10%). This probably happened because the nanoparticle formation mechanism is given by the migration of the solvent towards to the nonsolvent, which turns the polymer insoluble. When water is enriched with propylene glycol, which is also a polar solvent completely miscible with acetone, the formation mechanism is not altered, showing similar results. In fact, the NAC solubility in water and in water with propylene glycol, it presents no considerable change. Regarding the retained NAC, both the entrapment efficiency and specific charge increased 4 and 3 times, respectively. In this research, we proposed that the higher the medium viscosity, the lower the diffusion of NAC from the acetone polymer solution towards the aqueous phase.

３．３．水相pH值

figure3 (b)显示水相pH对粒度，效率和特定载荷的影响。具有低于250nm以下的尺寸的单分散纳米颗粒能够以低百分比诱捕NAC。粒度增加18％，夹带效率为17％，特定负载18％。尽管观察到pH 2.4的NAC和更大颗粒的夹杂物比在中性pH的同一测试中被观察到，但是可以在实验误差中找到这种差异。通常，在夹带（效率和特定电荷）或粒度中没有发现显着差异。这表明即使酸pH使NAC分子疏水，差异也不是相当的。Song等人报道了类似的结果。[23.，他在包封长春新碱时改变水相pH，发现pH高于7时，包封率增加10%(约)。实验还发现，颗粒大小保持不变。

3.4。溶剂和非溶剂比（S：NS）

这个变量的在所有的可变响应考虑（％NAC，特定的负载，和粒径）的影响可以在图中观察到3 (c)．添加较小的体积时，粒度增加（S：NS 1：2）。这发生是因为溶剂的一部分残留在聚合物基质中，增加其尺寸。具有较高体积的非溶剂，粒度降低，几乎保持恒定，因为1：3。另外，在水相体积上升时夹紧效率和特定电荷降低。这是溶剂与非溶剂之间的浓度梯度的结果。其他作者报告了类似的结果[21.，24.，27.］．由于纳米粒子粒径小，包封效率高，因此S与NS的最佳配比为1:3。因此，对于进一步的测试，这个比率将是首选。

3.5。NAC浓度在溶剂中

被捕获的可用量根据溶剂容量而变化，以溶解它。在丙酮的情况下，添加的浓度不能高于30mg / ml（在室温≈22℃），因为在较高浓度下，不可能的溶解化合物。然而，使用的浓度较高（100mg / ml），DMSO更高（100mg / ml）。

数字3（d）和3（e）表明，对于所用的任何溶剂，粒度不会显着变化，并且不会受到NAC的影响。相反，可以肯定的是，活性化合物不会干扰纳米颗粒形成，因为它的粒度保持恒定，即使具有较高的浓度（100mg / ml）。效率值低。然而，当涉及到特定电荷时，这种行为是不同的，因为它随着NAC的添加量而增加并给予较高量的分子以保留在聚合物基质内。鉴于聚合物面向较高量的NaC，特定电荷的增量甚至更清楚于丙酮中。这些结果表明，当可用分子的量更高时，聚合物基质可以在内部保留更高数量的分子。其他研究人员使用不同的溶剂报告类似的结果[44.，45.］．

3.6。NAC集中在非溶剂性

在图中3（f）中，粒度的变化，包封率，和特定的负载时，NAC被添加到非溶剂可以观察到。粒径稍有增加（7％），而包封率和特定的负载增加了2.5倍左右。这表明粒径没有显著由NAC的在非溶剂存在的影响，可能是由于低滞留。此外，效率和特定的负载由在纳米颗粒中，这可能导致从NAC浓度梯度递减内部非溶剂的存在NAC显着增加。

其他作者报告说，将活性化合物添加到非溶剂中作为增加包封的策略[46.，47.］．例如，avgoustakis等。报告类似的顺铂缩减值，这在饱和Nonsolvent时从0.1％增加到0.66％[46.］．尽管在向非溶剂（高达两次）添加NAC时，NAC夹带有效地增加，但是在最终测试之前不会使用NAC富集的水相，以描述其他变量的行为。

3.7。溶剂类型

使用DMSO、丙酮和这两种低毒性物质(ICH分类第3类)的混合物(1:1)进行了不同的测试。混合溶剂试验的目的是增加丙酮对NAC的溶解能力，考虑到它们相互补充。DMSO在浓度为100 mg/ml时对NAC具有增溶作用，但在离心后重悬时，NAC具有较高的结块倾向。与此相反，丙酮产生的颗粒仍保持悬浮状态。这可以通过比较zeta电位(丙酮为−33.4 mV, DMSO为−9.8 mV)得到验证。

figure3（g）结果表明，溶剂的变化不影响其粒径，粒径值可达200 ~ 250 nm。类似的结果包括表面活性剂也有报道。例如，Song等人发现，当使用表面活性剂时，粒径仍然保持不变准持续的 [45.］．

在效率和比电荷方面，DMSO作为溶剂时，观察到降低。然而，在丙酮和混合溶剂中观察到这种降低。这使得我们可以得出结论，使用混合溶剂将是最好的选择，因为它允许增加可以添加到溶剂中的NAC的数量，并且它的分离过程通过离心将更不容易团聚。

3.8。NAC-钙盐形成

图的结果3（h）表明将钙添加到NAC以使其更加疏水。当使用NAC盐时，观察到粒度几乎降低到25％，但NAC的样品没有钙的效率和比电荷较高。这些结果表明，NAC分子中的钙离子的存在不会影响夹带效率。这些结果与Desai等人报告的结果形成鲜明对比。[29.，虽然活性成分的包封方法不同，但采用NAC-Ca盐包封后，包封率由87.9%提高到98.4%。

3.9。PLGA集中

结果在图3（I）显示增加聚合物浓度，关于粒径，包封率，和特定的负载的效果。正如你所看到的，粒径在17％增加，而包封率增加了近两倍，但具体的负荷保持没有任何变化。这发生，因为聚合物添加量增加以及粒度;因此，存在要截留纳米颗粒内部的活性化合物具有更高的容量。作为具体的负载有关，添加的聚合物的量，并且它增加时，最后的结果是特定的负载保持恒定。类似的结果已报告了其他研究者[21.，27.］．Mora-Huertas等人报道了一种比本研究中使用的更大的粒径[31.］．由于这个原因，被选择的最低浓度，因为它产生较小的颗粒尺寸和相同的特定载荷。

3.10。聚合物分子量

figure3（j）的研究了聚合物分子量对粒径、包封效率和比载的影响。粒径随分子量的变化而变化。然而，对于7-17 kDa和38-54 kDa值，变化是微不足道的(与7-17 kDa值相比，变化为18%)，而对于最高分子量(54-69 kDa)，变化几乎增加了70%。包封效率和比载荷均随分子量的增加而略有增加，特别是当分子量增大时(与7-17 kDa的数据相比，包封效率和比载荷均增加了近50%)。其他研究人员报告了效率和粒径随分子量的增加[23.，38.，48.］．这说明颗粒尺寸的增加是由于聚合物链长度的增加。这可以解释为什么夹持效率和比载荷都有轻微的增加。需要确定纳米颗粒内部孔径随分子量变化的变化情况，以验证其是否受到影响。由于获得了更多的多孔颗粒，化合物就更容易放弃聚合物基体。

3.10.1。最后的测定

表格2显示了在粒度，效率和特定负载上研究的变量的效果。因此，使用最佳发现条件提出了最终的测定。用丙二醇（1：1）和Pluronic F127用作非溶剂（表面活性剂1％w / v）;将该非溶剂富含NaC（80mg / ml）。作为溶剂，使用丙酮和DMSO（1：1）的NAC浓度为80mg / ml和10mg / ml的PLGA 38-54kDa的混合物。结果，获得球形纳米颗粒，其未存在聚集（图4）.直方图(图5（a））示出了不同粒度通过TEM获得的，并且所述图5（b）示出了由DLS获得的曲线图。Based on micrographs of TEM, particle sizes vary from 76 to 180 nm with an average of 111.6 ± 24.8 (n = 43). These results differ from values obtained by DLS (235.5 ± 11.4 nm). It could be explained by the fact that TEM samples were dried as a preparation for TEM imaging, while DLS reported the hydrodynamic diameter that includes core plus any molecule attached on surface; this kind of difference between these techniques had been reported by other researchers [49.，50］．The nanoparticle zeta potential was −3.42 ± 0.5 mV, the entrapment efficiency was 0.4 ± 0.04%, and the specific load was 3.14 ± 0.33%. The latter increased almost 20 times compared with the data obtained for the base case. As a comparison, other research has reported higher and lower values for the specific load using similar molecules, which were made by the nanoprecipitation method: Lu et al. found 21% for doxirubicin trapped in mPEG-PLGA particles [51]，Dalpiaz等。报道了7.4％的鱼精蛋白为[14.， Govender等人发现载于PLGA纳米颗粒中的普鲁卡因含量为4.1% [20.]， Yang等报道了载于PEG-PLA颗粒的阿霉素占2.59% [52]和达尔皮亚等人。找到0.26％的n⁶-cyclopentyladenosine。PLGA-NAC纳米颗粒也通过其他方法获得，如电喷雾法，载药量为5% [53］．

这是必要的，以保持优化过程中，为了获得更高的滞留以及增加车辆的运输能力。作为一种可能性，所述NAC大小可以通过加入这个分子一个更大的，并形成一个键，可通过在人体内的酶被破坏增加，。其他替代可能是发现，为了提高纳米颗粒的密度和限制对非溶剂的NAC迁移或修改共聚物加入的分子使聚合物更亲水生成较小的孔的溶剂。

结论

为了增加亲水性低分子量化合物(如NAC)在PLGA纳米颗粒中的包封，对不同的替代方案进行了评估。研究发现，非溶剂粘度、溶剂类型、溶剂或非溶剂中NAC浓度对颗粒大小均无影响。然而，溶剂和非溶剂的比例(S: NS)、聚合物浓度和分子量、钙盐的使用以及不同溶剂-非溶剂偶对的使用都会影响颗粒的大小。结果表明，除丙酮和DMSO(溶剂)与丙二醇和丁醇(非溶剂)形成的电介质常数较高的溶剂-非溶剂电偶外，其他溶剂-非溶剂电偶均存在团聚现象。

非溶剂粘度的增加、溶剂中NAC浓度的增加以及非溶剂中NAC的富集有利于比电荷和包封效率的提高。然而，随着非溶剂(S: NS)体积的增大，两者均降低。

该方法允许PLGA纳米颗粒内的NAC增加，保持粒径低于250 nm和3.1%(比基本情况高20倍)。然而，在使用其他策略增加捕集之前，应进行不同的试验，以评估目前的方法是否影响NAC的生物活性。

数据可用性

所有的数据都在http://www.bdigital.unal.edu.co/55610/13/RuthJannethLancherosSalas.2016.pdf．

利益冲突

作者声明他们没有利益冲突。

致谢

这项研究得到了Bogotá de la Universidad Nacional de Colombia Grant 202010018338的Dirección de Investigación和Departamento Administrativo de Ciencia的Tecnología e Innovació-COLCIENCIAS Grant 110156935147的资助。

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