等离子体自由放养红海龟的卵黄蛋白原(Caretta Caretta)的西北大西洋

文摘

卵黄蛋白原是蛋黄前体蛋白由产卵的脊椎动物。随着内生雌激素增加在早期生殖活动,引起肝脏卵黄蛋白原的生产和被认为是完成在第一个嵌套事件前女海龟。在本研究之前,天生的卵黄蛋白原的生产还没有描述的畅所欲言的海龟。我们的研究描述了红海龟(循环的卵黄蛋白原浓度Caretta Caretta)从西北大西洋。我们收集血液样本青少年和成年人通过水中捕捉美国东南海岸从5月到8月,和从嵌套女性在6月和7月哈钦森岛,佛罗里达州。所有样品进行了分析使用一个内部ELISA开发的具体措施Caretta Caretta卵黄蛋白原浓度。正如所料,等离子体卵黄蛋白原拒绝在小海龟产卵季节的进展,尽管它仍然保持相对高在本赛季结束后。此外,意思是卵黄蛋白原浓度小海龟是1000倍,在水中捕捉样本测量。我们的研究结果表明,卵黄形成可能继续在产卵季节,尽管以递减的速度。此外,卵黄蛋白原在海龟捕获的水中发现可能是由于暴露于内分泌干扰化学物质。

1。介绍

海龟是古老的爬行动物,完全适应了海洋的生活。这些物种的威胁和危害的状况使得关于他们的生殖生理学研究保护计划的重要组成部分。然而,几个方面的生殖生理尚不清楚。例如,循环血浆卵黄蛋白原浓度尚未完全描述自由放养海龟繁殖活跃。全面了解卵黄的季节性周期可能允许我们识别个体的生殖状态和评价生殖健康。

卵黄形成的过程是雌性产卵的脊椎动物发展的合成和隔离卵黄蛋白原蛋黄(1]。卵黄蛋白原是在人体肝脏内合成,并通过血液运输到卵母细胞,通过内吞作用进入并保持酶裂解成phosphovitins和卵黄脂磷蛋白,造成营养物质的主要蛋白质和脂类的胚胎发育过程中(2]。其他蛋白质也纳入蛋黄免疫球蛋白、白蛋白、维生素d3、极低密度脂蛋白(3]。卵黄形成与增加肝脏的大小,输卵管和卵巢1,4- - - - - -6)和血浆浓度的钙的增加,蛋白质和脂质(6- - - - - -8]。estradiol-17肝脏卵黄蛋白原的生产控制β在产卵的脊椎动物1,9]。在接触外源性雌激素,卵黄蛋白原已经检测到几小时的海龟,鸟类和两栖动物(4,10,11)和达到最大血浆浓度几天后接触(4]。血液中卵黄蛋白原继续流传很久之后初始生产;后一个注射雌激素,卵黄蛋白原仍可检测在一个月后Chrysemys picta等离子体(4),在两个月后摘要本文kempii(12]。

负责多个激素调节卵黄形成的雌激素诱导。孕酮可以抑制卵黄蛋白原生产,最有可能作用在肝脏1,2,13]。低浓度的睾丸激素也可以抑制卵黄蛋白原生产(1]。孕酮和睾酮可能函数结束时停止卵黄形成卵巢周期(14]。相比之下,孕激素也可能导致雌激素诱导卵黄形成通过孕激素受体的表达B(复审委员会),这是目前只在卵泡生长和似乎废弃孕激素受体的抑制作用(PRA) [15,16]。然而,孕酮的特定功能,PRA,复审委员会在卵黄形成仍然不确定。垂体激素也认为在卵黄形成中发挥作用。在切除垂体卵黄蛋白原浓度显著升高Chrysemys picta接受注射雌二醇和生长激素(GH)相比,海龟,只有注射雌二醇或GH (17),这表明GH可能协同促性腺激素促进卵黄形成。进一步激活hypothalamo-pituitary-gonadal轴,启动卵黄生成作用,还可能涉及到促黄体激素(LH)除了瘦素,其他爬行动物的脂肪细胞激素,依季节变化但还没有彻底研究海龟(18]。卵黄蛋白原的发展中卵泡刺激了外源性促卵泡激素(FSH)的蜥蜴虽然胎管(19]。虽然LH和FSH的海龟,FSH的作用目前尚不清楚,这些海洋爬行动物的生殖周期(20.]。

活跃的海龟展览相对夏普和等离子estradiol-17突然增加β集中几周之前他们的生殖迁移8,21- - - - - -24),然后保持增高大约4周(8]。立即迁移之前,血浆雌二醇浓度开始下降,睾酮浓度急剧增加(20.]。雌二醇负责卵黄形成以来,很可能有一个随之而来的卵黄蛋白原生产迁移前几周。此外,腹腔镜检查红海龟(Caretta Caretta)透露的存在卵黄的卵泡排卵的卵泡大小的一半四个月产卵季节前,表明卵黄形成生殖季节开始前几个月(23]。血浆雌二醇和睾酮下降明显随着产卵季节的进展(21,25),这表明卵黄蛋白原生产前完成第一个海龟筑巢的事件。血浆中钙浓度(嵌套棱皮龟Dermochelys coriacea)仍然相对较低和持续整个产卵季节,这也可能表明卵黄形成后不继续第一个嵌套事件(8]。

了解海龟的卵黄的周期可以提供洞察海龟生理学的其他方面。例如,卵黄形成的过程需要大量能源储备的动员;因此,卵黄蛋白原的生产与产妇的身体条件(7]。初始浓度的卵黄蛋白原嵌套女性可能是食物的质量和数量的指标可用internesting时期(26]。同样,卵黄蛋白原浓度也可能是离合器的大小和频率的指标在嵌套女性。自从卵黄形成是一个过程,发生在几个月23),等离子体卵黄蛋白原浓度可以作为生物标志物的生殖发展青少年和复发的海龟。此外,卵黄蛋白原被认为是暴露于内分泌干扰化学物质的生物标志物(edc)在许多物种27]。了解海龟的卵黄蛋白原的自然生产可能支持这个分子的生物学指标的使用生殖中断海龟。

为了更好地理解卵黄的周期在海龟,我们已经开发出一种酶联免疫吸附试验(ELISA)特定的红海龟的卵黄蛋白原,我们分析了等离子体从红海龟栖息收集西北大西洋。在这个地区有一个世界上最高的红海龟筑巢聚合,嵌套的多数发生在维吉尼亚州和佛罗里达州等美国海岸。一些嵌套也发生在墨西哥湾,加勒比海和中美洲(28]。Posthatchlings使用北大西洋环流以帮助他们达到东北大西洋海域,他们花几年的时间来觅食和成长,然后回到西北大西洋(29日]。雄性的花费他们的整个生活在海上,而雌性的回到自己的出生地的海滩一旦繁殖成熟(30.]。女性出现在海滩上躺着一批鸡蛋从一到七次一个产卵季节,通常不回巢两到四年(30.]。在佛罗里达海岸,红海龟筑巢季节持续六个月,从4月到9月中旬。这是未知的循环卵黄蛋白原的概要文件是什么样子在红海龟的生命周期。

本研究描述了在嵌套循环的卵黄蛋白原浓度和nonnesting女性,男性,少年红海龟从西北大西洋。我们的假设是,循环卵黄蛋白原浓度将并行模式在海龟的雌二醇浓度。具体地说,我们预计卵黄蛋白原只能在雌性繁殖活跃,发现和最高浓度的产卵季节的开始,然后随着产卵季节的进展迅速下降。

2。材料和方法

2.1。样品收集

国家海洋渔业服务(NMFS)和美国鱼类和野生动物服务(物)指定的九个不同的人群(DPS)红海龟,其中四个特点是国际自然保护联盟(IUCN)威胁的濒危和五个【31日]。我们的研究侧重于浅海和嵌套红海龟从西北大西洋DPS。红海龟的西北大西洋DPS被归类为威胁,包括海龟在赤道的北部地区和东部60°W,南部40°N [31日]。在美国东部的浅海区,几乎所有的海龟都是不成熟的,通常是40到80厘米直甲壳长度(sci) [32,33]。嵌套女性在美国东海岸一般是80至100厘米sci (34- - - - - -37]。最低甲壳长度为成年海龟很难辨别,但是乌龟专家工作组使用82厘米sci指定成人大小(38]。在这项研究中,我们旨在样本海龟在浅海区描述卵黄蛋白原不成熟的海龟。此外,我们捕捉觅食成年女性,为了描述卵黄蛋白原生产前生殖季节和internesting期间。

样本收集从水中捕捉海龟下的南卡罗来纳自然资源部10节(a) (1) (a)允许1540年和15566年,GADNR允许21303年,FWC许可证163。样本收集的嵌套女性根据佛罗里达州鱼类和野生动物委员会允许152和东南路易斯安那大学机构的动物保健和使用委员会协议0013。所有从颈窦收集血液样本,使用21个指标,1.5英寸的针,肝素化真空采血管管。血液采集后协议了欧文斯和鲁伊斯(39]。

水中捕捉发生从5月到2009年8月,2008年5月至7月。开始样品季节可能允许捕获的可能性较大的雌龟(> 75厘米sci)将巢后的季节。研究船舶配备NMFS乌龟网(18.3网)配对,在20分钟的时间。所有抽样过程发生在沿海水域(4.6 - -17.0米深)之间Winyah湾,南卡罗来纳和圣奥古斯丁,佛罗里达,美国(图1)。捕获后,我们评估了海龟一般健康和身体条件之前收集血液形态学测量和记录数。然后标记所有海龟放生到野外。我们血液离心和存储液氮在海上;然后,我们存储在冰箱−80°C到分析。更全面的描述水中采样协议是由阿伦特et al。40]。

我们晚上收集血液样本从嵌套女性哈钦森岛,佛罗里达州(图1从6月6日至8月14日,2008年)。海龟产卵后,我们标记与铬镍铁合金合作海龟的鳍状肢标记标签计划和记录的最小和最大sci和直甲壳宽(标准铜线;厘米)。收集血液我们暂时克制海龟后他们已经成功地下蛋。我们储存的血液在冰上直到离心机并保持等离子体冻结(−80°C),直到分析。

2.2。等离子体激素浓度

我们使用循环血浆睾酮浓度来确定水中捕捉海龟的性别:女,< 400 pg毫升⁻¹;男,> 500 pg毫升⁻¹;和未知,400 - 500 pg毫升⁻¹(40]。我们测量睾丸激素通过放射免疫检定法(RIA)所描述的类似Blanvillain et al。41]。我们提取10至500μL 4毫升乙醚和化验的等离子体复制。我们准备了标准曲线与已知的睾酮浓度从19.5到1250 pg /管(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州)。我们添加了抗体和氚化激素(Esoterix, Inc .,奥斯汀,TX PerkinElmer, Inc .,沃尔瑟姆,MA)样品、标准和相应的控制。我们分开释放激素在每个管使用dextran-coated木炭和离心管单独绑定和不受约束的分数。我们测量放射性氚化激素的上层清液Wallac 1409液体闪烁计数器和决定中原生睾酮浓度样品使用RIA软件(p .发亮,加州大学伯克利分校)。我们测量等离子体estradiol-17传播β浓度在水中捕捉样本。样本ether-extracted上面描述的过程。我们测量estradiol-17β浓度从水中捕捉使用商业酶联免疫试剂盒(开曼化工、安阿伯、MI),根据制造商的规格。

我们量化循环血浆睾酮在嵌套女性样本使用商业酶联免疫试剂盒(开曼化工、安阿伯、MI)。我们使用ELISA技术(即由于缺乏资源。、时间、人员、样品体积,等等);虽然不同的RIA,两种方法产生了类似的结果。我们增加了3至20μL 100样品μL环评缓冲与400年在玻璃试管和提取μL醚;然后我们涡的解决方案,flash-froze干冰/乙醇浴。我们倾析醚分数成干净的试管和重复整个过程。我们干乙醚提取物在N₂气体在37°C水浴。我们与在180年重组样本μL和480μL环评缓冲区,这取决于最初的提取量。我们跑样品通过睾丸激素装备根据制造商的规格。由于缺乏资源,我们没有测量estradiol-17β在嵌套女性样本;然而,雌二醇测定在其他几个研究海龟筑巢8,21- - - - - -23),包括嵌套红海龟(24,数据显示,雌二醇展品近10 x低浓度嵌套在交配期间,随着激增接近700 pg / mL后每个嵌套事件(24]。

2.3。净化和卵黄蛋白原代的卵黄蛋白原抗体

我们汇集血浆从成年女性红海龟最大化蛋白质上的负载列然后分馏用DEAE色谱过程,以前有效的净化非洲爪蟾蜍光滑的卵黄蛋白原(42]。我们跑的程序BioRad经济色谱系统(BioRad,梅尔维尔,纽约)使用1.0×15厘米列满Macro-Prep DEAE支援(BioRad)。平衡缓冲是25毫米Tris-HCl, pH值7.5。梯度缓冲区是500毫米的生理盐水平衡缓冲。我们从5个人,汇集血浆稀释1:1卷:在平衡缓冲(200卷μL总量),加载到列。我们洗了列30毫升平衡缓冲去除蛋白质,没有坚持DEAE。我们运行了一个线性渐变,从0到500毫米氯化钠通过列使用总量的90毫升。我们监测蛋白的紫外吸光度在色谱运行280海里。我们收集分数(3毫升)整个过程。我们决定蛋白质产量分别为每个分数通过Coomassie蛋白测定。我们评估分数中包含了大量的蛋白质变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

生成ELISA标准,我们汇集和透析DEAE分数发现含有卵黄蛋白原(210 kDa蛋白质)对DEAE平衡缓冲一夜之间使用光谱/腰围超过1透析膜(光谱,休斯顿,德克萨斯州)。增加标准纯度这个透析步骤后,我们跑的第二次pooled-dialyzed分数为血清DEAE柱使用相同的条件。我们汇集,透析对水,并存储结果vitellogenin-containing分数在-20°C到使用。我们确定了蛋白质浓度的红海龟纯化卵黄蛋白原Coomassie蛋白质分析。

Covance(普林斯顿,纽约)准备对纯化抗血清c . caretta卵黄蛋白原的两只兔子使用标准方法在77天的协议。兔子群0,然后注入了250天μ克净化卵黄蛋白原在弗氏完全佐剂。兔子了21天125微克的卵黄蛋白原在弗氏不完全佐剂。后续增加进行42和63天。生产出血20毫升血清被天31日,52岁,和73年。在77天终端流血了。从两只兔子在抗血清ELISA效价测定使用1μg / mL纯化卵黄蛋白作为包被抗原和抗血清稀释1:500 - 1:。50%浓度计算1:66000和1:两只兔子43000,比< 1:100 -控制。这些值被认为是好的和平均浓度,分别。抗血清被冻结在80−到使用。

2.4。量化卵黄蛋白原

我们使用了两种解决方案的纯化红海龟卵黄蛋白原创建两个单独的elisa的标准曲线。标准和镀样本一式两份(100μL的解决方案)96 -好平底聚苯乙烯微量滴定板(热费希尔科学,Inc .)。之前我们没有稀释水中捕捉的血浆样本分析。我们稀释标准和血浆样本筑巢的雌性在磷酸缓冲盐(PBS)解决方案(pH值7.4)。我们稀释血浆样本嵌套女性1:1:20000年,10000年和25000 1:确保光密度介绍过o。d。邓肯()将在标准曲线的线性部分。

一旦我们镀标准和样品,我们覆盖,把盘子放在一个密封的塑料容器和一小杯的水和孵化一夜之间在4°C (18 h)。我们洗盘子与150年的三倍μL PBS和阻塞PBS溶液和5%脱脂奶粉(烂醉如泥的)1 h在室温下在一个旋转的平台上。我们preincubated anti-loggerhead卵黄蛋白原抗体(1:1000)与男性摘要本文报道烂醉如泥的等离子体(1:2000)1 h在4°C。这样做是为了确保最大的特异性抗体。我们洗盘子与PBS前三次涂层preadsorbed笨蛋卵黄蛋白原抗体(1:30000)和一个旋转平台上孵化2 h在室温下。洗后再一次,我们与100年孵化板块μL的山羊anti-rabbit免疫球蛋白与辣根过氧化物酶(Bio-Rad实验室,Inc .)稀释在烂醉如泥的(1:2000),然后在一个旋转的孵化平台,在室温下2 h。最后一个洗步骤后,我们增加了100μL三甲过氧化物酶环评衬底(Bio-Rad实验室,Inc .)每个好,在室温下培养10分钟。显色反应于100年停止增加μL 1 N H₂所以₄。我们阅读板块Bio-Rad模型550标在450海里。我们计算卵黄蛋白原浓度使用一般的四个参数物流非线性回归模型:我们连续稀释(1:100:128000)等离子体从雄性乌龟决定卵黄蛋白原的回收率,并添加一个已知数量的纯化卵黄蛋白原稀释。我们比较已知的卵黄蛋白原飙升的卵黄蛋白原测量样本。

2.5。统计分析

我们使用散点图来可视化卵黄蛋白原浓度之间的关系和参数提供给我们(sci、体重、睾丸激素浓度和雌激素浓度)。由于不平等的方差,我们使用非参数统计分析和考虑的可能性是重要的。我们为了满足对数转换数据统计假设之间的简单线性回归卵黄蛋白原(y)和sci、体重、睾丸激素浓度或雌激素浓度(x)。我们利用克鲁斯卡尔-沃利斯单向方差分析比较平均卵黄蛋白原浓度和平均睾酮浓度在每两周的间隔采样筑巢的女性。我们使用相同的测试比较检测卵黄蛋白原浓度(见部分3所示。1在每个月的水中捕捉的定义)。我们图基测试用于事后分析。我们使用了Wilcoxon等级测试比较检测意味着卵黄蛋白原从水中捕捉组雄性和雌性。我们比较的意思是卵黄蛋白原在水中捕捉海龟海龟筑巢的意思是卵黄蛋白原使用学生的以及。我们使用两个示例以及比较意味着卵黄蛋白原假爬女性和女性在哈钦森岛筑巢。我们进行统计使用PASW统计18 (SPSS, Inc .)和11.0σ情节(Systat软件有限公司),并使用SigmaPlot 11.0创建的所有数据。统计数据报告为平均值±1标准错误(SE)。

3所示。结果

3.1。验证和特异性卵黄蛋白原的ELISA

卵黄蛋白原标准曲线测定水中的用于分析样本捕获范围从0.3μ克毫升⁻¹到170年μ克毫升⁻¹和探测范围约为3.5μ克毫升⁻¹。每个标准的检测极限曲线估计的两个标准差的意思是卵黄蛋白原浓度计算出平均每个板的空白吸光度读数。这些化验的平均intra-assay CV 8.1%和平均interassay简历为11.8% ()。分析用于分析样本的嵌套女性工作范围是0.04μ克毫升⁻¹到20μ克毫升⁻¹和探测范围约为0.2μ克毫升⁻¹。对于这些化验,平均intra-assay简历是7.3%,平均interassay简历为12.3% ()。复苏的精制卵黄蛋白原平均为92%。

3.2。水中捕捉

性的乌龟”是由睾丸激素浓度,表明部分2。2。睾酮范围从43.6到10413 pg毫升⁻¹女性,从515.6到18800 pg毫升⁻¹在男性。雌激素范围从3.18到4405.3 pg毫升⁻¹在女性,从3.08到3463.3 pg毫升⁻¹在男性。筛选后的血液样本361个海龟捕获使用卵黄蛋白ELISA,只有22检测血浆卵黄蛋白原:15女性,男性,5和2未知的性别。意思是卵黄蛋白原浓度在水中捕捉海龟μ克毫升⁻¹()。一个海龟采样2009年5月的卵黄蛋白原浓度146μ克毫升⁻¹,明显高于中发现海龟在6月和7月(图采样2)。这个人是一个女海龟sci大约93厘米,她和卵黄蛋白原浓度是不包括在计算总体的意思是这个群体。的意思是sci 361年海龟被捕获厘米,50.1到93.6厘米不等。只有21个361年的海龟被认为是sci的成人大小大于82厘米。

既没有显著差异检测卵黄蛋白原相比6月7月(μ克毫升⁻¹,和μ克毫升⁻¹,分别;U= 48.5,;图2)和卵黄蛋白原之间的显著差异中发现男性比女性(μ克毫升⁻¹,和μ克毫升⁻¹,分别;U= 33.0,)。卵黄蛋白原浓度之间没有显著的线性关系和sci,质量,时间,血浆睾酮或血浆雌二醇浓度。

3.3。嵌套的女性

所有237个海龟采样在哈钦森岛,FL,可检测卵黄蛋白原浓度从1.3到96毫克毫升⁻¹()。卵黄蛋白原浓度均值嵌套女性的1000倍,在水中捕捉样本中发现(=−6.306,df = 256,;图3)。卵黄蛋白原浓度下降在筑巢的雌性产卵季节进行(图4(一))。卵黄蛋白原浓度也显著大于6月在小海龟采样(mg毫升⁻¹,)相比,以海龟在7月和8月(mg毫升⁻¹,和mg毫升⁻¹,分别;H= 62.151,df = 2,)。嵌套的雌性排卵成功有一个稍高的意思是卵黄蛋白原浓度(mg毫升⁻¹,)相比,嵌套的雌性false-crawled (mg毫升⁻¹,),但这种差异不显著。

睾酮浓度测量嵌套女性样本随机选取的67年,整个赛季。睾酮是ng毫升⁻¹它拒绝在产卵季节(图4 (b))。睾酮浓度最高6月在雌性嵌套测量的平均值ng毫升⁻¹(),睾酮浓度明显高于以女性嵌套在7月和8月,与平均值的ng毫升(),ng毫升(),分别(Hdf = 4 = 26.46,)。睾酮明显与卵黄蛋白原浓度在嵌套女性(r²= 0.225,;图5)。

4所示。讨论

4.1。嵌套的女性

卵黄蛋白原的血浆浓度下降随着产卵季节的进展,平行的趋势报道血浆雌二醇浓度在嵌套海龟(8,21- - - - - -24]。这些结果预计雌二醇负责诱导卵黄形成以来海龟和其他卵生的脊椎动物(1,12,43]。此外,卵黄蛋白原的浓度,我们报告嵌套女性将以单个个体浓度绿海龟筑巢龟鳖目mydas(4.6毫克毫升⁻¹)在另一项研究中44]。

被假定卵黄形成在海龟产卵季节前完成由于雌二醇下降发生在交配前(21,23,45,46]。虽然在我们的研究中我们无法测量活动卵黄蛋白原在生育期女性嵌套在哈钦森岛之前,血浆浓度下降随着产卵季节的进展,表明卵黄形成事实上停止之前或在产卵季节的早期。然而,卵黄蛋白原已观察到在等离子体居高不下数月后外源性雌激素诱导(4,12,44),尽管雌激素剂量使用药理;因此,它似乎是合理的,野生动物的蛋白质仍高企在较长一段时间后自然卵黄形成就完成了。此外,筑巢季节的末尾卵黄蛋白原浓度嵌套女性仍以高近1000倍nonreproductively活跃的女性(这项研究中,44])。这表明卵黄形成可能持续到产卵季节的开始。最近,这是俘虏所示红海龟,虽然雌二醇浓度很低在产卵季节与交配期间,这个类固醇经历短暂飙升后每个嵌套事件(24]。这些跳动的瞬态峰值雌二醇浓度符合高架卵黄蛋白原的维护通过大部分的野生龟产卵季节,我们观察到。这表明,卵巢对雌二醇非常敏感,这是符合其他研究[4,12,44]。人们很容易假定高架卵黄蛋白原在筑巢季节用来防止卵泡的再吸收,而不是支持folliculogenesis,随着卵泡大小相当均匀的发病季节(46]。

女海龟的繁殖活跃,明显增加睾酮浓度迁移之前(20.,23]可能发挥作用在停止卵黄形成由于其抑制效应(14]。在这项研究中,血浆睾酮浓度下降随着产卵季节的进展,并行的趋势对卵黄蛋白原和雌二醇浓度和类似于数据从其他研究8,24]。然而,睾丸激素和卵黄形成之间的功能关系仍然是模棱两可的。我们无法开始采样,直到一个月后产卵季节已经开始,因此我们没有测量睾丸激素女性之前迁移。也许迁移之前收集的血液样本进行分析或者只是第一个嵌套事件之前可以帮助澄清卵黄形成和甾类激素浓度之间的关系。进一步检查其他生殖激素和激素受体在繁殖和海龟nonreproductively活跃,加上扩大采样周期,将大大有助于改善生殖生理的理解女海龟。

所有物种的海龟通常表现出保守序列的行为在嵌套,由出现在沙滩上,挖掘蛋室,存放鸡蛋,然后覆盖伪装蛋室,回到海(26]。然而,它是常见的嵌套海龟出现在沙滩上,然后回到海在排卵前一批鸡蛋,一个行为经常记录在美国东南部[红海龟筑巢47]。有几种假说,为什么这些海龟回到海洋,如不满意生理、环境条件或碎片阻碍他们的路径。然而,这种行为的实际原因仍然未知。在这项研究中,我们发现没有区别在卵黄蛋白原浓度以嵌套的雌性排卵成功,相比,卵黄蛋白原浓度以嵌套的雌性产卵前回到大海。因此,从卵黄蛋白原数据的角度,女性出现在海滩,但未能巢可能是生理准备筑巢,但他们中止工作,原因未知。这个结果并不出乎意料,考虑到海龟之前回到海通常被认为试图再次窝筑巢在未来24小时(26]。

4.2。水中捕捉

我们发现6%的血浆样本中卵黄蛋白原雄性和雌性红海龟被俘美国东南海岸。卵黄蛋白原的浓度测量在这些22海龟明显低于最低浓度以嵌套女性,令人吃惊的是,这些少量的卵黄蛋白原被检测到,因为五的海龟是男性和女性的只有两个海龟是成人的尺寸。我们没有预料到检测卵黄蛋白原在这群海龟,因为他们可能繁殖活动觅食人口中由于其大小和位置(33]。

对于这些发现的一种解释是,海龟在这个人口暴露在环境雌激素。卵黄蛋白原生产活动是典型的生育期女性,但男性海龟也携带卵黄蛋白原的基因。感应的卵黄形成男性接触外源性雌激素已被证明在一些爬行动物物种4,43,48]。正因为如此,卵黄蛋白原被认为是环境中的暴露于雌激素污染物的生物标志物,被归类为edc (49,50]。这组化学物质干扰自然内源激素的合成和功能,这导致健康动物的生理和行为变化(27,51- - - - - -53]。edc的影响可能严重影响海龟考虑到健康、成熟的海龟表现出明显的季节性周期激素生产(22,25,46,54,55]。edc的积累会导致不受监管或受损的激素的生产,这可能会导致浪费能源储备的使用,从而降低整体健康,繁殖成功率下降,整体降低健身(56]。卵黄蛋白原elisa已经开发了绿色和红海龟的目的使用卵黄蛋白原作为暴露于雌激素污染物的指标(43,57]。然而,一个清晰的垮台使用卵黄蛋白作为一种生物标志物在海龟是卵黄蛋白原的自然生产这些物种没有彻底的描述。正因为如此,很难区分nonreproductive女性暴露于雌激素污染和复发的女性,虽然卵黄蛋白原ELISA结合雌激素污染物负荷的测量应做好检测男性内分泌干扰作用和幼虾。一种改进的理解卵黄蛋白原在生殖周期中所起的作用可能会更容易识别海龟环境雌激素污染物的暴露。

等离子体从一个个人从水中捕捉海龟群体产生了更高浓度的卵黄蛋白原相比,所有其他可检测卵黄蛋白原的海龟。因为这个人是一个相对较大的女性(> 82厘米sci),很可能这乌龟”是在早期阶段的性腺的复发。然而,在2年的水中抽样我们没有捕获超过14雌性sci大于82厘米,其中只有三个人(包括上面提到的)可检测卵黄蛋白原。由于大的小样本大小类女性,并与检测卵黄蛋白原大的女性更少,我们无法产生声音的结论关于他们的生殖状态。

由于海龟不表现出两性异形,直到他们方法生殖成熟,很难预测未成熟动物的性别。血浆雌激素和睾酮浓度常用来预测或确认少年海龟的性别41,58,59]。尽管这种方法通常是可靠的,它还需要使用昂贵的和微妙的化验。辨别卵黄蛋白原的个体发生可能允许我们预测不仅少年海龟的性别,而且当一个女海龟变得成熟和繁殖活动如果(可能时)生育期女性会迁移,伴侣,和/或在一个给定的筑巢季节。这样,卵黄蛋白原浓度可能有助于阐明成熟雌性的生殖状态通过使用微创技术,如我们的ELISA测定。还需要更多的研究在大类(> 70厘米sci)嵌套和nonnesting雌性红海龟为了更好地了解卵黄蛋白原生产与繁殖发展。

5。结论

据我们所知,这是第一个研究,系统地描述了季节性生产的卵黄蛋白原野生海龟。通过发展赤蠵卵黄蛋白原的ELISA具体,我们可以测量卵黄蛋白原的血浆浓度在青少年和成人红海龟nonreproductive和生殖。先前的研究推测,卵黄形成开始筑巢季节和前几个月前完成第一个嵌套活动活跃的女海龟。我们的研究结果表明,在卵黄蛋白原浓度下降随着产卵季节的进行,它仍然显著升高甚至在本赛季结束后。这似乎是零星的悸动的生产的结果雌二醇在产卵季节在其他研究中观察到。此外,卵黄蛋白原似乎没有关系是否出现女性成功的巢穴或返回到前海嵌套。卵黄蛋白原中检测出男性和少年从水中捕捉海龟,这可能表明暴露于内分泌干扰物在这个人口。继续研究海龟的卵黄蛋白原的生产将是有用的在评估这些濒危物种的生殖状态和健康。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者非常感谢许多志愿者现场和实验室援助,特别是比利Poche和生态协会的研究人员和工作人员,Inc .)和红海龟MarineLife中心朱诺海滩,佛罗里达州。这项工作不可能是没有很多志愿者和船员从南卡罗来纳自然资源部水中海龟研究项目。他们也感谢戴夫•欧文斯博士有价值的输入编写和校对。这部分工作由LEQSF格兰特(2006 - 09年)-RD-A-26 r·瓦尔韦德。

引用

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