生态相关性的血淋巴总蛋白浓度在七无关的甲壳纲动物物种不同栖息地Density-Salinity折射计测量预测

文摘

近年来,血液代谢物研究了作为一个工具来监控生理条件在野生或养殖甲壳类动物暴露在不同的环境条件。血液中蛋白质含量与环境变化波动和生理条件和发挥根本性作用在甲壳类动物的生理学O₂运输繁殖对压力的反应。血淋巴蛋白是主要的贡献者密度,本研究相关的简单和低成本的测量血淋巴密度由density-salinity折射计总蛋白浓度,用比色法测定。此外,这项研究评估的准确性关系,提供了一个从血淋巴密度转换因子蛋白质在七种甲壳类动物,代表类群远在系统发育树中,以不同的生活习惯。使用折射计测量血清蛋白浓度,可以提供一种非破坏性场法评估甲壳类物种种群相关蛋白质/修改的生理状态不需要昂贵的实验室设施和程序。

1。介绍

近年来血液代谢物研究了作为一个工具来监控生理条件在野生或养殖甲壳类动物暴露在不同的环境条件1- - - - - -3]。血蓝蛋白是主要的血淋巴成分(> 60%);剩余的蛋白质(浓度)包括coagulogen apohemocyanin,激素和脂蛋白。

血液中蛋白质含量与环境变化波动和生理条件和发挥根本性作用在甲壳类动物的生理学O₂运输繁殖到应激反应(4- - - - - -9]。事实上,蜕皮,繁殖、营养状态、感染、缺氧、盐度变化的主要影响因素的相对比例和总数量的血淋巴蛋白(10- - - - - -12]。

虾在很大程度上是基于蛋白质的免疫系统反应。这些都是外国粒子(例如参与识别13),在捕获外来入侵生物,防止失血伤(14,15]。

最近,玫瑰花等。2)表明,虾,适应使用蛋白质作为能量的来源和分子。血液蛋白浓度长期以来被发现与营养状况的甲壳类动物(16,17]。血液中蛋白质的浓度是一个可能的营养状态指数,减少在饥饿的虾和龙虾1,18,19]。蜕皮周期强加限制蛋白质的水平,血蛋白通常下降蜕皮前都是和蛋白质水用于合成新的外骨骼(20.]。蛋白质含量又逐渐建立蜕皮后水是被组织(17,21,22]。因此,测量血液中的蛋白质浓度的甲壳纲动物样本组可以提供有价值的信息来识别其状态(23]。

血液中蛋白质的浓度成正比的折射率。测量血液折射率因此提供潜在的领域评估方法对虾的营养条件(17]。

比色过程通常是首选测量血清蛋白的浓度;然而,他们是昂贵的,耗时的,不容易执行。因为轻松,快速的操作模式,和少量的材料要求,使用折射计测量血清蛋白浓度提供了一种无损场法评估甲壳纲动物的生理状态(压力、免疫反应、营养状态、脱毛等)没有任何需要实验室设施;折射计是一个简单的、小的便携式仪器,可以使用在该领域或甲壳类动物农场。

已经推荐给的条件分级的方法生活h .也到达工厂,让行业运营商的营销决策个体龙虾基于信息从一滴血24,25]。它也被用于研究活龙虾,螃蟹,虾penaeid [1,17,26]。

本研究的目的是:(1)确定在几个种类的甲壳类动物,代表类群远在系统发育树中,以不同的生活习惯,他们的血淋巴中总蛋白浓度比色法、最多样的环境和生理条件下测试;(2)测量血淋巴的密度相同的样本通过density-salinity折射计;(3)与两个变量通过线性回归和检查最终后者衡量是否可以作为一个合适的预测前者。

2。材料和方法

2.1。数据集

数据提出了工作代表一个数据集收集在我们实验室在过去的十年中,当进行常规血淋巴蛋白质和密度的措施在不同的甲壳纲动物物种和在不同的实验设置(3,9]。从样本集中的数据选择和排序为性,大小,或任何生殖或其他生理状态。他们代表因此充足的变化可用尽可能在生活条件和适应。蛋白质浓度范围近似的数据在生活条件后立即钓鱼,运输,或在实验室驯化后。

特别是使用收集的数据测量血淋巴参数在下面。

淡水小龙虾Astacus leptodactylus(Eschscholtz, 1823)(十足目,螯虾科)从土耳其到意大利进口商业(Olivotto,乌迪内),它是一个经济上重要的水产养殖物种以及一些欧洲国家的入侵物种。

岩石池虾Palaemon线虫(Rathke, 1837)(十足目,真虾下目),一个广温性的和广盐性的物种沿着欧洲沿海地区分布广泛,被发现在墨西哥湾的里雅斯特(上亚得里亚海)由当地渔业。

螃蟹Carcinus aestuarii(Nardo, 1847)(十足目,短尾派)广温性的和广盐性的沿岸物种也被手工的里雅斯特湾渔业的渔获。

潮下的蟹癌症pagurus(林奈,1758)(十足目,短尾派)上发现的基础包括在巨石下,混合粗渣,在泥泞的沙滩和海上。停留在低海岸,浅潮下带,离岸约100米。,they were provided by commercial import to Italy (Fiorital srl, Venezia) from Cherbourg (France).

美国龙虾也(h·米尔恩爱德华兹,1837)(十足目,Nephropidae)可能发现从低潮马克大约400米深的海底,他们提供的商业进口意大利(威尼斯Fiorital srl)从美国东北部海岸。

泥虾Upogebia pusilla(Petagna, 1792)(十足目,海蛄虾下目)生活在潮间带的浅水洞穴中,最后的螳螂虾虾蛄螳螂(Stomatopoda Squillidae),都是由手工渔业的里雅斯特海湾。螃蟹,龙虾,也在一些地区,螳螂虾经济非常重要,在活捉他们运输和存储柜系统商业核电站之前出售。Palaemon线虫和Upogebia pusilla有一个本地市场随着生活的鱼饵。

这些物种在种系发生树的代表类群远(Stomatopoda与十足目)住在不同的栖息地与不同的盐度和温度范围;例如,美国螳螂底栖生物狭盐性的物种适应一个常数相对高盐度环境;p .线虫和c . aestuarii暴露在estuarine-marine变量盐度和温度梯度在哪里美国pusilla掘地的,而答:leptodactylus是一种淡水物种。

2.2。动物维护

但对于动物流血后立即降落或者到来,环境适应人的管理。生物学(目前管理。生命科学)水族馆足够的大小,重量的1%水量少,表面上看,和避难所,闭路过滤水,控制温度、盐度、光照、氧气在实验条件范围内的测试。动物被喂以每周两次随意的鱼,软体动物,虾但是喂养实验前48 h出血停止。只有、苔藓动物使用。

2.3。血淋巴参数的确定

动物被涂抹干燥和至少100μL血淋巴的退出心包窦或关节膜pereiopods(取决于物种)无菌1毫升注射器装有25 g针。血淋巴为1分钟离心机在10300 g和4°C,和等离子体分数很快被冻结在−20°C和存储直到所需的研究。

控制,测量血淋巴的密度和总蛋白的血淋巴中执行10个样本h .也和10美国螳螂离心前后密度的情况下通过姬氏可能影响阅读全血。无显著差异()被记录和程序因此接受。出血后立即密度阅读规则抗凝剂的要求,无论是这是所需储存冷冻血浆:偶尔凝结的血液样本在解冻(< 2%)丢弃。

血浆总蛋白(TP)浓度测定修改使用屏幕点(Hospitex诊断srl缩二脲试验。佛罗伦萨,意大利)多通道(420 - 590 nm)光度读数系统,肾上腺素的临床化学分析仪试剂比色皿(Kit Hospitex诊断srl。佛罗伦萨,意大利)。标准溶液校准样品之间使用。

血淋巴的密度是通过使用density-salinity折射计(Scubla s.n.c。意大利乌迪内,自动温度补偿。折射计密度测量的范围是1000 - 1070 g L⁻¹精确到最近的1 g L⁻¹和稀释1:1 v / v时用蒸馏水进行血淋巴的价值超越了上限。没有明显的()不同水平的测量蛋白质之间的未经处理的记录和计算出稀释血淋巴(数据没有显示)。

2.4。统计分析

所有数据都是由使用Statistica 7 (R)为Windows软件包。描述性统计分析是用来描述血淋巴的参数。

数据给出算术意味着±标准错误。方差分析(方差分析)是用来测试意味着零假设为每个参数,然后所有物种之间都是平等的测试的数据图基HSD事后测试。概率值小于0.05的实验值之间的统计检验(均值±ES)被认为是显著的。正态分布的参数进行了分析使用Shapiro-Wilk测试。培生血淋巴的密度之间的相关性和TP决心和线性回归测试。

一个配对以及用于评估总血浆蛋白差异评估与折射法和光度方法。意义接受水平()。

3所示。结果

图1(一)显示了血淋巴总蛋白(TP)和密度的水平(图1 (b)在七种甲壳类动物。总蛋白质是显示的最低水平虾蛄螳螂(),平均2.84±0.09 g dL⁻¹紧随其后的是Astacus leptodactylus(;3.32±0.25 g dL⁻¹),Carcinus aestuarii(;4.01±0.07 g dL⁻¹),Upogebia pusilla(;4.41±0.14 g dL⁻¹),也(;4.45±0.09 g dL⁻¹),癌症pagurus(;5.31±0.17 g dL⁻¹),最后Palaemon线虫水平最高的蛋白质(;6.48±0.17 g dL⁻¹)。每组结果的TP明显不同于其他(方差分析,),异常详细图1(一)。

看着血淋巴的密度(图1 (b))记录在最低水平答:leptodactylus(1034.8±2.07 g L⁻¹),美国螳螂密度为1038.9±0.85 g L⁻¹,紧随其后的是c . aestuarii(1049.78±0.66 g L⁻¹),h .也(1052.0±0.74 g L⁻¹),c . pagurus(1059.2±1.14 g L⁻¹),美国pusilla(1062.4±1.56 g L⁻¹),一次又一次p .线虫显示密度值最高的1087.1±1.99 g L⁻¹。每组的血淋巴密度显著不同于其他(方差分析结果,),异常详细图1 (b)。

血淋巴中的密度进行了测量h .也样品(离心前后)显示无显著差异,,分别为1044.7±3.09 g L⁻¹和1044.2±3.03 g L⁻¹();TP是3.85±0.31 g dL⁻¹和3.83±0.29 g dL⁻¹()。同样在美国螳螂()的密度为1038.1±2.50 g L⁻¹和1039.8±2.51 g L⁻¹(),和蛋白质浓度分别为2.64±0.23 g dL⁻¹和2.62±0.23 g dL⁻¹()。

血淋巴之间的回归线密度和TP含量在不同物种在数据绘制2(一个)- - - - - -2 (h),每个物种的统计数据表进行了总结1。

最高的相关记录答:leptodactylus()和最低的h .也()。图2 (h)显示的关系获得一起策划的所有数据,在这种情况下也获得高相关性()。数据证实血淋巴密度是一个合适的代表血液蛋白质。两种方法得到的值的TP(从血淋巴密度测量和计算)为每一个物种在双尾成对比较以及和这项研究的结果发表在表2;显著相关性明显所有的物种和没有显著差异的计算水平TP与测量()。也比较测量TP与计算的通用回归通过策划所有物种的数据(表2),没有发现显著差异()。线性回归获得测量TP对那些从一般的回归线是计算。

4所示。讨论

蜕皮、繁殖、营养状态、感染、应激反应、缺氧、盐度变化的影响因素的相对比例和总数量的血淋巴蛋白(10- - - - - -12,22,27]。血淋巴中的总蛋白水平也取决于物种,与最高浓度观察penaeid和较低的淡水小龙虾(6,7,28,29日]。此外蛋白质水平的表达动物的适应性特征和气候适应战略的29日]。

因此,测量蛋白质浓度的甲壳纲动物的血液可以提供有价值的信息来识别其状态(23]。

这里给出的结果证实使用血淋巴密度测量折射法作为血液蛋白的一个合适的代理。此外,这个用的功效是在七个甲壳纲动物物种的代表类群甚至远系统的关系(例如,Stomatopoda与十足目),以不同的生活习惯和栖息地与不同的盐度和温度范围。

事实上,我们的研究c . aestuarii这就像p .线虫容忍范围广泛的盐度(从4 42事业单位)和温度(从0°C到30°C);的成年人c . pagurus和h .也是狭盐性的,可以容忍的盐度范围变量从20岁到40岁事业单位和温度从8到20°C。蛋白质含量最低的是最原始的子类中掠虾亚纲的甲壳类动物测试,其余属于真软甲类。淡水小龙虾密度最低的是证实a . leptodactylus的血淋巴具有无机离子浓度大约三分之一的海洋物种从同一infraorder Astacidea。

几项研究表明,蛋白质在临床血清折射计规模,虽然相关蛋白质浓度,有时会高估了返回的值比色测定血清蛋白质的鱼(26,30.- - - - - -32]。在甲壳纲动物,我们的工作证实了先前的数据来自其他作者建议使用折射法为了测量总蛋白,因为轻松,快速的操作模式,和该领域的可行性和实验室(22,23,25]。全血和血浆没有显著不同的读数,折射法也可以用于现场后立即出血没有离心和抗凝血剂。

不同种类的不同水平的相关性,获得可能是相关的差异对血淋巴蛋白质以外的溶质的密度的贡献。事实上,颜色比色试剂与肽键形成反应复杂,吸光度可以以546海里。颜色的强度正比于肽债券的数量,因此蛋白质浓度,而屈光计检查测量影响溶质在样本。但总蛋白的比较两种方法得到的值和比较的小动物——一张长有配对以及显示无显著差异,从而证实了该方法的有效性。

因此,它可能是安全的假设方程报道,至少对一些目的,可能是一个令人满意的血红蛋白浓度估计在其他大型海洋甲壳类动物,特别是如果仅仅知道相对的改变是不够的。

使用折射计测定血清或血液蛋白质浓度在更复杂的方法有许多好处。(1)光学密度折射计本身是相对便宜和水产养殖中常见的植物对盐度检查。(2)方法提供了直接的结果和(3)的数据至少那样可靠普遍采用比色需要离心样品的方法,存储,分析后。(4)凝血的血不是问题蛋白质决定通过密度可以迅速执行的时间内使用全血全血凝血开始。

确认

这项研究受到了批准号6 d4意大利MiPAF e·a·费列罗和INTERREG iii a Transfrontaliero ANSERE Adriatico”。“协作与t . Scovacricchi Fiorital spa和d·玛和p·g . Giulianini欣然acknowledeged。

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