抗菌活性的游离脂肪酸水解处女椰子油使用脂肪酶假丝酵母玫瑰

文摘

游离脂肪酸(远期运费协议)从水解获得处女椰子油(VCO)假丝酵母玫瑰脂肪酶(CRL)。四个因素对水解度的影响(高清)检查。为了得到最高的最佳水解条件HD值测定在VCO缓冲区比1:5 (w / w), CRL浓度1.5% (w / w石油),温度和pH值7日40°C。经过16个小时的反应,HD值达到79.64%。远期运费协议和残余水解处女椰子油(HVCO)分离水解产品。他们检测抗菌活性对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌,可以发现在受污染的食物而引起食物中毒。远期运费协议显示他们的抑制枯草芽孢杆菌(写明ATCC 11774),大肠杆菌(写明ATCC 25922),肠炎沙门氏菌(写明ATCC 13076)金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923)的最低抑制浓度(MIC)为50%,60%,20%,和40%,分别。然而,VCO HVCO没有显示对这些测试细菌的抗菌活性。

1。介绍

VCO内核提取新鲜用冷压或离心的过程。它没有经过精炼、漂白和除臭过程(RBD)。因此,其物理性质的味道,颜色等等不如RBD改变石油。VCO皮肤护理有很多优势,促进头发的生长,提高了美丽。抗氧化活性和酚类化合物在VCO也开展了一些研究;建议食用含酚类化合物的食物将会有一个健康积极的贡献(1]。

除了上面的好处,VCO也在健康促进和预防一些疾病,因为VCO的远期运费协议的存在。远期运费协议VCO富含中链脂肪酸(MCFAs)月桂酸约46 - 48%比例最高。MCFAs VCO的容易消化和吸收,但脂肪更难,因为它含有长链脂肪酸需要通过循环系统吸收之前,所以VCO可以用来代替食用油在日常膳食改善消化。此外,MCFAs也适合肥胖的人,因为他们比平时增加能量消耗更多。和MCFAs直接从肠道吸收和肝脏中燃烧;这使他们有一种感觉总是早饱腹感,和体重下降(2]。同时也吸收和肝脏中直接燃烧使MCFAs不参与胆固醇的生物合成和运输。因此,MCFAs VCO的心血管能力(3]。MCFAs还显示抗真菌活性;Shino和同事(2016)表现出比较洗必泰的抗菌活性,椰子油,益生菌,酮康唑白色念珠菌隔离在童年早期儿童龋齿(4]。Parfene和同事(2013)给出一个关于抗真菌活性的结果Yarrowia lipolytica从原油MCFAs椰子油(5]。MCFAs有效抑制某些种类的病毒的能力,打破他们的膜3]。和抗菌活性MCFAs也进行了一些以往的研究;金和李(2016)提出,MCFAs抗菌药物大肠杆菌(6]。先令和同事(2013)还研究了抗菌效果的VCO, MCFAs票反对艰难梭状芽胞杆菌(7]。

MCFAs抗菌药物;这是由以前的研究证明,但MCFAs用于他们的研究的纯化学形式。因此,本研究的目的是利用远期运费协议提取水解VCO和评估他们的抗菌枯草芽孢杆菌(写明ATCC 11774),大肠杆菌(写明ATCC 25922),肠炎沙门氏菌(写明ATCC 13076)金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923),可以在食品和引起食物中毒。同时,VCO的阻力和HVCO这些测试细菌也被评估。

2。材料和方法

2.1。材料

VCO由陈德良什么椰子有限公司有限公司(Ben省,越南)。假丝酵母玫瑰脂肪酶(CRL)(类型七世,≥700单位/ mg固体)购买Sigma-Aldrich有限公司(加拿大)。化学物质用于本研究KOH,正己烷,标准异辛烷和其他化学物质来自默克公司(德国)和中国进行了分析与净化超过95%。媒介用于抗菌测试营养肉汤(NB)(意大利),穆勒辛顿琼脂(尼古拉斯)HiMedia实验室经纪公司(印度)和穆勒辛顿汤(MHB)泰坦生物技术有限公司(印度)。和四种类型的细菌用于本研究枯草芽孢杆菌(写明ATCC 11774),大肠杆菌(写明ATCC 25922),肠炎沙门氏菌(写明ATCC 13076)金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923)提供的微生物学的有限公司(美国)。

设备用于本研究高速均质器(德国IKA T25数字ULTRA-TURRAX)开销搅拌器(美国OS20),轨道瓶孵化器(lm - 2575)从Yihder科技有限公司(台湾)、蒸发器(IKA RV数字V)来自德国,和GC-FID日本岛津公司2010 +(日本)。

2.2。水解的VCO

VCO溶解在标准异辛烷(VCO溶剂比1:1 (w / w))和磷酸盐缓冲溶液pH值调整条件将被放置在一个250毫升锥形烧瓶(8]。乳化混合物是由使用搅拌器速度10000 rpm的15分钟;脂肪酶的适量添加,搅拌溶解速度350 rpm的5分钟。反应是在轨道进行瓶孵化器速度150转2小时。停止反应,加1毫升乙醇99.5%到锥形烧瓶。

水解度(HD)按照下列公式计算(9]: 在哪里氢氧化钾(KOH)的体积是滴定(毫升),是KOH溶液的物质的量浓度(mol / L),游离脂肪酸的平均分子量,然后呢是质量的VCO (g)。

2.3。获得远期运费协议

这个过程是根据什和同事(1998)的方法(10]。超过0.5 N KOH加入水解混合物中和远期运费协议发布。分液漏斗用于提取远期运费协议和HVCO (tri - di -和单甘油酯)。上阶段包含HVCO溶解在正己烷净化用旋转蒸发器。下阶段包含远期运费协议与4 N HCl溶液酸化,然后由正己烷提取。远期运费协议,分析了HVCO成分的气相色谱法和火焰离子化检测器(GC-FID)。

2.4。抗菌活性试验

测试后进行磁盘扩散法。首先,细菌培养液悬浮在生理盐水稀释,调整让最后一剂1.5×10⁶CFU /毫升(11]。混合的体积1毫升细菌培养液15毫升的尼古拉斯,等到媒体固化(12]。纸与直径6毫米盘包含不同的解决方案如庆大霉素、VCO, HVCO,远期运费协议被安置在琼脂表面然后孵化24小时37°C。抗菌活性是由测量抑菌圈的直径。

2.5。确定的最低抑制浓度(MIC)

麦克风是继汤macrodilution方法进行的。细菌培养液悬挂在MHB直接稀释,调整让最后一剂5×10⁵CFU /毫升。远期运费协议(抗菌剂)是由直接稀释FFA MHB稀释系列 。1毫升细菌培养液添加到每个管包含1毫升的稀释一系列远期运费协议(积极控制管只有MHB)和混合的混合物。管是在孵化前35°C从16到20小时录音。麦克风是远期运费协议,完全抑制增长的最低浓度的细菌在管。这是与积极的控制管在确定增长结束点。本次测试的结果是有效的,如果生长控制绝对是浑浊或殖民地≤2毫米直径(13]。

所有的实验进行了一式三份,收集到的数据通过使用R软件进行统计分析。

3所示。结果与讨论

3.1。VCO缓冲区比的影响

脂肪酶催化水解反应乳液的界面区。水和油之间有更多债券时的缓冲量的增加,所以脂肪酶催化水解的主要增加更多的基质。然而,多余的水量将减少水解程度由于绑定脂肪酶(底物竞争8]。在图1(一)1:5的VCO缓冲区比(w / w)水解程度最高。因此,接下来的实验将在这个比率。

3.2。CRL浓度的影响

CRL浓度对水解度有很大的影响。增加脂肪酶浓度会水解程度高,但当乳液的界面是饱和与脂肪酶浓度,添加更多的脂肪酶不会得到更高的水解程度(14]。从图1 (b)水解度不能在CRL 1.5% +的浓度增加了。因此,CRL浓度1.5%的被选为进行下一步实验。

3.3。pH值的影响

每个脂肪酶的最佳pH值条件。改变pH值范围影响衬底的电离,自由脂肪酶,或lipase-substrate复杂。高pH值或低pH值将使脂肪酶变性;底物分解导致减少水解度(15]。

根据图1 (c)水解反应,pH值7.0是最好的条件。这也相当于一些研究结果沙玛和同事(2013)水解的鱼肝油使用CRL脂肪酸生产。过程进行了pH值7.0 (8]。水解使用CRL的豆油也进行pH值7.0 [16]。Freitas和同事(2007)研究的水解的豆油通过使用三种脂肪酶,其中CRL水解反应的pH值是7.0 (17]。

3.4。温度的影响

温度有很强的影响脂肪酶的水解程度。当温度增加,脂肪酶变得灵活;因此,水解程度也增加。此外,增加反应混合物的温度会降低粘度。这使得脂肪酶容易债券衬底;因此,水解度增加。然而,高温将变性脂肪酶因为脂肪酶的本质是蛋白质;因此,水解程度降低(15]。

如图1 (d),最高的水解程度得到40°C。这结果是相当于一些研究水解的豆油在40°C的Freitas使用CRL和同事(2007)(17];周和同事(2015)使用CRL水解麻疯树油生产生物柴油在40°C (18]。Yiğitoğlu和Temocin(2010)也进行了一项研究水解的蔬菜油通过酶固定化和自由CRL 40°C (19]。

3.5。水解时间

经过16个小时的反应,水解程度最高达到79.64%(图2)。当比较与其他先前的研究结果,水解程度,例如,大豆油70% CRL是24小时后的反应(17]。另一方面,金枪鱼油被使用CRL水解,经过24小时的反应;水解度达到了86.5% (20.]。在本研究中,水解时间短于其他研究,但它有等价的水解程度。因此,它可以被理解,使用标准异辛烷水解反应产生了积极的影响。标准异辛烷的存在在反应混合物VCO粘度下降。VCO容易乳化,增加了VCO的界面和水,所以这使得CRL有更多的机会接触,从而很容易地催化水解反应(21]。因此,它缩短了时间的VCO水解反应。

3.6。抗菌测试

根据表1和图3远期运费协议显示,显然在4种细菌抗菌活性。每个细菌抑菌圈直径的远期运费协议是不同的。远期运费协议的抗菌活性肠炎沙门氏菌是比金黄色葡萄球菌和大肠杆菌从水解提取的,所以结果证明远期运费协议产品的抗菌药物。这是相当于一些作者使用远期运费协议的形式纯化学物质。先令和同事(2013)显示抗菌能力的结果MCFAs(月桂酸在化学纯的形式)艰难梭状芽胞杆菌。此外,水解VCO的发展也有影响艰难梭状芽胞杆菌因为远期运费协议公布后水解的VCO (7]。Bergsson和同事(2002)研究了脂肪酸的抗菌效果幽门螺杆菌和结果展示,脂肪酸,MCFAs抗菌剂(22]。金姆和李承晚(2016)的研究也表明,MCFAs可能抑制经济增长大肠杆菌(6]。

VCO没有显示其对这些测试细菌的抗菌活性。这是相当于先令和同事(2013)的结果用VCO来抑制艰难梭状芽胞杆菌,VCO阴性结果(7]。

HVCO在这项研究并没有显示出其抗菌能力虽然它可能包含单甘油酯。这可能是解释说,在这项研究中,HVCO只包含少量的单甘油酯,所以它没有足以抑制细菌。

3.7。最低抑制浓度(MIC)

麦克风是显示在表的结果2和数字4和5。远期运费协议的麦克风肠炎沙门氏菌是最低的大肠杆菌需要远期运费协议60%抑制浓度,这表明最低浓度的抑制细菌的远期运费协议是完全不同的;它不区分这是革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌。

4所示。结论

本研究发现VCO的最佳水解条件下四个参数:VCO缓冲比率,脂肪酶浓度、pH值、温度。利用脂肪酶水解VCO收到少改变远期运费协议,因为在温和的条件下进行水解反应的pH值和温度比酸性或碱性水解。和酶法水解可以避免一些危险的不良副反应,不会影响产品的颜色或限制氧化产品,远期运费协议可以应用在其他领域食品保存、制药、等等。此外,使用标准异辛烷溶解VCO救了水解反应的时间与其他研究相比。远期运费协议获得、孤立和显示他们对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的抗菌活性而VCO HVCO并没有表现出任何积极的结果。在不同浓度麦克风远期运费协议的决心。在此基础上,可以使用远期运费协议作为防腐剂在食品在我们的下一个研究适量。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

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